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St. Valentine's Day is an informal observance of a lover's holiday. Today, the observance has no connection with the many legendary St. Valentines, and holds no religious significance.
The day is observed with exchanges of love notes and cards, and other tokens of affection, called valentines. The symbols of the heart and Cupid are common in cards, decorations of store windows, candies and other paraphernalia.
Traditional valentines were frillysweet, and tender affairs made of red and white paper and lace with cutoutsand cupids. The custom of sending cards, giving candy, and other such tokens has caught a great deal of commercial enthusiasm.
Many stores, for instance, decorateseasonally, or a according to calendar holidays. Valentine's Day is the first excuse for splashy valentine theme dominates stationery stores, candy stores, confectioneries, and quite often drug stores where cards and candy are sold.
2、在七夕的日子里,每一分每一秒都在想你念你,明天是我們相會的日子,鵲橋中央不見不散!
3、情人節(jié)是美好的日子,為什么不過我們自己的情人節(jié)呢?這美好的日子我們共同度過好嗎?我等你!
4、我的那個他是個蓋世英雄,我知道,總有一天他會披著彩衣,踏著戰(zhàn)車,來接我,今天你能來嗎?你的織女!
5、日子在不同的空間流逝,夢境總會有佳期,想念在不同的時間到來。不管世事如何的變幻,你永遠是我的最愛!
6、七夕夜,孤枕難入眠,我將我的心掛在那彎新月上:愛一個人為什么就那么難?
7、但愿天地能知曉,你我心情,百雀筑橋,星夢遞書,星語心愿,七夕與君長相伴!
8、天上有雀橋,地上有佳期,你我心相連,希望今后的每天我們也都朝朝暮暮。
9、親愛的,七夕情人節(jié)就快到了,我發(fā)條短信把愛意化作玫瑰花,溫馨快樂你的心情;把我的情意化作巧克力,香甜美好你的生活,祝情人節(jié)快樂,天天快樂!
10、親愛的,“掃描”到你,我的愛情就“啟動”了,特別是七夕快到的這幾天,思念很快就“升級”了!腦子里的“帶寬”都被你占滿了!七夕快樂!
11、其實淚很甜,哭過天很藍;其實笑也酸,時間總在跑;其實風(fēng)很柔,萬事總有情;其實雨也輕,潤物細無聲;其實思念苦,你知道就好,七夕節(jié)快樂!
12、七月七皺眉頭,愛情可以有,我還真沒有!不管情人有沒有,親戚朋友總會有!不管現(xiàn)在有沒有,繼續(xù)努力肯定有!不管七夕有沒有,幸??鞓范ㄒ?
13、空中飄下的是落葉,帶來的卻是思念;水里流淌的是秋水,帶來的卻是關(guān)切;電波傳來的是短信,接受的卻是祝福。七夕,你快樂,我就快樂。
14、你在哪?如果在路上,祝你一路平安!如果在工作祝你一切順利!如果在聚會,祝你玩的盡興!如果在約會,那你先忙吧,祝七夕情人節(jié)快樂!
15、七夕節(jié)快到了,預(yù)祝有情的你永遠浪漫熱情的你永遠青春真情的你永遠開心純情的你永遠快樂深情的你永遠甜蜜癡情的你永遠幸福!
16、七夕情人節(jié),甜蜜微笑的女人可獲牛郎熱情擁抱一次;嘻哈大笑的男人可獲織女溫柔牽手一次;愁眉苦臉的,不論男女,一律獲老牛深情一舔!
17、七夕織女請俺在銀河邊散步,俺沒答應(yīng)!中秋嫦娥請俺參觀月宮,俺也沒答應(yīng)。俺拒絕了仙女的誘惑留在人間,為了能對你說聲:情人節(jié)快樂!
18、鵲橋是銀河的傳奇,你是我心中的傳奇。浪漫緣分是上天的安排,愛情神話是永恒的未來。許多的奇跡只有相信才會存在。親愛的,七夕愉快!
19、圣旨到,閣下接旨:恰逢七夕,玉帝特安排鵲橋盛會,旨在選撥人間最美之癡情男女,與牛郎織女共渡鵲橋。望相互轉(zhuǎn)告,以便贏取轉(zhuǎn)發(fā)獎勵。
20、天有情,地有情,天地都有情;鵲橋在,銀河在,七夕就存在;七夕樂,天天樂,永遠都快樂;短信來,祝福來,美好日子朝你來。七夕快樂。
21、悄悄的挾一縷情絲,放飛在炎炎夏日;默默的拽一絲牽掛,懸掛在無垠宇宙;靜靜的捎一聲問候,盛開在七夕佳節(jié)。七夕來臨,祝你愛情甜甜,生活滿滿。七夕送男朋友短信
22、牽掛是一束美麗的鮮花;思念是一種情感的升華;朋友是一種永恒的無價;送上我的祝福祝你:錢途無限美好!事業(yè)突飛猛進!七夕情人節(jié)快樂!
23、牽掛,如一束束鮮花的綻放;掛念,是一絲絲情感的升華;念想,是一生的問候;想思,是一世的祝福。牽掛念想思,正隨鵲橋而來,祝七夕快樂!
24、千年神話演繹著經(jīng)典的浪漫,長久的期盼等來喜鵲飛舞翩翩。銀河隔開牛郎織女的思念,卻美麗了一份緣。只愿相愛的人們:七夕快樂,終成眷屬!
25、千年等待,牛郎摯愛,保鮮永不壞,千年期盼,牛郎愛戀,幸福永不斷,千年七夕,今夜如期,祝福要給妻,所有的情,所有的意,深情道聲:老婆我愛你。
26、千里姻緣,鵲橋相約,七夕相會,互訴衷腸;花團錦簇,美景交融,五彩云集,幸福延延;愛意濃濃,回憶悠悠,相伴相依,白頭偕老。愿有情人終成眷屬!
27、銀河水兒浪滔滔,我把思念來打包;牛郎織女聚鵲橋,祝福船兒水上漂;天地此刻靜悄悄,七夕祝愿你人生樂逍遙,愛情永美好,事業(yè)步步高!
28、我特意收集了七夕的第一縷陽光,并把它裝進手機,然后編成了短信發(fā)送給你。希望收到這條新鮮短信的你能感受到我暖暖的祝福:一定一定要幸福哦!
29、愛是一種緣分,即使分離也會覺得心醉;愛是一種感受,即使痛苦也會覺得幸福;愛是一種體會,即使心碎也會覺得甜蜜;七夕將臨,愿心愛的人快樂幸福!
30、女友何時有把酒問吧友不知吧里姑娘是否有男友吾欲離吧而去又恐回吧太難夜難眠相思何其苦女有黑白美丑男有高矮肥瘦此事古難全但愿人長久光棍不再有
31、七夕佳節(jié),彼此天各一方,只見秋字我心上長:想你,念你,該如何告訴你?親愛的,我只能將思念化作短信橋,傾訴愛的\'衷腸你是我心里永恒的!
32、我的生命在于愛你,生命若不息,愛你將不止,我的愛熱烈而不跋扈,給你信任,給你自由,傾聽你的心聲,撫慰你的脆弱,給你愛的關(guān)懷與呵護。七夕節(jié)到了,我要將愛你進行到底。
33、微風(fēng)輕吹浮動相思葉,細雨斜打攪亂相思情,鵲橋相會遇見夢中人,七夕節(jié)情話訴衷腸,天長地久會有時,此情綿綿無絕期,遙望星空兩纏綿,用愛續(xù)寫新神話,祝親愛的七夕節(jié)快樂。
34、擁著真情的心態(tài),癡情的情懷,深愛的誓言;抱著芬芳的玫瑰,醇香的香檳酒,甜蜜的巧克力;送給擁抱情人節(jié)中的你,愿你快樂美意,幸福甜蜜!同時告訴你,我愛你!七夕快樂!
35、農(nóng)歷七月又初七,牛郎又要會織女,我發(fā)短信思念你,天天都想看見你,人生難得遇知己,遠隔千山愛著你。親愛的,七夕節(jié),祝福你我的愛情經(jīng)得起時間的考驗,愛你直到永遠!
36、七夕情人節(jié)將至,七情六欲泛濫,七個情人要擺平:鞏固老情人,聯(lián)絡(luò)舊情人,發(fā)展新情人,保育大情人,栽培小情人,尋找多情人,提防知情人!
37、銀河的光亮也比不過我們愛情的燦爛,流星劃過的印跡也比不過我們愛情的痕跡。想在七夕夜和你深情依偎在葡萄架下,凝望星空,點燃水中的心燭,祈求永遠依偎在你的身旁。
38、七夕情人節(jié),愿你有七喜:一喜天氣晴朗;二喜心情舒暢;三喜出入安康;四喜健康常在;五喜親朋和美;六喜工作順利;七喜節(jié)日快樂!
摘 要 真人秀節(jié)目以一種全新的形式將體育與娛樂完美的結(jié)合在了一起。通過研究真人秀節(jié)目對青少年參加體育活動的影響,激發(fā)青少年參與體育活動的興趣,提高我國青少年的體質(zhì)。運用文獻資料法、比較分析法、邏輯推理法等對真人秀節(jié)目對青少年參加體育活動項目的影響進行了研究分析。結(jié)果表明:真人秀節(jié)目對青少年參加體育活動有影響,將真人秀節(jié)目的形式應(yīng)用于體育教學(xué)之中理論上具有可行性。
關(guān)鍵詞 真人秀節(jié)目 青少年 興趣 體育課
真人秀節(jié)目將專業(yè)性很強的體育運動項目簡單化、趣味化,同時保留了體育運動競爭性的原始特點,且節(jié)目中運動項目的設(shè)置新奇有趣,運動量大,能充分鍛煉身體各項素質(zhì)。因此近年來真人秀節(jié)目受到廣大青少年的歡迎和喜愛。根據(jù)時代、科技的發(fā)展和對當代青少年個性的把握,以及青少年對體育活動越來越高要求的特點,本研究致力于充分發(fā)揮電視網(wǎng)絡(luò)等新媒體覆蓋面廣、傳播力度大的優(yōu)越性,以深受青少年喜歡的真人秀節(jié)目為契合點,激發(fā)青少年對體育活動的興趣和熱情,讓青少年主動的參加體育活動。
一、真人秀節(jié)目對青少年價值觀的影響
從表1可以看出,73.7%的青少年認為真人秀節(jié)目對其價值觀有影響,且將近一半青少年認為真人秀節(jié)目的積極影響多余消極影響,可見真人秀節(jié)目對青少年價值觀影響較大。
真人秀節(jié)目的觀看渠道目前有兩個,一是通過電視直接觀看,二是通過互聯(lián)網(wǎng)視頻搜索觀看。這兩種方式都是傳播力度大、覆蓋面廣的傳播方式,再加上嘉賓明星通過微博、微信等平臺不斷進行宣傳造勢,對觀眾來說可^是全方位、包圍式的影響。
二、真人秀節(jié)目對青少年參加體育活動的影響
從表2可以看出70.2%的青少年在觀看真人秀節(jié)目后有想?yún)⑴c體育活動的沖動。通過調(diào)查還發(fā)現(xiàn)青少年參加體育活動的比率與觀看體育類真人秀節(jié)目的次數(shù)成正比,即觀看次數(shù)越多的青少年體育活動參與率也就越高[3]。
真人秀節(jié)目形式新穎,內(nèi)容豐富,情節(jié)跌宕起伏,結(jié)局出人意料,剪輯和后期制作精良,節(jié)目里涉及的運動項目非常之廣,包括籃球、足球、排球、羽毛球、乒乓球、游泳、踢毽子、跑步、跳舞、蹦床等等。真人秀節(jié)目另外一個特點是參與嘉賓大多是明星或名人,而青少年又極易產(chǎn)生偶像崇拜和模仿行為,這也是真人秀節(jié)目備受青少年喜愛的主要原因之一。
三、真人秀節(jié)目對體育課的影響
青少年對體育課的追求越來越高,將真人秀節(jié)目的形式應(yīng)用于體育課中不僅可以提高青少年體育學(xué)習(xí)的興趣,對培養(yǎng)青少年體育行為、體育意識和體育習(xí)慣的養(yǎng)成也至關(guān)重要。真人秀節(jié)目順應(yīng)時代潮流的特點決定真人秀式的體育模式對未來體育的發(fā)展有借鑒意義,通過借鑒真人秀節(jié)目中的某些形式可對傳統(tǒng)體育課做出合適的調(diào)整,開發(fā)一系列新青少年喜歡的體育活動項目。在將這種全新的模式運用到體育課程中時,體育教師發(fā)揮著非常重要的作用。他們開發(fā)的新的運動形式是否吸引學(xué)生,是否能充分利用身邊的材料制作道具,組織的形式和規(guī)則是否能得到學(xué)生的認可,都對體育教師有著較高的要求。
四、結(jié)語
真人秀節(jié)目火爆的同時也暴露出許多問題,節(jié)目泛濫,內(nèi)容良莠不齊,為迎合觀眾口味趨向低俗化。青少年對很多事物缺乏正確的判斷力且模仿力強,容易受到電視網(wǎng)絡(luò)的影響。因此,真人秀節(jié)目在繼續(xù)發(fā)展的同時一定要注意節(jié)目的質(zhì)量,發(fā)揮其優(yōu)勢,向社會和青少年傳播正能量,促進社會的進步。老師和家長也要對青少年進行正確的引導(dǎo)。
參考文獻:
[1] 成衛(wèi)衛(wèi).青少年收看真人秀節(jié)目情況調(diào)查[J].廣東青年職業(yè)學(xué)院學(xué)報.2016.30(1):28-33.
關(guān)鍵詞 玄參; 哈巴俄苷; 人血清白蛋白; 熒光猝滅; 結(jié)合反應(yīng)
1 引 言
中藥活性成分是中藥防治疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)。從細胞和分子水平研究中藥及其有效成分的作用機理,對中藥的深入研究與開發(fā)具有重要意義。藥物與生物大分子的相互作用研究,一直是藥理學(xué)、藥物化學(xué)、分子生物學(xué)等領(lǐng)域關(guān)注的熱點問題?,F(xiàn)階段,在藥物與蛋白質(zhì)相互作用研究方面,主要針對它們之間的結(jié)合部位、作用力、結(jié)合位點數(shù)、熱力學(xué)常數(shù),以及由此引起的蛋白質(zhì)構(gòu)型變化等方面[1,2]。人血清白蛋白(Human serum albumin, HSA)是血漿中含量最豐富的蛋白質(zhì),具有維持內(nèi)生理環(huán)境相對穩(wěn)定作用,可與藥物小分子結(jié)合,并將其運輸至身體的各個部位,是藥物發(fā)揮藥效和生理功能的重要載體和靶分子。應(yīng)用多種光譜法獲得中藥有效成分與HSA相互作用的各種數(shù)據(jù),進而分析兩者之間相互作用機理,對于揭示中藥藥理活性、進行藥物分子設(shè)計和開發(fā)及藥物的臨床應(yīng)用等具有重要的指導(dǎo)意義[1~5]。
中藥玄參為玄參科(Scrophulariaceae)玄參屬(Scrophularia)植物玄參(Scrophularia ningpoensis Hemsl.)的干燥根,具有清熱涼血、滋陰降火、解毒散結(jié)之功效[6~9]。哈巴俄苷(Harpagoside, HAR)為環(huán)烯醚萜類化合物,是玄參中的主要化學(xué)成分和藥理活性成分之一,現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,HAR苷具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗血小板聚集、保護血管內(nèi)皮層細胞、保護神經(jīng)元及提高免疫力等作用[10~14]。目前,關(guān)于HAR與HSA的結(jié)合反應(yīng)研究未見報道。因此,本研究以HSA為模型蛋白,利用熒光光譜法和紫外可見吸收光譜法研究HAR與HSA的結(jié)合作用機制,獲取了兩者相互作用的結(jié)合參數(shù)、結(jié)合位點數(shù)、作用力類型以及HAR對HSA構(gòu)象的影響。
2 實驗部分
2.1 儀器與試劑
F4500熒光光度計、UV4010紫外可見分光光度計(日本日立公司); HH2數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海江星儀器有限公司); UPTII10T優(yōu)普超純水器(四川優(yōu)普超純科技有限公司); PHS3C pH計(上海康儀儀器有限公司); Eppendorf移液器(德國Eppendorf公司)。
哈巴俄苷(本實驗室從玄參中分離得到,NMR鑒定結(jié)構(gòu),HPLC鑒定純度>98%)用50%乙醇配制成1.0 × 103 mol/L儲備液,于4.0℃暗處保存,用時逐級稀釋至所需濃度; 人血清白蛋白(0.2 g/mL,批號為201511052,華蘭生物工程重慶有限公司),用0.05 mol/L 緩沖溶液TrisHCl(pH 7.40)配制成2.0×105 mol/L的儲備液4.0℃暗處保存,用時稀釋至所需濃度; 0.05 mol/L的TrisHCl緩沖溶液(pH=7.40)和0.04 mol/L BrittonRobinson緩沖溶液(BR,用0.2 mol/L NaOH調(diào)節(jié)至pH 4.0, 7.0和9.0); 乙醇、三羥甲基氨基甲烷、乙酸、硼酸等試劑均為分析純; 實驗用水為超純水。
2.2 實驗方法
熒光光譜和同步熒光光譜:在10 mL定量比色管中加入1.0 mL緩沖溶液、2.0 mL 2.0 × 106 mol/L HSA、適量HAR,使HAR濃度分別為4.0\, 6.0\, 15\, 30\, 40\, 50\, 60\, 70和80 μmol/L,用去離子水定容后,在24℃、37℃和50℃下恒溫水浴2 h(整個體系保持NaCl濃度為0.9%,以維持生理條件下的離子強度)。固定激發(fā)波長λex=280 nm,激發(fā)和發(fā)射狹縫均為5 nm,用1 cm石英比色皿在280~500 nm范圍內(nèi)掃描HSA及HSAHAR體系的熒光光譜[15]。固定Δλ=60 nm和15 nm(Δλ=λem-λex),記錄HAR與HSA相互作用的同步熒光光譜; 在240~500 nm范圍內(nèi)的掃描HAR與HSA相互作用的紫外光譜[15]。
紫外吸收光譜:在10 mL定量比色管中加入1.0 mL緩沖溶液、2.0 mL 20 μmol/L的HSA和HAR,用去離子水定容后,在24℃、37℃和50℃下水浴恒溫2 h。以相應(yīng)溶液的空白為參比,在紫外可見分光光度計上,記錄HASHAR體系在250~500 nm范圍內(nèi)的紫外吸收光譜(1 cm的石英比色池)。
3 結(jié)果與討論
3.1 熒光猝滅機制及猝滅常數(shù)
許多分子能通過與熒光物質(zhì)相互作用(如激發(fā)態(tài)反應(yīng)、分子重排、能量轉(zhuǎn)移、形成基態(tài)復(fù)合物及碰撞猝滅等)而使其熒光強度下降的現(xiàn)象,稱為熒光猝滅[16,17]。HSA的內(nèi)源熒光主要來源于色氨酸殘基,當小分子與HSA結(jié)合,會使色氨酸殘基的微環(huán)境發(fā)生改變而使其熒光強度發(fā)生改變[15]。在HSA溶液中,隨著HAR不嗉尤耄其濃度不斷增大,同時HSA的熒光強度逐漸降低(圖1),表明HAR可以有效猝滅HSA的內(nèi)源熒光。
靜態(tài)猝滅和動態(tài)猝滅。靜態(tài)猝滅主要是由于猝滅劑分子和熒光物質(zhì)發(fā)生結(jié)合作用,形成了復(fù)合物而導(dǎo)致淬滅; 動態(tài)猝滅主要是由于熱運動和分子碰撞引起的。不同猝滅機制可以根據(jù)溫度對結(jié)合常數(shù)的影響及測定熒光壽命的方法區(qū)別[16,18]。
判斷體系的熒光猝滅機制,可對猝滅過程的實驗結(jié)果,按照SternVolmer方程[16]進行處理。
根據(jù)SternVolmer方程,用F0/F對[Q]作圖(SternVolmer曲線),呈一條直線(圖2),通過該直線的斜率可計算得到動態(tài)猝滅常數(shù)Ksv。在不同溫度和pH值條件下,根據(jù)SternVolmer曲線計算得到HAR對HSA的熒光猝滅常數(shù)(表1)。
通常,對于靜態(tài)猝滅,猝滅常數(shù)Ksv隨溫度的升高而減?。?而對于動態(tài)猝滅,猝滅常數(shù)Ksv隨溫度的升高而增大[19,20]。根據(jù)實驗數(shù)據(jù)所得計算結(jié)果(表1),HAR與HSA結(jié)合反應(yīng)的動態(tài)猝滅常數(shù)Ksv隨著溫度的升高而減小,表明HAR對HSA的熒光猝滅機制為靜態(tài)猝滅。通常情況下,小分子猝滅劑對生物大分子的最大碰撞猝滅速率常數(shù)的閾值為2.0×1010 L/mol?s,如果計算所得的猝滅速率常數(shù)小于此閾值,表明為動態(tài)猝滅機理; 若猝滅速率常數(shù)大于此閾值,則猝滅過程可能包含了靜態(tài)猝滅過程[18]。由計算所得的數(shù)據(jù)(表1)可知,在不同條件下,HAR對HSA的熒光猝滅速率常數(shù)Kq值均遠大于最大碰撞猝滅速率常數(shù)的閾值,進一步說明了HAR對HSA的熒光猝滅機制為靜態(tài)猝滅。根據(jù)以上分析,HAR對HSA的熒光猝滅過程主要是由兩者之間結(jié)合形成復(fù)合物而引起的靜態(tài)猝滅。
3.2 結(jié)合常數(shù)和結(jié)合位點數(shù)
HAR對HSA的熒光猝滅機理主要為靜態(tài)猝滅。對于靜態(tài)猝滅過程,假設(shè)化學(xué)小分子Q在蛋白質(zhì)分子上有n個獨立且等同的結(jié)合位點,小分子化合物與蛋白質(zhì)大分子相互作用的結(jié)合常數(shù)KA及結(jié)合為點數(shù)n,可采用Scatchard方法,由公式(2)求出[20,21]。
lg[(F0-F)/F]=lgKA + nlg[Q](2)
以lg[(F0-F)/F]為縱坐標,lg[Q]為橫坐標作圖,根據(jù)雙對數(shù)曲線的斜率和截距可以得到HAR與HSA相互作用的結(jié)合常數(shù)KA及結(jié)合位點數(shù)n。
在不同實驗條件下,HAR與HSA按照靜態(tài)猝滅形成復(fù)合物模型,通過實驗數(shù)據(jù)得到雙對數(shù)曲線(圖3)均呈良好的線性關(guān)系(線性回歸系數(shù)>0.99)。根據(jù)雙對數(shù)曲線計算得到HAR與HSA相互作用的結(jié)合常數(shù)KA在1.20 × 105~2.98 × 106 L/mol之間,表明兩者之間有較強的結(jié)合作用; 結(jié)合位點數(shù)n在1.09~1.44之間,數(shù)值接近于1,表明兩者可能形成一個結(jié)合位點(表2)。在不同溫度和pH值條件下,HAR與HSA相互作用的結(jié)合常數(shù)存在一定差異,說明體系的溫度和pH值對HAR與HSA的結(jié)合反應(yīng)有影響。
3.3 相互作用的熱力學(xué)參數(shù)和主要作用力
化合物(包括藥物小分子)與蛋白質(zhì)等生物大分子之間常借助氫鍵、靜電引力、范德華力和疏水作用力等非共價結(jié)合形成超分子復(fù)合物。不同化合物與蛋白質(zhì)結(jié)合的作用力類型不同,根據(jù)熱力學(xué)常數(shù)的符號與大小判斷作用力類型[4,22]。ΔG(自由能變)、ΔH(焓變)和ΔS(熵變)可通過Van′t Hoff方程[23]進行計算:
其中,KA為對應(yīng)溫度下的結(jié)合常數(shù),R為摩爾氣體常數(shù),以lnKA對1/T作圖(圖4),由斜率和截距分別可以求出焓變ΔH和熵變ΔS,再由公式(4)可計算出不同條件下反應(yīng)的吉布斯自由能變ΔG。 從熱力學(xué)角度看,在一定溫度和壓力下,化合物與蛋白質(zhì)結(jié)合反應(yīng)能否自發(fā)進行取決于體系的吉布斯自由能變ΔG,ΔG0、ΔS>0時, 為疏水作用力; 當ΔH0時,為靜電作用力; 當ΔH
3.4 結(jié)合距離
HSA有較強的熒光,且與HAR的吸收光譜有較大的重疊,作為給體(HSA)的熒光光譜和作為受體(HAR)的吸收光譜的重疊,可以說明兩者有一定程度的能量轉(zhuǎn)移。根據(jù)Frster非輻射能量轉(zhuǎn)移理論,當HAR在HSA上的結(jié)合位點與色氨酸的距離小于7 nm時,將發(fā)生非輻射能量轉(zhuǎn)移[4~5]。HSA熒光發(fā)射光譜與HAR吸收光譜間的光譜重疊(見圖5)積分J可由式(5)求得[23]:
其中, F(λ)為HSA在波長λ處的熒光強度, ε(λ)則為HAR在波長λ處的摩爾消光系數(shù),J為重疊面積。
能量轉(zhuǎn)移效率E與HSAHAR結(jié)合距離r及臨界能量轉(zhuǎn)移距離R0有關(guān),可由以下公式求得[21~23]:
其中, R0是指能量轉(zhuǎn)移效率E=50%時的臨界距離, K2為偶極空間取向因子(取值2/3), N為介質(zhì)的折射指數(shù)(取值1.336), Φ為給體的光量子效率(取值0.118)。
依據(jù)公式(5)求得HAR紫外吸收光譜與HSA熒光發(fā)射光譜的重疊的積分J,再根據(jù)式(6)和(7)計算得HAR與HSA結(jié)合反應(yīng)的R0,E、和r(表3)。結(jié)果表明,HAR與HSA反應(yīng)的結(jié)合距離r為4.08~4.29 nm, 小于7 nm,且符合了0.5R0
3.5 HAR對HSA構(gòu)象的影響
熒光光譜其最大發(fā)射波長的偏移與蛋白質(zhì)氨基酸殘基周圍的微環(huán)境有關(guān),同步熒光光譜可以提供關(guān)于蛋白質(zhì)構(gòu)象改變的信息。對于蛋白質(zhì)的同步熒光光譜,Δλ=15 nm時只表現(xiàn)酪氨酸殘基的熒光; Δλ=60 nm時僅表現(xiàn)色氨酸殘基的熒光[19,24]。
固定HSA的量,隨著HAR濃度增大,酪氨酸和色氨酸殘基的同步熒光強度均發(fā)生明顯的猝滅(圖6)。隨HAR濃度增大,色氨酸殘基的發(fā)射峰波長有明顯的紅移,而酪氨酸殘基的發(fā)射峰波長在HAR濃度較高時有紅移現(xiàn)象,說明HAR的加入使HSA的構(gòu)象發(fā)生了一定程度的改變,可能使色氨酸和酪氨酸殘基所處的微環(huán)境極性增強,疏水性減弱。
山東省高級人民法院:
你院魯法(民)發(fā)〔1990〕25號關(guān)于許秀英夫婦與王青蕓間是否已事實解除收養(yǎng)關(guān)系的請示報告收悉。
經(jīng)我們研究認為,一九三七年王青蕓兩歲時被其伯父母王在起、許秀英夫婦收養(yǎng),并共同生活了二十年,這一收養(yǎng)事實為親戚、朋友,當?shù)厝罕姟⒒鶎咏M織所承認,應(yīng)依法予以保護。雖然王青蕓于一九五七年將戶口從王在起處遷出到其單位落戶,后又遷入其生母處,但雙方未以書面或口頭協(xié)議公開解除收養(yǎng)關(guān)系。而且,王在起生前與王青蕓有書信來往,并以父女相稱,王青蕓對王在起夫婦也盡有一些義務(wù)。據(jù)此,我們同意你院第一種意見,即以認定許秀英夫婦與王青蕓的收養(yǎng)關(guān)系未事實解除為妥。
以上意見,供參考。