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胰蛋白酶范文第1篇

Induction of secretion of interleukin8 from lung epithelial cells by trypsin

【Abstract】　AIM: To investigate the actions of trypsin on the secretion of interleukin8 (IL8) from human lung epithelial cells. METHODS: A549 cells were cultured in a 12well culture plate. The challenge was performed by adding various concentrations of trypsin or trypsin inhibitor into each well， respectively. After 2 h， 8 h or 16 h， the reactions were terminated by removing the supernatant from each well. A sandwich ELISA was used to determine the levels of IL8 in supernatants. RESULTS: Following 16 h incubation， trypsin induced the secretion of IL8 in a concentration dependent manner. As low as 1 μg/L trypsin was able to induce IL8 release from epithelial cells and the maximum of accumulated release of IL8 was observed with 3 μg/L trypsin， which was 5fold more than the baseline release. However， when trypsin concentration increased over 3 μg/L， the extent of increased secretion of IL8 decreased. Soybean trypsin inhibitor (SBTI) and α1antitrypsin (α1AT) inhibited trypsin induced secretion of IL8. The time course showed that the actions of trypsin initiated at 2 h and reached their peak at 16 h. CONCLUSION: Trypsin is a potent secretogogue of IL8 release from cultured human lung epithelial cells， indicating that it is likely to be involved in the pathophysiological process of airway inflammation.

【Keywords】 trypsin；epithelial cells; interleukin8; lung

【摘要】 目的： 探討胰蛋白酶對人上皮細(xì)胞白細(xì)胞介素8（IL8）分泌的影響. 方法： 人肺上皮細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞分別接種于12孔培養(yǎng)板各孔內(nèi)，并分別用不同濃度的胰蛋白酶和/或胰蛋白酶抑制劑進行刺激. 刺激時間為2 h、8 h和16 h. 用ELISA方法檢測上清液中的IL8水平. 結(jié)果： 經(jīng)過16 h的培養(yǎng)，胰蛋白酶可引起濃度相關(guān)性IL8釋放，胰蛋白酶在濃度1 μg/L時就可引起IL8的釋放量增加，3 μg/L時誘導(dǎo)IL8的釋放量達(dá)高峰，為基礎(chǔ)分泌量的5倍，但隨著胰蛋白酶濃度的增加，IL8的釋放量反而下降. 胰蛋白酶抑制劑可以抑制胰蛋白酶誘導(dǎo)IL8釋放的作用. 時間相關(guān)曲線表明，胰蛋白酶從2 h起即可引起IL8釋放，16 h達(dá)高峰. 結(jié)論： 胰蛋白酶可促進人肺上皮細(xì)胞分泌IL8，表明它能積極參與呼吸道的炎癥過程.

【關(guān)鍵詞】 胰蛋白酶；上皮細(xì)胞；白細(xì)胞介素8；肺

0引言

蛋白酶激活受體（protease activated receptor， PAR）屬G蛋白耦聯(lián)受體家族中的亞類，目前有PAR14 4個成員組成，PAR2可在人呼吸道上皮細(xì)胞和多種呼吸道腫瘤上皮細(xì)胞系表面表達(dá)［1-5］. 胰蛋白酶主要由胰腺分泌，在體內(nèi)主要參與腸道消化功能. 最近研究表明，胰蛋白酶還是PAR2的激動劑，胰蛋白酶在人PAR2的R34?S35LIGKV處切斷受體的N末端暴露系鎖配體SLIGKV，從而激活PAR2參與肺部炎癥［6］，而PAR2的缺乏可以降低氣道炎癥反應(yīng)［7］. 因此，我們利用人肺癌上皮細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞探討胰蛋白酶對上皮細(xì)胞IL8分泌的影響.

1材料和方法

1.1材料

胰蛋白酶、大豆胰蛋白酶抑制劑(SBTI)、α1抗胰蛋白酶(α1AT)、青、鏈霉素均購于Sigma公司，DMEM 培養(yǎng)液、胎牛血清（FBS）、胰蛋白酶EDTA消化液均購自Gibco公司.

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)人肺癌上皮細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞（購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞研究所）接種于50 mL培養(yǎng)瓶內(nèi)，用DMEM完全培養(yǎng)液（含100 g/L FBS， 10×104 U/L青霉素和100 mg/L鏈霉素），于37℃，50 mL/L CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng).

1.2.2上皮細(xì)胞激發(fā)實驗待細(xì)胞鋪滿瓶底后，用2.5 g/L胰蛋白酶EDTA消化液消化，將獲得的細(xì)胞分種于12孔培養(yǎng)板各孔內(nèi)，用1 mL完全培養(yǎng)液培養(yǎng)至細(xì)胞相互融合后，換無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)16 h. 然后向每孔的細(xì)胞內(nèi)加入不同濃度的胰蛋白酶和/或胰蛋白酶抑制劑進行激發(fā)實驗. 胰蛋白酶抑制劑和胰蛋白酶加入細(xì)胞前在冰上孵育30 min，細(xì)胞培養(yǎng)2， 8和16 h后收集上清液，離心后于-80℃凍存. 全部實驗為雙樣，每組實驗均重復(fù)5次.

1.2.3細(xì)胞上清IL8水平檢測用人IL8 ELISA檢測試劑盒（Biosource）， 檢測細(xì)胞上清液中的IL8水平，并用酶標(biāo)儀 (Molecular Devices公司) 于450 nm波長處測定吸光度（A）.

統(tǒng)計學(xué)處理： 數(shù)據(jù)以x±s表示，采用SPSS(11.0版)軟件進行單因素方差分析，組間方差不齊時采用非參數(shù)秩和檢驗. P

2結(jié)果

2.1胰蛋白酶對肺上皮細(xì)胞系IL8釋放的影響經(jīng)過16 h的培養(yǎng)，胰蛋白酶可引起濃度相關(guān)性IL8釋放增加， 胰蛋白酶1 μg/L時就可引起IL8釋放量增加， 3 μg/L時達(dá)高峰，為基礎(chǔ)分泌量的5倍，但隨著胰蛋白酶濃度的再增加， IL8的釋放量反而下降 （Fig 1）. 時間關(guān)系曲線顯示，胰蛋白酶引起A549細(xì)胞分泌IL8從2 h起就有所增加，16 h增加最顯著（Fig 2）.

2.2胰蛋白酶抑制劑對胰蛋白酶誘導(dǎo)釋放IL8的抑制作用胰蛋白酶抑制劑和胰蛋白酶與A549細(xì)胞共同培養(yǎng)16 h后結(jié)果顯示：SBTI在濃度為10和30 mg/L時可分別抑制胰蛋白酶誘導(dǎo)的A549細(xì)胞釋放IL8的作用（Fig 3）. α1AT在濃度為10 mg/L也能抑制胰蛋白酶引起的IL8釋放（Fig 4）.

3討論

研究表明，PAR2激活能介導(dǎo)氣管平滑肌的收縮、促進炎癥性細(xì)胞的游走和血管的通透性增加，介

n=5. bP

導(dǎo)嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤［8］，調(diào)節(jié)血管舒張與收縮，調(diào)節(jié)消化道和皮膚的功能等［9］. 呼吸道上皮細(xì)胞PAR2的激活還可導(dǎo)致基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP9）［10］、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GMCSF）［1，2］、酸性粒細(xì)胞趨化因子［4］、前列腺素E2（PGE2）、白細(xì)胞介素（IL）6等［4］細(xì)胞因子的釋放，提示PAR2可能參與氣道的炎癥和重塑. 激活PAR2的蛋白酶主要有胰蛋白酶、肥大細(xì)胞類胰蛋白酶及凝血因子Ⅶa， Xa［11］.

我們的研究表明，胰蛋白酶對呼吸道上皮細(xì)胞IL8的分泌有顯著促進作用，表明胰蛋白酶能通過激活PAR積極參與呼吸道的炎癥過程，間接證明了PAR在哮喘和慢性阻塞性肺疾病的發(fā)病過程中起著一定的作用. 胰蛋白酶可引起肺上皮細(xì)胞高達(dá)5倍的IL8釋放，表明它對IL8的釋放促進作用是高效的. IL8的釋放量高達(dá)1.7 μg/L，達(dá)到了IL8發(fā)揮其生理和病理生理功能的濃度. 胰蛋白酶抑制劑SBTI對胰蛋白酶誘導(dǎo)IL8釋放的抑制作用，表明胰蛋白酶的作用是通過其水解活性實現(xiàn)的，也表明胰蛋白酶抑制劑可能有抗炎作用. α1抗胰蛋白酶對胰蛋白酶誘導(dǎo)的IL8釋放也具有抑制作用，它作為機體內(nèi)源性的胰蛋白酶抑制劑可能在呼吸道的抗炎反應(yīng)機制中起一定作用.

從時間關(guān)系曲線上看，胰蛋白酶對IL8分泌的刺激作用是一個比較緩慢的過程，這可能表明分泌出的IL8是由上皮細(xì)胞新合成的，而不是原有貯存的IL8的單純釋放.

我們發(fā)現(xiàn)，A549細(xì)胞系可同時表達(dá)PAR14四種受體［12］，而胰蛋白酶既可酶切PAR2又可酶切PAR4從而激活受體，因此，胰蛋白酶引起的肺上皮細(xì)胞IL8的釋放，是單純由PAR2或PAR4介導(dǎo)還是PAR2與PAR4同時參與，值得進一步探討.

【參考文獻】

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胰蛋白酶范文第2篇

關(guān)鍵詞：重組人Ⅱ型胰蛋白酶；牛胰蛋白酶：性質(zhì)；應(yīng)用

中圖分類號：Q55.9　文獻標(biāo)識碼：A　文章編號：1672-979X(2010)11-0384-05

鹽胰蛋白酶原為胰蛋白酶的前體，在胰臟合成。在Ca2+存在條件下，胰蛋白酶原可通過腸激酶或胰蛋白酶的自身激活，斷開肽鏈N端6位賴氨酸和7位異亮氨酸殘基之間的肽鍵，失去一段6肽，分子構(gòu)象變?yōu)橛谢钚缘囊鹊鞍酌浮Ｒ鹊鞍酌缚杉せ蠲冈?，成為有活性的酶。商品化胰蛋白酶主要來源于豬或牛的胰腺。

人胰蛋白酶有I型和II型2種類型，根據(jù)等電點不同，又分為陽離子型和陰離子型。我們用基因工程方法得到了重組人陰離子型胰蛋白酶原(II型胰蛋白酶)，激活后得到高活性的人源胰蛋白酶。由于胰蛋白酶在溶液中穩(wěn)定性較差，容易發(fā)生自降解，使酶活性下降。本實驗研究了重組人II型胰蛋白酶的穩(wěn)定性及部分性質(zhì)，并初步研究了酶解激活羧肽酶B酶原及在細(xì)胞消化中的應(yīng)用。

1　材料

1.1　試劑

牛胰蛋白酶(Sigma)；重組人Ⅱ型胰蛋白酶-(本實驗室制備)；苯甲酸-L-精氨酸乙酯(BAEE，Sigma)：其余試劑為進口或國產(chǎn)分析純。

1.2　儀器

T6紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器公司)：FE20型pH計(梅特勒，托利多儀器公司)；EV265雙向電泳儀(PS265-230V，Hoefer)

2　方法

2.1　Jm值的測定

以BAEE為底物，測定重組人II型胰蛋白酶和牛胰蛋白酶的米氏常數(shù)Km。底物BAEE的濃度范圍為0.005-0.25mmol／L，用雙倒數(shù)作圖法，以底物濃度的倒數(shù)值為橫坐標(biāo)，反應(yīng)速率即活性的倒數(shù)值為縱坐標(biāo)做圖，與x軸交點的負(fù)倒數(shù)即為Km。

2.2　重組人lI型胰蛋白酶的最適溫度及最適pH

取3mL底物分別置于4，15，20，25，30，40，55，65，75℃保溫1h，加入等量的重組人II型胰蛋白酶，測定酶活性。底物用不同pn的20 mmol／L乙酸鈉一乙酸，Tris-HCl及GIy-NaOH緩沖液配制。測定重組人II型胰蛋白酶活性，確定最適pH。

2.3　重組人ll型胰蛋白酶與牛胰蛋白酶熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性

將重組人Ⅱ型胰蛋白酶與牛胰蛋白酶分別配制成0.5 mg／mL溶液，分別于-20，4，15，37，50℃保溫，測定不同保溫時間的活性，計算失活百分比。

將重組人Ⅱ型胰蛋白酶1mL分別加入不同pH的緩沖液中，配成200 U／mL(0.3 mg／mL)溶液。緩沖液分別用50 mmol／L乙酸鈉-乙酸，Tris-HCl和Gly-NaOH，pH

2.4　金屬離子及化學(xué)試劑對重組人Il型胰蛋白酶與牛胰蛋白酶活性的影響

向重組人Ⅱ型胰蛋白酶液(活性860 U／mL)分別加入不同金屬離子(Zn2+，Mg2+，Ba2+，Mn2+，Ca2+，F(xiàn)e2+，Cu2+)1 mmol／L，4℃保溫1h后測活性。重組人II型胰蛋白酶液(活性750 U／mE)分別按1％的量加入EDTA(乙二胺四乙酸)，PMSF(苯甲基磺酰氟)，DTT(二巰基蘇糖醇)，SDS(十二烷基硫酸鈉)，Triton x，100，4℃保溫1 h后測活性。另取牛胰蛋白酶粉末按上述方法配成相同活性溶液。

取重組人II型胰蛋白酶分別加入不同濃度(0.5，1mol／L)氯化鈉溶液及尿素(1.2 mol／L)溶液配制成活性為1200 U／mL溶液。4℃放置24h后測活性。另取牛胰蛋白酶粉末配成相同活性溶液，同法操作。

2.5　重組人II型胰蛋白酶酶解羧肽酶B動力學(xué)研究

取牛胰蛋白酶和實驗室制取的重組人II型胰蛋白酶，按蛋白濃度比1:50將等量的2種酶加入羧肽酶B復(fù)性液(0.5mg／mL)中。間隔一定時間測羧肽酶B活’性，并留取樣品檢測SDS-PAGE。

2.6　重組人ll型胰蛋白酶消化細(xì)胞的初步研究

細(xì)胞消化液組成：胰酶0.5 mg／mL，EDTA 0.04 g／mE溶于PBS液中，并用鹽酸調(diào)為pH 7.4。所用溶液均經(jīng)高溫滅菌，或者經(jīng)0.22岫1濾膜過濾。

A組為牛胰蛋白酶組，AI：800 U／mL牛胰蛋白酶酶液200μL，EDTA 0.04g／nL；A2：800 U／mL牛胰蛋白酶酶液100μL，EDTA0.04g／mL。

B組為重組人胰蛋白酶組，B1：800U／mL重組人II型胰蛋白酶酶液200uL，EDTA 0.04g／mL；B2：800U／mL重組人1I型胰蛋白酶酶液100μL，EDTA0.04g／mL；B3：400U／mL重組人II型胰蛋白酶酶液200uL，EDTA 0.04g／mL。

c組為專用細(xì)胞消化液200μL，活性800 U／mL，EDTA0.04g,／mL。

將傳代的鼠T3細(xì)胞傳代于6孔板，加入細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁生長后，向6孔板分別加入上述6種試液。顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，待細(xì)胞完全脫離培養(yǎng)瓶時拍照并記錄時間。比較細(xì)胞形態(tài)變化和完全消化所需時間。

3　結(jié)果

3.1　重組人Il型胰蛋白酶和牛胰蛋白酶Km值的測定

結(jié)果見圖1。由圖1A計算可知，重組人II型胰蛋白酶的Km值為12.7μmogL，Vmax為212.76μmol／min。由圖1B計算可知，牛胰蛋白酶Km。值為40μmol／L，Vmax為588.23μmol／min。表現(xiàn)出重組人胰蛋白酶對BAEE有更高的親和力。

3.2　最適溫度及最適pH的確定

不同的測定溫度測得的吸光度在5min內(nèi)的變化見圖2。測活溫度低于30℃，吸光度變化均勻。高于30℃，5min內(nèi)的吸收度隨時間呈下降趨勢，即酶在高于30℃條件下易失活。所以，30℃為測定重組人II型胰蛋白酶活性的最適溫度。通常情況下，我們?nèi)赃x擇25℃的標(biāo)準(zhǔn)條件為測活溫度。

pH對測定活性有很大的影響，pH7.6時酶活性最高，所以pH 7.6為胰酶測活的最適pH。見圖3。

3.3　重組人II型胰蛋白酶與牛胰蛋白酶的熱穩(wěn)定性及pH穩(wěn)定性

重組人Ⅱ型胰蛋白酶酶液置于不同溫度下，活性隨著時間的變化見圖4A。由圖4A可見，溫度越低，酶活性損失越小，溫度高于50℃，酶活性很快-喪失。但是，酶置于20℃的條件下，活性喪失相當(dāng)快。這可能是凍融過程中蛋白構(gòu)象發(fā)生變化所致。所以重組人II型胰蛋白酶的最適保存溫度為4℃。牛胰蛋白酶酶液置于不同溫度下，活性隨著時間的變化見圖4B。牛胰蛋白酶隨著溫度升高活性喪失很快，-20℃條件下酶液最穩(wěn)定。相同時間內(nèi)，牛胰蛋白酶活性喪失的速度比重組人Ⅱ型胰蛋白酶快。

重組人II型胰蛋白酶及牛胰蛋白酶在不同pH條件下活性變化見圖5。由圖5可見，2種酶的變化趨勢基本相同。pH過低或過高都使2種酶活性降低，重組人Ⅱ型胰蛋白酶pH8～9時活性最穩(wěn)定。牛胰蛋白酶對pH的耐受性要強，pH 7～10時牛胰蛋白酶活性只有較小的損失。

3.4　金屬離子及試劑對胰蛋白酶活性的影響

各種試劑對酶活性的影響見表1。牛胰蛋白酶活性隨著EDTA濃度上升喪失增多，1mmol／L EDTA就能使重組人II型胰蛋白酶活性喪失80％。EDTA使酶活性喪失是因酶液中鈣離子被EDTA螯合，表明重組人II型胰蛋白酶活性中心的鈣離子對酶活性的發(fā)揮有至關(guān)重要的作用。二者不同可能與牛胰蛋白酶含ca2+有關(guān)。PMSF對酶活性有抑制作用，因為PMSF是絲氨酸蛋白酶抑制劑，這也表明胰蛋白酶是絲氨酸蛋白酶，活性被抑制。DTT對2種酶的活性也有很大的影響，尤其是對重組人II型胰蛋白酶。1％SDS和0.1％Triton-X100能使酶活性徹底喪失，使蛋白質(zhì)發(fā)生變性。高濃度的NaCl(如0.5mol／L和lmol／L)和低濃度的Urea(如l mol／L和2 moFL)對重組人II型胰蛋白酶活性沒有影響。表1不同試劑對牛胰蛋白酶及重組人胰蛋白酶活性的

3.5　重組人11型胰蛋白酶及牛胰蛋白酶用于羧肽酶原B的酶解激活

用重組人Ⅱ型胰蛋白酶酶解的羧肽酶B的最終比活性是用牛胰蛋白酶酶解樣品的1.5倍。由圖6可見，重組人離子型胰蛋白酶酶解羧肽酶原B在速率上優(yōu)于牛胰蛋白酶。由圖7可見，羧肽酶原B在加入胰蛋白酶后，逐步酶解為羧肽酶B。所以，我們通過基因工程方法制備的重組人胰蛋白酶在某些方面已經(jīng)達(dá)到甚至超過了市場同類產(chǎn)品。

3.6　重組人Il型胰蛋白酶消化細(xì)胞初步研究結(jié)果

各組樣品完全消化細(xì)胞所用時間見表2。由表2可見，在活性相同時，重組人II型胰蛋白酶完全消化細(xì)胞所用的時間較短，幾乎與市場上消化細(xì)胞專用消化液所用時間相同。

細(xì)胞消化效果見圖8。經(jīng)過胰蛋白酶消化作用后，原來貼壁生長的T3細(xì)胞從培養(yǎng)瓶壁上脫離，細(xì)胞形態(tài)從扁平狀變成球狀，T3細(xì)胞之間出現(xiàn)空隙。細(xì)胞生長狀態(tài)良好。

4　討論

胰蛋白酶原具有自身活化和自身降解的特性，在真核系統(tǒng)中表達(dá)，很難得到完整的胰蛋白酶原，并且其活化為有活性的胰蛋白酶會對宿主細(xì)胞造成一定的毒性。因此，在畢赤氏酵母中天然牛胰蛋白酶沒有成功表達(dá) 。

胰蛋白酶范文第3篇

【關(guān)鍵詞】 急性胰腺炎 尿胰蛋白酶原-2 血淀粉酶 診斷 臨床分析

【中圖分類號】 R657.5+1 【文獻標(biāo)識碼】 A 【文章編號】 1671-8801（2014）03-0004-01

急性胰腺炎是一種常見的消化系統(tǒng)疾病，極易發(fā)展成急性重癥胰腺炎，往往起病急、病情較重、進展快，嚴(yán)重的話會病變轉(zhuǎn)化為壞死性胰腺炎，從而引發(fā)敗血癥、呼吸衰竭等并發(fā)癥，致死率極高，對患者生理及心理有嚴(yán)重的影響，因此早期的診斷與及時的治療非常重要。目前血淀粉酶檢測是臨床診斷急性胰腺炎的常用指標(biāo)，但是其特異性及敏感性偏低，常常發(fā)生診斷錯誤。根據(jù)相關(guān)報道急性胰腺炎患者中的尿胰蛋白酶原-2含量會明顯升高，可以幫助快速篩選診斷?，F(xiàn)在對80例急性胰腺炎患者進行尿胰蛋白酶原-2以及血淀粉酶活性測定，對比其敏感性和特異性，具體分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年3月-2O11年3月在我院急診科就診的80例急性胰腺炎患者，其中男性患者45例，女性患者35例，患者年齡在27歲-70歲之間，平均年齡為50歲左右，所有患者均在不同程度上表現(xiàn)出惡心、嘔吐以及持續(xù)性上腹痛的癥狀，經(jīng)相關(guān)的輔助檢查確診為急性胰腺炎的有42例和38例其他急腹癥患者，其中重癥急性胰腺炎患者有25例，輕癥急性胰腺炎患者15例；12例急性胃腸炎，8例急性膽囊炎，6例急性闌尾炎，6例膽結(jié)石，6例腸梗阻?，F(xiàn)按照患者的病情分為急性胰腺炎組和其他急腹癥組，兩組患者在性別、年齡以及身體狀況等基本資料等方面沒有明顯的差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 方法

所有患者的血、尿標(biāo)本均應(yīng)該在急診室內(nèi)采集，先抽取5ml的空腹靜脈血，從發(fā)病后第3天開始每隔2天進行采集，每次采集應(yīng)該在2h內(nèi)完成。應(yīng)用免疫層析法檢測尿胰蛋白酶原-2，試劑由芬蘭OY Media Biochemical公司提供。試紙條有結(jié)合在藍(lán)色的乳膠粒上和結(jié)合在膜上的兩種尿胰蛋白酶原-2抗體；血淀粉酶是采用酶動力學(xué)法來判定，儀器是日立7180生化分析儀，試劑由中生北控生物公司提供。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會外科分會推薦的診斷標(biāo)準(zhǔn)診斷急性胰腺炎患者。尿胰蛋白酶原-2檢測，如果試紙上同時出現(xiàn)2條藍(lán)色線，濃度>50 ug/L時判為陽性，只出現(xiàn)1條藍(lán)色線（參照線）判為陰性。血淀粉酶檢測血清AMS的參考上限為100 U/L。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

選用軟件SPSS10.0對觀察的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，使用t 對計量數(shù)據(jù)進行檢驗，χ2對計數(shù)資料進行檢驗，P

2 結(jié)果

42例急性胰腺炎組的尿胰蛋白酶原-2中有39例陽性，測陽性率為92.9%，血淀粉酶中有32例陽性，測陽性率為84.2%。其他急腹癥組的尿胰蛋白酶原-2的測陽性率為4.8%，只有2例陽性；血淀粉酶的陽性率為26.3%，陽性10例。尿胰蛋白酶原-2的敏感性和特異性分別為92.1%、91.2%，而血淀粉酶的敏感性和特異性分別為81.2%、77.5%，急性胰腺炎組的尿胰蛋白酶原-2及血淀粉酶檢測陽性率均明顯高于其他急腹癥組，尿胰蛋白酶原-2的敏感性和特異性均明顯優(yōu)于血淀粉酶，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P

2 討論

急性胰腺炎是臨床上常見的急腹癥之一，對患者的正常生活帶來很大的困擾，由于該病起病比較急，進展快，早期診斷對于急性胰腺炎的治療非常重要，目前臨床上比較常用的是血淀粉酶的測定，但是膽石癥、急性胃腸炎、急性膽囊炎、急性闌尾炎以及腸梗阻患者的血淀粉酶含量也會上升，因此其敏感性和特異性遠(yuǎn)遠(yuǎn)不足以應(yīng)對臨床的需求，近年來尿胰蛋白酶原-2憑借其較強的特異性和敏感性在臨床診斷急性胰腺炎中得到廣泛應(yīng)用，并且篩選、診斷的準(zhǔn)確率和很高。

胰蛋白酶原主要有胰蛋白酶原-1和胰蛋白酶原-2兩種類型，主要是由胰腺生成的，其中胰蛋白酶原-2是其主要形式之一，胰蛋白酶原-2的作用機制是：一般機體在正常的情況下由于受到胰腺腺泡內(nèi)胰蛋白酶的抑制在進入十二指腸前是不會被激活的，但是一旦患者的機體防御功能受到襲擊，特別是急性胰腺炎病情發(fā)作時胰蛋白酶原就很容易被激活，因為腎小管很難對尿胰蛋白酶原-2進行重吸收過程從而導(dǎo)致血清中的胰蛋白酶原-2濃度明顯增高。

本文主要分析探討尿胰蛋白酶原-2以及血淀粉酶對急性胰腺炎診斷的特異性以及敏感性，研究尿胰蛋白酶原-2的臨床診斷價值，結(jié)果表明尿胰蛋白酶原-2診斷準(zhǔn)確率高，操作簡單，是一種很好的篩選、診斷急性胰腺炎的方法，值得在臨床上廣泛應(yīng)用和推廣。

參考文獻

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胰蛋白酶范文第4篇

[關(guān)鍵詞] 胰腺癌；血清胰蛋白酶原-2；CA199；CA50；CA242

[中圖分類號] R735.9 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）11（a）-0054-04

胰腺癌是一種起病隱匿、進展速度快、預(yù)后極差的消化系惡性腫瘤，5年生存率在所有惡性腫瘤中最低，在美國僅為6%左右，即使已行早期根治性手術(shù)切除的患者5年生存率也只有24%，但因其起病隱匿，53%的患者發(fā)現(xiàn)時已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，5年生存率僅為0～2%[1]。在胰腺癌早期診斷方法中，腫瘤標(biāo)志物檢測方法簡便、費用低廉，已被廣泛應(yīng)用于臨床。目前比較普遍應(yīng)用于胰腺癌診斷的血清學(xué)腫瘤標(biāo)志物有CA199、CA50、CA242等。胰蛋白酶原-2，絲氨酸蛋白酶，絕大部分由胰腺腺泡分泌，以酶原的形式分泌到胰液中，Hedstr？m等[2]的研究提示，胰蛋白酶原-2可能與胰腺癌相關(guān)，本研究采用ELISA法定量檢測胰腺癌、正常對照者血清中胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242含量，應(yīng)用ROC曲線探討其在檢測胰腺癌中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2009年12月～2011年6月總醫(yī)院、2011年6月～2012年2月北京市石景山醫(yī)院就診內(nèi)、外科未經(jīng)治療的胰腺癌住院患者25例為胰腺癌組，其中男14例，女11例，平均年齡（66.36±12.98）歲，入組前均未行手術(shù)及放化療治療，均由術(shù)后病理或影像學(xué)資料+長期隨訪證實。隨機選取同期于總醫(yī)院及石景山醫(yī)院體檢中心進行健康體檢的35例為健康對照組，其中男20例，女15例，平均年齡（43.54±11.28）歲，均無明顯上消化道癥狀及胰腺疾病病史；并排除其他腫瘤患者及孕婦、酗酒者、藥癮者。本研究獲得上述兩家醫(yī)院倫理委員會倫理審查批準(zhǔn)。

1.2 標(biāo)本采集與檢測

留取清晨空腹靜脈全血4 ml，標(biāo)本經(jīng)1000×g離心后去上層血清分裝至Eppendorf（EP）管凍存于-70℃，檢測前1天將凍存標(biāo)本于4℃冷藏室解凍，檢測前取出放置室溫（20℃）1 h，應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)ELISA操作流程（雙抗體夾心法）檢測，采用全自動多功能酶標(biāo)儀及相應(yīng)檢測統(tǒng)計軟件進行分析，胰蛋白酶原-2及CA199、CA242、CA50檢測試劑盒由北京永瀚星港生物技術(shù)有限公司惠贈，酶標(biāo)儀為全自動多功能酶標(biāo)儀（OLY- MPUS5421全自動生化分析儀）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，繪制受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC曲線），找出最佳截斷點（ROC曲線上最左上方的點，此時靈敏度及特異度均較高，或根據(jù)文獻設(shè)定的臨界值選取臨界點），因數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布，采用中位數(shù)、四分位數(shù)間距描述各組結(jié)果。

2 結(jié)果

各腫瘤標(biāo)志物ROC曲線如圖1。

圖1 各腫瘤標(biāo)志物ROC曲線

胰蛋白酶原-2：AUC=0.988，P

2.1 血清胰蛋白酶原-2鑒別正常人和胰腺癌的靈敏度和特異度

以點SEN 0.960（1-SPE 0.086）為最佳臨界點，其對應(yīng)的臨界值為1.85 ng/ml，ROC曲線下面積為0.988（P

表1 兩組血清胰蛋白酶原-2含量的檢測值（ng/ml）

M：中位數(shù)；QL-QU：四分位數(shù)間距；Min-Max：最小值-最大值

2.2 CA199鑒別正常人和胰腺癌的靈敏度和特異度

當(dāng)前通常以37 U/ml作為胰腺癌診斷臨界值，本試驗選取最接近點SEN 0.88（1-SPE 0.171），相應(yīng)臨界值為37.20 U/ml，ROC曲線下面積為0.906（P

表2 兩組血清CA199含量的檢測值（U/ml）

M：中位數(shù)；QL-QU：四分位數(shù)間距；Min-Max：最小值-最大值

2.3 CA50鑒別正常人和胰腺癌的靈敏度和特異度

當(dāng)前通常以20 U/ml作為胰腺癌診斷臨界值，本試驗選取最接近點SEN 0.72（1-SPE 0.200），相應(yīng)臨界值為19.68 U/ml，ROC曲線下面積為0.833（P

表3 兩組血清CA50含量的檢測值（U/ml）

M：中位數(shù)；QL-QU：四分位數(shù)間距；Min-Max：最小值-最大值

2.4 CA242鑒別正常人和胰腺癌的靈敏度和特異度

當(dāng)前通常以20 U/ml作為胰腺癌診斷臨界值，本試驗選取最接近點SEN 0.68（1-SPE 0.143），相應(yīng)臨界值為20.45 U/ml，ROC曲線下面積為0.834（P

表4 兩組血清CA242含量的檢測值（U/ml）

M：中位數(shù)；QL-QU：四分位數(shù)間距；Min-Max：最小值-最大值

3 討論

胰腺癌是預(yù)后極差的惡性腫瘤，近年我國胰腺癌發(fā)病率明顯上升，且多數(shù)胰腺癌確診時已屬中晚期，失去了最佳治療時機，預(yù)后差[3]。Pelaez-Luna等[4]回顧性分析45例胰腺癌患者114次CT掃描（胰腺癌診斷時或診斷前），發(fā)現(xiàn)在臨床診斷胰腺癌前6個月做CT掃描，部分未檢測到病變，部分為可切除性病變，但有臨床癥狀患者幾乎均屬于不可切除性胰腺癌，提示在胰腺癌臨床診斷前，僅有6個月的時間窗，此時病灶多數(shù)可切除。但多數(shù)無癥狀者，一般不會就診，故“因癥就診”者是不太可能檢測到真正意義上的早期可治愈的胰腺癌的，必須對無癥狀者進行篩查才有可能發(fā)現(xiàn)早期胰腺癌[5]。腫瘤標(biāo)志物是指在腫瘤發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細(xì)胞所產(chǎn)生或分泌并釋放到血液、細(xì)胞及體液中，反映腫瘤存在和生長的一類物質(zhì)，已被廣泛應(yīng)用于臨床，在腫瘤的診斷和預(yù)后判斷中發(fā)揮了巨大作用。糖類抗原CA199是一種非特異性的腫瘤相關(guān)抗原，在胰腺癌患者血清中升高最為顯著[6]，是當(dāng)前國內(nèi)外應(yīng)用最廣泛的胰腺癌腫瘤標(biāo)志物[7]。CA50是一種缺少巖藻糖殘基碳水化合物的糖蛋白，其構(gòu)型與CA199有相似的抗原決定簇，Lewis抗原陽性或陰性的人種均能檢測出，故認(rèn)為CA50對腫瘤的識別譜較CA199更為廣泛[8]。CA242主要存在于胰腺和結(jié)腸惡性腫瘤細(xì)胞中，是不同于CA199和CA50的唾液酸化糖酯類抗原，它的單克隆抗體與Lewis-a血型物質(zhì)及唾液酸化的半乳糖苷均不發(fā)生反應(yīng)，在胰腺癌中有較高的特異度、靈敏度。胰蛋白酶原-2，絕大部分以胰腺腺泡酶原的形式分泌到胰液中，并在腸內(nèi)被腸激酶激活。近年來發(fā)現(xiàn)，胰蛋白酶原-2在一些腫瘤細(xì)胞中呈高表達(dá)[9-12]。本試驗胰腺癌組胰蛋白酶原-2含量明顯高于正常組，提示血清胰蛋白酶原-2與胰腺癌關(guān)系密切。本文采用ROC曲線對胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242在診斷胰腺癌中進行分析，結(jié)果顯示，胰蛋白酶原-2鑒別胰腺癌與正常人曲線下面積為0.988，以1.85 ng/ml為臨界點，靈敏度為96%，特異度為91.4%。CA199鑒別胰腺癌與正常人曲線下面積為0.906，以37.2 U/ml為臨界點，靈敏度為88%，特異度為82.9%。CA50鑒別胰腺癌與正常人曲線下面積為0.833，以19.68 U/ml為臨界點，靈敏度為72%，特異度為80%。CA724鑒別胰腺癌與正常人曲線下面積為0.834 U/ml，以20.45 U/ml為臨界點，靈敏度為68%，特異度為85.7%。

本試驗中可見4種標(biāo)志物ROC曲線下面積，胰蛋白酶原-2最高，其次為C199，CA242和CA50接近，均>0.5，提示以上腫瘤標(biāo)志物用于診斷胰腺癌均有一定的臨床意義。據(jù)文獻報道及臨床試驗觀察，提示各自有其局限性：CA50無器官特異度，多種腫瘤中均可增高，尤其是胃腸癌，在肝膽疾病患者，尤其是黃疸中也升高[7]，因此單獨測定CA50對胰腺癌的診斷意義較小。Kawa等[13]認(rèn)為，CA242比CA199和CA50更特異，在胰腺炎、慢性肝炎和肝硬化等良性疾病中也很少升高，并且不受肝實質(zhì)損害、膽汁淤積的影響，但也有文獻報道CA242、CA50的靈敏度和特異度均不優(yōu)于CA199[14]。盡管CA199是目前對胰腺癌靈敏度最好的標(biāo)志物[7]，但在Lewisa陰性基因人群中無法表達(dá)，因此此血清型的腫瘤患者表現(xiàn)為CA199陰性。此外，急慢性胰腺炎、膽囊炎、膽管阻塞、肝炎、肝硬化等疾病中，CA199也有不同程度的升高，且在分化差的腫瘤中表達(dá)也較低[15-16]。目前鮮有關(guān)于胰蛋白酶原-2與胰腺腫瘤大小、病情嚴(yán)重程度、病理分期相關(guān)性，及是否能預(yù)測胰腺癌預(yù)后、評價治療效果的研究報道，且有文獻報道[17]胰蛋白酶原-2在急性胰腺炎患者血清中呈現(xiàn)高表達(dá)，因此，胰蛋白酶原-2也非胰腺癌絕對理想指標(biāo)。目前尚未發(fā)現(xiàn)單一理想診斷胰腺癌的腫瘤標(biāo)志物，近年傾向于將靈敏度、特異度較高的腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測。

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胰蛋白酶范文第5篇

通信作者：祝益民，Email： cszhuyimin@163.com 

【摘要】目的通過測定重癥患兒糞彈性蛋白酶-1（FE-1），探討FE-1與胰酶、膿毒癥及疾病嚴(yán)重程度之間的關(guān)系。方法分析2013年7月至2014年3月湖南省兒童醫(yī)院PICU收治的402例重癥患兒，入住PICU 24 h內(nèi)留取成形大便標(biāo)本，根據(jù)FE-1質(zhì)量分?jǐn)?shù)分組：>200 μg/g為胰腺外分泌功能正常組（A組，n=300），（100～200）μg/g為輕中度胰腺外分泌功能不全組（B組，n=52），<100 μg/g為重度胰腺外分泌功能不全組（C組，n=50）。分析各組與胰酶變化、膿毒癥及其嚴(yán)重程度，及其與休克、器官功能障礙個數(shù)、PCIS評分、SOFA評分、APACHE Ⅱ評分之間的關(guān)系。計數(shù)資料采用χ2檢驗。計量資料非正態(tài)分布或方差不齊，以中位數(shù)和四分位數(shù)[M（P25，P75）]表示，行非參數(shù)檢驗，有統(tǒng)計學(xué)意義時行多個樣本兩兩比較的秩和檢驗。相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。結(jié)果（1）A、B兩組間血脂肪酶升高差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。（2）非膿毒癥患兒288例，膿毒癥114例，兩組FE-1水平差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。膿毒癥患兒分為一般膿毒癥組、嚴(yán)重膿毒癥組、膿毒性休克組，與非膿毒癥組四組間FE-1差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。（3）A、B、C三組患兒在膿毒癥與非膿毒癥所占比例分別為65.79% vs.78.13%，15.79% vs.11.80%， 18.42% vs.10.07%，B、C組在膿毒癥中所占比例高于非膿毒癥且逐漸升高。（4）FE-1質(zhì)量分?jǐn)?shù)的總體趨勢隨膿毒癥嚴(yán)重程度而降低，非膿毒癥組與一般膿毒癥組，嚴(yán)重膿毒癥組與膿毒性休克組兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），其余組兩兩比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。（5）三組間休克、器官功能障礙個數(shù)、MODS≥3個、PCIS評分、SOFA評分、APS評分比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。隨著FE-1質(zhì)量分?jǐn)?shù)降低，器官功能障礙個數(shù)、SOFA評分、APS評分呈升高趨勢（rs1 =-0.194，P=0.000;rs2=-0.348，P=0.000;rs3 =-0.176，P=0.000），PCIS評分呈下降趨勢（rs4= 0.185，P=0.000）。結(jié)論胰腺外分泌功能受損與膿毒癥存在相關(guān)性，這種胰腺功能障礙在輕癥膿毒癥患者可能并不顯著，但隨膿毒癥嚴(yán)重程度加重或病情嚴(yán)重程度加重其發(fā)生率逐漸升高。 

【關(guān)鍵詞】糞彈性蛋白酶-1;胰腺外分泌功能;膿毒癥;重癥;兒童 

Clinical study of the fecal elastase-1 levels in critically ill children 

Wu Qiong*，Lu Xiulan，Zhu Yiming，Qiu Jun.*Emergency Center，The Pediatric Academy of University of South China;Hunan Children''s Hospital，Changsha 410007，China 

Corresponding author：Zhu Yiming，Email： cszhuyimin@163.com 

【Abstract】ObjectiveTo determine the fecal elastase-1 （FE-1） in critically ill children in order to investigate the relationships between FE-1 and trypsin， sepsis as well as the severity of the disease.MethodsTotally 402 critically ill children admitted in pediatric intensive care unit （PICU） of Hunan Children’s Hospital from July 2013 to March 2014 were studied. The formed stool of patients was collected during the first 24 h after admission. Subjects were divided to 3 groups according to FE-1 concentration： >200 μg/g for normal pancreatic exocrine function （group A， n=300）， 100-200 μg/g for mild to moderate exocrine pancreatic insufficiency （group B， n=52）， <100 μg/g for severe pancreatic exocrine insufficiency （group C， n=50）. The analyses of the relationships between FE-1 and pancreatic enzymes， sepsis severity， shock， the number of organ dysfunction， PCIS （pediatric critically ill score）， SOFA score， and APACHE Ⅱ score were carried out. Chi-squared test was used for data statistics. The median and four percentile interval were used for the measurement data of abnormal distribution or non-neat variance， the rank sum test of each two of multiple samples compared each other was used for non-parametric test， only when it was statistically significant， and the Spearman method of correlation analysis was used for correlation analysis.Results（1） There was significant difference in serum lipase between group A and group B （P<0.01）. （2） There was statistical difference in FE-1 level between sepsis group and non-sepsis group （P<0.05）. Children with sepsis were divided into three groups according to the severity of sepsis： mild sepsis group， severe sepsis group and septic shock group. There were significant difference in FE-1 level among different severities of sepsis groups and as well as non-sepsis group （P<0.01）. （3） The proportions of FE-1 in septic children of A， B and C groups in comparison with those in non-septic children of three groups were 65.79% vs.78.13%， 15.79% vs.11.80%， 18.42% vs.10.07%， respectively. The proportions of FE-1 in septic children of B and C groups escalated were higher than those in children without sepsis. （4） The general trend in FE-1 concentrations varied along with the severity of sepsis. There were no significant differences in FE-1 concentration between non-sepsis group and mild sepsis group， and between severe sepsis group and septic shock group， but other paired comparisons between the four groups had statistical significant （P<0.01）. （5） Along with FE-1 level decreased， the number of organ dysfunction， SOFA score， APS score （This is a part of APACHE Ⅱscore and other part， CPS， is excluded） increased and PCIS score decreased （rs1=-0.194， P=0.000; rs2=-0.348， P=0.000; rs3=-0.176， P=0.000; rs4=0.185， P=0.000）. ConclusionsPancreatic exocrine function damage is associated with sepsis， the pancreatic dysfunction in patients with mild sepsis may not be significant， but its incidence increases gradually with the development of sepsis or with the deterioration of the disease.　【Key words】Fecal elastase-1;Pancreatic exocrine function;Sepsis;Critically ill;Children 

國內(nèi)外學(xué)者已通過臨床研究、病理檢查、動物實驗。分別從器官系統(tǒng)、細(xì)胞組織、基因水平證實膿毒癥與胰腺外分泌功能受損密切相關(guān)^[1-4]。胰腺作為遠(yuǎn)程器官積極參與了膿毒癥的急性期炎癥反應(yīng)，膿毒癥可繼發(fā)胰腺損害，出現(xiàn)胰腺腺泡細(xì)胞損傷而導(dǎo)致胰腺外分泌功能障礙。Hardt等^[5]通過薈萃分析亦指出，危重癥繼發(fā)的胰腺損傷胰腺形態(tài)學(xué)改變往往輕微，僅5%～35%有胰腺影像學(xué)改變，而56%存在胰腺外分泌功能障礙。本研究通過測定重癥患兒糞彈性蛋白酶-1（fecal elastase-1，F(xiàn)E-1）間接評估其胰腺外分泌功能，并分析其與胰酶、膿毒癥及疾病嚴(yán)重程度之間的關(guān)系。 

1資料與方法 

1.1一般資料 

以2013年7月至2014年3月入住湖南省兒童醫(yī)院兒科重癥監(jiān)護?。≒ICU）的402例重癥患兒為研究對象，入選標(biāo)準(zhǔn)：①年齡>28 d;②小兒危重病例評分分值≤90，或者小兒危重病例評分分值>90但符合美國危重醫(yī)學(xué)會和美國兒科學(xué)會制定的PICU入出院初步指南標(biāo)準(zhǔn)。 

分組根據(jù)FE-1質(zhì)量分?jǐn)?shù)分組：>200 μg/g為胰腺外分泌功能正常組（A組），100～200 μg/g為輕中度胰腺外分泌功能不全組（B組）;<100 μg/g為重度胰腺外分泌功能不全組（C組）^[6]。 

1.2研究方法 

入院24 h內(nèi)對所有患兒進行小兒危重病例評分（PCIS），急性生理學(xué)和慢性健康評分（APACHEⅡ，取APS分值，年齡評分和CPS分值不計）、全身性感染相關(guān)性器官功能衰竭評分（SOFA） 。收集入住PICU后第1次成形大便以測FE-1值。 

1.3FE-1檢測方法 

糞便儲存于-80 ℃冰箱，檢測前置于室溫。FE-1的質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測試劑盒購自德國ScheBo.Tech公司。檢測原理為雙抗夾心的酶聯(lián)免疫法（ELISA）。糞便于實驗前1 d提取過夜，使其充分溶解于提取液。次日將糞便提取液稀釋，分別加入96 孔酶標(biāo)板，同時進行標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控的測定。依照試劑盒檢測步驟進行實驗，最后于405 nm 波長讀取吸光度值。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算FE-1質(zhì)量分?jǐn)?shù)（μg/g）。FE-1質(zhì)量分?jǐn)?shù)正常值為>200 μg/g。所有樣本由一名實驗人員進行檢驗。 

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 

采用spss 18.0統(tǒng)計軟件包處理數(shù)據(jù)。采用描述性分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗。計量資料為非正態(tài)分布或方差不齊時，以中位數(shù)和四分位距M（P25，P75）表示，行非參數(shù)檢驗中的 Wilcoxon 秩和檢驗，Mann-Whitney法（U檢驗）或Kruscal-Wallis法（H檢驗），有統(tǒng)計學(xué)意義時行多個樣本兩兩比較的秩和檢驗。雙變量不符合正態(tài)分布時采用Spearman相關(guān)分析。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 

2結(jié)果 

2.1危重患兒一般資料 

402例危重患兒中，男性264例（65.67%），女性138例（34.33%）。年齡1個月至13歲8個月，中位數(shù)1歲（4個月至2歲）。其中0～1歲203例（50.50%），1～3歲107例（26.62%），4～6歲57例（14.18%），7歲以上35例（8.71%）。根據(jù)FE-1質(zhì)量分?jǐn)?shù)分組，A組（>200 μg/g）300例（74.63%），B組（100～200 μg/g）52例（12.94%），C組（<100 μg/g）50例（12.44%）。三組年齡、性別差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=3.386，10.233，P>0.05）。 

2.2FE-1水平與胰酶的關(guān)系 

三組間血淀粉酶≥正常值、血淀粉酶≥正常值2倍、血淀粉酶≥正常值3倍、尿淀粉酶≥正常值比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），而血脂肪酶升高在三組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），進一步行三組間兩兩比較可知，A、B兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），見表1。 

2.3FE-1與膿毒癥的關(guān)系 

402例重癥兒童中非膿毒癥患兒288例（71.64%），膿毒癥患兒114例（28.36%），兩組FE-1水平差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。進一步將膿毒癥患者按嚴(yán)重程度分為一般膿毒癥組86例（21.39%），嚴(yán)重膿毒癥組16例（3.98%），膿毒性休克組12例（2.99%），隨膿毒癥程度加重，A組比例下降，B、C組比例上升，嚴(yán)重膿毒癥組、膿毒性休克組尤為明顯，四組間FE-1水平差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），見表3。 

3討論 

糞彈性蛋白酶-1全部經(jīng)胰腺腺泡分泌，生理情況下胰液中的質(zhì)量濃度約170～360 μg/mL，約占所有胰酶的6%^[7]。FE-1具高度穩(wěn)定性，在腸道排泄過程中主要與膽鹽結(jié)合而不被降解，糞便中的濃度是胰液中的5～6倍^[8]，故FE-1與胰液中的彈性蛋白酶有很好的相關(guān)性，這是其與糜蛋白酶等其他胰酶的顯著不同點。此外，室溫下能保持穩(wěn)定長達(dá)1周^[7]。Walkowiak等^[9]比較了檢測胰腺外分泌功能的直接試驗和各種間接試驗法，指出FE-1試驗無痛苦、用時和花費少，且在間接測試中靈敏度及特異度最高，是最好的胰腺外分泌功能測定方法。Wali等^[10]亦指出，F(xiàn)E-1是適用于兒童的最簡單最可行的間接評估胰腺外分泌功能的方法。目前國內(nèi)外公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)：FE-1正常值>200 μg/g，100～200 μg/g提示輕中度胰腺外分泌功能不全;100 μg/g以下提示重度胰腺外分泌功能不全。這在2周齡以上的兒童均適用^[11]。

胰腺是人體第二大消化腺體，胰腺腺泡分泌胰液，參與胰腺外分泌功能，腺泡損傷可導(dǎo)致胰腺外分泌功能障礙，胰酶分泌減少。Hardt等^[5]的薈萃分析指出危重癥繼發(fā)的胰腺損傷約56%存在胰腺外分泌功能障礙。目前國內(nèi)外均無胰腺損傷的金標(biāo)準(zhǔn)，反映胰腺外分泌功能的指標(biāo)血淀粉酶、血脂肪酶、尿淀粉酶常用于分析胰腺損傷。本研究中，血淀粉酶變化在不同水平FE-1組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，考慮與以下因素有關(guān)：血淀粉酶特異性較差、高峰出現(xiàn)時間短且在嚴(yán)重病例常常不升反降。Vaccaro等^[12]通過對大鼠腹腔灌注內(nèi)毒素而直接損傷胰腺腺泡細(xì)胞，觀察到電鏡下許多的空泡變性及嚴(yán)重的核改變，胰腺炎相關(guān)蛋白-1（PAP-1）呈現(xiàn)高表達(dá)，而淀粉酶mRNA水平表達(dá)下降。Tribl等^[4]通過建立銅綠假單胞菌肺炎引起的膿毒癥大鼠模型，亦發(fā)現(xiàn)淀粉酶和胰蛋白酶mRNA水平下調(diào)，并推測這可能有助于保護腺泡細(xì)胞避免酶過量造成的損害，可能是腺泡細(xì)胞分泌功能障礙的部分自適應(yīng)變化^[13]。尿淀粉酶與FE-1水平間亦未見有明顯相關(guān)性，考慮與尿液稀釋或濃縮的影響有關(guān)，故其用于胰腺損傷診斷的價值低。而血脂肪酶的改變在三組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，考慮與脂肪酶高峰持續(xù)時間長且特異性相對較高有關(guān)。進一步的組間兩兩比較可知，F(xiàn)E-1正常組與FE-1輕度下降組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），而FE-1下降明顯時差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），推測可能與嚴(yán)重胰腺外分泌功能不全時胰酶的分泌下降明顯有關(guān)。但由于本研究未做進一步追蹤復(fù)查，F(xiàn)E-1與胰酶的關(guān)系還有待進一步探討。 

本研究證實，胰腺外分泌功能受損與膿毒癥密切相關(guān)。FE-1正常組患兒非膿毒癥所占比例（78.12%）高于膿毒癥（65.79%），而FE-1下降組患兒膿毒癥所占比例均高于非膿毒癥且隨胰腺外分泌功能障礙程度加重而呈升高趨勢（分別為15.79% vs.11.81%，18.42% vs.10.06%）。同時，F(xiàn)E-1水平的總體趨勢隨膿毒癥嚴(yán)重程度而逐漸降低，非膿毒癥組與嚴(yán)重膿毒癥組、膿毒性休克組兩兩比較有顯著差異，膿毒癥組與嚴(yán)重膿毒癥、膿毒性休克組兩兩比較有顯著差異，均說明胰腺外分泌功能不全隨膿毒癥程度加重發(fā)生率升高。而非膿毒癥組與一般膿毒癥組之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示這種胰腺功能障礙在一般膿毒癥患者可能并不顯著。Tribl 等^[4]研究證實，胰腺作為遠(yuǎn)程器官積極參與了膿毒癥的急性炎癥反應(yīng)過程。胰腺腺泡直接受損導(dǎo)致的壞死或自身的凋亡可能是胰腺外分泌功能不全的重要因素。研究常用膿毒癥動物模型多是通過對大鼠腹腔灌注內(nèi)毒素而直接損傷胰腺腺泡細(xì)胞建立。Kovacs等^[14]通過胰腺組織病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，部分因嚴(yán)重膿毒癥或膿毒性休克死亡患者有脂肪組織出血和急性出血性胰腺壞死。Grulke 等^[15]電鏡下觀察到胰腺損傷時胰腺外分泌腺有輕微或嚴(yán)重空泡性退化、線粒體隆起、顆粒酶原及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹。 

研究顯示，出現(xiàn)MODS、休克時嚴(yán)重外分泌功能不全的發(fā)生率明顯升高。隨多器官功能衰竭和休克的出現(xiàn)血流量重新分配，胰腺血流量顯著減少，胰腺對缺血敏感且耐受差，這可能是胰腺外分泌功能障礙的另一關(guān)鍵因素。Hiltebrand等^[16]對嚴(yán)重膿毒性休克豬模型測定各臟器的血流量發(fā)現(xiàn)，血液灌注在胰腺下降最明顯（56%）。病理學(xué)亦證實休克導(dǎo)致了胰腺外分泌功能損傷，Grulke等^[15]在對休克馬胰腺損傷的觀察中發(fā)現(xiàn)，電鏡下胰腺外分泌腺有輕微或嚴(yán)重空泡性退化、線粒體隆起、顆粒酶原及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膨脹。Tribl 等^[13]對膿毒癥、膿毒性休克患者以促胰液素—縮膽囊素試驗直接檢測胰腺外分泌功能的研究顯示，與健康對照組相比，膿毒癥患者淀粉酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶和十二指腸液碳酸氫鹽的分泌均受損，胰蛋白酶含量在膿毒癥與膿毒性休克患者之間有明顯差異（P<0.05）。進一步證實胰腺外分泌功能障礙與膿毒癥相關(guān)，且在出現(xiàn)膿毒性休克時更嚴(yán)重。 

同時，相關(guān)性分析顯示，隨著FE-1水平的下降，器官功能障礙個數(shù)、SOFA評分、APS評分呈升高趨勢，PCIS評分呈下降趨勢，提示胰腺外分泌功能不全的發(fā)生發(fā)展與器官功能障礙的增多及病情的加重存在一定相關(guān)性，以上結(jié)果與Tribl等^[13]的研究基本一致。FE-1水平越低可能提示病情越重;反之，病情越嚴(yán)重，胰腺外分泌功能不全發(fā)生率越高。   本文由wWw.DyLw.NeT提供，第一論 文 網(wǎng)專業(yè)教育教學(xué)論文和以及服務(wù)，歡迎光臨dYlw.nET

綜上，胰腺外分泌功能受損與膿毒癥存在相關(guān)性，這種胰腺功能障礙在輕癥膿毒癥患者可能并不顯著，但隨膿毒癥嚴(yán)重程度加重或病情嚴(yán)重程度加重其發(fā)生率逐漸升高。 

參考文獻 

[1]肖政輝， 盧秀蘭， 劉萍萍， 等. 重癥患兒高淀粉酶血癥相關(guān)因素分析[J]. 中華急診醫(yī)學(xué)雜志， 2014， 23（6）： 1094-1098. 

[2] 胡限， 祝益民， 陳衛(wèi)堅，等.膿毒癥與非膿毒癥死亡患兒胰腺功能的病理特征分析[J].中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2014，23（2）：157-162.