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【摘要】用高效液相色譜法測(cè)定醋氯酚酸片中有關(guān)物質(zhì)。方法選用WatersC18（3.9mm×150mm，5μm）色譜柱；流動(dòng)相為0.0025mol/L醋酸鈉溶液-甲醇-冰醋酸（32：68：0.3）；檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm；流速為1.0ml/min；柱溫為40℃。結(jié)果醋氯酚酸的保留時(shí)間約7min；有關(guān)物質(zhì)雙氯酚酸鈉和未知雜質(zhì)的保留時(shí)間約6min與9min；有關(guān)物質(zhì)雙氯酚酸鈉線性范圍：0.5～4.0μg/ml,Y=1.99E+004X-3.96E+003，r=0.9990。結(jié)論本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確,適于醋氯酚酸片有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】醋氯酚酸雙氯酚酸鈉高效液相色譜（HPLC）法有關(guān)物質(zhì)

【Keywords】aceclofenac;diclofenacsodium;HPLC;relatedsubstance

醋氯酚酸屬苯乙酸類(lèi)非甾體抗炎鎮(zhèn)痛藥，為雙氯酚酸的衍生物，用于急性炎癥、關(guān)節(jié)炎和疼痛的治療。有報(bào)道含量測(cè)定采用高效液相色譜法［1，2］；有關(guān)物質(zhì)采用薄層色譜法［3，4］。本試驗(yàn)采用不同于報(bào)道的流動(dòng)相對(duì)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明：本實(shí)驗(yàn)條件合理、有效，可將雙氯酚酸鈉及未知雜質(zhì)與醋氯酚酸分離,測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。現(xiàn)報(bào)告如下。

1儀器與試藥

高效液相色譜儀為Waters2695和Waters2996二極管陣列紫外/可見(jiàn)檢測(cè)器，高效液相色譜柱為WatersC18（3.9mm×150mm，5μm）。甲醇為色譜純，冰醋酸、無(wú)水醋酸鈉均為分析純。對(duì)照品醋氯酚酸、雙氯酚酸鈉均為中國(guó)藥品生物制品檢定所提供,含量分別為99.2%、100.0%；供試品醋氯酚酸片3批，批號(hào)為H40024（A）、H40025（B）、H40026（C）。

2方法與結(jié)果［1，2］

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱溫為40℃；流動(dòng)相為0.0025mol/L醋酸鈉溶液-甲醇-冰醋酸（32：68：0.3）；檢測(cè)為波長(zhǎng)275nm；流速為1.0ml/min；進(jìn)樣量10μl。

醋氯酚酸的保留時(shí)間約為7min，雙氯酚酸鈉和未知雜質(zhì)峰的保留時(shí)間分別約為6min和9min；雙氯酚酸鈉與醋氯酚酸及未知雜質(zhì)峰間的分離度分別為2.5和6，理論板數(shù)按醋氯酚酸計(jì)為5000。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2有關(guān)物質(zhì)

2.2.1線性范圍精密稱取雙氯酚酸鈉對(duì)照品10mg置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液25ml置100ml量瓶中用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。精密量取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0ml分別置50ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液1～5。在上述色譜條件下,分別進(jìn)樣5次，記錄色譜圖。以濃度X為橫坐標(biāo),峰面積Y為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算線性回歸方程。結(jié)果本品在0.5～4.0μg/ml范圍內(nèi)呈線性關(guān)系：Y=1.99e+004X-3.96e+003，r=0.9990。

2.2.2測(cè)定法精密稱取供試品適量（相當(dāng)于醋氯酚酸50mg）置50ml量瓶中,加甲醇適量振搖使溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻，即得供試品溶液。以有關(guān)物質(zhì)線性范圍項(xiàng)下濃度2.0μg/ml溶液為對(duì)照品溶液。在上述色譜條件下,分別進(jìn)樣5次，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使對(duì)照品溶液主成分峰高度達(dá)到滿量程的20%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不得過(guò)3.0%。記錄供試品溶液色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍，用外標(biāo)法計(jì)算有關(guān)物質(zhì)的含量。見(jiàn)表1。表1有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果

2.3精密度試驗(yàn)取有關(guān)物質(zhì)測(cè)定項(xiàng)下供試品批號(hào)（A）溶液，連續(xù)5次進(jìn)樣測(cè)定,RSD為1.5%。

2.4重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品（批號(hào)A）,分別稱取5份,按照有關(guān)物質(zhì)測(cè)定項(xiàng)下方法操作,RSD為2.91%。

2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)將有關(guān)物質(zhì)測(cè)定項(xiàng)下的溶液光照放置3天和9天及30天，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)新配制對(duì)照品溶液。測(cè)定結(jié)果詳見(jiàn)表1。色譜圖見(jiàn)圖2。

2.6響應(yīng)值測(cè)定在上述色譜條件下,分別取線性范圍項(xiàng)下對(duì)照溶液1～510μl注入液相色譜儀，其主峰的保留時(shí)間約為6min，理論板數(shù)按醋氯酚酸鈉峰計(jì)算不得小于4000，重復(fù)進(jìn)樣5次，計(jì)算每種溶液的平均面積及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值。結(jié)果見(jiàn)表2。表2響應(yīng)值測(cè)定結(jié)果

3討論

本試驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定醋氯酚酸片中有關(guān)物質(zhì)雙氯酚酸鈉和未知雜質(zhì)的含量。該法可有效地將醋氯酚酸與有關(guān)物質(zhì)分離，且分離度好，結(jié)果更準(zhǔn)確地反映出樣品的純度與質(zhì)量。

圖2色譜圖

該樣品不是很穩(wěn)定，對(duì)光比較敏感，光照3～30天，有關(guān)物質(zhì)的含量由0.1%增加到65%以上。顏色由無(wú)色變?yōu)殚冱S色。

測(cè)定有關(guān)物質(zhì)的供試品溶液濃度為1mg/ml，從表2可以看出：有關(guān)物質(zhì)的對(duì)照溶液的濃度為供試品溶液的0.002倍（0.2%），測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差較小，有較強(qiáng)的可操作性。

該方法精密度高，重現(xiàn)性好，適用于醋氯酚酸片有關(guān)物質(zhì)測(cè)定。

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