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【摘要】目的建立西蘭花種子中萊菔硫烷的HPLC含量測定方法。方法色譜柱：Waters公司XBridgeTMC18(150mm×4.6mm,5μm)；流動相：甲醇水(體積比30∶70)；流速：1.0mL/min；PDA檢測器；檢測波長：240nm；柱溫:30℃。結(jié)果萊菔硫烷在14.6～292.5μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,r=0.9994，平均回收率為97.32%（RSD=1.2%）。結(jié)論本法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用作西蘭花種子的質(zhì)量控制，為不同產(chǎn)地不同品種的西蘭花種子的收購及栽培等提供有效監(jiān)控依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】西蘭花種子；萊菔硫烷；HPLC；含量測定

Abstract:ObjectiveToestablishamethodforcontentanalysisofsulforaphaneinbroccoliseeds.MethodsSampleswereanalyzedonaWatersXbridgeTMC18(150mm×4.6mm,5μm)columnbyusingmethanolwater(30∶70)asthemobilephase.Theflowratewas1.0ml/min.Thedetectionwavelengthwas240nm.Thecolumntemperaturewas30℃.ResultsThecalibrationcurvewaslinearovertheconcentrationof14.6～292.5μg/mlforsulforaphane(r=0.9994).Theaveragerecoveryofsulforaphanewas97.32%andRSD1.2%.ConclusionThemethodissimple,accurate,reproducibleandcanbeusedforthequalitycontrolofbroccoliseeds.

Keywords:broccoliseeds；sulforaphane；HPLC

西蘭花又名綠花菜、青花菜等，為十字花科蕓苔屬甘藍(lán)種中以綠色花球?yàn)楫a(chǎn)品的一個(gè)變種，一、二年生草本植物。20世紀(jì)50年代，西蘭花就已經(jīng)成為國際上最受歡迎的抗癌抗衰老的十字花科蔬菜，并被譽(yù)為“防癌新秀”［1］。

西蘭花中所含的萊菔硫烷、烯丙基異硫氰酸鹽、苯乙基異硫氰酸鹽等異硫氰酸鹽類化合物可以有效地預(yù)防肝癌、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、直腸癌、胃癌等癌癥［2，3］。而其中的萊菔硫烷是目前發(fā)現(xiàn)的抗氧化、防癌、抗癌活性最顯著的異硫氰酸鹽類化合物，是一種有效的保護(hù)酶誘導(dǎo)物,能夠防護(hù)致癌化合物引起的傷害，也因此有開發(fā)成抗癌藥或保健品的價(jià)值，具有較為廣闊的市場前景［4］。有關(guān)十字花科植物中萊菔硫烷的含量測定已有文獻(xiàn)報(bào)道［5，6］，本研究對不同產(chǎn)地不同品種的西蘭花種子中萊菔硫烷的含量進(jìn)行了比較，方法簡便準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用作西蘭花種子的質(zhì)量控制，為不同產(chǎn)地不同品種的西蘭花種子的收購及栽培等提供有效監(jiān)控依據(jù)。

1儀器與試藥

1.1儀器

Waters2695/2996高效液相色譜儀；Empower色譜工作站；十萬分之一電子天平（Sartorius）；KQ250B型超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器廠）；FW80密封式高速超細(xì)粉碎機(jī)（上海市國創(chuàng)建筑機(jī)械廠）。

1.2試劑與試藥

甲醇(色譜純，英國TEDIA公司)；三蒸水（自制）；萊菔硫烷對照品(sigma公司，含量＞98%)；實(shí)驗(yàn)所用樣品見表1,經(jīng)本院生藥教研室鑒定均為西蘭花種子。

表1不同品種西蘭花種子樣品（略）

Tab.1Sampleofdifferentkindsofbroccoliseed

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Warers公司產(chǎn)XbridgeTMC18(150mm×4.6mm,5μm)；流動相：甲醇水(體積比30∶70)；流速：1.0mL/min；檢測波長：240nm；進(jìn)樣量：10μL；柱溫30℃。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取萊菔硫烷對照品5.85mg，置20mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，得到質(zhì)量濃度為292.5μg/mL的對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

取不同品種的西蘭花種子，粉碎成粉末，過20目篩,取粉末0.3g,精密稱定，加1mL蒸餾水,超聲30min后，置35℃水浴水解4h,加入10mL甲醇，超聲30min后，濾過,濾渣用約8mL甲醇分3次洗滌，合并濾液并定容至20mL。再經(jīng)0.45μm濾膜濾過得供試品溶液。

2.4系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別吸取對照品及西蘭花藥材溶液各10μL，注入液相色譜儀。在此條件下，萊菔硫烷色譜峰與其相鄰組分峰達(dá)到基線分離，理論塔板數(shù)以萊菔硫烷計(jì)不低于5300。見圖1。

A.萊菔硫烷對照品;B.西蘭花種子樣品

圖1HPLC色譜圖（略）

Fig.1HPLCchromatogram

2.5線性關(guān)系考察

精密量取“2.3”項(xiàng)下儲備液分別用甲醇稀釋制成質(zhì)量濃度為14.6、58.5、117.0、175.5、234.0和292.5μg/mL的對照品溶液，分別進(jìn)樣20μL，以峰面積(A)對質(zhì)量濃度(ρ)進(jìn)行回歸分析,得回歸方程:A=3743.7ρ-2878.2,r=0.9994。結(jié)果表明萊菔硫烷的質(zhì)量濃度在14.6～292.5μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.6重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取1號種子粉末6份,按“2.4”項(xiàng)下制備，依法測定萊菔硫烷的含量。結(jié)果平均含量為1.4014%,RSD為0.49%。

2.7中間精密度試驗(yàn)

精密吸取濃度為292.5μg/mL的對照品溶液10μL,重復(fù)進(jìn)樣6次,以萊菔硫烷峰面積計(jì)算，RSD=0.14%，表明中間精密度良好。

2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)

取重復(fù)性試驗(yàn)中同一濃度供試品溶液室溫下放置，于0、2、4、6、8h后依法測定萊菔硫烷的含量，結(jié)果其RSD值為0.84%，表明樣品溶液在8h內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定。

2.9加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取9份已知含量的1號種子樣品0.15g,按“2.4”項(xiàng)下，同法制成供試品溶液。經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，各取續(xù)濾液0.5mL，分別置于25mL量瓶中，分別加入不同量的質(zhì)量濃度為292.5μg/mL的萊菔硫烷對照品溶液0.1、0.2、0.3mL，甲醇定容至刻度。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定萊菔硫烷的含量,結(jié)果平均回收率為97.32%,RSD為1.20%,見表2。

表2萊菔硫烷加樣回收率試驗(yàn)（略）

Tab.2Theresultsofrecoverytest

2.10樣品的含量測定

取不同品種的西蘭花種子按“2.4”項(xiàng)下，同法制成供試品溶液，依法測定，結(jié)果見表3。

3討論

3.1從表3可以看出,不同品種的西蘭花種子中萊菔硫烷的含量有明顯差別，臺灣和日本進(jìn)口的西蘭花種子萊菔硫烷的含量明顯沒有我國的高，但是我國產(chǎn)的幾種西蘭花種子中萊菔硫烷的含量也有較大差別。本方法簡便、準(zhǔn)確，可作為西蘭花種子的質(zhì)量控制，同時(shí)為不同產(chǎn)地的西蘭花種子的收購及栽培等提供有效依據(jù)。

表3西蘭花種子中萊菔硫烷的含量（略）

Tab.3Contentsofsulforaphaneinbroccoliseeds

3.2制備供試品溶液采用的前處理過程的原理是：異硫氰酸鹽以其前體芥子油苷的形式存在于西蘭花種子中，完整的芥子油苷沒有防癌活性，萊菔硫烷等異硫氰酸鹽是由西蘭花種子中的芥子油苷經(jīng)過內(nèi)源性黑芥子酶水解才能產(chǎn)生；粉碎種子過程中，隨著種子細(xì)胞壁的破碎內(nèi)源性黑芥子酶得以釋放出來［2］。故本試驗(yàn)關(guān)鍵步驟是水解，本試驗(yàn)采用正交試驗(yàn)篩選出了最佳的水解條件；由于甲醇會使黑芥子酶滅活,故測定加樣回收率時(shí)采取水解后再加入萊菔硫烷對照品的方法。

【參考文獻(xiàn)】

［1］季宇彬，池文杰，鄒翔，等.西蘭花中蘿卜硫素提取、分離與抗癌活性研究［J］.哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2005,21(3):270-273.

［2］單毓娟.十字花科蔬菜的癌癥預(yù)防作用［J］.國外醫(yī)學(xué)衛(wèi)生學(xué)分冊,2005,32(5):269-273.

［3］王舒然，夏薇.萊菔硫烷與腫瘤［J］.疾病控制雜志,2004,8（5）:452-455.

［4］LAURENCEG，PENGFEIL，SOLANGEL，etal．Sulforaphane,anaturaloccurringisothiocyanate，inducescellcyclearrestandapoptosisinHT29humancoloncancercells［J］．CancerResearch,2000，60(5):1426．

［5］梁浩，袁其朋，東惠茹，等.十字花科植物種子中萊菔硫烷含量的比較［J］.中國藥學(xué)雜志,2OO4,39(12):898.

［6］胡曄，梁浩，袁其明.十字花科植物種子中萊菔硫烷的薄層色譜鑒別［J］.北京化工大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2000，6（2）：237-238.