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本文作者：黃翠流1,2陳唯王1羅基同2譚學(xué)鋒2楊秀好2韋繼光1作者單位：1.廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院2.廣西壯族自治區(qū)森林病蟲害防治站

桉樹Eucalyptusspp.屬桃金娘科Myrtaceae桉屬Eucalyptus植物，約上千種，自然分布在澳大利亞和塔斯馬尼亞島等地。桉樹具有適應(yīng)性強、生長快、輪伐期短、用途廣泛等特點，聯(lián)合國糧農(nóng)組織推薦在全世界范圍大力發(fā)展?，F(xiàn)已有上百個國家引種，以印度、巴西、澳大利亞、中國為主要生產(chǎn)國。我國從1890年開始引種桉樹，至今已有100多年的歷史，目前以廣西、廣東、海南、浙江、福建和云南等省區(qū)為主，大力發(fā)展以速生桉為主的速生豐產(chǎn)林。廣西栽培桉樹開始于1965年，當(dāng)時主要種植窿緣桉、檸檬桉和野桉等。20世紀(jì)90年代，隨著桉樹雜交種無性系大面積推廣，廣西速生桉人工林面積迅速增加，現(xiàn)已超過150萬hm2。

1材料與方法

1.1病害標(biāo)本的采集

2007—2010年在廣西南寧、貴港、玉林、北海、崇左、來賓、河池、百色、桂林等速生桉種植地，廣泛采集桉樹葉部病害標(biāo)本。

1.2病原菌鑒定

對不同癥狀類型進行病原菌的分離、培養(yǎng)、純化及顯微觀察，對于非專性寄生菌通過柯赫氏法則驗證，依據(jù)相關(guān)文獻進行病原菌種類鑒定。對常規(guī)方法難以鑒定的病原菌，提取其DNA，對其ITS序列進行PCR擴增，擴增產(chǎn)物送到上海生物工程有限公司測序。在GenBank上用BLAST程序與已有菌物序列進行同源性比對，進行分子技術(shù)輔助鑒定。

2結(jié)果與分析

通過鑒定，初步探明了廣西速生桉葉部真菌性病害10種，分別是:隱盤孢葉斑病、輪斑病、花斑病、黃紫斑病、焦枯病、紫斑病、圓斑病、灰斑病、炭疽病、灰霉病，其中前4種為我國新發(fā)現(xiàn)的病害。

2.1隱盤孢葉斑病

危害桉樹葉片、嫩枝和頂梢，葉部病斑的大小、形狀和顏色在桉樹種間及種內(nèi)都存在差異。例如，在廣林9號桉上，至少出現(xiàn)4種不同的病斑:第1種，初為紅紫色近圓形或不規(guī)則小斑，后不斷擴大形成中間為紅褐色，邊緣黃褐色的病斑，病斑部分常增厚，有時病斑中央呈火山口狀或潰瘍狀，條件適宜時，可在病斑上產(chǎn)生深褐色的子實體。第2種，病斑多數(shù)從葉緣開始發(fā)病，并向中間擴展，病斑淺黃褐色，這類病斑與焦枯病病斑很相似，但發(fā)病后期在病斑上可形成多輪淺褐色子實體。第3種，病斑發(fā)病初即出現(xiàn)不規(guī)則深褐色小斑，后不斷擴大，病斑淺褐色至深褐色，病斑上可產(chǎn)生深色子實體。幼樹頂芽受危害時可導(dǎo)致落葉或頂芽枯萎。第4種，初為近圓形或不規(guī)則小斑，后不斷擴展，有些病斑產(chǎn)生子實體后似眼斑，多數(shù)葉緣病斑擴大并連接向葉中間擴展，也可形成與焦枯病相似的病斑，這類病斑可引起鄧恩桉大量落葉。病原菌為Cryptosporiopsissp.。分生孢子盤暗色，厚壁，橢圓形到長橢圓形，突出;分生孢子梗簡單，短或伸長;分生孢子無色，單胞，卵圓形到寬橢圓形，頂端鈍圓，基部變小平截，分生孢子大小為(20.5～26.5)μm×(7～9.5)μm。PDA培養(yǎng)基上菌絲白色到乳白色，菌落生長較慢，近圓形，邊緣氣生菌絲茂盛，不整齊;后期菌落上可見從分生孢子盤內(nèi)溢出的乳白色粘稠孢子堆［1－2］。

2.2輪斑病

主要危害葉片，感病葉片初期出現(xiàn)針頭狀紫色小斑，小斑逐漸擴大，中間淡黃褐色，邊緣的病斑有一褪綠赤色暈圈;當(dāng)條件適宜時，小病斑上可形成少量褐色至黑色子實體。多數(shù)葉緣病斑相連接后向葉片中間發(fā)展，形成的病斑類似焦枯病的病斑，但病斑有明顯的輪紋，在每一輪紋上可形成一輪褐色至黑色子實體。病原菌是Pilidiella屬的2個種，即:Pilidiellaeuca-lyptorumCrousetWingfield和P．diplodiella(Speg．)VanNiekerk。P．eucalyptorum的菌絲在PDA培養(yǎng)基上生長較快，菌落白色，接近中心常有一圈淺褐色菌絲;分生孢子器圓形或扁圓形，深褐色，有孔口，寬可達300μm，高可達240μm;分生孢子初為淺色，成熟后變深褐色，寬橢圓形，大小為(9～11)μm×(5～7)μm;P．diplodiella的菌絲在PDA培養(yǎng)基上生長快，菌落白色，分生孢子器球形或近球形，褐色，有孔口，寬可達375μm，高可達375μm;分生孢子無色或近無色，橢圓形，(11～14)μm×(4～5)μm［3］。兩種病原菌經(jīng)PCR擴增后，產(chǎn)物測序，得到兩個ITS序列，其中一個共537bp，與桉小比利孢Pili-diellaeucalyptorum(收錄號為AY339341.1)的ITS序列同源性最高，為99%;另一個序列共556bp，與P．diplodiella(收錄號為GUO62317.1)的ITS序列同源性最高，為99%。經(jīng)比較，形態(tài)鑒定和分子鑒定結(jié)果一致。

2.3花斑病

主要危害葉片，感病葉片多由葉緣開始發(fā)病，產(chǎn)生淺褐色、不規(guī)則形小斑，逐漸向葉片中部擴大，形成花邊樣病斑，病斑黃褐色，后期病斑上產(chǎn)生褐色子實體，病斑大面積枯黃時葉子脫落。該病常由植株基部開始發(fā)病，向上擴展。病原菌為Aureobasidiumsp.。該菌菌絲在培養(yǎng)基上一般不擴展，早期無色或淡色，以后變成暗色，在PDA培養(yǎng)基上生長時間較長時變黑色及光亮，且菌落稍微擴展;菌絲側(cè)生茂盛的分生孢子，分生孢子初近無色，后變暗色，單胞，卵圓形，可芽殖產(chǎn)生新的分生孢子，大小為(2.3～6.5)μm×(2.5～4.0)μm［4］。

2.4黃紫斑病

危害葉片。感病葉片初期產(chǎn)生不規(guī)則淡黃綠色小斑，小斑不斷擴展，后期小病斑連成大病斑，由淡黃綠色變?yōu)樽霞t色。在葉片背面病斑產(chǎn)生細(xì)密的黑色子實體，與煤污病的病癥相似。在葉背病斑邊緣常形成一圈愈傷組織狀的突起，突起物初為綠色，后漸變成淺黃褐色，病斑后期扭曲可使病葉變形。病原菌為Phleosporasp.。分生孢子器生于葉片基質(zhì)內(nèi)，器壁不發(fā)達，大小為(91～130)μm×(103～140)μm;分生孢子細(xì)長，或兩端尖削，常屈曲，有些卷曲如線蟲，無色，成熟時有1～3個隔膜，大小為(33～68)μm×(1.3～1.5)μm［5］。

2.5焦枯病

主要危害桉樹的葉片、嫩莖和枝梢。感病葉片初期出現(xiàn)針頭狀水漬小斑，當(dāng)條件適宜時，病斑逐漸擴大，形成2種典型的病斑。第1種是變?yōu)榛揖G色，中間淡黃褐色，病斑的邊緣有一褪綠水漬暈圈;后期病斑中部變成淺色輪紋狀或不明顯，多數(shù)葉緣的病斑連接，然后向中間發(fā)展，病葉焦枯變脆易裂。第2種是變?yōu)辄S褐色，病斑邊緣有一退綠赤色暈圈，多個小斑連成大斑，使病葉呈現(xiàn)花斑狀。病葉常卷曲皺縮，呈焦枯變脆易裂狀。嚴(yán)重感病的苗木可導(dǎo)致葉片全部脫落、頂枯。莖部病斑表皮出現(xiàn)長條形或近圓形的淺色小褐斑，常凹陷，后期病斑變?yōu)樯詈稚?，向四周擴展，環(huán)繞莖部，有些病斑表皮開裂。在高溫高濕條件下，尤其靠近地面的病莖部或病葉上密布白色霜狀物，是病原菌的孢子堆。病原菌在PDA培養(yǎng)基上生長迅速，氣生菌絲豐富，絨毛狀，初為乳白色，后變褐色，埋生菌絲淡褐色至暗褐色;分生孢子梗直立無色，有分隔，帚狀分枝，多為3級分枝，典型的有細(xì)而伸長的不孕分枝，端生棒狀、梨形、橢圓形、倒卵球形和近球形的泡囊;瓶梗桶形或腎形;分生孢子無色，雙細(xì)胞或多細(xì)胞，圓柱形。根據(jù)形態(tài)學(xué)鑒定，病原菌為Cylindrocladium屬的3個種，即C.quinqueseptatumBoed.etReit，C.scopariumMorgan，C.floridanumSobersetSey-mour，三者的主要區(qū)別見表1［6－7］。

2.6紫斑病

病葉背面先出現(xiàn)分散或較密集的多角形或不規(guī)則形黃綠色小病斑，葉面還呈正常綠色。但當(dāng)條件適宜時，病斑背面產(chǎn)生大量的分生孢子器并大量產(chǎn)孢，暗褐色或近黑色卷須狀的孢子角在葉背和葉面形成黑色煤煙狀物，與煤污病的病癥相似。通常情況下病斑由黃綠色變成紫色，病斑兩面生，后期病斑可相連成片，形成灰褐色大病斑;在U6速生桉病葉上出現(xiàn)深紫色病斑，且病葉出現(xiàn)明顯變形。病原菌是Phaeoseptoriaeucalypti。分生孢子器多數(shù)葉背生，暗色，球狀，分開，有孔口，(100～138)μm×(88～128)μm;分生孢子簡單，黃色到淺褐色，棒狀、柱狀擬紡錘形，常具(1－)3～5(－7)個分隔，大小為(40～72)μm×(3.8～5.5)μm，孢子壁略粗糙［8－9］。

2.7圓斑病

主要危害葉片，發(fā)病初期在葉片上形成針頭狀小圓斑，逐漸擴大成紫紅色斑點，后期病斑相連并漸變?yōu)榛液稚?，有時病斑邊緣有較寬的紫紅色圈;春季產(chǎn)孢時葉斑上常出現(xiàn)白色粉狀物，即病菌的分生孢子堆;末期病葉變枯并從枝條上脫落下來，病害嚴(yán)重時可導(dǎo)致枝條枯死。病原菌是Pseudocercosporasp.。病原菌在PDA平板上生長較緩慢，菌落近圓形，邊緣整齊，菌絲深綠色。菌絲體內(nèi)生，無或有子座，褐色。分生孢子梗多根叢生于子座上面，淺褐色，無或有分枝，隔膜有或無，直立或彎曲，頂端變小，孢痕有時明顯。分生孢子單生，倒棍棒形、圓柱形，近無色，淺黃色或淡褐色，正直或彎曲，具3～5隔膜，頂端略尖或鈍圓，基部倒圓錐形，臍點不明顯加厚，大小為(26.5～70)μm×(2.5～5)μm［4］。病原菌經(jīng)PCR擴增后，產(chǎn)物測序，該菌的ITS序列長度為513bp，與桉樹病原假尾孢Pseudocer-cosporachiangmaiensis(收錄號為EU882130.1)的ITS序列同源性為99%。形態(tài)特征與泰國記載清邁假尾孢Ps.chiangmaiensis相符合［10］，故鑒定為清邁假尾孢Ps.chiangmaiensisCheewangkoonK.D.Hyde＆Crous。

2.8灰斑病

發(fā)病葉片初期產(chǎn)生淺褐色近圓型或不規(guī)則小斑，后病斑不斷擴大，邊緣病斑常連成大病斑，病斑邊緣有一紫色暈圈。后期病斑上產(chǎn)生深色子實體，病斑漸變?yōu)榛液稚?。病原菌屬無性態(tài)真菌，葉點霉Phyllostictalin-dericola。分生孢子器暗色，有孔，兩面凸到球形;分生孢子梗短，分生孢子近圓形、橢圓形、兩端鈍圓，單胞無色，內(nèi)含多數(shù)細(xì)小顆粒，分生孢子大小為(5～9)μm×(4～5)μm［11］。

2.9炭疽病

感病葉片通常從葉緣開始發(fā)病，葉片大面積變?yōu)辄S綠色，后漸變?yōu)闇\褐色至褐色，病斑邊緣出現(xiàn)紅褐色暈環(huán)，但病斑上的側(cè)脈呈淺褐色，當(dāng)條件適宜時，斑面溢出粉紅色粘稠分生孢子團。后期病斑擴大，導(dǎo)致病葉卷縮變形。病原菌是Colletotrichumgloeosporioides。病原菌在PDA培養(yǎng)基上菌落圓形，邊緣整齊，氣生菌絲濃密，初為白色，后為灰白色;分生孢子盤蝶形或墊形，近表生;分生孢子團呈橘紅色;分生孢子梗簡單，伸長;分生孢子單胞無色，卵圓或長圓形，兩端鈍圓，部分有1～2個油球，大小為(13.8～17.5)μm×(3～5)μm;附著胞橢圓形或不規(guī)則，大小為(6～15)μm×(4～8)μm［12］。病原菌經(jīng)PCR擴增后，產(chǎn)物測序，該菌的ITS序列長度為558bp，與膠孢炭疽菌Colletotrichumgloeosporioides(收錄號為AY266387.1)的ITS序列同源性為99%。

2.10灰霉病

病菌危害速生桉苗的嫩梢、幼莖和嫩葉。發(fā)病組織初呈淺褐色，水漬狀軟腐，后期潰爛。葉片受害后出現(xiàn)透明黃色小點，可迅速擴展為灰色至褐色大斑塊，后全葉變枯。莖部受害時，出現(xiàn)暗綠色水漬條斑，后變褐色，略凹陷，最后腐爛。幼苗多在2d內(nèi)全株感病。感病苗木常在發(fā)病部位折倒，最后整株死亡。病原菌屬無性態(tài)真菌，灰葡萄孢菌Botrytiscinerea。該菌分生孢子梗直立，粗大，淡褐色，分枝，近頂部常二叉狀，頂部細(xì)胞擴大或圓形，在短梗上密生小梗，聚生大量分生孢子。分生孢子團呈葡萄穗狀，分生孢子近無色或淡灰褐色，單胞，近橢圓形或卵圓形，大小為(7.5～16)μm×(5～9.5)μm［13－14］。

3討論

據(jù)報道［13，15－17］，廣西速生桉主要葉部病害有焦枯病、紫斑病、葉斑病、炭疽病、葉尖枯病、角斑病、灰斑病和黑斑病等。本文中Cylindrocladiumflorida-num是我國桉樹焦枯病病原的新紀(jì)錄，隱盤孢葉斑病、輪斑病、花斑病、黃紫斑病未見報道，為我國新發(fā)現(xiàn)病害。經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，廣西速生桉葉部病害種類在增加，發(fā)病面積和危害程度也在加劇，多種病害同時同地發(fā)生。隱盤孢葉斑病和花斑病的發(fā)生，嚴(yán)重影響桉樹的生長，直接造成林分產(chǎn)值下降，因此，對這些病害應(yīng)作更加詳細(xì)地調(diào)查，以掌握其病害流行規(guī)律及進一步研究病原菌的特性，為病害的防治提供重要依據(jù)。