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【摘要】目的采用反相高效液相色譜（RPHPLC）法測定竺黃復(fù)方片中甘草酸的含量。方法采用kromasilC18柱（200mm×4.6mm,5μm），以甲醇-0.2mol·L-1乙酸銨-冰乙酸（65∶35∶1）為流動(dòng)相，流速1ml·min-1，柱溫30℃，檢測波長250nm。結(jié)果在0.402～2.010μg之間，峰面積與進(jìn)樣量的線性關(guān)系為A=673028.2878C-67302.7076（r=0.9998），平均回收率為99.66％。測得3批樣品中甘草酸的含量（以甘草酸銨計(jì)）分別為1.034，1.103和1.008mg/片。結(jié)論所建方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于竺黃復(fù)方片的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】竺黃復(fù)方片；甘草酸；反相高效液相色譜法

Abstract：ObjectiveToestablishanHPLCmethodtodetermineglycyrrhizicacidfromprescriptionofZhuhuangTablet.MethodsThecolumnwaskromasilC18(200mm×4.6mm,5μm),themobilephaseconsistedofMethanol～0.2mol·L-1Ammoniumacetate-Glacialacrticacid(65:35:1),withtheflowrateof1ml·min-1andtheUVdetectorwassetat250nm.ResultsThemethodshowedagoodrangeof0.402～2.010μg(r=0.9998).Theaveragerecoverywas99.66%.Theglycyrrhizicacidcontentsofthreebatchsampleswere1.034,1.103，1.008mg,respectively.ConclusionThismethodissimple,accurate,repeatableandsuitableforthedeterminationofglycyrrhizicacidinprescriptionofZhuhuangTablet.

Keywords：PrescriptionofZhuhuangTablet；Glycyrrhizicacid;RP–HPLC

竺黃復(fù)方片由甘草、力嘎都、牛黃、紅花、榜嘎（唐古特烏頭）等九味藥材組成，具有利肺、消炎、止痛的功效，用于小兒流感引起的肺炎、上呼吸道感染等［1］。該方標(biāo)準(zhǔn)收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》藏藥第一冊，標(biāo)準(zhǔn)未收載鑒別項(xiàng)和含量測定項(xiàng)，不利于生產(chǎn)和使用的相關(guān)部門控制其藥品質(zhì)量。本文擬建立甘草酸含量測定方法，增加含量測定項(xiàng)，提高其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1材料

Waters2695/2690分離系統(tǒng)，2996（2487）檢測器，Empower色譜管理系統(tǒng)，島津UV-2100型紫外分光光度計(jì)，AtutoScienceAS5150超聲波清洗儀，Sartorius公司BP211D電子天平。甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1甘草酸的含量測定

2.1.1色譜條件和系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用kromasil色譜柱（200mm×4.6mm,5μm），流動(dòng)相為甲醇-0.2mol·L-1乙酸銨-冰乙酸（65∶35∶1），流速1ml·min-1，柱溫：30℃，檢測波長250nm［2］，按甘草酸銨峰計(jì)，色譜柱理論塔板數(shù)不低于2000，甘草酸銨峰與其它峰達(dá)到基線分離，峰形對稱，色譜圖見圖1。

2.1.2溶液的制備對照品溶液的制備：精密稱取甘草酸銨對照品適量，置10ml量瓶中，加甲醇-0.2mol·L-1乙酸銨-冰乙酸（65∶35∶1）溶解并稀釋至刻度，搖勻,使成為每毫升中含對照品0.201mg的溶液即得。

樣品溶液的制備：取竺黃復(fù)方片適量，研細(xì)，取1.5g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-0.2mol·L-1乙酸銨-冰乙酸（65∶35∶1）溶液45ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，用0.45μm濾膜濾過即得。

陰性樣品溶液的制備：取缺甘草的陰性樣品，照上述樣品溶液制備方法處理即得陰性樣品溶液。

2.2方法學(xué)考察

2.2.1線性范圍精密量取上述甘草酸銨對照品溶液2，4，6，8，10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積，并以峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量C（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸，得回歸方程：A=673028.2878C-67302.7076，甘草酸銨在0.402～2.010μg之間，進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好（r=0.9998）。

2.2.2精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取對照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，甘草酸銨峰面積的RSD為0.97％，表明儀器精密度良好。

2.2.3重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取竺黃復(fù)方片品（批號(hào)20040301）研細(xì)，取1.5g，5份，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-0.2mol·L-1乙酸銨-冰乙酸（65∶35∶1）溶液45ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，并計(jì)算含量，結(jié)果甘草酸含量（以甘草酸銨計(jì)）平均含量為2.75mg·g-1,RSD為1.81％。上述實(shí)驗(yàn)表明，該方法的精密度較好。

2.2.4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取樣品供試液（批號(hào)20040301）與甘草酸銨對照品分別于0，2，4，6，8h，分別進(jìn)樣10μl注入色譜儀，記錄峰面積，平均峰面積為533271，RSD為1.97%,說明樣品溶液8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.5加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密量取甘草酸銨對照品溶液（0.2010mg/ml）10ml，5份，分別置100ml具塞錐形瓶中，水浴上揮干甲醇，取已知含量的樣品（批號(hào)20040301）約0.8g，5份，精密稱定，置上述錐形瓶中，加入甲醇-0.2mol·L-1乙酸銨-冰乙酸（65∶35∶1）溶液45ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，稱定重量，用上述溶劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取上清液，用0.45μm過濾膜過濾，作為供試品溶液。按上述色譜條件，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。表1加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

2.2.6專屬性考察精密吸取陰性樣品溶液10μl，注入色譜儀，結(jié)果表明干草酸銨位置上無干擾峰。

2.2.7樣品測定樣品按2.1.2項(xiàng)下方法制備樣品溶液后，再按上述重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下方法測定含量。3批樣品中甘草酸銨含量分別為1.034，1.103和1.008mg/片。

3討論

在甘草酸的含量測定中，提取溶媒比較了甲醇提取和流動(dòng)相提取，結(jié)果表明用流動(dòng)相提取效果更佳。

本實(shí)驗(yàn)用RP–HPLC法測定竺黃復(fù)方片中甘草酸的含量，所建方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于竺黃復(fù)方片的質(zhì)量控制。

【參考文獻(xiàn)】

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·藏藥，第一冊［S］.1995:251.

［2］國家藥典委員會(huì)．中國藥典,Ⅰ部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：59.