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【摘要】目的探討腦得生膠囊對家兔血管成形術(shù)后內(nèi)皮功能和內(nèi)膜增殖的影響。方法雄性大耳白兔30只，隨機(jī)分成4組:對照組(n=6)，拉傷組(n=8)，高脂組(n=8)，腦得生組(n=8)。采用高膽固醇喂養(yǎng)加腹主動脈內(nèi)皮剝脫制作血管狹窄模型，之后行血管球囊擴(kuò)張成形術(shù)。于術(shù)后4w處死動物，取血管成形術(shù)部位血管標(biāo)本，用免疫組化測定增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)水平。并分別于實(shí)驗(yàn)初、實(shí)驗(yàn)?zāi)┩枚夓o脈采血檢測一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素(ET1)濃度。結(jié)果高脂組內(nèi)膜增生最明顯，內(nèi)膜面積最大而管腔面積最小;腦得生組內(nèi)膜面積較高脂組明顯減小，管腔面積明顯擴(kuò)大。高脂組血清總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDLC)和ET1均明顯升高,而血清NO明顯下降;腦得生組血漿TC、LDLC和ET1明顯降低,而血清NO水平明顯升高。免疫組化染色:與高脂組比較，腦得生組PCNA的表達(dá)水平顯著減少，有顯著性差異(P<0.05)。結(jié)論腦得生膠囊具有抑制家兔血管成形術(shù)后內(nèi)膜增殖和保護(hù)血管內(nèi)皮功能的作用。

【關(guān)鍵詞】腦得生;血管成形術(shù);內(nèi)皮功能;內(nèi)膜增殖;PCNA

從80年代起經(jīng)皮冠狀動脈血管成形術(shù)(PTCA)已成為治療冠心病的重要手段，但PTCA術(shù)后30%～50%的再狹窄率使這一技術(shù)的應(yīng)用受到很大限制。因而對于術(shù)后再狹窄的防治是當(dāng)前冠心病防治研究的熱點(diǎn)。本研究主要探討中藥腦得生對家兔血管成形術(shù)后內(nèi)皮功能及血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響。

1材料與方法

1.1材料健康日本雄性大耳白兔30只，體重(2.0±0.3)kg，月齡6～8個月，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物部提供。在適應(yīng)性飼養(yǎng)1w后，隨機(jī)分成4組：對照組6只，拉傷組、高脂組、腦得生組各8只。腦得生(批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z20054595，由吉林大學(xué)制藥廠提供，主要成分：三七皂甙、紅花黃色素、葛根、川芍、山楂)。MMP2、TIMP1試劑盒購至南京建成生物研究所。TG、TC、HDLC、LDLC試劑盒購于北京中生生物工程高技術(shù)公司，NO和血漿ET1試劑盒購于南京建成生物工程研究所。主要儀器設(shè)備：日立7600020全自動生化分析儀。

1.2給藥方法最初4w對照組和拉傷組只喂普通飼料，高脂組和腦得生喂普通飼料加膽固醇1.5g·kg-1·d-1，第4周末除對照組外各組經(jīng)一側(cè)股動脈用3.5～4.0mm球囊行腹主動脈內(nèi)膜剝脫術(shù)，術(shù)后繼續(xù)4w;第8周末除對照組外各組在X線下經(jīng)另一側(cè)股動脈行腹主動脈造影，對血管狹窄超過50%的部位，用帶導(dǎo)絲的球囊進(jìn)行擴(kuò)張。血管成形術(shù)后再繼續(xù)飼養(yǎng)4w后處死動物。

1.3主要觀察指標(biāo)各組家兔分別于實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)?zāi)亩夓o脈抽血測定：①甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDLC)、低密度脂蛋白(LDLC)水平測定，檢測試劑盒來自北京中生生物工程高技術(shù)公司。②血清NO和血漿ET1檢測試劑盒來自南京建成生物工程研究所。

動物氣栓處死后，4%多聚甲醛血管內(nèi)膜原位灌流固定，參照X線照片截取血管成形術(shù)部位血管標(biāo)本，標(biāo)本經(jīng)乙醇脫水，透明，石蠟包埋，制成蠟塊，切片3μm厚，HE染色。行計(jì)算機(jī)圖像分析，測定管腔面積(LA)，內(nèi)彈力極包繞面積(IEA),計(jì)算出內(nèi)膜面積(NIA)=IEALA。

石蠟切片，采用標(biāo)準(zhǔn)SABC法，DAB顯色，觀察各組血管形態(tài)及增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)陽性細(xì)胞。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS11.0軟件進(jìn)行分析,計(jì)量資料以x±s表示。兩組間比較用t檢驗(yàn)，多組比較用F檢驗(yàn)，組間兩兩比較用q檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1血脂測定結(jié)果TC和LDLC在高脂喂養(yǎng)后明顯升高，較對照組及拉傷組比較有顯著性差異(P<0.05)。腦得生組TC和LDLC較高脂組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。表1各組血脂測定結(jié)果與對照組與拉傷組比較：1)P<0.05;與高脂組比較：2)P<0.05

2.2NO和ET1測定結(jié)果拉傷組血清NO降低，血漿ET1升高，較對照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。高脂組NO明顯降低，而血漿ET1明顯升高，較對照組及拉傷組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與高脂組相比較，腦得生組NO明顯升高，ET1明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。表2各組各組血清NO和血漿ET1的變化與對照組比較：1)P<0.05;與高脂組比較：2)P<0.05

2.3血管形態(tài)學(xué)變化測定結(jié)果高脂組內(nèi)膜增生最明顯，內(nèi)膜面積最大而管腔面積最小。腦得生組內(nèi)膜面積較高脂組明顯減小，管腔面積明顯擴(kuò)大，有顯著性差異(P<0.05)，見表3。表3各組血管形態(tài)學(xué)測量結(jié)果與對照組和拉傷組比較：1)P<0.05;與高脂組比較：2)P<0.05

2.4PCNA免疫組化結(jié)果PCNA陽性細(xì)胞為核陽性，主要分布于內(nèi)膜和內(nèi)彈力板區(qū)域。高脂組陽性細(xì)胞明顯升高，腦得生組陽性細(xì)胞面積明顯減少，與高脂組相比有顯著性差異(P<0.05)。

3討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明,中藥在保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、防治和減輕血管內(nèi)膜增殖等方面效果顯著〔1〕。腦得生是臨床常用的治療心、腦血管疾病的新藥,是采用現(xiàn)代制藥技術(shù)研制的一種高效、新型純中藥膠囊制劑，經(jīng)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)多種指標(biāo)綜合測定表明具有擴(kuò)張冠狀動脈血管、增加冠狀動脈血流量、顯著降低血脂，降低血黏度的作用，對聚積之血小板有解聚作用和很強(qiáng)的抗血栓形成、防治心肌缺血等功效。腦得生的主要成分：三七皂甙、紅花黃色素、葛根、川芍、山楂等，其中三七、川芎、紅花、山楂均具有活血化疲、疏通經(jīng)絡(luò)、降低血液黏滯度，增加冠狀血管血流量的作用。本實(shí)驗(yàn)通過球囊損傷加高膽固醇飲食制作家兔動脈粥樣硬化模型，在此基礎(chǔ)上對其進(jìn)行血管成形術(shù)，成功模擬了人體血管成形術(shù)的整個過程〔2〕。同時使用中藥腦得生進(jìn)行干預(yù)治療，證實(shí)復(fù)方藥物從多環(huán)節(jié)抑制內(nèi)膜增殖和血管重構(gòu)的作用。超級秘書網(wǎng)

ET1與NO是一對影響血管平滑肌細(xì)胞增殖及調(diào)節(jié)血管收縮與舒張的因子。ET1可通過增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+內(nèi)流和Ca2+的釋放〔3〕，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的收縮與增殖。而NO可通過環(huán)磷酸鳥苷或環(huán)磷酸腺苷途徑降低細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度或阻斷Ca2+內(nèi)流,使血管平滑肌舒張并抑制其增殖〔4〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示動脈粥樣硬化和血管成形術(shù)后內(nèi)皮的損傷導(dǎo)致了ET1釋放增多、NO合成受阻。腦得生具有降低血脂，抗動脈粥樣硬化，明顯升高NO、降低ET1的作用，從而具有保護(hù)血管內(nèi)皮、抑制內(nèi)膜增殖的作用。

再狹窄不僅是局部血管損傷后的一種修復(fù)反應(yīng)，且是多種細(xì)胞因子和生長因子介導(dǎo)的局部血管重建和再塑及血管平滑肌細(xì)胞(SMC)遷移、增殖、凋亡及細(xì)胞基質(zhì)分泌和堆積的過程〔5〕。PCNA是一種僅在增殖細(xì)胞中合成與表達(dá)的36kD的多肽，其表達(dá)和合成與細(xì)胞的增殖周期有關(guān)，在靜止期細(xì)胞內(nèi)含量很低，自G晚期逐漸增加，S期量達(dá)到高峰〔6〕。因此，它可有效地反映細(xì)胞的增殖功能。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)腦得生治療組再狹窄動脈壁PCNA陽性細(xì)胞面積比高脂組顯著減少，從而提示抑制平滑肌細(xì)胞增殖的信號通路可能是腦得生防治血管再狹窄的主要機(jī)制之一。

總之，本實(shí)驗(yàn)觀察到腦得生具有保護(hù)血管內(nèi)皮和抑制血管內(nèi)膜增生兩方面的作用，對血管成形術(shù)后再狹窄具有防治作用，可能是一個很有前途的藥物，值得進(jìn)一步深入研究。

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3LauerMR,GunnMD,ClusinWT.EndothelinactivatesvoltagedependentCa2+currentbyaGproteindependentmechanisminrabbitcardiacmyocytes〔J〕.JPhysiol，1992;448:72947.

4InagamiT,NaruseM,RichardH.Endotheliumasanendocrineorgan〔J〕.AnnuRevPhysiol,1995;57:17189.

5BautersC,IsnerJM.Thebiologyofrestenosis〔J〕.ProgCardiovascDis,1997;40(2):10716.

6PrelichG，TanCK，KosturaM,etal.FunctionalidentityofProliferatingcellnuclearantigenandaDNAPglynerasedeltaauxiliaryportein〔J〕.Nature,1987;326(4):517610.