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自動(dòng)化免疫分析范文第1篇

【關(guān)鍵詞】 全面質(zhì)量管理；全自動(dòng)生化分析儀；臨床生化檢驗(yàn)；生化試劑

        1  全自動(dòng)生化分析儀操作人員的素質(zhì)要求

        人員因素是保證生化檢驗(yàn)結(jié)果的前提，醫(yī)院各級(jí)領(lǐng)導(dǎo)應(yīng)高度重視。

        1.1  操作人員的英語(yǔ)水平

        進(jìn)口全自動(dòng)生化分析儀的操著界面大都是英文，對(duì)操著人員的英文水平應(yīng)有一定的要求，為適應(yīng)工作的需要，科室領(lǐng)導(dǎo)應(yīng)合理安排工作人員。

        1.2  操作人員的業(yè)務(wù)水平

        全自動(dòng)生化分析儀是實(shí)驗(yàn)室的大型設(shè)備，操著人員除具備相應(yīng)的專業(yè)理論知識(shí)外，還應(yīng)具備熟練操著電腦的能力。對(duì)每一位上機(jī)操著人員在上崗前都應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格的、專門的技術(shù)培訓(xùn)?？荚嚭细袢〉蒙蠉徺Y格方能上機(jī)操著。

        2  全自動(dòng)生化分析儀的安裝條件

        全自動(dòng)生化分析儀的運(yùn)行必須有一個(gè)良好的工作環(huán)境，才能保證生化結(jié)果的準(zhǔn)確性。

        2.1  儀器應(yīng)安裝在相對(duì)獨(dú)立的環(huán)境中，有良好的通風(fēng)，防塵，避免陽(yáng)光直射，避免暖氣設(shè)備。

        2.2  應(yīng)有穩(wěn)定的電流、電壓和接地保護(hù)的電源系統(tǒng)。應(yīng)該配備ups保護(hù)電源，用以應(yīng)對(duì)突然斷電的情況。

        2.3  應(yīng)滿足適應(yīng)儀器工作的環(huán)境溫度、濕度和實(shí)驗(yàn)室的清潔度等，保證儀器運(yùn)轉(zhuǎn)良好。工作室內(nèi)應(yīng)配備溫濕度表，每天觀察，并做好文字記錄以便出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)及時(shí)糾正。

        3  試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品準(zhǔn)備

        3.1  試劑

        試劑的質(zhì)量直接影響到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。目前試劑種類較多，不同的生產(chǎn)廠家、不同型號(hào)的全自動(dòng)生化分析儀對(duì)試劑的要求不完全相同，原則上建議選擇有國(guó)家批準(zhǔn)文號(hào)，有量值溯源性，有配套校準(zhǔn)品和質(zhì)控品的試劑或使用儀器配套系列試劑產(chǎn)品。不宜經(jīng)常更換試劑廠家，若要更換必須及時(shí)調(diào)整檢測(cè)項(xiàng)目的參數(shù)。試劑的存放要有專用冰箱，建立冰箱溫度每日登記制度，以保證試劑的存放條件達(dá)到要求。應(yīng)定期清理試劑，及時(shí)處理過(guò)期試劑。

        3.2  校準(zhǔn)品

        用校準(zhǔn)品校準(zhǔn)儀器應(yīng)選擇與試劑配套的校準(zhǔn)品，最好是人血清基質(zhì)的校準(zhǔn)品而不是水溶液標(biāo)準(zhǔn)，不得隨意更換，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的可溯源性。

        3.3  質(zhì)控品

        在試劑質(zhì)量和標(biāo)準(zhǔn)品得到保證的前提下，質(zhì)控品應(yīng)盡量選擇人血清基質(zhì)、無(wú)傳染性、瓶間差異小的凍干質(zhì)控品，且復(fù)溶后穩(wěn)定時(shí)間要長(zhǎng)。質(zhì)控品有效期應(yīng)大于一年。 

        4  儀器的操作

        4.1  試劑的順序編排

        一般情況下，生化檢測(cè)所產(chǎn)生的誤差來(lái)源于方法誤差、儀器誤差、試劑誤差、操著誤差和試劑誤差等。全自動(dòng)生化分析儀按照預(yù)先設(shè)定好的指令自動(dòng)工作，吸樣針的自動(dòng)沖洗可能不完全干凈，在吸取下一項(xiàng)目試劑時(shí)，可能會(huì)污染下一項(xiàng)目的試劑。因此在使用全自動(dòng)生化分析儀隨機(jī)組合檢測(cè)項(xiàng)目時(shí)，必須注意位置的特別設(shè)置。在設(shè)計(jì)分析儀項(xiàng)目上機(jī)參數(shù)時(shí)，應(yīng)考慮試劑成分對(duì)下一個(gè)測(cè)定項(xiàng)目的影響，應(yīng)該分開(kāi)互相干擾的項(xiàng)目。

       4.2  校準(zhǔn)

        校準(zhǔn)的作用是為了減少或消除儀器、試劑等造成的系統(tǒng)誤差。臨床實(shí)驗(yàn)室必須制定儀器的校準(zhǔn)計(jì)劃和校準(zhǔn)方法。全自動(dòng)生化分析儀校準(zhǔn)方法包括：①選擇合適（配套）的校準(zhǔn)試劑，最好是人血清基質(zhì)，以減少基質(zhì)效應(yīng)造成的誤差；②校準(zhǔn)試劑應(yīng)溯源到有證參考物質(zhì)或參考方法；③確定校準(zhǔn)的頻率，至少半年應(yīng)進(jìn)行一次校準(zhǔn)；④特殊情況發(fā)生時(shí)必須進(jìn)行校準(zhǔn)。 

        5  質(zhì)量控制

        5.1  確定質(zhì)控方法

        包括選擇質(zhì)控規(guī)則、質(zhì)控物的數(shù)量以及質(zhì)控測(cè)定的頻率等。

        5.2  凍干血清

        凍干血清加水復(fù)溶后，應(yīng)嚴(yán)格按說(shuō)明書要求在室溫避光靜置30分鐘，然后輕輕混勻，禁止用力振蕩，避免產(chǎn)生泡沫，以免造成人為誤差。

        5.3  室內(nèi)質(zhì)控血清靶值的確定

        由于各個(gè)實(shí)驗(yàn)室所使用的儀器、試劑、校準(zhǔn)品不同，如果采用商家提供的定值質(zhì)控品的靶值作為本室的靶值，容易出現(xiàn)偏差。因此，室內(nèi)質(zhì)控使用的質(zhì)控血清的靶值應(yīng)在自己實(shí)驗(yàn)室常規(guī)條件下進(jìn)行測(cè)定。

        5.4  失控原因分析及處理

        質(zhì)控血清每天隨標(biāo)本一起測(cè)定，結(jié)果在允許誤差范圍內(nèi)，此次結(jié)果才可以發(fā)出報(bào)告。若質(zhì)控結(jié)果超出允許誤差范圍，要立即查找原因。回顧整個(gè)檢查、操著過(guò)程，分析是否由于人為因素所致，是否由于質(zhì)控品、試劑變質(zhì)等所致。

        5.5  室間質(zhì)控

        在認(rèn)真做好室內(nèi)質(zhì)控的同時(shí)，一定要正確對(duì)待室間質(zhì)評(píng)工作及反饋的信息。每次室間質(zhì)評(píng)都要由本實(shí)驗(yàn)室認(rèn)真獨(dú)立完成，并如實(shí)報(bào)告檢測(cè)結(jié)果。當(dāng)收到反饋報(bào)告后要認(rèn)真分析反饋報(bào)告中所反映的問(wèn)題，積極查找原因，找出與同類實(shí)驗(yàn)室之間的差距，及時(shí)改進(jìn)，采取措施提高測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

        6  儀器的維護(hù)保養(yǎng)

        6.1  建立檢驗(yàn)項(xiàng)目操著程序

        建立各項(xiàng)檢驗(yàn)項(xiàng)目的《標(biāo)準(zhǔn)化操著程序》和《全自動(dòng)生化儀的標(biāo)準(zhǔn)操著程序》，使檢驗(yàn)人員在檢驗(yàn)操著過(guò)程中有據(jù)可依，減少因隨意操著引起的誤差。

        6.2  儀器的維護(hù)和保養(yǎng)

        儀器的保養(yǎng)應(yīng)由專人負(fù)責(zé)，嚴(yán)格按《全自動(dòng)生化儀的標(biāo)準(zhǔn)操著程序》的要求進(jìn)行。其維護(hù)、保養(yǎng)的內(nèi)容包括儀器的清潔、清潔液的配制，每天光度計(jì)的檢測(cè)，每天開(kāi)、關(guān)機(jī)對(duì)比色杯的清洗，加樣針頭的定期清理等。儀器在使用間隔一定時(shí)間后，應(yīng)為其工作軸承涂抹油，保護(hù)工作元件，使儀器能夠正常運(yùn)行。

參考文獻(xiàn)

自動(dòng)化免疫分析范文第2篇

【關(guān)鍵詞】 ARCHITECT—i2000SR；梅毒螺旋體特異性抗體；性能評(píng)價(jià)

i2000SR運(yùn)用的是化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法，它能對(duì)多項(xiàng)免疫項(xiàng)目進(jìn)行定性或定量分析。由于在不同的運(yùn)行環(huán)境下相同儀器有可能出現(xiàn)性能差異，本科新儀器投入臨床使用前要對(duì)該儀器檢測(cè)系統(tǒng)中的進(jìn)行性能評(píng)價(jià)。

1 材 料

1.1 儀器 ARCHITECT—i2000SR全自動(dòng)免疫分析儀。

1.2 試劑 原裝配套試劑盒。

1.3 標(biāo)本 2012年本院的住院或健康體檢者。

2 方 法

2.1 空白實(shí)驗(yàn) 使用PBS作為樣本測(cè)定三次，記錄結(jié)果。

2.2 精密度 ①日間精密度：使用高、中、低質(zhì)控品連續(xù)測(cè)定15天，計(jì)算CV值。②批內(nèi)精密度：使用高、中、低3個(gè)水平的血清重復(fù)測(cè)定15次，計(jì)算CV值。

2.3 線性范圍 收集略高于線性范圍下限的低值血清（L）和略低于線性范圍上限的高值血清（H），按5H、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、5L梯度進(jìn)行混合并檢測(cè)1，對(duì)不同濃度的實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值進(jìn)行線性回歸分析。

2.4 污染攜帶率 先取一份H值標(biāo)本，連續(xù)測(cè)定3次，隨后立即取一份L值標(biāo)本連續(xù)測(cè)定3次：攜帶污染率=（L1—L3）/（H3—L3）×100%。

2.5 參考區(qū)間驗(yàn)證 按照NCCLS2推薦的要求進(jìn)行驗(yàn)證，選擇經(jīng)體檢排除其他疾病的正常血清標(biāo)本男女性標(biāo)本各20名，觀察檢測(cè)結(jié)果是否在參考范圍內(nèi)。

3 結(jié) 果

3.1 精密度試驗(yàn)結(jié)果 高、中、低3個(gè)水平血清的批內(nèi)精密度CV分別為5.54%、7.04%和3.54%，用廠家配套低、高水平質(zhì)控品測(cè)定結(jié)果的批間精密度CV分別為8.92%及6.69%，均小于10%。

3.2 空白試驗(yàn)結(jié)果 PBS三次結(jié)果分別為0.01、0.02和0.01。

3.3 線性試驗(yàn)結(jié)果 Y=0.9963X+0.0029，相關(guān)系數(shù)R2=0.9965。由結(jié)果可知，儀器的線性良好，達(dá)到說(shuō)明書的要求。

3.4 攜帶污染率 攜帶污染率為0.29%

3.5 參考區(qū)間驗(yàn)證 經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，檢測(cè)值均落在廠家給定的參考范圍之內(nèi)，符合率為100%。

4 討 論

近年來(lái)全自動(dòng)免疫化學(xué)發(fā)光儀在梅毒特異性抗體定量檢測(cè)中的應(yīng)用逐漸受到重視，i2000SR采用微粒子化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)定量測(cè)定梅毒特異性抗體。為保證檢驗(yàn)質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)室對(duì)新裝的儀器在用于檢測(cè)臨床標(biāo)本前都應(yīng)該要做性能評(píng)價(jià)。通過(guò)性能評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)，該儀器檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體的空白試驗(yàn)良好；批內(nèi)精密度和日間精密度均小于10%，試驗(yàn)表明儀器測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定，能滿足臨床應(yīng)用的要求；通過(guò)線性范圍的驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)儀器在廠家給定的范圍內(nèi)線性良好、能滿足臨床要求；標(biāo)本的攜帶污染率低，證明該儀器的自動(dòng)沖洗管道能力強(qiáng)，能夠有效控制交叉污染3；對(duì)參考區(qū)間的驗(yàn)證結(jié)果都在儀器說(shuō)明書給出的參考范圍內(nèi)。

總之，通過(guò)對(duì)ARCHITECT—i2000SR全自動(dòng)免疫分析儀是臨床實(shí)驗(yàn)室較理想儀器。

參考文獻(xiàn)

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自動(dòng)化免疫分析范文第3篇

[關(guān)鍵詞]化學(xué)發(fā)光儀；方法比對(duì)；甲胎蛋白；癌胚抗原

[中圖分類號(hào)] R197.39 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 2095-0616（2013）21-122-03

隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展，免疫分析技術(shù)得到很大提高，不同型號(hào)不同檢測(cè)原理的自動(dòng)化免疫分析儀在國(guó)內(nèi)得到廣泛使用，同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用不同儀器檢測(cè)相同項(xiàng)目的現(xiàn)象越來(lái)越普遍[1]。然而，由于不同儀器、試劑、校準(zhǔn)品所構(gòu)成的不同檢測(cè)系統(tǒng)之間測(cè)定的結(jié)果卻不一定完全一致。臨床和患者會(huì)困惑而對(duì)結(jié)果提出質(zhì)疑。因此，如何判斷同一項(xiàng)目在不同儀器之間的檢測(cè)結(jié)果是否具有可比性，以及如何保證其結(jié)果的一致性，是目前醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)界關(guān)注和討論的熱點(diǎn)[2]。本科先后引進(jìn)了兩臺(tái)全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫儀，其中雅培i2000SR全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀用于常規(guī)標(biāo)本AFP和CEA的測(cè)定，Beckman DXI800全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀則用于體檢標(biāo)本AFP和CEA的測(cè)定。為了確認(rèn)本研究2臺(tái)化學(xué)發(fā)光儀對(duì)AFP、CEA檢測(cè)結(jié)果是否具有可比性，按照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室委員會(huì)（NCCLS）[3]EP9-A2文件的要求對(duì)本科兩臺(tái)全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)AFP、CEA的結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析和偏差評(píng)估，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本采集

按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室委員會(huì)（NCCLS）EP9-A2文件的要求準(zhǔn)備標(biāo)本，收集本院門診住院患者檢測(cè)AFP、CEA的新鮮血清，無(wú)溶血、無(wú)脂血，并從中抽取符合條件的40份標(biāo)本，標(biāo)本濃度涵蓋正常參考區(qū)間及異常高值并盡可能分布均勻，標(biāo)本收集后置冰箱冷凍待用。

1.2 儀器和試劑

美國(guó)雅培i2000SR和Beckman DXI800全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀，其配套試劑和標(biāo)準(zhǔn)品分別為南京奕昕生物科技有限公司和上海海爾施診斷產(chǎn)品有限公司提供，質(zhì)控品為Randox批號(hào)為1102、1105、1162。

1.3 檢測(cè)方法

因雅培i2000SR化學(xué)發(fā)光分析儀主要用于常規(guī)腫瘤指標(biāo)的檢測(cè)，參加全省室間質(zhì)評(píng)成績(jī)優(yōu)秀，測(cè)定結(jié)果可靠，故以雅培i2000SR化學(xué)發(fā)光儀作為比較方法，Beckman DXI800全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀作為實(shí)驗(yàn)方法。實(shí)驗(yàn)前對(duì)儀器進(jìn)行維護(hù)和保養(yǎng)并做好室內(nèi)質(zhì)控工作，確保儀器保持正常狀態(tài)。每日將選好的8個(gè)標(biāo)本分別在兩臺(tái)儀器上進(jìn)行雙份平行測(cè)定，測(cè)定順序按照18及81進(jìn)行，連續(xù)測(cè)定5d共40個(gè)標(biāo)本，記錄每一項(xiàng)目測(cè)定結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用EXCEL2003軟件自動(dòng)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)并繪制相應(yīng)圖表：（1）離群點(diǎn)的檢查，以同時(shí)超過(guò)絕對(duì)差值和相對(duì)差值均值的4倍判斷為方法內(nèi)方法間離群點(diǎn)；（2）計(jì)算相關(guān)系數(shù)r，如r≥0.975則認(rèn)為X分布范圍合適，直線回歸統(tǒng)計(jì)的斜率和截距可靠；（3）計(jì)算回歸方程，實(shí)驗(yàn)方法Y=bX+a

1.5 計(jì)算方法間的誤差

如r≥0.975，根據(jù)臨床使用要求，將各個(gè)項(xiàng)目給定的醫(yī)學(xué)決定水平（Xc）代入回歸方程，計(jì)算兩臺(tái)儀器之間的系統(tǒng)誤差即預(yù)期偏倚（SE）和相對(duì)偏倚（SE%）。

2 結(jié)果

2.1 兩儀器對(duì)AFP、CEA測(cè)定結(jié)果

經(jīng)計(jì)算，無(wú)離群點(diǎn)。均值的散點(diǎn)圖。見(jiàn)圖1、圖2。

2.2 AFP、CEA測(cè)定結(jié)果相關(guān)性分析和線性回歸

兩儀器測(cè)定AFP的相關(guān)系數(shù)r=0.999，相關(guān)方程為Y=0.913X+1.66，CEA的相關(guān)系數(shù)r=0.997，相關(guān)方程為Y=0.916X+0.324。兩項(xiàng)目的r>0.975，從AFP、CEA的散點(diǎn)圖可看出兩儀器測(cè)定AFP、CEA的線性關(guān)系良好，偏倚較小，無(wú)離群點(diǎn)。

2.3 預(yù)期偏倚及相對(duì)偏倚

兩項(xiàng)目在給定醫(yī)學(xué)決定水平（Xc）的預(yù)期偏倚及相對(duì)偏倚根據(jù)結(jié)果兩儀器測(cè)定AFP、CEA的結(jié)果相關(guān)性好，均可接受。見(jiàn)表1。

3 討論

AFP和CEA作為臨床應(yīng)用較為廣泛的腫瘤標(biāo)志物，在腫瘤的篩查、診斷和療效觀察中有著重要的意義[4]。隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，為了滿足臨床標(biāo)本量日益增長(zhǎng)需要，實(shí)驗(yàn)室往往是同一檢驗(yàn)項(xiàng)目，會(huì)在不同儀器上檢測(cè)。同一實(shí)驗(yàn)室的不同儀器之間所存在的差別，常會(huì)給臨床帶來(lái)混亂。如何使不同檢測(cè)系統(tǒng)相統(tǒng)一，使檢測(cè)結(jié)果相一致，已成為當(dāng)今臨床實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化必須解決的問(wèn)題[5-6]。美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室委員會(huì)（NCCLS）EP9-A2以及《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理方法》[7]均對(duì)實(shí)驗(yàn)室儀器比對(duì)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和偏倚評(píng)估提供了依據(jù)，實(shí)現(xiàn)同一檢驗(yàn)項(xiàng)目不同儀器檢測(cè)結(jié)果的可比性是質(zhì)量管理的最終目標(biāo)之一。因此對(duì)不同儀器進(jìn)行比對(duì)以了解各檢驗(yàn)項(xiàng)目結(jié)果的可比性和偏倚評(píng)估是非常必要的[8]。

本研究選擇雅培i2000SR全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀作為比較方法，Beckman DXI800全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀作為實(shí)驗(yàn)方法，嚴(yán)格按照EP9-A2文件的要求收集符合條件的標(biāo)本40例，分別在兩儀器上進(jìn)行AFP和CEA測(cè)定并對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析、偏差評(píng)估和臨床可接受評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示兩儀器對(duì)AFP和CEA的檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性較好，相關(guān)系數(shù)r均>0.99，AFP和CEA在醫(yī)學(xué)決定水平上的SE%均

[參考文獻(xiàn)]

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自動(dòng)化免疫分析范文第4篇

[關(guān)鍵詞] 心肌肌鈣蛋白免疫熒光干式定量法； 肌鈣蛋白I； 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光法

[中圖分類號(hào)] R446.1[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B[文章編號(hào)] 1005-0515（2011）-07-297-01

心肌肌鈣蛋白I(cardiac troponin I，cTnI)測(cè)定方法的標(biāo)準(zhǔn)化、檢測(cè)系統(tǒng)相對(duì)固定及質(zhì)量控制措施的不斷完善，2000年，歐洲心臟病學(xué)會(huì)(ESC)與美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)(ACC)對(duì)AMI進(jìn)行了重新定義，聯(lián)合發(fā)表了新標(biāo)準(zhǔn)，確定cTnI為AMI診斷的首選心臟標(biāo)志物，以cTnI取代CK-MB作為評(píng)價(jià)心肌壞死和診斷心肌梗死“金標(biāo)準(zhǔn)”[1]。定量的cTnI檢測(cè)在臨床上已經(jīng)廣泛應(yīng)用，但在臨床應(yīng)用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)各種方法之間差異很大，為了解該試劑盒在臨床應(yīng)用中的實(shí)際效果，本研究從批內(nèi)重復(fù)性、線性及準(zhǔn)確度等三個(gè)方面對(duì)該檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 采用i-CHROMA_Reader的心肌肌鈣蛋白免疫熒光干式定量檢測(cè)系統(tǒng)及配套試劑，貝克曼ACCESS 2免疫分析系統(tǒng)及配套試劑，該參照系統(tǒng)檢測(cè)心肌肌鈣蛋白I近三月內(nèi)室內(nèi)質(zhì)控穩(wěn)定，最近一次參加衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)PT成績(jī)?yōu)?00。比對(duì)前做好儀器維護(hù)及校準(zhǔn)，檢測(cè)期間室內(nèi)質(zhì)控在控。

1.2 標(biāo)本來(lái)源 2011年在橫縣人民醫(yī)院已確診AMI患者共98例，其中男性63例，平均年齡61.5±5.6歲，女性36例，平均年齡63.2±3.8歲。抽取患者EDTA-K2抗凝血4ml，分離心分離血漿，將血漿分裝為兩管，一管用貝克曼ACCESS 2免疫分析系統(tǒng)測(cè)定，同時(shí)另一管用心肌肌鈣蛋白免疫熒光干式定量系統(tǒng)檢測(cè)，兩組檢測(cè)均在2h內(nèi)完成。

1.3 測(cè)定方法 i-CHROMATM cTnI的檢測(cè)原理是免疫熒光快速定量檢測(cè)技術(shù)，干化學(xué)層析方法。即將血液樣本與檢測(cè)緩沖液進(jìn)行混合，緩沖液中的熒光標(biāo)記抗-cTnI抗體與血液中cTnI抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，當(dāng)該復(fù)合物被加入到試劑盒的反應(yīng)板上并通過(guò)毛細(xì)管作用擴(kuò)散到硝化纖維基質(zhì)的測(cè)試帶上被測(cè)試帶上的抗-cTnI抗體所捕獲。因此，血液樣本中cTnI抗原越多，測(cè)試帶上復(fù)合物聚積越多，熒光抗體信號(hào)強(qiáng)度反應(yīng)了被捕獲的cTnI數(shù)量，通過(guò)i-CHROMA Reader 免疫熒光分析儀檢測(cè)血液樣本中的cTnI濃度。

1.4 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1 試劑批內(nèi)重復(fù)性評(píng)價(jià)：選取高、低值標(biāo)本各1例，重復(fù)測(cè)定2O次，以變異系數(shù)CV%≤10%符合要求。

1.4.2 線性范圍評(píng)價(jià)：選取低值和高值兩份CRP血清，用本檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定3次，得CRP均值分別為1.7ng/mL、15.6ng/mL，然后按照3:1、2:1、1:1、1:2、1:3，制備成不同濃度樣本，將各混合樣本測(cè)定2次，取測(cè)定平均值與理論值計(jì)算相關(guān)系數(shù)r，以r≥0.995為符合線性評(píng)價(jià)要求。

1.4.3 準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)：按照EP9-A2[2]文件的要求選取cTnI>1.6ng/mL的新鮮樣本，連續(xù)測(cè)定5d, 每天測(cè)定8份樣本, 總共測(cè)定40份。每天將所選取的樣本分成2等份，一份用本檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)，另一份用貝克曼ACCESS 2免疫分析系統(tǒng)（全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光法）測(cè)定，每份樣本測(cè)定兩次,第1次按照18的順序，第2次按照81的順序測(cè)定，所有測(cè)定在2h內(nèi)測(cè)定完畢。對(duì)兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析，以相關(guān)系數(shù)r≥0.975（或r2≥0.95）為符合要求。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用Microsoft Office Excel 2003進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 結(jié)果

2.1 批內(nèi)重復(fù)性 測(cè)定其中高值X=10.83，CV=8.9%、低值X=1.51，CV=8.5%。結(jié)果顯示該法精密度較好，符合CV

表1 批內(nèi)重復(fù)性測(cè)定結(jié)果 （ng/mL）

2.2 線性檢測(cè) 測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2，回歸方程為y= 1.0352x-0.1792(Y為測(cè)定值，X為理論值)，r2=0.9969，顯示其在1.7～15.6ng/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，見(jiàn)圖1。

表2CRP線性測(cè)定結(jié)果（ng/mL）

圖1cTnI線性測(cè)定結(jié)果（ng/mL）

2.3 準(zhǔn)確度 測(cè)定結(jié)果表明，以金標(biāo)法所測(cè)結(jié)果為Y，免疫速率散射比濁法所測(cè)結(jié)果為X，并對(duì)所測(cè)結(jié)果做直線回歸分析 y=1.0212x-0.1232，r=0.995，b=0.1232，提示兩者呈良好的相關(guān)性，見(jiàn)圖2。

圖2準(zhǔn)確性測(cè)定

3 討論 cTnI在AMI發(fā)病后迅速釋放入血，胸痛后4～8 h升高，14～36 h達(dá)峰值，持續(xù)時(shí)間為3-7d，血中濃度可高達(dá)100～300 g／L[3]。因其在心肌損傷中具有特異性好和靈敏度高的特點(diǎn)，1999年歐洲心臟病學(xué)會(huì)(ESC)和美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)(ACC)聯(lián)合發(fā)表文件建議將cTnI的異常變化作為診斷AMI的必要條件[4]。

cTnI最早以RIA進(jìn)行檢測(cè)，使用多克隆抗體，交叉反應(yīng)較多，分析靈敏度為10ng/mL，耗時(shí)達(dá)24-36h。后來(lái)采用IRMA和ELISA法，使用單克隆抗體，提高了靈敏度和特異性，分析靈敏度可達(dá)0.1ng/ml，但檢測(cè)的CV仍較大，耗時(shí)長(zhǎng)。目前常用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析法(ACLIA)。ACLIA法使用單克隆抗體，以全自動(dòng)檢測(cè)設(shè)備取代手工操作，使檢測(cè)的重復(fù)性和可靠性大幅提高，分析靈敏度可達(dá)0.01ng/ml，且檢測(cè)耗時(shí)短，一般都可在20 min內(nèi)完成樣品cTnI檢測(cè)。心肌損傷標(biāo)志物的檢測(cè)周轉(zhuǎn)時(shí)間(TAT)對(duì)于心肌損傷患者的及時(shí)診斷和治療非常重要。1999年以來(lái)的重要文件大都要求檢測(cè)心肌損傷標(biāo)志物時(shí)從標(biāo)本采集到醫(yī)生得到檢測(cè)報(bào)告的TAT≤1h。2002年的ACC/AHA文件更進(jìn)一步要求心肌損傷標(biāo)志物TAT最好能≤0.5h，床邊檢測(cè)(POCT)系統(tǒng)即是cTnI快速檢測(cè)方法發(fā)展的另一個(gè)方向。它可在急診室、病房直接開(kāi)展cTnI檢測(cè)，使用全血標(biāo)本。由于減少了中間步驟，儀器檢測(cè)時(shí)間僅需約10 min，從而將由取血到出報(bào)告的時(shí)間大為縮短[5]。

本試驗(yàn)結(jié)果從批內(nèi)重復(fù)性、線性、準(zhǔn)確度三個(gè)方面表明心肌肌鈣蛋白免疫熒光干式定量法測(cè)定血漿cTnI的結(jié)果準(zhǔn)確可靠。cTnI是敏感、特異的心肌標(biāo)志蛋白，對(duì)心肌損傷，特別是AMI的診斷、治療監(jiān)測(cè)和預(yù)后評(píng)估均具有重要臨床價(jià)值，適合在臨床工作中推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

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自動(dòng)化免疫分析范文第5篇

【關(guān)鍵詞】 化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù);基本原理;分類;應(yīng)用

近10多年來(lái),當(dāng)代生物技術(shù)的研究和應(yīng)用取得高速發(fā)展的同時(shí),也大大推動(dòng)了化學(xué)發(fā)光免疫分析方法(CLIA))的更新?lián)Q代速度。化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA)是建立在放射免疫分析技術(shù)(RIA)理論的基礎(chǔ)上,以標(biāo)記發(fā)光劑為示蹤物信號(hào)建立起來(lái)的一種非放射標(biāo)記免疫分析法,具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、分析速度快和容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化和不污染環(huán)境等優(yōu)點(diǎn),特別是能在較短的時(shí)間內(nèi)得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果,因此深受檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)工作者和臨床醫(yī)師的好評(píng)。

1 化學(xué)發(fā)光免疫分析的原理

化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的基本原理,化學(xué)發(fā)光免疫分析含有免疫分析和化學(xué)發(fā)光分析兩個(gè)系統(tǒng)[1]。免疫分析系統(tǒng)是將化學(xué)發(fā)光物質(zhì)或酶作為標(biāo)記物,直接標(biāo)記在抗原或抗體上,經(jīng)過(guò)抗原與抗體反應(yīng)形成抗原-抗體免疫復(fù)合物?；瘜W(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)是在免疫反應(yīng)結(jié)束后,加入氧化劑或酶的發(fā)光底物,化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)氧化劑的氧化后,形成一個(gè)處于激發(fā)態(tài)的中間體,會(huì)發(fā)射光子釋放能量以回到穩(wěn)定的基態(tài),發(fā)光強(qiáng)度可以利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x器進(jìn)行檢測(cè)[2]。根據(jù)化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物與發(fā)光強(qiáng)度的關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出被測(cè)物的含量。

2 化學(xué)發(fā)光免疫分析的分類

化學(xué)發(fā)光免疫分析根據(jù)應(yīng)用發(fā)光體系應(yīng)用于免疫分析中的方式不同可分為直接標(biāo)記發(fā)光物質(zhì)的免疫分析,酶催化化學(xué)發(fā)光免疫分析,電化學(xué)發(fā)光免疫分析(ECLIA)。直接標(biāo)記發(fā)光物質(zhì)的免疫分析,目前常見(jiàn)的標(biāo)記物主要為魯米諾類和吖啶酯類化學(xué)發(fā)光劑。

3 化學(xué)發(fā)光免疫分析的臨床應(yīng)用

CLIA已廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域,成為替代RIA的首選技術(shù)。Amersham公司針對(duì)AmerliteTM發(fā)光增強(qiáng)酶免疫分析系統(tǒng)研制出的試劑盒項(xiàng)目有甲狀腺功能檢測(cè)的促甲狀腺素、三碘甲腺原氨酸、甲狀腺素、甲狀腺素結(jié)合球蛋白、游離甲狀腺素,與性激素有關(guān)的有促黃體激素、促卵泡激素、人絨毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睪酮,以及其他方面的如癌胚抗原、鐵蛋白、地高辛等。Amersham公司雖然研制出這10余種試劑盒,但因操作不夠簡(jiǎn)便,檢測(cè)項(xiàng)目?jī)H限于蛋白質(zhì)類大分子化合物,未能廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)檢測(cè)。

美國(guó)Ciba Corning公司研制的ACS:180自動(dòng)CLIA系統(tǒng)能非常精確測(cè)量閃光。經(jīng)過(guò)不斷的改進(jìn),實(shí)現(xiàn)了ACS:180CLIA系統(tǒng)的全自動(dòng)化,推出全新產(chǎn)品"ADVIA系列"?，F(xiàn)有檢測(cè)項(xiàng)目47項(xiàng),更多的項(xiàng)目還在開(kāi)發(fā)之中。主要有甲狀腺系統(tǒng)、性腺系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、腫瘤標(biāo)記物、心血管系統(tǒng)、血藥濃度及其他一些檢測(cè)項(xiàng)目。

經(jīng)過(guò)改良后,金剛烷衍生物在堿性磷酸酶作用下可發(fā)出高強(qiáng)度的輝光,光信號(hào)可持續(xù)1～2 h。隨后國(guó)外生產(chǎn)廠家研制出以堿性磷酸酶為標(biāo)記物的試劑盒,與之相匹配的有DPC的IMMULITE全自動(dòng)CLIA系統(tǒng)和Beckman的ACCESS全自動(dòng)微粒子CLIA系統(tǒng)。IMMULITE全自動(dòng)CLIA系統(tǒng)可檢測(cè)項(xiàng)目有心臟病、甲狀腺功能、性腺激素、傳染病、藥物、血清學(xué)、血液病、成癮藥物、糖尿病、過(guò)敏檢測(cè)和腫瘤標(biāo)志物。ACCESS全自動(dòng)微粒子CLIA系統(tǒng)主要可檢測(cè)甲狀腺功能、血液系統(tǒng)、內(nèi)分泌激素、藥物、腫瘤因子、心血管系統(tǒng)和糖尿病等項(xiàng)目。

目前商品化的ECLIA分析系統(tǒng)只有Roche公司的ECLIA全自動(dòng)分析系統(tǒng)。主要特點(diǎn)是本底信號(hào)極微,特異性更高,最小檢出值可達(dá)1 pmol以下,操作十分簡(jiǎn)便快速,是CLIA優(yōu)點(diǎn)較為集中的完美分析技術(shù)。已提供試劑盒的項(xiàng)目有腫瘤標(biāo)志物、甲狀腺功能、內(nèi)分泌、傳染病、心肌標(biāo)志物和維生素類等項(xiàng)目。

王陽(yáng)[3]運(yùn)用了電化學(xué)免疫分析技術(shù),檢測(cè)了3種腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原(Carcinoem-bryonic Antigen,CEA)、細(xì)胞角蛋白l9片段(Cytokeratin 19fragments,CYFRA21,1)和神經(jīng)元特異性烯醇化酶(Neuron-specific enolase,NSE)水平,對(duì)肺癌診斷有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。張忠英[4]等利用電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)檢測(cè)尿CK19片段,結(jié)果顯示尿CK19檢測(cè)對(duì)膀胱癌等泌尿系統(tǒng)腫瘤診斷和復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)具有敏感性高、無(wú)創(chuàng)傷性的優(yōu)點(diǎn),優(yōu)于血清CK19和尿細(xì)胞學(xué)檢查。動(dòng)態(tài)觀察尿CK19片段含量的變化可降低急性尿感患者的假陽(yáng)性率。王利娜[5]等應(yīng)用ECLIA測(cè)定和酶免疫測(cè)定(EIA)檢測(cè)乙肝標(biāo)志物。結(jié)果:應(yīng)用ECLIA方法檢測(cè)HBsAg精密度,最大批內(nèi)變異≤8.30%,最大日間變異≤15.33%,HBsAg靈敏度0.05 ng/ml,HBeAg靈敏度0.03NCU/ml。HBsAg檢測(cè)范圍0.01～7 000 COI。顯示ECLIA檢測(cè)HBsAg靈敏度高,重復(fù)性好,檢測(cè)范圍寬。檢測(cè)HBeAg靈敏度可能更高。李錦洲[6]等采用ECLIA法對(duì)卵巢癌、良性卵巢腫瘤及健康婦女血清CA125分別進(jìn)行測(cè)定,ECLIA用于第二代CA125(CA125-Ⅱ)測(cè)定,使CA125測(cè)定更加敏感恒定,每日之間差異較小。黃琛,湯漢紅等[7]在ECLIA法檢測(cè)與蛋白質(zhì)芯片法多腫瘤標(biāo)志物結(jié)果差異的研究中顯示:兩種方法有較好的相關(guān)性(P

化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)在醫(yī)學(xué)的臨床應(yīng)用已非常成熟,有取代放射免疫分析技術(shù)和酶聯(lián)免疫分析技術(shù)而成為診斷市場(chǎng)上的主流產(chǎn)品的趨勢(shì)。國(guó)外的化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)系統(tǒng)價(jià)格昂貴,普及有一定的困難;國(guó)內(nèi)的化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)系統(tǒng)雖然價(jià)格較國(guó)外產(chǎn)品便宜很多,但其檢測(cè)的靈敏度和可靠性,還有待進(jìn)一提高。研究者在如何提高免疫診斷的敏感性和特異性、發(fā)展新的分析體系和檢測(cè)技術(shù)便攜化等方面仍需要不斷努力。

參 考 文 獻(xiàn)

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