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人血白蛋白范文第1篇

關(guān)鍵詞 人血白蛋白 不良反應(yīng) 合理用藥

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2009.20.215

人血白蛋白注射液(人血白蛋白)是從健康人血漿中分離提取的蛋白制劑,屬血容量擴充藥,臨床用于治療失血、燒傷、創(chuàng)傷等引起的繼發(fā)性休克,腦水腫、大腦損傷所致的顱內(nèi)壓升高,低蛋白血癥、新生兒高膽紅素血癥、肝硬化及腎病引起的水腫和腹水等。近年來,臨床應(yīng)用日益廣泛,其不良反應(yīng)報道也逐漸增多。

藥物因素

統(tǒng)計資料表明,輸注人血白蛋白后變態(tài)反應(yīng)發(fā)生率為0.11%,總發(fā)生率為 0.47%～1.58%,多為蕁麻疹、發(fā)熱和低血壓等,癥狀輕微。過敏樣反應(yīng)臨床多見速發(fā)型,常在使用后幾分鐘內(nèi)發(fā)生。患者可連續(xù)出現(xiàn)呼吸困難、面色蒼白、口唇發(fā)紺、煩躁不安、腹痛、腹瀉等現(xiàn)象,嚴重者還可出現(xiàn)神志改變、血壓下降及過敏性休克等。雖然由人血白蛋白所引發(fā)的過敏性休克發(fā)生率較低,但其中有約 1/3是致命的。熱原樣反應(yīng)患者可出現(xiàn)高熱、寒戰(zhàn)、抽搐等反應(yīng),約占 30%以上。人血白蛋白被認為是小分子蛋白,不具有抗原特性,許多人對其誘發(fā)變態(tài)反應(yīng)認識不夠,但其屬于生物制品,也是異體蛋白,易引起過敏。曾有報道,異種動物血清注入人體后引起血清病的發(fā)生率為30%～50%。引起過敏樣反應(yīng)和熱原樣反應(yīng)的一個重要原因是人血白蛋白制劑中的細小微粒和細菌內(nèi)毒素等,人血白蛋白在生產(chǎn)過程中提取不純、儲藏和運輸中均可能產(chǎn)生細小微粒(雜蛋白或異物的復合體),同時生產(chǎn)和儲運中污染的內(nèi)毒素也是導致發(fā)熱、溶血反應(yīng)、急性腎功能衰竭甚至休克死亡的重要因素。也有學者研究認為,白蛋白制劑中含有雜質(zhì),包括血型物質(zhì)和血管活性物質(zhì)、熱原質(zhì)等。資料提示,發(fā)熱反應(yīng)多集中在某個廠家,或某個批號的產(chǎn)品中,這說明發(fā)熱反應(yīng)與該批藥物的某項指標有關(guān)。按生物制品規(guī)程規(guī)定,每1g人血白蛋白中辛酸鈉應(yīng)

生理因素

臨床上速發(fā)型過敏反應(yīng)多與患者過敏體質(zhì)有關(guān),個體免疫球蛋白(IgE)是一種親細胞抗體,過敏體質(zhì)的患者IgE含量往往高于正常值,在多次輸注人血白蛋白時易誘發(fā)IgE介導速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。當機體第一次接觸到特異性抗原時,IgE就吸附在組織肥大細胞和血液中的嗜堿性細胞上,當機體再次遇到同一種抗原時,抗原抗體則發(fā)生反應(yīng),致使肥大細胞及血液中的嗜堿性細胞發(fā)生脫粒現(xiàn)象,釋放一系列中介物質(zhì),如組織胺、激肽等生物活性物質(zhì)作用于皮膚、呼吸道和消化道等效應(yīng)器官,就可引起平滑肌收縮,血管通透性增加等,故而出現(xiàn)皮膚局部紅腫、皮疹、哮喘、嘔吐、腹痛等反應(yīng),嚴重者可出現(xiàn)過敏性體克。李明慧等[1]報道1例65歲男患者,首次輸注白蛋白后10分鐘即出現(xiàn)腮腺腫大,該患者既往有磺胺類藥物過敏史,為過敏性體質(zhì),因此可考慮為白蛋白過敏所致。亦有食魚蝦過敏史者(系過敏體質(zhì))使用人血白蛋白發(fā)生過敏反應(yīng)的報道。趙喜榮等[2] 報道3例患者,年齡分別為74、73、80歲,在靜滴人血白蛋白后出現(xiàn)寒顫、高熱、氣喘等,停藥對癥處理后癥狀減輕。 康愛玲等[3]報道87例高齡患者在使用人血白蛋白后發(fā)生高熱反應(yīng)31例,并認為高齡患者應(yīng)慎用白蛋白。因此,對于高齡患者使用人血白蛋白更要密切注意觀察。

使用方法

輸注量過大、速度過快會使血容量突然增加,引起循環(huán)超負荷致肺水腫,對心功能不全或有其他心臟病的患者應(yīng)謹慎使用,對有心、肺或腎臟疾病的患者尤其不利,同時應(yīng)十分注意心力衰竭的發(fā)生。在搶救大量失血的休克患者時,有必要快速輸注,但要對患者進行密切觀察。一般情況下滴速應(yīng)以2ml/分為宜,但在開始15分鐘內(nèi)滴速應(yīng)慢,控制在1～2ml/分逐漸加速至上述速度。在輸液操作中應(yīng)輕取輕放,減少泡沫的產(chǎn)生,避免白蛋白的損失。白蛋白應(yīng)根據(jù)規(guī)定貯藏條件保存,以單獨靜滴為宜,使用前后如有別的藥物,用生理鹽水沖洗最少 15分鐘,如有可能,最好再建立一道靜脈通道。在使用過程中,一定要注意觀察,一旦發(fā)現(xiàn)變態(tài)反應(yīng)表現(xiàn),應(yīng)立即停止輸注,酌情給予抗過敏治療,必要時使用氣管插管、氣管切開、機械通氣等抗休克治療措施。

合理用藥

當人體血漿中白蛋白含量不低于 2.5%～3.0%時,對體液平衡無顯著影響,患者只要肝功能正常,補給含足夠蛋白或氨基酸的食物即可使低蛋白血癥很快糾正。給血漿白蛋白水平正常的人輸白蛋白不但沒有益處,反而可使白蛋白合成受到抑制并使其分解代謝加速。因此肝硬化的患者除了發(fā)生肝昏迷進行搶救外,輸白蛋白的意義值得商榷。

人血白蛋白臨床應(yīng)用已多年,由于依靠輸血傳播的肝炎、艾滋病(AIDS)等在全球的擴散,醫(yī)學界對成分血和全血的輸注采取了更為慎重的態(tài)度,但對使用包括人血白蛋白在內(nèi)的血容量擴充藥卻未足夠重視,致其不良反應(yīng)的發(fā)生日趨頻繁。減少和降低人血白蛋白的不良反應(yīng)發(fā)生率,首先應(yīng)著手生產(chǎn)工藝改進、檢測手段更新、增加檢測項目,提高藥品生產(chǎn)水平,保證藥品的質(zhì)量;臨床上應(yīng)結(jié)合患者的具體情況慎重使用、綜合考慮,嚴格執(zhí)行操作原則,發(fā)現(xiàn)患者對藥物產(chǎn)生任何反應(yīng),均應(yīng)立即停用,并對癥處理,最大限度減少和降低其不良反應(yīng)給患者帶來的傷害,確保更加安全、合理、有效、經(jīng)濟地使用人血白蛋白。

參考文獻

1 李明慧,楊莉,李蘊茹,等.人血白蛋白過敏致雙側(cè)腮腺腫大.藥物不良反應(yīng)雜志,2005,7(3):215.

人血白蛋白范文第2篇

關(guān)鍵詞：低溫乙醇法 人血白蛋白 工業(yè)化生產(chǎn)

人血漿中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的蛋白成份約有100多種，其中已經(jīng)分離提純和性質(zhì)明了的有60余種，大約20種已經(jīng)有臨床用途。血漿蛋白的分離，是利用不同蛋白成份的理化性質(zhì)，如分子大小、密度高低、表面結(jié)構(gòu)、荷電狀態(tài)等的區(qū)別，將其互相分開。

血漿蛋白分離工業(yè)在中國起步比較晚，直到上世紀80年代才真正開始了大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)，目前全國有30余家血制品生產(chǎn)企業(yè)，但其中大部分企業(yè)的主要產(chǎn)品僅有人血白蛋白和靜脈注射用人免疫球蛋白這2種血漿中含量最大的成份，可以說對血漿資源的利用率是比較低的。

血漿蛋白分離的方法很多，其中大部分方法只適用于實驗室研究使用，如電泳、等點聚焦等，可以應(yīng)用于大規(guī)模生產(chǎn)的只有沉淀法（鹽析、有機溶劑法等）、層析法（凝膠層析、離子交換層析以及親和層析），另外的超濾、吸附、變性處理等均為輔助手段。目前，國內(nèi)用于生產(chǎn)人血白蛋白和免疫球蛋白類制品的生產(chǎn)方法基本都是低溫乙醇法。筆者結(jié)合低溫乙醇法的基本原理以及本人實際的工作經(jīng)驗和體會，對人血白蛋白的工業(yè)化生產(chǎn)過程進行闡述。

人血白蛋白是一個一級結(jié)構(gòu)簡單的單鏈蛋白，無碳水化合物側(cè)鏈，僅含少量的脂肪酸，構(gòu)型較為對稱，分子量約為69000D，由585個氨基酸殘基組成，富含門冬氨酸及谷氨酸，而缺乏色氨酸。天然狀態(tài)下，白蛋白含有19個負電荷，其i.e.p依溶液中含有的鹽的種類與濃度的不同在pH4.4~5.4之間。

低溫乙醇法的原理和要點為：往蛋白質(zhì)的水溶液中加入乙醇，產(chǎn)生幾種效應(yīng)，主要效應(yīng)是降低水分子的活度，降低溶液的介電常數(shù)，從蛋白分子周圍排代水分子，使蛋白分子和蛋白分子之間通過極性基團的相互作用在范德華引力下發(fā)生凝聚，從而沉淀下來。影響這種沉淀過程的主要有5大參數(shù)：溶液的蛋白濃度、pH值、離子強度、溶液的溫度和乙醇的濃度。在前4個參數(shù)都一致的情況下，乙醇的沉淀作用取決于蛋白分子的大小。在逐漸提高乙醇濃度時，蛋白將按分子大小順序先后沉淀。人血白蛋白作為血漿主要成分中分子量最小的一種，是在最后一步的沉淀反應(yīng)中分離出來的。下面是人血白蛋白生產(chǎn)的簡要工藝流程圖。（其中的部分主要參數(shù)進行了模糊化處理）

人血白蛋白制備工藝流程

步驟①：原料血漿的檢測。在現(xiàn)今血液傳播疾病越來越令人恐懼的情況下，對血漿進行常見的5種病毒檢測是國家的強制標準，而且必須是對每一袋單采血漿進行5項病毒檢測，合格后方可投入生產(chǎn)。

步驟②：8%乙醇沉淀反應(yīng)，產(chǎn)生組份I沉淀，主要成分為纖維蛋白原。組份I沉淀可以用于人纖維蛋白粘合劑的生產(chǎn)。在此步驟之前一般會對原料血漿進行一次離心，可以分離得到冷沉淀，這也是制造凝血因子VIII的原料。離心去除冷沉淀之后的血漿可以用于人凝血酶原復合物（凝血因子II、VII、IX、X的混合物）的吸附生產(chǎn)。然后可以進行8%乙醇沉淀反應(yīng)（若不生產(chǎn)凝血因子VIII和人凝血酶原復合物，也可以直接對原料血漿進行8%乙醇沉淀反應(yīng)）。由于工業(yè)化生產(chǎn)中投入的血漿數(shù)量巨大（一般一次為5000千克血漿左右），反應(yīng)罐的容積也是很大的，如我們公司使用的是5噸容量的罐。巨大的體積給乙醇濃度和pH值的調(diào)節(jié)帶來了一些問題。顯然我們不可能像在實驗室中那樣一邊加入緩沖液一邊攪拌，同時用pH計直接測試。實際采取的方法是：準確抽取10ml的溶液，滴定至指定的pH值，然后將所用的緩沖液量擴大到一個罐的反應(yīng)液所需的量。一般情況下，需要加入的緩沖液量都會有數(shù)十千克，50%的乙醇大概會有500千克以上，往反應(yīng)罐中加入這些液體的時候一定要控制好速度，加得太快會使局部pH值或酒精濃度超出限度而導致不良后果，加得太慢則會拖長生產(chǎn)周期。沉淀反應(yīng)完成以后，需要將反應(yīng)液靜置數(shù)小時，以利于沉淀的積聚（一般還會按一定的比例往反應(yīng)液中加入硅藻土作為助濾劑），而后就可以進行分離，以收集沉淀，同時將上清液轉(zhuǎn)移入另外的反應(yīng)罐以備進行下一步的沉淀反應(yīng)?，F(xiàn)今最常用的分離器具是壓濾機（以前也經(jīng)常使用高速離心機來分離沉淀，但其使用成本和工人的勞動強度均比壓濾機要高，因此逐漸被壓濾法取代），它其實就是一臺大型的板框濾器，配合相應(yīng)規(guī)格的濾板，反應(yīng)液在壓縮空氣或泵的驅(qū)動下穿過濾器，沉淀被濾板截留在板框中，待液體過完后一并取出。每臺壓濾機大概可以容納400千克以上的沉淀。

步驟③：20%乙醇沉淀反應(yīng)，分離出組份II+III沉淀，其主要成份為各種類型的球蛋白和凝血因子II、VII、IX、X。組份II+III沉淀可以用于免疫球蛋白類制品和人凝血酶原復合物的生產(chǎn)。上清液繼續(xù)進入下一步的反應(yīng)。

步驟④：40%乙醇沉淀反應(yīng)，分離出組份IV沉淀，主要成份為球蛋白、銅藍蛋白和一些補體蛋白，同時還含有少量的白蛋白。組份IV沉淀也可以用于回收分離白蛋白。上清液繼續(xù)進入下一步的反應(yīng)。

步驟⑤：40%粗制反應(yīng)，分離出組份V沉淀，也就是白蛋白，一般5000千克的血漿大約能得到600千克左右（具體的量和沉淀的干濕程度等都有關(guān)系）的組份V沉淀，其蛋白含量約為25%~28%。上清液中僅含少量的蛋白，直接棄去。此步驟分離出的白蛋白還不是很純，需要再進行一次純化反應(yīng)。

步驟⑥：白蛋白純化反應(yīng)。通過這個步驟得到的白蛋白溶液，其純度已經(jīng)可以達到95%以上，但其中仍含有大量的乙醇和鹽類，需要通過超濾的方法將其去除。

步驟⑦：超濾脫醇及配制、滅活。這個步驟主要是去除蛋白溶液中的鹽類和乙醇，然后加入一定量的辛酸鈉，最后進行60℃10小時的巴氏滅活以確保人白制品的病毒安全性。血液制品在超過60年的使用歷史中，只有經(jīng)過巴氏滅活的人血白蛋白才被公認為是安全制品。辛酸鈉在這里起的是保護劑的作用，一定濃度下可以幫助白蛋白忍受住60℃10小時的保溫過程，但如果辛酸鈉濃度過高，它也可能會保護病毒度過巴氏滅活。另外，如果是以組份IV沉淀為原料生產(chǎn)的白蛋白，由于其中含有較高濃度的PKA（激肽釋放酶原復合物，有降壓作用），在超濾脫醇前必須經(jīng)過層析以去除大部分的PKA而保證制品的安全性。由于人血白蛋白為生物活性物質(zhì)，無法承受劇烈的滅菌條件，所以，滅活完的蛋白溶液經(jīng)過0.22微米的濾器過濾，就可以進行分裝，這也對前面的各生產(chǎn)步驟提出了較高的潔凈度要求。一般每5000千克血漿可以得到10克/瓶的人血白蛋白約12000支。

步驟⑧：最后的處理。分裝完畢后，制品還需要在30―32℃下放置14天，而后進行逐瓶燈檢，觀察其穩(wěn)定性指標和外觀情況。同時取樣送檢測部門，待結(jié)果合格后才能投入銷售。

一批人血白蛋白從開始投料到可以銷售，大概需要一個半月到兩個月多的時間。

低溫乙醇法生產(chǎn)人血白蛋白已經(jīng)是一個比較成熟的方法，現(xiàn)今的主要問題就是如何進一步提高人血白蛋白的得率，這主要牽涉到各步驟的一些細微注意點，也是我們的技術(shù)部門一直在追求的目標。

參考文獻：

［1］劉雋湘.輸血療法與血液制劑.1996年.

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［4］藥品生產(chǎn)驗證指南（2003）.2003.

［5］FDA，Biological Product Deviation Reports，Annual Summary for Fiscal Year， 2006.

［6］FDA，Biological Product Deviation Reports，Annual Summary for Fiscal Year， 2005.

［7］FDA，Biological Product Deviation Reports，Annual Summary for Fiscal Year， 2004.

［8］FDA，Biological Product Deviation Reports，Annual Summary for Fiscal Year， 2003.

［9］FDA，Biological Product Deviation Reports，Annual Summary for Fiscal Year， 2002.

［10］FDA，Biological Product Deviation Reports，Annual Summary for Fiscal Year， 2001.

［11］FDA，Biological Product Deviation Reports，Error and Accident Report FY1997 through FY2000.

［12］王清和等.中華血液制品學雜志.1983.

［13］壽.醫(yī)用生物制品學.1992.

人血白蛋白范文第3篇

關(guān)鍵詞 人血白蛋白 嚴重過敏反應(yīng) 護理

人血白蛋白主要調(diào)節(jié)組織與血管之間水分的動態(tài)平衡，起到增加循環(huán)血容量和維持血漿膠體滲透壓的作用，一般不會產(chǎn)生不良反應(yīng)，偶可出現(xiàn)寒顫、發(fā)熱、顏面潮紅、皮疹、惡心嘔吐等癥狀，快速輸注可引起血管超負荷導致肺水腫，過敏反應(yīng)非常少見。我院除今年4月份發(fā)生1例嚴重過敏反應(yīng)外，其余均無明顯的不良反應(yīng)。

1 臨床資料

患者，女，34歲，妊娠并全身重度特發(fā)水腫，妊高征，行剖宮產(chǎn)術(shù)后于2007年4月18日14：30靜脈滴注人血白蛋白（湖南紫光古漢南岳制藥公司，生產(chǎn)批號200608038）10g，滴速20滴/分，剛輸5分鐘突然出現(xiàn)心慌、氣促、呼吸困難、眼花、視物模糊等嚴重不良反應(yīng)，測脈搏130次/分，呼吸26次/分，血壓152/100mmHg，但神志清楚，雙側(cè)瞳孔等大等圓約3mm,對光反射靈敏，經(jīng)檢查，眼底無出血，立即停用人血白蛋白，給予地塞米松10mg靜脈注射，非那根注射液25mg肌注抗過敏治療，給氧，同時給予靜脈注射5％Gs 20ml+西地蘭0.2mg，速尿20mg進行強心、利尿，因血壓高，加用5％Gs200ml+酚妥拉明10mg，5％Gs100ml+25％硫酸鎂5g靜脈注射以解痙、降壓，并24小時心電監(jiān)護，記尿量。經(jīng)搶救后于17：30患者癥狀消失，生命體征平穩(wěn)。

2 護理

2.1 急救護理

2.1.1 就地搶救，使病人平臥，保持呼吸道通暢，并及時給予氧氣吸入，氧流量3-5L/min。

2.1.2 立即停用人血白蛋白，更換液體及輸液導管，遵醫(yī)囑給予抗過敏、強心、利尿、解痙、降壓等藥物，積極配合搶救。

2.1.3 迅速建立另一組靜脈通道，以便及時輸入液體及藥物，為搶救創(chuàng)造條件。

2.1.4 密切觀察病情變化 給予持續(xù)心電監(jiān)護，密切注意神志、瞳孔及生命體征變化，準確記錄尿量。

2.1.5 藥物使用 靜脈注射酚妥拉明要注意監(jiān)測血壓，掌握藥物輸注速度，開始稍慢，以后逐漸加快至正常需要的速度；注射速尿后注意尿量變化；硫酸鎂注射給藥時不可過快、過量，注意觀察膝反射與呼吸情況，防止出現(xiàn)血壓急劇下降，膝反射消失，呼吸抑制以至死亡。

2.2 心理護理 因病情發(fā)生突然，患者及其家屬充滿恐懼與焦慮，及時安慰病人及家屬，做好解釋工作，解除不必要的顧慮及恐懼心理，使其最大限度配合治療，并盡量滿足病人合理要求。

2.3 一般護理 保持病室安靜，為病人創(chuàng)造舒適環(huán)境，做好基礎(chǔ)護理，保證病人安全，防止護理并發(fā)癥發(fā)生。

3 體會

3.1 靜脈注射人血白蛋白時，最初滴速應(yīng)緩慢，注意觀察有無不良反應(yīng)，因為過敏反應(yīng)往往發(fā)生在最初幾分鐘內(nèi)，如發(fā)生嚴重過敏反應(yīng)，出現(xiàn)支氣管痙攣或心慌不適等癥狀，則需立即停止滴注并對癥治療。

人血白蛋白范文第4篇

    鄭某因交通事故受傷到醫(yī)院治療,醫(yī)院擅自為親輸血液制品人血白蛋白,且告知說是營養(yǎng)品。導致患者患上丙型肝炎,構(gòu)成二級傷殘。協(xié)商無果患者將醫(yī)院告上法庭,索賠百萬元。2013年4月22日,南陽市唐河縣法院一審判決唐河縣中醫(yī)院向患者補償醫(yī)療損失20萬元。

    案件簡介

    鄭某是河南省唐河縣人。2002年9月5日,他因交通事故受傷,到唐河縣中醫(yī)院住院治療。經(jīng)醫(yī)院檢查,鄭某肝、腎功能均正常。9月8日,該院在沒告知鄭某及其家人的情況下,為其輸入血液制品人血白蛋白一瓶。還稱只是營養(yǎng)品,無任何副作用。9月25日,鄭某仍處昏迷狀態(tài),在家屬要求下,鄭轉(zhuǎn)入南陽市中心醫(yī)院治療。經(jīng)南陽市中心醫(yī)院檢查,鄭某肝功能顯示不正常,之后轉(zhuǎn)入該院內(nèi)科調(diào)理肝功能。后經(jīng)檢查南陽市中心醫(yī)院確診:鄭某為丙肝肝硬化。后經(jīng)北京302醫(yī)院多次診斷,鄭均為肝炎肝硬化丙型活動性,腹水。

    原本好端端一個人怎么能患上肝炎呢?鄭某的親屬很是不解,之后到唐河縣中醫(yī)院查閱鄭當時的住院病歷,才知道該院曾為鄭輸入人血白蛋白的事實。鄭某及其家屬認為,唐河縣中醫(yī)院為鄭某輸血液制品,是導致鄭患丙型肝炎的唯一原因。2012年5月15日,鄭某一紙訴狀將唐河縣中醫(yī)院告到法院。請求法庭判令被告唐河縣中醫(yī)院賠償其醫(yī)療費、誤工費、殘疾賠償金等共計1027078.88元。

    2011年11月,唐河縣衛(wèi)生局委托南陽市醫(yī)學會對鄭某與唐河縣中醫(yī)院醫(yī)療糾紛進行醫(yī)療事故鑒定。最終鑒定結(jié)論認為:本病例是否構(gòu)成醫(yī)療事故現(xiàn)有證據(jù)尚不能確定。經(jīng)鑒定:鄭某傷殘程度已達二級。唐河縣中醫(yī)院辯稱,醫(yī)院對鄭某的救護符合診療原則,不存在醫(yī)療過錯;丙肝傳播途徑較多,不能確定是該院的醫(yī)療行為造成;而且,鄭某在該院的治療已經(jīng)過去十多年,鄭并未到醫(yī)院反映和索賠,現(xiàn)在卻起訴到法院,即使醫(yī)院有過錯,按照法律上人身傷害索賠時間為一年的訴訟時效之規(guī)定,鄭某的起訴已過訴訟時效,請求法庭駁回起訴,判決原告敗訴。

人血白蛋白范文第5篇

【關(guān)鍵詞】 發(fā) 角蛋白 人工神經(jīng) 修復外科手術(shù) 組織相容性 免疫學

［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the histocompatibility of humanhair keratin (HHK) artificial nerve and offer an ideally transplanted material for repairing the defect of peripheral nerve (PN).MethodsFiftyfour Wistar rats were randomly pided into three groups: group A， experiment group; group B and group C， control groups. The right tibial nerves of the rats were removed to create a 10 mm gap. The gaps in group A were bridged with the HHK artificial nerve， and other two groups with the nerve of its own or the homologous nerve (group C). The blood samples were taken on 2， 8 and 16 weeks after operation to detect IgA， IgM， IgG， C3， C4， and T lymphocyte subgroup and T lymphocyte transformation.ResultsThe immunological parameters between rats of groups A and B showed no statistical difference (F=17.56-571.34，q=0.00-2.09，P>0.05). The difference between groups C and A or B was statistically significant (q=7.04-41.47，P

［KEY WORDS］capilli; keratin; artificial nerve; reconstructive surgery; histocompatibility; immunology

人發(fā)角蛋白（HHK）是由青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院骨科與廣州南方醫(yī)科大學生化研究室共同研發(fā)的一種天然生物性材料，初步的實驗研究已經(jīng)證明，該材料可降解，組織相容性好，可誘導自體組織形成[1，2]，且來源廣泛，價格低廉，由其制成的人工腱已經(jīng)應(yīng)用于臨床[3，4]，取得了較理想效果。但該系列的人發(fā)角蛋白人工神經(jīng)在橋接周圍神經(jīng)(PN)缺損后的免疫學研究國內(nèi)外尚未見報道。本實驗著重從免疫學角度研究人發(fā)角蛋白人工神經(jīng)在橋接PN缺損后的抗原性及組織相容性，為人發(fā)角蛋白人工神經(jīng)修復PN缺損提供動物實驗依據(jù)，為PN缺損修復尋求較為理想的移植材料。

1 材料與方法

1.1 動物及材料

健康成年SPF級雄性Wistar大白鼠(青島市實驗動物中心提供)54只，體質(zhì)量（250±10）g；快速降解HHK、生物膜（青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院骨科與廣州南方醫(yī)科大學生化研究室提供）。

1.2 主要試劑及儀器

單克隆抗體（英國朗道公司），植物血凝素（SigmaAldrich公司），流式細胞儀（FACS Calibur，美國BD公司），自動生化分析儀（AQ 640，奧林巴斯），手術(shù)顯微鏡（ASOM4A，上海生產(chǎn)）。

1.3 人發(fā)角蛋白人工神經(jīng)制備

快速降解HHK 36根，外包一層生物膜，制成長度為10 mm，直徑約1 mm人工神經(jīng)材料，經(jīng)高溫消毒備用。

1.4 模型建立

將54只大白鼠隨機分為3組，每組18只，其中A組為實驗組，B、C組為對照組。100 g/L水合氯醛（350 mg/kg）對大鼠進行腹腔注射麻醉。麻醉成功后取俯臥位將大白鼠固定于操作臺上，取右下肢后外側(cè)切口，顯露坐骨神經(jīng)及其分支，確認脛神經(jīng)，切除一段長10 mm脛神經(jīng)，在16倍手術(shù)顯微鏡下，A組大鼠用人工神經(jīng)材料橋接脛神經(jīng)，兩斷端各用 90顯微縫線將人工神經(jīng)生物膜和神經(jīng)外膜間斷縫合6針。按以上方法，C組大鼠取A組大鼠之切除脛神經(jīng)進行橋接。B組大鼠將切除神經(jīng)倒轉(zhuǎn)180°，橋接于斷端。術(shù)后所有大鼠均腹腔注射青霉素4萬單位預防感染。

1.5 術(shù)后取材及檢測

分別于術(shù)后2、8、16周各組隨機抽取6只大鼠，按照前法腹腔麻醉后，于左頸前分離左頸總動脈，取血3 mL置EDTA抗凝管內(nèi)，送實驗室立即進行免疫熒光染色和固定，標記后即上流式細胞儀行T淋巴細胞亞群檢測。取血2 mL進行體外培養(yǎng)，用PHA進行刺激，進行T淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗。取血6 mL 置干燥管內(nèi)，靜置后送實驗室采用免疫速率散射比濁法行免疫球蛋白IgA、IgM、IgG及補體C3、C4檢測。

1.6 統(tǒng)計學處理

各組數(shù)據(jù)采集整理后，以均數(shù)±標準差表示，應(yīng)用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件進行方差分析。

2 結(jié)

果

術(shù)后2、8、16周各組大鼠血液免疫學指標比較，A、B兩組之間無顯著性差別（F=17.56～571.34，q=0.00～2.09，P>0.05），C組與A、B兩組比較均有極顯著性差別（q=7.04～41.47，P

3 討

論

3.1 PN損傷修復的發(fā)展

PN損傷常導致神經(jīng)斷端的缺損，兩神經(jīng)斷端存在間隙不利于再生軸突的生長，直接縫合神經(jīng)兩斷端往往困難，且吻合端張力較大，影響其血液供應(yīng)及修復[5]，尋求理想的橋接材料成為PN損傷修復的關(guān)鍵。自體神經(jīng)富含雪旺細胞和神經(jīng)束結(jié)構(gòu)，被公認為是修復神經(jīng)缺損的黃金標準[6]，但自體神經(jīng)移植必然伴有供區(qū)的功能受損，而且可供移植的神經(jīng)來源有限。異體神經(jīng)移植由于移植后免疫排斥反應(yīng)不能解決，并且可能引起疾病的傳播以及醫(yī)學倫理方面的障礙，至今尚未廣泛用于臨床。隨著組織工程學迅速發(fā)展，使用神經(jīng)移植替代物(人工神經(jīng))來代替自體神經(jīng)移植，多年來成為人們研究的重點。

轉(zhuǎn)貼于 FAWCETT等[7]認為理想的神經(jīng)橋接體應(yīng)具備的條件：①再生軸突能長入并通過移植體到遠端部位；②通過移植體的軸突具有正常的直徑、髓鞘和傳導動作電位；③沒有抗原性；④能較快地獲得血運；⑤移植體再生軸突排列有序，確保準確到達靶組織或靶器官。人發(fā)中的主要成分為角蛋白，以微絲和基質(zhì)的形式存在，經(jīng)一系列物理化學處理后，能軟化解聚，并保持人發(fā)的力學特性。解聚的角蛋白較容易被組織降解和吸收，可根據(jù)需要控制其降解速度。用HHK制成的生物材料在體內(nèi)可降解吸收，不產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)，并可誘導自體組織的形成。

但HHK在橋接PN神經(jīng)缺損后對機體免疫影響，尚缺乏完整的動物實驗依據(jù)，限制了其進一步應(yīng)用到臨床修復PN缺損。

3.2 本實驗設(shè)計的科學性和可靠性

本實驗用人發(fā)角蛋白人工神經(jīng)橋接大白鼠脛神經(jīng)缺損，進行免疫學研究，并與自體神經(jīng)和異體神經(jīng)相對照，評價其組織相容性。機體全身免疫分為體液免疫和細胞免疫，免疫球蛋白IgA、IgM、IgG和補體C3、C4在血液中含量較高，在機體的體液免疫中起著重要作用。CD+4代表T輔助細胞，CD+8代表T抑制細胞，CD+4/CD+8比值的變化可以判斷細胞免疫功能，反映免疫調(diào)節(jié)功能變化。T細胞轉(zhuǎn)化試驗主要用于體外檢測T細胞的生物學功能，反映機體的細胞免疫水平。

坐骨神經(jīng)是建立PN損傷與修復的良好實驗?zāi)Ｐ?，常用的方法是切斷坐骨神?jīng)主干。以往實驗中發(fā)現(xiàn)，切斷坐骨神經(jīng)主干后，同時切斷了前往其所支配的組織器官的神經(jīng)纖維，遠端的大部分肢體失去了神經(jīng)營養(yǎng)和皮膚感覺。術(shù)后遠端肢體陸續(xù)出現(xiàn)皮膚潰瘍，部分用來實驗的大白鼠甚至自食或相互咬掉實驗側(cè)肢體，使實驗失敗。而且經(jīng)久不愈的肢體潰瘍也嚴重影響實驗材料檢測的準確性，尤其對體液免疫和細胞免疫指標檢測會產(chǎn)生偏差，影響實驗數(shù)據(jù)的準確性。本實驗顯示成年大白鼠脛神經(jīng)由坐骨神經(jīng)分出至遠端分叉處長度超過15 mm，解剖清晰，和腓總神經(jīng)比較形態(tài)差別明顯，易于辨認，切斷坐骨神經(jīng)分出的脛神經(jīng)可以完全阻斷腓腸肌的神經(jīng)支配，最大限度地保存肢體其他組織的神經(jīng)營養(yǎng)和皮膚感覺，盡可能避免大白鼠出現(xiàn)肢體潰瘍及撕咬肢體現(xiàn)象，保證實驗?zāi)Ｐ徒⒌某晒?。同時，術(shù)后早期預防性應(yīng)用一次抗生素，可防止切口感染，提高了實驗數(shù)據(jù)的準確性。

3.3 人發(fā)角蛋白人工神經(jīng)良好的組織相容性

植入物進入機體后，血液免疫球蛋白、C3、C4、CD+4/CD+8及T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率水平升高，往往提示發(fā)生排斥反應(yīng)。本實驗結(jié)果顯示，術(shù)后2、8、16周各組大鼠免疫球蛋白IgA、IgM、IgG及補體C3、C4檢測結(jié)果比較，A、B兩組間差別均無顯著意義（P>0.05），C組與A、B兩組的差別均有極顯著意義（P

【參考文獻】

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