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摘要】目的建立高效液相色譜法同時測定痔炎消片中綠原酸和蘆丁的含量。方法采用DiamonsilC18柱（4.6mm×250mm,5μm）,流動相：乙腈-0.5%磷酸（20：80），流速：1.0ml/min,檢測波長：344nm。結(jié)果綠原酸在進樣量0.0192～0.48μg呈良好的線性關系；平均加樣回收率為99.89%，RSD=0.33%（n=5）。蘆丁在進樣量為0.096～2.406μg呈良好的線性關系；平均加樣回收率為99.73%，RSD=1.49%（n=5）。結(jié)論本法操作簡便，重現(xiàn)性好，可用作該藥品的質(zhì)量控制。

【關鍵詞】痔炎消片綠原酸蘆丁HPLC含量測定

【Abstract】ObjectiveToestablishaHPLCmethodforthedeterminationofchlorogenicacid,rutininZhiyanxiaotablets.MethodsADiamonsilC18column（250mm×4.6mm,5μm）wasusedwithmobilephaseofacetonitrile-0.5%phosphoricacidsolution（20:80）.Theflowratewas1.0ml/minandthedetectionwavelengthwas344nm.ResultsThelinerarityrangeofchlorogenicacidandrutinwere0.0192～0.48μgand0.096～2.406μgrespectively.Theaveragerecoveryratewere99.89%（RSD=0.33%,n=5）and99.73%（RSD=1.49%,n=5）.ConclusionThismethodissimple,accurateandcanbeusedforthestandardqualitycontrolofZhiyanxiaotablets.

【Keywords】Zhiyanxiaotablet;chlorogenicacid;rutin;HPLC;determination

痔炎消片是由火麻仁、紫珠葉、槐花、金銀花、地榆、白芍、三七、茅根、茵陳、枳殼十味藥材經(jīng)適當加工制成，具有清熱解毒，潤腸痛便，止血，止痛，消腫的功效，用于痔瘡發(fā)炎腫痛等癥［1］。在處方組成中，金銀花具有清熱解毒,涼散風熱之功效［2］；茵陳具有清濕熱，退黃疸之功效［2］；槐花具有涼血止血，清肝瀉火之功效［2］。本文用同一流動相系統(tǒng)對金銀花、茵陳中的綠原酸和槐花中的蘆丁同時進行測定，結(jié)果較為滿意，可用作加強本品的質(zhì)量控制指標。

1儀器與試藥

儀器：日本島津LC-10Atvp泵、SPD-10Avp紫外檢測儀；深圳威瑪通用多媒體數(shù)據(jù)工作站；SB2200超聲清洗器。綠原酸對照品（供含量測定用,批號：200212）、蘆丁對照品（供含量測定用,批號：200206）,均為中國藥品生物制品檢定所提供。痔炎消片為廣西某藥業(yè)市售品（規(guī)格：0.53g/片，批號：070601，070602，070603）。乙腈、磷酸為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件DiamonsilC18柱（4.6mm×250mm,5μm）,流動相：乙腈-0.5%磷酸（20：80），流速：1.0ml/min,檢測波長：344nm，進樣量：20μl,柱溫：室溫。在此色譜條件下，對照品和樣品色譜圖見圖1～4。

2.2對照品溶液的制備

2.2.1綠原酸對照品的制備精密稱取綠原酸對照品4.8mg,置20ml棕色瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取5ml，置50ml棕色瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含綠原酸0.024mg）。

2.2.2蘆丁對照品的制備精密稱取蘆丁對照品12.03mg，置20ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取10ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含蘆丁0.1203mg）。

2.2.3混合對照品溶液的制備精密量取綠原酸對照品和蘆頂對照品各5ml，置同一棕色瓶中，搖勻，即得。

2.3供試品溶液的制備取本品5袋內(nèi)容物，混勻，研細，取0.5g，精密稱定，置50ml棕色容量瓶中，加甲醇-水（3：7）的溶液40ml，超聲30min使溶解，放冷，加至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4空白樣品的制備據(jù)處方比例，按標準制備法［1］制備不含金銀花、茵陳和槐花的痔炎消顆粒，并按“2.3”項下方法同法制成陰性空白對照溶液。

2.5線性關系的考察分別精密量取對照品溶液1.0、2.0、5.0、10.0、15.0、25.0ml,分別置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣測定。以峰面積積分值為縱坐標，進樣量（μg）為橫坐標繪制標準曲線，回歸方程分別為：

綠原酸：y=308248.9x+402.2,r=0.9999，線性范圍為：0.0192～0.48μg;

蘆?。簓=461350.8x-4078.5,r=0.9998，線性范圍為：0.096～2.406μg。

2.6精密度試驗對同一份供試品溶液，連續(xù)進樣6次，結(jié)果綠原酸、蘆丁峰面積的RSD（n=6）分別為1.81%、2.76%，表明精密度較好。

2.7穩(wěn)定性試驗取供試品溶液，在室溫下放置0h、2h、4h、6h、8h、12h分別進樣，測定峰面積，結(jié)果綠原酸、蘆丁峰面積的RSD（n=6）分別為2.35%、3.37%。

2.8重復性試驗取同一批次（061001）樣品5份，同法測定，結(jié)果綠原酸的平均含量為2.06mg/g，RSD為0.70%；蘆丁的平均含量為1.06mg/g，RSD=0.81%，表明該法重復性好。

2.9加樣回收試驗精密稱取已知含量的樣品6份，分別精密加入綠原酸、蘆丁對照品適量，按“2.3”項下方法配制供試品溶液，依上述方法測定，計算回收率，結(jié)果見表1、表2。表1樣品中綠原酸加樣回收結(jié)果表2樣品中蘆丁加樣回收結(jié)果

2.10樣品測定取樣品3個批次，根據(jù)上述色譜條件，依法進樣測定含量，每批測定5份，結(jié)果見表3。

3討論

3.1測定波長的選擇經(jīng)對綠原酸和蘆丁的紫外吸收光譜測定，兩對照品在344nm處均有較大的吸光度，因而選擇344nm作為測定波長。表3樣品測定結(jié)果

3.2提取方法的選擇以甲醇、甲醇-水（1：1）、甲醇-水（7：3）、甲醇-水（3：7）、60%乙醇、70%乙醇6種不同溶劑分別采用超聲提取和加熱回流提取的實驗，結(jié)果以甲醇-水（3：7）超聲處理為佳。通過對超聲時間10min、20min、30min、40min和60min的考察，提取時間30min與40min、60min樣品中的綠原酸和蘆丁無明顯差別，故選用超聲提取30min。

3.3流動相的選擇實驗中曾使用甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀（40：60）［3］，乙腈-0.4%磷酸（10：90）［4］作流動相，供試品中綠原酸未能有效分離。經(jīng)對乙腈-0.4%磷酸（10：90）流動相進行配比，特別是增加乙腈的濃度，選用乙腈-0.5%磷酸（20:80）作為流動相時，綠原酸、蘆丁與其他成分峰的分離度好，峰形對稱性良好。

實驗中發(fā)現(xiàn)，綠原酸有光分解現(xiàn)象，即儲存在無色容量瓶中的綠原酸對照液在實驗室光照條件下放置一定時間后，色譜中除綠原酸主峰外，其后會出現(xiàn)一個雜質(zhì)峰，其峰面積與光照時間呈正比。改用棕色瓶后，同樣條件未發(fā)現(xiàn)此現(xiàn)象，因此，實驗中應注意避光操作。

【參考文獻】

1國家藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部頒藥品標準（中藥成方制劑第十二冊），1997，172.

2國家藥典委員會.中國藥典（一部）.北京：化學工業(yè)出版社，2000,177;192;246.

3國家食品藥品監(jiān)督管理局.標準YBZ02992006（單本試行）.

4國家中成藥標準匯編.中成藥地方標準上升國家標準部分（外科婦科分冊）.國家藥品監(jiān)督管理局，2002,262.