前言：本站為你精心整理了復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜大黃素含量測定范文，希望能為你的創(chuàng)作提供參考價值，我們的客服老師可以幫助你提供個性化的參考范文，歡迎咨詢。

【摘要】目的建立用高效液相色譜（HPLC）法測定復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜中大黃素的含量。方法采用HPLC法,色譜柱為AgilentZORBAXSB-C18（4.6mm×150mm,5μm）,流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液（4：1）,流速為1.0ml/min,柱溫為30℃,檢測波長為254nm。結(jié)果大黃素在0.04～0.4μg/ml（r=0.9998）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。大黃素平均回收率分別為98.25%。結(jié)論該方法操作簡便、快速、準確。

【關(guān)鍵詞】復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜；大黃素；高效液相色譜法

【Abstract】ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofemodinincompoundornidazole-rhubarbbuccalfilmbyHPLC.MethodsAHPLCmethodwasusedwithAgilentZORBAXSB-C18column（150mm×4.6mm,5μm）.Themobilephasewasmethanol-0.1%phosphoricacid（4:1）.Theflowratewas1.0mL/min.Thecolumntemperaturewas40℃andthedetectionwavelengthwas254nm.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.04～0.4μg（r=0.9998）.Theaveragerecoverywas98.25%.ConclusionThemethodissimple,rapidandaccurate.

【Keywords】compoundornidazole-rhubarbbuccalfilm；emodin；HPLC

牙周炎是一種常見病、多發(fā)病，由厭氧菌感染引起，局部應(yīng)用抗菌藥物對于牙周病的治療有很好的效果。以往報道的牙周炎藥膜多以生物不降解的材料為輔料，使用中需要定時更換。復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜由蘭州大學(xué)藥學(xué)院和蘭州市第一人民醫(yī)院口腔科合作開發(fā)作為醫(yī)師協(xié)定處方，治療牙周炎，療效確切。它以奧硝唑為主藥，大黃提取物中蒽醌類成分為輔藥，具有活血化淤、消炎止痛、促進創(chuàng)面愈合等作用。該口腔膜劑是生物可吸收性牙周炎藥膜，應(yīng)用時不需要更換藥膜，可被機體有效吸收，達到長效和加強愈合的作用［1，2］。為有效地控制該口腔膜劑的內(nèi)在質(zhì)量，確保臨床療效，本文報道采用反相高效液相色譜法測定大黃素含量。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent-1100高效液相色譜儀,G1315A/BDAD檢測器,G1313ALS自動進樣器,Agilent-1100色譜工作站（美國安捷倫科技有限公司）；BS224型電子天平（德國賽多利斯公司）；KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；0.45μm濾膜（天津Do-Chrom科技有限公司）；臺式離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠，型號TDL-40B）；SZ-97自動三重純水蒸餾器（上?？莆鰜啒s生化儀器廠）；DZKW-4水浴鍋（上海實驗儀器廠）。

1.2試劑甲醇（色譜純）、磷酸（分析純）、水（重蒸餾純凈水）、大黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所,批號：0854-200532）。

復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜的制備［3］：按2：1稱取PVA17-88和CMC-Na，分別加適量蒸餾水浸泡12h，使其充分溶脹。再將PVA和CMC-Na分別置85℃～95℃水浴上加熱溶解后混合，過濾備用。按處方量稱取奧硝唑溶于熱蒸餾水中，稱取大黃提取物溶于90%乙醇中，并將它們加入備用的成膜材料漿液中，加入甜蜜素、甘油，適量水至規(guī)定量，攪拌均勻后，于超聲儀中超聲30min脫泡后，傾入預(yù)先涂有少量液體石蠟的玻璃板上，于凈化室內(nèi)鋪膜，避光，50℃～60℃干燥，啟膜，在紫外燈下照射15min滅菌，在凈化臺上分割成1cm×0.5cm藥膜（每片含大黃提取物約50mg，奧硝唑約1mg），密封包裝（燙封于聚乙烯薄膜中）。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱AgilentZORBAXSB-C18（4.6mm×150mm,5μm）,流動相:甲醇-0.1%磷酸水溶液（4：1）；流速:1.0ml/min；柱溫:30℃；檢測波長:254nm，進樣量10μl。

2.2試驗溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取大黃素對照品各5mg分別于兩個50ml量瓶中,加甲醇溶解制成0.1mg/ml大黃素儲備液,各取上述溶液2ml于10ml量瓶中,加甲醇定容,即得含大黃素（20mg/L）對照品溶液。

2.2.2樣品溶液的制備取復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜10cm2（含大黃酚9.49mg），剪碎，置50ml容量瓶，加甲醇定容至刻度，超聲30min使膜完全溶解，取上清液10ml于離心管中，以4000r/min離心10min，取上清液5ml，置燒瓶中,揮去甲醇,加2.5mol/L的硫酸溶液10ml,超聲5min,加氯仿10ml,置水浴中加熱回流水解1h,冷卻,轉(zhuǎn)移至分液漏斗中,燒瓶用少量氯仿潤洗3次,用氯仿振搖萃取3次,每次10ml,合并氯仿液,用無水硫酸鈉脫水,減壓蒸餾揮去氯仿,殘渣用甲醇溶解,移至10ml量瓶中,并稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜（0.45μm）濾過,取續(xù)濾液,即得。

2.2.3陰性樣品溶液的制備除大黃外,按“儀器與試藥”制備復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜陰性樣品，再按樣品溶液的制備制成陰性溶液。

2.2.4大黃對照藥材溶液取大黃對照藥材按樣品溶液制備方法制備,即得。

2.3系統(tǒng)適應(yīng)性試驗取樣品溶液、陰性樣品溶液、大黃對照藥材溶液和大黃素對照品溶液,在上述色譜條件下進樣10μl,結(jié)果陰性樣品對大黃素測定無干擾。見圖1。

2.4線性關(guān)系精密吸取含大黃素對照品溶液2、4、8、10、14、16、20μl按上述色譜條件依次進樣,以對照品進樣量X（μg）為橫坐標,峰面積Y為縱坐標作標準曲線,得回歸方程:Y=3140.50X-6.10,r=0.9998。結(jié)果表明,大黃素進樣量在0.04～0.4μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗取同一濃度對照品溶液,在相同色譜條件下重復(fù)進樣5次,結(jié)果大黃素峰面積的RSD為0.42%（n=5）。

2.6穩(wěn)定性試驗取同一樣品溶液,分別于0、2、4、6、8、10、12h時進樣,測定峰面積,結(jié)果大黃素的RSD為1.20%（n=7）,表明樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7重復(fù)性試驗取同一批號（071103）復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜樣品,按樣品含量測定方法測定,結(jié)果測得大黃素含量為0.9495mg/cm,RSD為1.25%（n=6）。

2.8加樣回收試驗精密稱取已知含量的復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜（大黃素0.9495mg/cm）5份，分別精密加入大黃素儲備液1ml,同“2.2.2”處理,測定峰面積,計算回收率。見表1。表1大黃素回收率試驗結(jié)果

2.9樣品測定取2批復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜,分別按2.2.2項下處理后,進樣10μl,測定峰面積，計算大黃素含量。見表2。表2樣品含量測定

3討論

在選擇檢測波長時,取大黃素對照品溶液在200～360nm波長范圍內(nèi)掃描,結(jié)果在254nm波長處有最大吸收,且樣品中其他成分在此波長處對測定無干擾,靈敏度高,可準確測定大黃素,故測定波長選定254nm。

選擇樣品處理方法時,參考文獻資料［4，5］,比較了幾種處理方法,實驗證明,本文用的樣品處理方法,其分離度好,無干擾,峰信號較強。

采用HPLC法測定復(fù)方奧硝唑大黃口腔膜中大黃素含量,該法分離度好,靈敏度高,穩(wěn)定性好,可作為其質(zhì)量控制方法。

【參考文獻】

1李淑娟，董曉華，武海霞，等.大黃及其有效成分藥理作用研究進展.醫(yī)學(xué)綜述，2005，11（1）:76.

2MunozE,CastellaJ,GutierrezJF.InvivoandinvitrosensitivityofTrichomonasgallinaetosomenitroimidazoledrugs.VetParasitol,1998,78（4）:239.

3安媛，孫德江.奧硝唑口腔膜劑的制備及質(zhì)量控制.中國藥房，2005，16（12）：908-909.

4國家藥典委員會.中國藥典一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005，354-355.

5劉臘娥,陳立新,楊長成,等.HPLC測定潔康舒洗劑中大黃酸、大黃素及黃酚的含量.中成藥,2004,26（9）：710-713.