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【摘要】目的建立高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定痔炎消片中綠原酸和蘆丁的含量。方法采用DiamonsilC18柱（4.6mm×250mm,5μm）,流動(dòng)相：乙腈-0.5%磷酸（20：80），流速：1.0ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)：344nm。結(jié)果綠原酸在進(jìn)樣量0.0192～0.48μg呈良好的線(xiàn)性關(guān)系；平均加樣回收率為99.89%，RSD=0.33%（n=5）。蘆丁在進(jìn)樣量為0.096～2.406μg呈良好的線(xiàn)性關(guān)系；平均加樣回收率為99.73%，RSD=1.49%（n=5）。結(jié)論本法操作簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，可用作該藥品的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】痔炎消片綠原酸蘆丁hplc含量測(cè)定

【Abstract】ObjectiveToestablishaHPLCmethodforthedeterminationofchlorogenicacid,rutininZhiyanxiaotablets.MethodsADiamonsilC18column（250mm×4.6mm,5μm）wasusedwithmobilephaseofacetonitrile-0.5%phosphoricacidsolution（20:80）.Theflowratewas1.0ml/minandthedetectionwavelengthwas344nm.ResultsThelinerarityrangeofchlorogenicacidandrutinwere0.0192～0.48μgand0.096～2.406μgrespectively.Theaveragerecoveryratewere99.89%（RSD=0.33%,n=5）and99.73%（RSD=1.49%,n=5）.ConclusionThismethodissimple,accurateandcanbeusedforthestandardqualitycontrolofZhiyanxiaotablets.

【Keywords】Zhiyanxiaotablet;chlorogenicacid;rutin;HPLC;determination

痔炎消片是由火麻仁、紫珠葉、槐花、金銀花、地榆、白芍、三七、茅根、茵陳、枳殼十味藥材經(jīng)適當(dāng)加工制成，具有清熱解毒，潤(rùn)腸痛便，止血，止痛，消腫的功效，用于痔瘡發(fā)炎腫痛等癥［1］。在處方組成中，金銀花具有清熱解毒,涼散風(fēng)熱之功效［2］；茵陳具有清濕熱，退黃疸之功效［2］；槐花具有涼血止血，清肝瀉火之功效［2］。本文用同一流動(dòng)相系統(tǒng)對(duì)金銀花、茵陳中的綠原酸和槐花中的蘆丁同時(shí)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果較為滿(mǎn)意，可用作加強(qiáng)本品的質(zhì)量控制指標(biāo)。

1儀器與試藥

儀器：日本島津LC-10Atvp泵、SPD-10Avp紫外檢測(cè)儀；深圳威瑪通用多媒體數(shù)據(jù)工作站；SB2200超聲清洗器。綠原酸對(duì)照品（供含量測(cè)定用,批號(hào)：200212）、蘆丁對(duì)照品（供含量測(cè)定用,批號(hào)：200206）,均為中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。痔炎消片為廣西某藥業(yè)市售品（規(guī)格：0.53g/片，批號(hào)：070601，070602，070603）。乙腈、磷酸為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件DiamonsilC18柱（4.6mm×250mm,5μm）,流動(dòng)相：乙腈-0.5%磷酸（20：80），流速：1.0ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)：344nm，進(jìn)樣量：20μl,柱溫：室溫。在此色譜條件下，對(duì)照品和樣品色譜圖見(jiàn)圖1～4。

2.2對(duì)照品溶液的制備

2.2.1綠原酸對(duì)照品的制備精密稱(chēng)取綠原酸對(duì)照品4.8mg,置20ml棕色瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取5ml，置50ml棕色瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含綠原酸0.024mg）。

2.2.2蘆丁對(duì)照品的制備精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品12.03mg，置20ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取10ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含蘆丁0.1203mg）。

2.2.3混合對(duì)照品溶液的制備精密量取綠原酸對(duì)照品和蘆頂對(duì)照品各5ml，置同一棕色瓶中，搖勻，即得。

2.3供試品溶液的制備取本品5袋內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，取0.5g，精密稱(chēng)定，置50ml棕色容量瓶中，加甲醇-水（3：7）的溶液40ml，超聲30min使溶解，放冷，加至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4空白樣品的制備據(jù)處方比例，按標(biāo)準(zhǔn)制備法［1］制備不含金銀花、茵陳和槐花的痔炎消顆粒，并按“2.3”項(xiàng)下方法同法制成陰性空白對(duì)照溶液。

2.5線(xiàn)性關(guān)系的考察分別精密量取對(duì)照品溶液1.0、2.0、5.0、10.0、15.0、25.0ml,分別置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，回歸方程分別為：

綠原酸：y=308248.9x+402.2,r=0.9999，線(xiàn)性范圍為：0.0192～0.48μg;

蘆?。簓=461350.8x-4078.5,r=0.9998，線(xiàn)性范圍為：0.096～2.406μg。

2.6精密度試驗(yàn)對(duì)同一份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果綠原酸、蘆丁峰面積的RSD（n=6）分別為1.81%、2.76%，表明精密度較好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液，在室溫下放置0h、2h、4h、6h、8h、12h分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，結(jié)果綠原酸、蘆丁峰面積的RSD（n=6）分別為2.35%、3.37%。

2.8重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次（061001）樣品5份，同法測(cè)定，結(jié)果綠原酸的平均含量為2.06mg/g，RSD為0.70%；蘆丁的平均含量為1.06mg/g，RSD=0.81%，表明該法重復(fù)性好。

2.9加樣回收試驗(yàn)精密稱(chēng)取已知含量的樣品6份，分別精密加入綠原酸、蘆丁對(duì)照品適量，按“2.3”項(xiàng)下方法配制供試品溶液，依上述方法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1、表2。表1樣品中綠原酸加樣回收結(jié)果表2樣品中蘆丁加樣回收結(jié)果

2.10樣品測(cè)定取樣品3個(gè)批次，根據(jù)上述色譜條件，依法進(jìn)樣測(cè)定含量，每批測(cè)定5份，結(jié)果見(jiàn)表3。

3討論

3.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇經(jīng)對(duì)綠原酸和蘆丁的紫外吸收光譜測(cè)定，兩對(duì)照品在344nm處均有較大的吸光度，因而選擇344nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。表3樣品測(cè)定結(jié)果

3.2提取方法的選擇以甲醇、甲醇-水（1：1）、甲醇-水（7：3）、甲醇-水（3：7）、60%乙醇、70%乙醇6種不同溶劑分別采用超聲提取和加熱回流提取的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果以甲醇-水（3：7）超聲處理為佳。通過(guò)對(duì)超聲時(shí)間10min、20min、30min、40min和60min的考察，提取時(shí)間30min與40min、60min樣品中的綠原酸和蘆丁無(wú)明顯差別，故選用超聲提取30min。

3.3流動(dòng)相的選擇實(shí)驗(yàn)中曾使用甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀（40：60）［3］，乙腈-0.4%磷酸（10：90）［4］作流動(dòng)相，供試品中綠原酸未能有效分離。經(jīng)對(duì)乙腈-0.4%磷酸（10：90）流動(dòng)相進(jìn)行配比，特別是增加乙腈的濃度，選用乙腈-0.5%磷酸（20:80）作為流動(dòng)相時(shí)，綠原酸、蘆丁與其他成分峰的分離度好，峰形對(duì)稱(chēng)性良好。

實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，綠原酸有光分解現(xiàn)象，即儲(chǔ)存在無(wú)色容量瓶中的綠原酸對(duì)照液在實(shí)驗(yàn)室光照條件下放置一定時(shí)間后，色譜中除綠原酸主峰外，其后會(huì)出現(xiàn)一個(gè)雜質(zhì)峰，其峰面積與光照時(shí)間呈正比。改用棕色瓶后，同樣條件未發(fā)現(xiàn)此現(xiàn)象，因此，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意避光操作。

【參考文獻(xiàn)】

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