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免疫抑制劑范文第1篇

目前，器官移植已達(dá)到相當(dāng)成功的水平，這與免疫抑制劑，特別是環(huán)孢素A（CsA）在臨床應(yīng)用是分不開的。但是CsA存在著毒副作用大，治療窗窄等問題，因此人們一直在尋找和開發(fā)新型免疫抑制劑。

FTY720（以下簡稱FTY），化學(xué)名2-amino-2[2-(4-octylphenyl)ethy-1]-1，3 propanediol hydrochloride，是一種新合成的免疫抑制劑。它是將冬蟲夏草抽提物中具有免疫抑制作用的成份ISP-Ⅰ進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造而成。該藥研制成功至今雖然只有三四年的時(shí)間，但它已經(jīng)顯示出顯著的免疫抑制效果和獨(dú)特的作用。下面就該藥的特點(diǎn)，綜述相關(guān)文獻(xiàn)。

1 顯著的免疫抑制作用

1.1 在各種移植模型中的應(yīng)用

至今，F(xiàn)TY已在各種動(dòng)物同種異體移植模型中進(jìn)行了試用，效果良好，其中有大鼠皮膚移植、心臟移植[1]、肝移植、小腸移植、肢體移植和犬腎移植。除了同種異體移植模型外，F(xiàn)TY還可延長異種移植物的存活[2]。給藥方式大多是從手術(shù)當(dāng)日起，口服數(shù)天至14天，劑量由0.1-10mg/kg/d不等，各種模型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示FTY有如下特點(diǎn)：

①明顯延長移植物存活，存活時(shí)間與藥物劑量正相關(guān)，②強(qiáng)烈的免疫抑制效果，當(dāng)達(dá)以相同的延長移植物存活時(shí)間時(shí)，F(xiàn)TY的劑量僅為CsA的1/20，③FYT既可預(yù)防急性排斥發(fā)生，也可逆轉(zhuǎn)已經(jīng)發(fā)生的排斥反應(yīng)。

另外，我們最近的一項(xiàng)研究顯示，術(shù)前3天至術(shù)后14天給予FTY（3mg/kg/d）可使大鼠同種異體心臟移植物長期存活。除此之外，F(xiàn)TY還可阻止自身免疫性Ⅰ型糖尿病的發(fā)生。

1.2 誘導(dǎo)免疫耐受

總體上，對FTY在免疫耐受誘導(dǎo)中的意義研究還不多。注射同種異體嵌合蛋白折同時(shí)給予短時(shí)FTY可以誘導(dǎo)同種異體心臟移植物的長期存活，若將長期存活受者的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移給另外一個(gè)受者，則可誘導(dǎo)該受者對同基因供者的免疫耐受，IL-2不能逆轉(zhuǎn)耐受狀態(tài)[3]。在給予胸腺內(nèi)注射供者脾細(xì)胞的同時(shí)給予FTY可延長供者移植物的存活[4]。我們的一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)表明，F(xiàn)TY與供者脾細(xì)胞合用可誘導(dǎo)供者特異性免疫耐受，若與從地塞來松處理過的供鼠分離的脾細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用則更能增強(qiáng)免疫耐受的誘導(dǎo)效果[5，6]。

1.3 與其它免疫抑制的協(xié)同作用

與CsA的協(xié)同作用 亞治療劑量的CsA（3mg/kg）與FTY聯(lián)合應(yīng)用可明顯延長移植物存活時(shí)間（即使FTY的劑量只有0.1mg/kg）。Hoshino 報(bào)道，當(dāng)FTY3mg/kg聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，7只同種異體心臟移植受鼠中有6只移植物長期存活。FTY的使用不影響CsA的谷值，所以并非靠提高CsA的血藥濃度來提高療效的。我們知道，兩種藥物間的相互作用可由組合系數(shù)（Combination Index CI）來衡量。CI值＜1表示兩者協(xié)同，CI值=1表示兩者相加，CI值＞1表示兩者拮抗。在大鼠心臟移植模型中，1mg/kgCsA與0.1mg/kgFTY的CI值=0.15，高度協(xié)同[7]。上述結(jié)果基本上是在嚙齒類動(dòng)物中的研究結(jié)果，而最近對一組靈長類動(dòng)物的研究也發(fā)現(xiàn)FTY可以增強(qiáng)CsA的免疫抑制效果，延長移植的存活時(shí)間[8]。

與FK506和雷帕霉素的協(xié)同作用除了與CsA的協(xié)同作用外，已證明，F(xiàn)TY與雷帕霉素（Rapa）有協(xié)同作用，而且FTY/CsA/Rapa三聯(lián)療法的協(xié)同作用更強(qiáng)[7]。FTY與FK506能否協(xié)同作用仍存在爭論，Wang等認(rèn)為FTY與FK506沒有協(xié)同作用，而Hoshino和Xu等則認(rèn)為兩者之間存在協(xié)同作用[7，9，10]。

2 獨(dú)特的藥 理作用

2.1 與CsA不同的藥理作用

如同藥理作用不同的抗生素可以產(chǎn)生協(xié)同作用一樣，F(xiàn)TY與CsA有協(xié)同作用的原因之一也是因其有與CsA完全不同的藥理作用。當(dāng)在體外用ConA刺激大鼠脾細(xì)胞時(shí)，1000nM的FTY對IL-2的產(chǎn)生沒有抑制作用，而這一濃度下的CsA已經(jīng)可以完全I(xiàn)L-2的生成。當(dāng)分別用同種異體抗原、ConA、IL-2刺激大鼠脾細(xì)胞，CsA可抑制前兩種刺激所引起的細(xì)胞增生反應(yīng)，但不能抑制 IL-2的刺激。FTY則不同，它可以抑制包括IL-2在內(nèi)的所有這三種刺激引起的細(xì)胞增生。FTY減少移植物中T細(xì)胞的浸潤，以及抑制移植物內(nèi)CD3 mRNA和細(xì)胞毒性分穿孔蛋白、顆粒酶以及以FasLmRNA的表達(dá)[1，11，12]。而且毒性分子尤其是FasL的表達(dá)抑制與移植物存活有密切關(guān)系，提示FTY減少了移植物中的細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）。我們知道，CsA產(chǎn)生免疫抑制的主要藥理作用是抑制編碼IL-2的基因的表達(dá)，而FTY并沒有對IL-2的調(diào)控作用。對于它是通過什么機(jī)制減少了外周淋巴細(xì)胞和移植物中的CTL目前仍不清楚。

2.2 誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡

大鼠脾細(xì)胞與FTY共育后，出現(xiàn)典型的凋亡特征：表面微絨毛消失、染色質(zhì)濃集、凋亡小體形成、DNA梯形條帶等。人淋巴細(xì)胞體外用FTY處理后也出現(xiàn)相似表達(dá)，并且細(xì)胞內(nèi)Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào)，Bax上調(diào)[13]。

MRL lpr/lpr小鼠的Fas基因缺失，而MRL野生型小鼠沒有該缺陷。當(dāng)它們的淋巴細(xì)胞與抗-Fas抗體共育時(shí)，只有野生型出現(xiàn)細(xì)胞凋亡；與FTY共育時(shí)，MRL lpr/lpr和野生型均出現(xiàn)與藥物濃度正相關(guān)的細(xì)胞死亡，兩者之間無差異。用10mg/kg FTY喂飼這兩種小鼠時(shí)，它們的外周淋巴明顯下降，兩者無差異[13]。這一結(jié)果表明FTY誘導(dǎo)凋亡不依賴Fas-FasL途徑。

Jurkat淋巴瘤細(xì)胞bcl-2基因過表達(dá)，對FTY存在抗性，而bcl-2表達(dá)正常的Jurkat淋巴瘤的新型瘤株（neo-type），就不存在FTY抗性。人單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)FTY處理1小時(shí)后，細(xì)胞內(nèi)Bax蛋白顯著上升，而2小時(shí)后Bcl-2蛋白明顯下降，細(xì)胞存活率低。這提示FTY可能通過影響bcl-2/bax比值，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

HL-60是人淋巴母細(xì)胞瘤株，其培養(yǎng)液中加入1～8uM FTY，1分鐘后可觀測到細(xì)胞內(nèi)Ca++明顯上調(diào)。用過量的EGTA鰲合細(xì)胞外Ca++，對這一效應(yīng)沒有影響，而Thapsigargin可以抑制這一效應(yīng)。已知Thapsigargin通過抑制Ca++-ATP酶抑制細(xì)胞內(nèi)Ca++儲(chǔ)存池的轉(zhuǎn)運(yùn)。當(dāng)用磷脂酶C的抑制劑U73122處理細(xì)胞后，完全抑制了FTY引起的細(xì)胞內(nèi)Ca++濃度升高，同時(shí)也抑制了細(xì)胞的凋亡[14]。這說明FTY可通過激活磷脂酶C，引起細(xì)胞內(nèi)Ca++的釋放，繼而誘發(fā)凋亡。FTY激活磷脂酶C導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Ca++上升和調(diào)節(jié)bcl-2/bax 比值是相對獨(dú)立的兩個(gè)作用還是同一作用的上、下游效應(yīng)還有待進(jìn)一步闡明。

有趣的是，最近發(fā)現(xiàn)FTY對淋巴細(xì)胞的凋亡有雙相調(diào)節(jié)作用，F(xiàn)TY可以增強(qiáng)超抗原引起的成熟淋巴細(xì)胞凋亡，而胸腺中的負(fù)選擇（胸腺細(xì)胞凋亡）卻受到FTY的抑制，表明FTY的作用可能是加速了成熟T淋巴細(xì)胞的凋亡，同時(shí)提示未成熟和成熟淋巴細(xì)胞的細(xì)胞凋亡機(jī)制是不同的[15]。

2.3 加速外周循環(huán)的成熟淋巴細(xì)胞歸巢

盡管最初的研究發(fā)現(xiàn)FTY可誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的凋亡和體內(nèi)外周血淋巴細(xì)胞的減少。但仍有一些現(xiàn)象難以用凋亡的誘導(dǎo)進(jìn)行解釋。如FTY誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究主要是體外實(shí)驗(yàn)，而體內(nèi)實(shí)驗(yàn)并未發(fā)現(xiàn)大量的凋亡細(xì)胞。其中一個(gè)解釋是凋亡細(xì)胞可能在體內(nèi)很快被體內(nèi)的吞噬系統(tǒng)吞噬。我們的一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)表明，將FTY誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞與脾細(xì)胞共溫育，發(fā)現(xiàn)可抑制脾臟中T細(xì)胞的活化，由于另外一個(gè)細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑（CHX）具有同樣的效果，提示細(xì)胞凋亡后被受者的吞噬系統(tǒng)吞噬后可能介導(dǎo)了FTY的免疫抑制效果[16]。另外一個(gè)難以解釋的現(xiàn)象是FTY的有效劑量很低，0.05mg/kg即有免 疫抑制效果，5mg/kg劑量的FTY僅使血濃度達(dá)到200ng/ml(0.58umol/L)，而體外實(shí)驗(yàn)中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡需要1umol/L以上的濃度。由此，一些作者尋找FTY的其它作用機(jī)制。Chiba觀察到[17，18]，口服小劑量FTY（0.1mg/kg）后，大鼠外周血脾臟及胸導(dǎo)管內(nèi)淋巴細(xì)胞明顯減少的同時(shí)，外周淋巴結(jié)腸系淋巴及派爾結(jié)中的淋巴細(xì)胞顯著增加，將標(biāo)記后的淋巴細(xì)胞靜脈輸入后，證實(shí)FTY可以加速外周淋巴細(xì)胞歸巢至PLN、MLN和PP，并與用藥劑量正相關(guān)，如用抗CD62L、CD49D和CD11a處理淋巴細(xì)胞，而后靜脈輸入，歸巢被完全阻斷，這提示FTY加速外周淋巴細(xì)胞歸巢是通過歸巢受體（homing releptors）介導(dǎo)的。

從上述的一些實(shí)驗(yàn)證據(jù)得出FTY似乎有兩個(gè)方面的作用，其一是誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡，其二是誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞歸巢。要假設(shè)同一個(gè)藥物同時(shí)具有這兩個(gè)方面的作用是困難的。目前淍無直接的實(shí)驗(yàn)證據(jù)證明兩者之間是否存在關(guān)系。

3 藥物代謝動(dòng)力學(xué)

目前在這方面的研究較少。FYT可用氣相色譜進(jìn)行檢測。由于FTY溶于水和乙醇，因而有很高的生物利用度，在狗、大鼠和靈長類動(dòng)物中的生物利用度分別大于60%、80%和40%。在血液中，血細(xì)胞的分布大于血漿。在狗和大鼠，口服FTY后的血濃度達(dá)峰時(shí)間約為8～9小時(shí)，而母藥的半衰期分別為12和29小時(shí)。FTY與CsA聯(lián)合應(yīng)用對兩者的血濃度都沒有影響。母藥的谷值濃度與口服劑量之間有線性關(guān)系。目前尚未發(fā)現(xiàn)有免疫抑制作用的代謝產(chǎn)物。在大便和尿中都發(fā)現(xiàn)了FTY的代謝產(chǎn)物，其中尿中的代謝產(chǎn)物比大便中的略低，這些提示FTY主要在肝臟代謝。

4 毒副作用低

4.1 高度的細(xì)胞選擇性

大鼠一次性口服10mg/kg FTY，3小時(shí)以后外周血淋巴細(xì)胞降至服藥前的18.3%，3天后降至谷底6.1%。此時(shí)外周血各種淋巴細(xì)胞的降低幅度存在顯著差異。與服藥前相比，T細(xì)胞降至2.3%，B細(xì)胞降至19.7%，CD4+細(xì)胞降至8.4%，CD8+細(xì)胞降至20%，單核細(xì)胞不變。而多核細(xì)胞數(shù)上升了3倍，CD4+、CD8+雙陽性細(xì)胞上升（這是不是因?yàn)轶w內(nèi)大量淋巴細(xì)胞凋亡后，巨噬細(xì)胞增生，以吞噬并清除這些凋亡細(xì)胞呢？）。脾臟T細(xì)胞明顯減少，胸腺、腸系膜淋巴結(jié)的細(xì)胞數(shù)及各種細(xì)胞的比例無變化。將不同組織中的淋巴細(xì)胞在含有10uMFTY的培養(yǎng)液中培養(yǎng)3小時(shí)后，細(xì)胞存活率分別為：胸腺53.2%，脾臟37.2%，外周血42.7%[19]。Chiba[2]等給大鼠連續(xù)口服FTY0.1mg/kg/d，14天后，外周血中CD3+細(xì)胞明顯減少，CD45RA+B細(xì)胞不受影響。骨髓細(xì)胞和胸腺細(xì)胞也不受影響。這些結(jié)果提示，F(xiàn)TY選擇性作用于外周淋巴細(xì)胞，特別是CD4+T細(xì)胞。

4.2 對動(dòng)物的影響

大鼠大劑量FTY（10mg/kg）服用15天，沒有出現(xiàn)腹瀉、嘔吐、消瘦、感染而引起死亡[20]。也沒有中毒性腎損傷，但體重增長受到抑制[2]。犬腎移植受者連續(xù)服藥3個(gè)月，沒有明顯的副作用[20]。我們最近的一項(xiàng)研究表明，F(xiàn)TY的劑量在0.3～10mg/kg的范圍內(nèi)無論是單獨(dú)應(yīng)用或是與CsA聯(lián)合應(yīng)用，連續(xù)服藥兩周后，明顯降低外周血淋巴細(xì)胞和脾臟淋巴細(xì)胞，對粒細(xì)胞、血紅蛋白以及胸腺和骨髓均無明顯影響。服藥后2周外周血淋巴細(xì)胞的數(shù)量一直維持在較低的水平，而且在停藥后維持4周左右恢復(fù)到服藥前的水平，表明FTY對淋巴細(xì)胞的影響是可逆的，而CsA不能增強(qiáng)FTY減少淋巴細(xì)胞的作用。

4.3 減少CsA用量 FTY與CsA聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，CsA的劑量只需達(dá)到亞臨床劑量（3mg/kg）就可達(dá)到滿意的治療效果[2]，從而避免了CsA過量所可能引起的肝、腎毒性。

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5 結(jié)語

對FTY的研究雖然時(shí)間不長，但相關(guān)的研究已顯示該免疫抑制劑有較好的前景。但也有許多問題有待澄清。如特異性地誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡的機(jī)制有待進(jìn)一步闡明，F(xiàn)TY為何僅對T細(xì)胞有作用，而對其它細(xì)胞似乎沒有影響呢？是T細(xì)胞內(nèi)有特殊的“受體”或酶系嗎？誘導(dǎo)細(xì) 胞凋亡和細(xì)胞歸巢之間有何關(guān)系呢？兩者對免疫系統(tǒng)的影響如何？單用或聯(lián)合應(yīng)用CsA可使移植物長期存活，那么這種效果是免疫抑制還是免疫耐受呢？對這些問題的深入探討也許會(huì)給免疫學(xué)的研究和臨床帶來新思路或方法。

參考文獻(xiàn)

孫爾維等，中華微生物和免疫學(xué)雜志，1998；18：377

Fukuda Y et al .Transpl Int ，1998;11 Suppl 1:461-464

Chueh SC et al .Transplantation，1997;64:1407-1414

Suzuki K et al .Transplant Proc，1998;30:1067-1068

Sun EW et al .J Med Col PLA，1999;14:103-107

Sun EW et al .J Med Col PLA，1999;14:99-102

Wang ME et al .Transplantation ，1998;65:899-905

Troncoso P et al .Transplantation，1999;67:145-151

Hoshino Y et al .Transplant Proc，1999;31:1224-1226

Xu M et al .Transpl Int ，1998;11:288-294

Yanagawa Y et al .Transplant ，proc31:1227-1229

Yanagawa Y et al .J Immunol，1998;160:5493-5499

Li XK et al .Transplant Proc，1997;29:1267-1268

Shinomiya T et al .Immunology，1997;91:594-512

Shimizu C et al .Immunology，1998;94:503-512

Sun EW et al.Sean J Immunol (in press)

Chiba K et al.J Immunol，1998;160:5037-5044

Yanagawa Y et al .Immunoloy，1998;95：591-594

免疫抑制劑范文第2篇

    【關(guān)鍵詞】  姜黃素; NF-?資B; 胰島素; 抵抗 )

    Abstract: 【Objective】 To investigate inhibitory effect of curcumin and its mechanism on insulin resistance. 【Methods】 Curcumin co-operated high fat diets were tested for the effect of curcumin on obesity induced insulin resistance in rodent model. Transcription factor I and circulating cytokines were also detected after curcumin treatment. 【Results】 (1) Curcumin inhibited TNF?琢-stimulated NF-?資B activation in Fao cells. (2)The fasting plasma glucose level was not obviously decreased after the treatment of curcumin, but the level of fasting insulin decreased by about 30%. Furthermore, the level of glucose tolerance curve dropped significantly. (3) The level of TNF?琢[(34.5±3.4)pg/mL vs (31.3±1.1) pg/mL] in circulation was not obviously changed, but the level of IL-1?茁 [(33.9±3.2) pg/mL vs (15.6±1.1) pg/mL] and IL-6 [(72.1±9.8) pg/mL vs (47.2±5.3) pg/mL] was suppressed dramatically. (4) IRS-1 tyrosine phosphorylation levels stimulated by insulin obviously increased, but the phosphorylation level of insulin receptor did not change. Being parallel with tyrosine phosphorylation levels of IRS-1, the phosphorylation levels of P85 and AKT increased accordingly. Significantly improved insulin sensitivity was observed in groups with curcumin. 【Conclusion】 Curcumin inhibits NF-?資B dependent inflammatory pathway and reverses obesity-induced insulin resistance.

    Key words:  curcumin, NF-?資B, insulin, resistance

    姜黃(Curcuma longa L.)是常用中藥,臨床上用于活血、行氣、通經(jīng)、止痛。姜黃素(curcumin)是一種黃素,從姜黃中提取得到的主要有效成分。近年來,大量研究發(fā)現(xiàn)它具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗炎及抗腫瘤、抗動(dòng)脈粥樣硬化等生理和藥理作用[1-4]。在實(shí)驗(yàn)室資料中姜黃素是良好的免疫調(diào)節(jié)劑,并有結(jié)果提示姜黃素可以抑制宿主抗移植物反應(yīng),而且提高受體動(dòng)物的存活率[5,6]。在實(shí)驗(yàn)研究中,炎癥又與胰島素抵抗密切相關(guān)[7,8]。炎癥被證實(shí)是代謝綜合征的共同土壤,聯(lián)想到許多抗炎藥物如阿司匹林可以逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗,本文嘗試?yán)媒S素治療肥胖合并極度胰島素抵抗的炎癥模型,并對姜黃素逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗的機(jī)制作初步探討。

    1   材料與方法

    1.1   材   料

    1.1.1   姜黃素   購于印度亞洲公司(純度99%)。

    1.1.2   動(dòng)物   Obob雄性小鼠16只,8周齡、空腹體質(zhì)量(33~38 g),購自南京國家模式動(dòng)物中心,用含脂肪6.4%的標(biāo)準(zhǔn)飼料飼養(yǎng),實(shí)驗(yàn)前1周紀(jì)錄小鼠的飼料攝取、空腹血糖、空腹胰島素水平及體量等。

    1.1.3   FAO細(xì)胞   購自  The American Type Culture Collection(ATCC)。

    1.1.4   試劑   IR、IRS-1、AKT、P85 多克隆抗體由Steven Shoelson實(shí)驗(yàn)室(Joslin Diabetes Center, Harvard)提供。FBS TNF?琢、胰島素購自Sigma, St. Louis USA, I-?資B?琢 抗體,IKK?酌抗體,購于 Santa Cruz, CA, GST-I-?資B(1-54) 底物由Boston Biologicals, Wellesley, MA合成。

    1.2   方   法

    1.2.1   體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)   FAO細(xì)胞使用培養(yǎng)液 DMEM(購自 Gibco公司),細(xì)胞置于37 ℃,5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在10 cm 培養(yǎng)皿用10 mL DMEM+10%FBS含有高濃度葡萄糖(25 mmol/L)的培養(yǎng)液中培養(yǎng)至80%重疊率,經(jīng)5 mL 0.1%BSA孵育16 h后接受不同濃度(0~40 umol/L)的姜黃素預(yù)處理,然后接受鼠TNF?琢 10 nmol/L刺激處理,于20 min后用預(yù)冷的PBS終止,并收集細(xì)胞,用于制作蛋白勻漿,備用, I-?資B?琢的水平用免疫印跡的灰度表示。NF-?資B的活性用20 min內(nèi)試驗(yàn)細(xì)胞和對照細(xì)胞I-?資B?琢灰度差值表示。

    1.2.2   動(dòng)物實(shí)驗(yàn)   利用食物參入法制成含2%姜黃素的顆粒飼料(Lab Diets, 5008),低溫保存。動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境為中央通氣,層流環(huán)境,恒溫(23 ℃)、恒濕,12 h明暗光照循環(huán),24 h隨意飲食環(huán)境. 動(dòng)物購入后第5天開始接受口服葡萄糖耐量試驗(yàn),并留取空腹血漿作血漿胰島素水平,和其它循環(huán)因子的檢查。在驗(yàn)證空腹血糖和胰島素水平后動(dòng)物被隨機(jī)分成兩組,并接受姜黃素治療,對照組用顆粒飼料5008作為對照。每天記錄動(dòng)物的攝食量,每3周測量空腹血糖并留取空腹血漿1次, 第6周空腹?fàn)顟B(tài)下進(jìn)行第2次口服葡萄糖耐量試驗(yàn),并留取空腹血漿。試驗(yàn)后繼續(xù)接受姜黃素治療,第7周于空腹?fàn)顟B(tài)下接受5 U/kg胰島素富強(qiáng)注射,注射后5 min整,用斷頸法迅速處死動(dòng)物, 留取肝臟經(jīng)液氮過渡后在-80 ℃低溫冰箱保存,作胰島素信號(hào)分析之用。血漿多種循環(huán)炎癥細(xì)胞因子的檢查用Linco Research 的Luminex 試劑盒并采用Luminex 200 監(jiān)測結(jié)果。

    1.2.3   免疫印跡   細(xì)胞或組織裂解液(30 mmol/L Hepes, 150 mmol/L NaCl, 1% Triton X-100, pH 7.4。蛋白酶抑制劑由1 mmol/L PMSF, 3 ?滋mol/L aprotinin, 5 ?滋mol/L pepstatin, 10 ?滋mol/L leupeptin, 25 mmol/L Benzamidin, 2 mmol/L Na-vanadate, 5 mmol/L ?茁-glycerolphosphate, 10 mmol/L NaF, 1 mmol/L Ammonium Molybdate, 30 mmol/L tetrasodium pyrophosphate, 5 mmol/L EGTA)裂解細(xì)胞, SDS-聚丙烯酰胺凝膠(6%),蛋白加熱變性后每孔加30 ?滋g, 電轉(zhuǎn)移儀將蛋白轉(zhuǎn)到PVDF膜。5%脫脂奶粉TBS-T緩沖液洗膜,加一抗, 4 ℃孵育過夜,TBS-T緩沖液洗膜,加過氧化物酶標(biāo)記的IgG 抗體(購自Amersham USA),室溫1 h,TBS-T緩沖液洗膜,加ECL 1 min,暗室顯影2~3 min后沖洗膠片。凝膠成像分析系統(tǒng)攝像。

    1.2.4   統(tǒng)計(jì)學(xué)分析   采用t檢驗(yàn)。

    2   結(jié)   果

    2. 1   姜黃素抑制NF-?資B的量效和時(shí)效關(guān)系

    Fao細(xì)胞在10 cm2 培養(yǎng)皿用10 mL在10% FBS+DMEM含有高濃度葡萄糖的培養(yǎng)液中培養(yǎng)至80%重疊,經(jīng)5 mL 0.1% BSA孵育16 h后接受姜黃素預(yù)處理:劑量關(guān)系用梯度濃度如圖1所示,時(shí)效曲線用30 μmol/L。預(yù)處理后接受鼠TNF 10 nmol/L刺激處理,于20 min后用預(yù)冷的FBS終止,并收集細(xì)胞,用于制作蛋白勻漿。用免疫印跡檢測勻漿內(nèi)I-?資?注?琢的水平。如圖1A所示:20 μmol/L姜黃素20 min預(yù)處理能夠抑制TNF刺激的I?資?注?琢的降解。從姜黃素的時(shí)效關(guān)系圖1B可見,姜黃素有效劑量30 μmol/L對NF-κB的抑制作用在30~60 min時(shí)最強(qiáng)。

    2. 2   姜黃素以逆轉(zhuǎn)肥胖小鼠的胰島素抵抗

    經(jīng)過6周姜黃素的治療,小鼠的空腹血糖水平?jīng)]有明顯下降,但空腹胰島素的水平下降約30%(圖2),口服葡萄糖耐量曲線的水平也明顯下降(圖2A),曲線下面積的比較有明顯差異(P< 0.01)。由空腹血糖和胰島素水平計(jì)算的HOMA指數(shù)[用FBS(mmol/L) ×胰島素(mmol/L)/22.5 計(jì)算]也呈明顯降低(P< 0.05,圖2C),提示小鼠對胰島素抵抗的水平得到明顯改善。

    2. 3   姜黃素對循環(huán)細(xì)胞因子的影響

    Obob 小鼠治療6周后的空腹血漿用Linco Research Luminex 試劑盒同時(shí)檢測細(xì)胞因子IL-1?茁,IL-6 和 TNF?琢的水平。如圖3所示:盡管循環(huán)胰島素的水平明顯下降,但TNF?琢 [(34.5±3.4)pg/mL vs (31.3±1.1) pg/mL]水平?jīng)]有明顯改變,與之對應(yīng),循環(huán)中IL-1?茁[(33.9±3.2)pg/mL vs (15.6±1.1) pg/mL] 和IL-6 [(72.1±9.8)pg/mL vs (47.2±5.3) pg/mL]水平明顯被抑制(P< 0.05)。

    2. 4   姜黃素為胰島素信號(hào)的增效劑

    經(jīng)胰島素刺激的肝臟組織在液氮下作粉碎并以1% Triton X100 RAPA(含有全部蛋白酶抑制劑,和蛋白磷酸酶抑制劑)緩沖液在冰點(diǎn)勻漿。經(jīng)全速4 ℃離心30 min取上清液(1 mg 蛋白質(zhì))作IRS-1和 IR聯(lián)合免疫沉淀。經(jīng)上樣緩沖液釋放的沉淀目標(biāo)蛋白質(zhì)經(jīng)6%的SDS-PAGE 分離,轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。用4G10、P85、 AKT抗體作免疫印跡。如圖4所示:胰島素刺激的IRS-1酪氨酸的磷酸化水平明顯升高, 而胰島素受體的磷酸化水平?jīng)]有明顯改變。與IRS-1酪氨酸的磷酸化水平平行,P85的磷酸化水平也明顯升高,AKT的磷酸化的水平也明顯升高。

    3   討   論

    胰島素抵抗(IR)及胰島?茁細(xì)胞功能減退是2型糖尿病發(fā)病機(jī)理的重要環(huán)節(jié)[9],目前被認(rèn)為是一個(gè)慢性非特異性炎癥過程,胰島素對胰島素敏感組織作用的缺陷(肝臟、脂肪組織、骨骼肌)會(huì)導(dǎo)致慢性、低水平炎癥狀態(tài)的惡化,任何與慢性炎癥有關(guān)的過程都會(huì)削弱胰島素的作用,作為惡性循環(huán),胰島素抵抗又會(huì)使炎癥惡化[10]。在抗炎藥物對胰島素抵抗有逆轉(zhuǎn)作用的報(bào)道之后, 我們探索新的抗炎藥物對胰島素抵抗的治療作用, 姜黃素是繼阿司匹林后又一個(gè)具有類似協(xié)同作用的活性成分[11]。在姜黃素治療6周后,盡管治療組和對照組的體重沒有明顯改善,但小鼠空腹血糖的水平明顯下降,而且胰島素的水平也明顯降低,提示胰島素的敏感性明顯升高,葡萄糖耐量曲線在治療后也明顯改善,說明小鼠整體對葡萄糖的處理能力明顯升高,即obob 小鼠的胰島素抵抗的水平得到明顯改善。這些都進(jìn)一步說明姜黃素治療改善肥胖誘導(dǎo)的胰島素抵抗。

    研究證實(shí)NF-?資B是啟動(dòng)和控制炎癥的主要核轉(zhuǎn)錄因子,在非激活條件下,NF-?資B和胞漿內(nèi)一種被稱為NF-?資B的抑制物(I-?資B)的蛋白質(zhì)結(jié)合處于無功能狀態(tài)。我們利用胰島素敏感組織來源的細(xì)胞系FAO,驗(yàn)證了姜黃素能夠抑制TNF?琢刺激的I?資B?琢的降解,繼而抑制NF-?資B的活性, 我們推測在高度肥胖NF-?資B高度激活的肥胖小鼠obob 體內(nèi),姜黃素可能具有更加明顯的改善代謝的作用。

    在NF-?資B激活的模型上我們證實(shí)炎癥激發(fā)的高水平循環(huán)細(xì)胞因子是系統(tǒng)性胰島素抵抗的原因。采用細(xì)胞因子的中和抗體可以逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗,在NF-?資B抑制型模型,胰島素敏感性升高,而且循環(huán)中細(xì)胞因子的水平較低。在肥胖發(fā)生過程中,NF-?資B 活性與動(dòng)物的體重呈正相關(guān)。Obob 小鼠的肝臟,脂肪以及淋巴組織中NF-?資B的活性水平升高,循環(huán)細(xì)胞因子的水平增高,這些都說明炎癥介質(zhì)與胰島素抵抗的關(guān)系。經(jīng)姜黃素治療的肥胖動(dòng)物循環(huán)中細(xì)胞因子IL-1, IL-6水平均明顯下降,由于IL-1和IL-6是NF-?資B活性調(diào)控的重要因子,因此,我們認(rèn)為姜黃素在胞漿內(nèi)有多個(gè)作用靶點(diǎn),通過對上述細(xì)胞因子的抑制作用,影響NF-?資B 的活性,繼而達(dá)到逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗和改善胰島素敏感性的作用。在肝臟組織的胰島素信號(hào)檢測中,胰島素刺激的IRS-1 酪氨酸磷酸化的水平明顯升高,AKT的活性也明顯增強(qiáng)。這些結(jié)果都進(jìn)一步說明肥胖小鼠胰島素的敏感性在治療后得到了改善,姜黃素能提高obob小鼠胰島素的敏感性,姜黃素作為一個(gè)免疫調(diào)節(jié)劑用于抑制免疫排斥的同時(shí),對系統(tǒng)性炎癥也有抑制作用,可能是通過抑制NF-?資B來改善胰島素敏感性的。

    【參考文獻(xiàn)】

    HUANG H C, JAN T R, YEH S F. Inhibitory effect of curcumin, an anti-inflammatory agent, on vascular smooth muscle cell proliferation[J]. Eur J Pharmacol, 1992, 221(3):381-384.

    CHEN H W, HUANG H C. Effect of curcumin on cell cycle progression and apoptosis in vascular smooth muscle cells [J]. Br J Pharmacol, 1998, 124(7):1029-1040.

    SIDHU G S, MANI H, GADDIPATI J P, et al. Curcumin enhances wound healing in streptozotocin induced diabetic rats and genetically diabetic mice[J]. Wound Repair Regen, 1999, 7(7):362-374.

    NAITO M, WU X, NOMURA H,et al. The protective effects of tetrahydrocurcumin on oxidative stress in cholesterol-fed rabbits [J]. J Atheroscler Thromb, 2002, 11(9):243-250.

    SHARMA S, CHOPRA K, KULKARNI S K,et al. Resveratrol and curcumin suppress immune response through CD28/CTLA-4 and CD80 co-stimulatory pathway [J]. Clin Exp Immunol, 2007, 147(7):155-163.

    JAGETIA G C, AGGARWAL B B. “Spicing Up” of the Immune System by Curcumin [J]. J Clin Immunol, 2007, 27(7):19-35.

    YUAN M, KONSTANTOPOULOS N, LEE J, et al. Reversal of obesity-and diet-induced insulin resistance with salicylates or targeted disruption of Ikkbeta [J]. Science, 2001, 293(5535):1673-1677.

    CAI D, YUAN M, FRANTZ D F, et al. Local and systemic insulin resistance resulting from hepatic activation of IKK-beta and NF-kappaB [J]. Nat Med, 2005, 11(7):183-190.

    程 樺, 嚴(yán) 勵(lì), 傅祖植. 糖尿病綜合研究10年(1992-2001年)[J]. 中山大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)科學(xué)版,2003,24(1):1-6.

免疫抑制劑范文第3篇

【關(guān)鍵詞】甲狀腺相關(guān)性眼??；免疫抑制劑；藥物局部注射

【中圖分類號(hào)】R581.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1004-7484（2013）01-0019-02

甲狀腺相關(guān)性眼病是在成人中常見的眼眶疾病之一，屬于一種自身的免疫性疾病，對于此種疾病的發(fā)病機(jī)制仍然沒有明確規(guī)定，對于出現(xiàn)此種疾病的患者，容易伴發(fā)甲狀腺機(jī)能紊亂疾病，從而在一定程度上加重患者的病情。此種疾病的主要臨床表現(xiàn)為流淚、畏光、眼腫、視力下降等，從而對患者的正常生活和工作造成了嚴(yán)重的影響，制約了患者生活質(zhì)量的提高[1]。因此，對于此種疾病，臨床醫(yī)生要及時(shí)給予患者對癥治療，以促進(jìn)患者病情的改善，降低患者發(fā)生病殘的機(jī)率，實(shí)現(xiàn)其生活質(zhì)量的提高。當(dāng)前，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，臨床上治療此種疾病的方法越來越多，其中，采用免疫抑制劑靜脈沖擊聯(lián)合藥物局部注射治療的效果尤為顯著[2]?，F(xiàn)在選取我院收治的甲狀腺相關(guān)性眼病患者，對其采用此種方法治療的情況進(jìn)行回顧性分析，并將回顧結(jié)果報(bào)告如下。

1　資料和方法

1.1　一般資料　選取在2007年5月-2012年8月間到我院診治的76例甲狀腺相關(guān)性眼病患者，其中，男性40例，年齡在23-59歲之間，平均年齡為38.1歲，女性36例，年齡在26-67歲之間，平均年齡為39.7歲，所有患者均經(jīng)臨床診斷為甲狀腺相關(guān)性眼病，需要進(jìn)行及時(shí)的對癥治療。將76例患者隨機(jī)分為兩組，觀察組38例，對照組38例，觀察組患者采用免疫抑制劑靜脈沖擊聯(lián)合藥物局部注射治療，對照組患者采用單純的免疫抑制劑靜脈沖擊治療，跟蹤觀察兩組患者的治療過程，并將所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄。

1.2　方法

1.2.1　診斷標(biāo)準(zhǔn)　患者表現(xiàn)出典型的甲亢癥狀，而且具有甲亢病史，甲狀腺均出現(xiàn)不同程度的重大，并伴有眼部疼痛、畏光、流淚、水腫、充血等癥狀。對所有患者的臨床癥狀和體征進(jìn)行詳細(xì)詢問并記錄，同時(shí)采用專業(yè)診斷儀對患者進(jìn)行診斷，以確診患者的病情[3]。

1.2.2　治療方法　首先給予所有患者常規(guī)治療，對于患者出現(xiàn)的并發(fā)癥進(jìn)行對癥及支持治療，以有效改善患者的各項(xiàng)身體指標(biāo)，并促進(jìn)患者的生命體征維持在穩(wěn)定狀態(tài)。在給予患者常規(guī)治療后，觀察組患者采用免疫抑制劑靜脈沖擊聯(lián)合藥物局部注射治療，給予患者口服甲亢藥物治療，同時(shí)對患者采用0.5g的甲波尼龍聯(lián)合250ml的生理鹽水、0.2g的環(huán)磷酰胺聯(lián)合500ml的生理鹽水進(jìn)行靜脈滴注治療，每天1次，對患者持續(xù)治療3天，然后間隔5-7天，再重復(fù)治療，對患者持續(xù)治療3-5個(gè)療程，然后再給予患者間隔性的局部注射50mg的環(huán)磷酰胺、5mg的地塞米松、50mg的環(huán)孢素A治療，每天1次，沖擊結(jié)束后再對患者采用二丙酸倍他米松肌內(nèi)注射治療，共7mg，半個(gè)月進(jìn)行1次，治療一個(gè)月后改為每月1次，持續(xù)治療2個(gè)月[4]。對照組患者僅采用免疫抑制劑靜脈沖擊療法進(jìn)行治療，標(biāo)準(zhǔn)同觀察組。對所有患者進(jìn)行隨訪，持續(xù)6個(gè)月-2年，對患者的血常規(guī)、尿常規(guī)、腎功能、肝功能、電解質(zhì)等指標(biāo)進(jìn)行跟蹤觀察，以評(píng)估患者病情的改善情況。

1.3　療效標(biāo)準(zhǔn)　顯效：患者的臨床癥狀和體征明顯消失，眼痛、水腫緩解，視力有較大程度的恢復(fù)，對于正常生活和工作影響較小。有效：患者的臨床癥狀和體征有所消失，眼痛、水腫有所緩解，視力有一定程度的恢復(fù)，對于正常生活和工作有一定的影響。無效：患者的臨床癥狀和體征沒有消失，病情呈現(xiàn)出不斷加重的趨勢，對患者的正常生活和工作造成了嚴(yán)重影響[5]。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析　采用SPSS　13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)，對于兩組患者的年齡、性別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，差異較小，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。對于兩組患者的治療效果進(jìn)行檢驗(yàn)，差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

2 結(jié)果

通過對所有患者實(shí)行一系列的治療，其病情均得到了較大程度的改善，觀察組38例患者中，顯效22例，有效12例，無效4例，治療有效率為89.5％，對照組38例患者中，顯效16例，有效11例，無效11例，治療有效率為71.1％。對觀察組和對照組患者的臨床治療結(jié)果進(jìn)行分析對比可知，觀察組患者的治療效果要顯著優(yōu)于對照組患者的治療效果，對于患者病情的改善和生活質(zhì)量的提高有著較大的幫助作用。見表1

3　討論

甲狀腺相關(guān)性眼病是在臨床上較為常見和多發(fā)的一種眼科疾病，導(dǎo)致患者出現(xiàn)眼痛、視力下降、充血、水腫等臨床癥狀和體征，致使患者需要承受較大的痛苦，嚴(yán)重的還會(huì)危及到患者的生命安全，從而制約到其生活質(zhì)量的提高。對此，臨床醫(yī)生應(yīng)當(dāng)及時(shí)給予患者準(zhǔn)確診斷，并對患者實(shí)行對癥治療，以促進(jìn)患者病情的改善，降低患者的死亡率，實(shí)現(xiàn)其生活質(zhì)量的提高[6]。

在本文的研究過程中，首先給予患者基礎(chǔ)治療，以有效改善患者的各項(xiàng)身體指標(biāo)，并促進(jìn)患者的生命體征維持在穩(wěn)定狀態(tài)。在此基礎(chǔ)上，觀察組患者采用免疫抑制劑靜脈沖擊聯(lián)合藥物局部注射治療，效果顯著，其中的甲波尼龍和地塞米松能夠?qū)C(jī)體細(xì)胞功能起到良好的抑制作用，同時(shí)可以對淋巴細(xì)胞在免疫活動(dòng)中的影響起到破壞作用，從而緩解炎性介質(zhì)對患者的影響，以逐步的改善患者的臨床癥狀和體征，促進(jìn)患者視力的快速恢復(fù)。此種治療方法不僅對于患者的治療效果顯著，而且對于患者的副作用較小，從而能夠有效提高患者的生活質(zhì)量，減輕患者及其家庭的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神壓力。對照組患者采用單純的免疫抑制劑靜脈沖擊治療，雖然對于患者病情的改善也有一定的幫助，但效果較差，難以實(shí)現(xiàn)患者的快速康復(fù)。因此，免疫抑制劑聯(lián)合藥物治療的方法值得在臨床上推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

[1]　石勇銓，劉志民，顧明君，鄒俊杰，徐潔，彭玲，林朗. 免疫抑制劑球后注射治療甲狀腺相關(guān)性眼病的療效和安全性觀察[J].　上海醫(yī)學(xué).　2009，100（07）：12-13.

[2]　顧明君，劉志民，朱莉，沈玉美，石勇銓，徐潔. 奧曲肽和潑尼松治療甲狀腺相關(guān)性眼病的隨機(jī)對照研究[J].　第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào).　2008，85（05）：88-89.

[3]　王堅(jiān)，王揚(yáng)天，邵加慶，趙明，王曉，杜宏. 霉酚酸酯治療甲狀腺相關(guān)性眼病臨床對照研究[J].　醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào).　2010，65（12）：66-67.

[4]　張道彩，唐金韌. 免疫抑制劑沖擊療法治療甲狀腺相關(guān)性眼病療效觀察[J].　基層醫(yī)學(xué)論壇.　2007，29（17）：103-104.

[5]　劉志民，顧明君，鄒俊杰，石勇銓，徐潔，沈玉美，林朗，談雯，段繼才. 免疫抑制劑等藥物局部注射治療甲狀腺功能亢進(jìn)的療效及安全性研究[J].　上海醫(yī)學(xué).　2009，112（01）：77-78.

[6]　王宇鷹，王養(yǎng)忠. 局部注射治療甲狀腺相關(guān)眼病32例報(bào)告[J].　實(shí)用診斷與治療雜志.　2007，66（09）：89-90.

免疫抑制劑范文第4篇

【關(guān)鍵詞】 姜黃素； NF-?資B； 胰島素； 抵抗 )

Abstract： 【Objective】 To investigate inhibitory effect of curcumin and its mechanism on insulin resistance. 【Methods】 Curcumin co-operated high fat diets were tested for the effect of curcumin on obesity induced insulin resistance in rodent model. Transcription factor I and circulating cytokines were also detected after curcumin treatment. 【Results】 （1） Curcumin inhibited TNF?琢-stimulated NF-?資B activation in Fao cells. （2）The fasting plasma glucose level was not obviously decreased after the treatment of curcumin， but the level of fasting insulin decreased by about 30%. Furthermore， the level of glucose tolerance curve dropped significantly. （3） The level of TNF?琢［(34.5±3.4)pg/mL vs (31.3±1.1) pg/mL] in circulation was not obviously changed， but the level of IL-1?茁 [(33.9±3.2) pg/mL vs (15.6±1.1) pg/mL] and IL-6 [(72.1±9.8) pg/mL vs (47.2±5.3) pg/mL] was suppressed dramatically. （4） IRS-1 tyrosine phosphorylation levels stimulated by insulin obviously increased， but the phosphorylation level of insulin receptor did not change. Being parallel with tyrosine phosphorylation levels of IRS-1， the phosphorylation levels of P85 and AKT increased accordingly. Significantly improved insulin sensitivity was observed in groups with curcumin. 【Conclusion】 Curcumin inhibits NF-?資B dependent inflammatory pathway and reverses obesity-induced insulin resistance.

Key words: curcumin， NF-?資B， insulin， resistance

姜黃（Curcuma longa L．）是常用中藥，臨床上用于活血、行氣、通經(jīng)、止痛。姜黃素（curcumin）是一種黃素，從姜黃中提取得到的主要有效成分。近年來，大量研究發(fā)現(xiàn)它具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗炎及抗腫瘤、抗動(dòng)脈粥樣硬化等生理和藥理作用［1-4］。在實(shí)驗(yàn)室資料中姜黃素是良好的免疫調(diào)節(jié)劑，并有結(jié)果提示姜黃素可以抑制宿主抗移植物反應(yīng)，而且提高受體動(dòng)物的存活率[5，6]。在實(shí)驗(yàn)研究中，炎癥又與胰島素抵抗密切相關(guān)［7，8］。炎癥被證實(shí)是代謝綜合征的共同土壤，聯(lián)想到許多抗炎藥物如阿司匹林可以逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗，本文嘗試?yán)媒S素治療肥胖合并極度胰島素抵抗的炎癥模型，并對姜黃素逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗的機(jī)制作初步探討。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 姜黃素 購于印度亞洲公司（純度99%）。

1.1.2 動(dòng)物 Obob雄性小鼠16只，8周齡、空腹體質(zhì)量（33～38 g)，購自南京國家模式動(dòng)物中心，用含脂肪6.4%的標(biāo)準(zhǔn)飼料飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)前1周紀(jì)錄小鼠的飼料攝取、空腹血糖、空腹胰島素水平及體量等。

1.1.3 FAO細(xì)胞 購自 The American Type Culture Collection（ATCC）。

1.1.4 試劑 IR、IRS-1、AKT、P85 多克隆抗體由Steven Shoelson實(shí)驗(yàn)室（Joslin Diabetes Center， Harvard)提供。FBS TNF?琢、胰島素購自Sigma， St. Louis　USA， I-?資B?琢 抗體，IKK?酌抗體，購于 Santa Cruz， CA， GST-I-?資B(1-54) 底物由Boston Biologicals， Wellesley， MA合成。

1.2 方 法

1.2.1 體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn) FAO細(xì)胞使用培養(yǎng)液 DMEM（購自 Gibco公司），細(xì)胞置于37 ℃，5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在10 cm 培養(yǎng)皿用10 mL DMEM+10%FBS含有高濃度葡萄糖（25 mmol/L）的培養(yǎng)液中培養(yǎng)至80％重疊率，經(jīng)5 mL 0.1％BSA孵育16 h后接受不同濃度（0～40 umol/L）的姜黃素預(yù)處理，然后接受鼠TNF?琢 10 nmol/L刺激處理，于20 min后用預(yù)冷的PBS終止，并收集細(xì)胞，用于制作蛋白勻漿，備用， I-?資B?琢的水平用免疫印跡的灰度表示。NF-?資B的活性用20 min內(nèi)試驗(yàn)細(xì)胞和對照細(xì)胞I-?資B?琢灰度差值表示。

1.2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 利用食物參入法制成含2％姜黃素的顆粒飼料(Lab Diets， 5008)，低溫保存。動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境為中央通氣，層流環(huán)境，恒溫(23 ℃)、恒濕，12 h明暗光照循環(huán)，24 h隨意飲食環(huán)境. 動(dòng)物購入后第5天開始接受口服葡萄糖耐量試驗(yàn)，并留取空腹血漿作血漿胰島素水平，和其它循環(huán)因子的檢查。在驗(yàn)證空腹血糖和胰島素水平后動(dòng)物被隨機(jī)分成兩組，并接受姜黃素治療，對照組用顆粒飼料5008作為對照。每天記錄動(dòng)物的攝食量，每3周測量空腹血糖并留取空腹血漿1次， 第6周空腹?fàn)顟B(tài)下進(jìn)行第2次口服葡萄糖耐量試驗(yàn)，并留取空腹血漿。試驗(yàn)后繼續(xù)接受姜黃素治療，第7周于空腹?fàn)顟B(tài)下接受5 U/kg胰島素富強(qiáng)注射，注射后5 min整，用斷頸法迅速處死動(dòng)物， 留取肝臟經(jīng)液氮過渡后在-80 ℃低溫冰箱保存，作胰島素信號(hào)分析之用。血漿多種循環(huán)炎癥細(xì)胞因子的檢查用Linco Research 的Luminex 試劑盒并采用Luminex 200 監(jiān)測結(jié)果。

1.2.3 免疫印跡 細(xì)胞或組織裂解液（30 mmol/L Hepes， 150 mmol/L NaCl， 1% Triton X-100， pH 7.4。蛋白酶抑制劑由1 mmol/L PMSF， 3 ?滋mol/L aprotinin， 5 ?滋mol/L pepstatin， 10 ?滋mol/L leupeptin， 25 mmol/L Benzamidin， 2 mmol/L Na-vanadate， 5 mmol/L ?茁-glycerolphosphate， 10 mmol/L NaF， 1 mmol/L Ammonium Molybdate， 30 mmol/L tetrasodium pyrophosphate， 5 mmol/L EGTA）裂解細(xì)胞， SDS-聚丙烯酰胺凝膠（6%），蛋白加熱變性后每孔加30 ?滋g， 電轉(zhuǎn)移儀將蛋白轉(zhuǎn)到PVDF膜。5%脫脂奶粉TBS-T緩沖液洗膜，加一抗， 4 ℃孵育過夜，TBS-T緩沖液洗膜，加過氧化物酶標(biāo)記的IgG 抗體(購自Amersham　USA)，室溫1 h，TBS-T緩沖液洗膜，加ECL 1 min，暗室顯影2～3 min后沖洗膠片。凝膠成像分析系統(tǒng)攝像。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2. 1 姜黃素抑制NF-?資B的量效和時(shí)效關(guān)系

Fao細(xì)胞在10 cm2 培養(yǎng)皿用10 mL在10% FBS+DMEM含有高濃度葡萄糖的培養(yǎng)液中培養(yǎng)至80%重疊，經(jīng)5 mL 0.1% BSA孵育16 h后接受姜黃素預(yù)處理：劑量關(guān)系用梯度濃度如圖1所示，時(shí)效曲線用30 μmol/L。預(yù)處理后接受鼠TNF 10 nmol/L刺激處理，于20 min后用預(yù)冷的FBS終止，并收集細(xì)胞，用于制作蛋白勻漿。用免疫印跡檢測勻漿內(nèi)I-?資?注?琢的水平。如圖1A所示：20 μmol/L姜黃素20 min預(yù)處理能夠抑制TNF刺激的I?資?注?琢的降解。從姜黃素的時(shí)效關(guān)系圖1B可見，姜黃素有效劑量30 μmol/L對NF-κB的抑制作用在30～60 min時(shí)最強(qiáng)。

2. 2 姜黃素以逆轉(zhuǎn)肥胖小鼠的胰島素抵抗

經(jīng)過6周姜黃素的治療，小鼠的空腹血糖水平?jīng)]有明顯下降，但空腹胰島素的水平下降約30％（圖2），口服葡萄糖耐量曲線的水平也明顯下降（圖2A），曲線下面積的比較有明顯差異（P< 0.01）。由空腹血糖和胰島素水平計(jì)算的HOMA指數(shù)［用FBS(mmol/L) ×胰島素（mmol/L)/22.5 計(jì)算］也呈明顯降低（P＜ 0.05，圖2C），提示小鼠對胰島素抵抗的水平得到明顯改善。

2. 3 姜黃素對循環(huán)細(xì)胞因子的影響

Obob 小鼠治療6周后的空腹血漿用Linco Research Luminex 試劑盒同時(shí)檢測細(xì)胞因子IL-1?茁，IL-6 和 TNF?琢的水平。如圖3所示：盡管循環(huán)胰島素的水平明顯下降，但TNF?琢 ［(34.5±3.4）pg/mL vs （31.3±1.1） pg/mL］水平?jīng)]有明顯改變，與之對應(yīng)，循環(huán)中IL-1?茁［（33.9±3.2）pg/mL vs （15.6±1.1） pg/mL］ 和IL-6 ［(72.1±9.8)pg/mL vs （47.2±5.3） pg/mL］水平明顯被抑制（P< 0.05）。

2. 4 姜黃素為胰島素信號(hào)的增效劑

經(jīng)胰島素刺激的肝臟組織在液氮下作粉碎并以1％ Triton X100 RAPA（含有全部蛋白酶抑制劑，和蛋白磷酸酶抑制劑）緩沖液在冰點(diǎn)勻漿。經(jīng)全速4 ℃離心30 min取上清液（1 mg 蛋白質(zhì)）作IRS-1和 IR聯(lián)合免疫沉淀。經(jīng)上樣緩沖液釋放的沉淀目標(biāo)蛋白質(zhì)經(jīng)6％的SDS-PAGE 分離，轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。用4G10、P85、 AKT抗體作免疫印跡。如圖4所示：胰島素刺激的IRS-1酪氨酸的磷酸化水平明顯升高，　而胰島素受體的磷酸化水平?jīng)]有明顯改變。與IRS-1酪氨酸的磷酸化水平平行，P85的磷酸化水平也明顯升高，AKT的磷酸化的水平也明顯升高。

3 討 論

胰島素抵抗（IR）及胰島?茁細(xì)胞功能減退是2型糖尿病發(fā)病機(jī)理的重要環(huán)節(jié)［9］，目前被認(rèn)為是一個(gè)慢性非特異性炎癥過程，胰島素對胰島素敏感組織作用的缺陷（肝臟、脂肪組織、骨骼肌）會(huì)導(dǎo)致慢性、低水平炎癥狀態(tài)的惡化，任何與慢性炎癥有關(guān)的過程都會(huì)削弱胰島素的作用，作為惡性循環(huán)，胰島素抵抗又會(huì)使炎癥惡化[10]。在抗炎藥物對胰島素抵抗有逆轉(zhuǎn)作用的報(bào)道之后， 我們探索新的抗炎藥物對胰島素抵抗的治療作用， 姜黃素是繼阿司匹林后又一個(gè)具有類似協(xié)同作用的活性成分[11]。在姜黃素治療6周后，盡管治療組和對照組的體重沒有明顯改善，但小鼠空腹血糖的水平明顯下降，而且胰島素的水平也明顯降低，提示胰島素的敏感性明顯升高，葡萄糖耐量曲線在治療后也明顯改善，說明小鼠整體對葡萄糖的處理能力明顯升高，即obob 小鼠的胰島素抵抗的水平得到明顯改善。這些都進(jìn)一步說明姜黃素治療改善肥胖誘導(dǎo)的胰島素抵抗。

研究證實(shí)NF-?資B是啟動(dòng)和控制炎癥的主要核轉(zhuǎn)錄因子，在非激活條件下，NF-?資B和胞漿內(nèi)一種被稱為NF-?資B的抑制物（I-?資B）的蛋白質(zhì)結(jié)合處于無功能狀態(tài)。我們利用胰島素敏感組織來源的細(xì)胞系FAO，驗(yàn)證了姜黃素能夠抑制TNF?琢刺激的I?資B?琢的降解，繼而抑制NF-?資B的活性， 我們推測在高度肥胖NF-?資B高度激活的肥胖小鼠obob 體內(nèi)，姜黃素可能具有更加明顯的改善代謝的作用。

在NF-?資B激活的模型上我們證實(shí)炎癥激發(fā)的高水平循環(huán)細(xì)胞因子是系統(tǒng)性胰島素抵抗的原因。采用細(xì)胞因子的中和抗體可以逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗，在NF-?資B抑制型模型，胰島素敏感性升高，而且循環(huán)中細(xì)胞因子的水平較低。在肥胖發(fā)生過程中，NF-?資B 活性與動(dòng)物的體重呈正相關(guān)。Obob 小鼠的肝臟，脂肪以及淋巴組織中NF-?資B的活性水平升高，循環(huán)細(xì)胞因子的水平增高，這些都說明炎癥介質(zhì)與胰島素抵抗的關(guān)系。經(jīng)姜黃素治療的肥胖動(dòng)物循環(huán)中細(xì)胞因子IL-1， IL-6水平均明顯下降，由于IL-1和IL-6是NF-?資B活性調(diào)控的重要因子，因此，我們認(rèn)為姜黃素在胞漿內(nèi)有多個(gè)作用靶點(diǎn)，通過對上述細(xì)胞因子的抑制作用，影響NF-?資B 的活性，繼而達(dá)到逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗和改善胰島素敏感性的作用。在肝臟組織的胰島素信號(hào)檢測中，胰島素刺激的IRS-1 酪氨酸磷酸化的水平明顯升高，AKT的活性也明顯增強(qiáng)。這些結(jié)果都進(jìn)一步說明肥胖小鼠胰島素的敏感性在治療后得到了改善，姜黃素能提高obob小鼠胰島素的敏感性，姜黃素作為一個(gè)免疫調(diào)節(jié)劑用于抑制免疫排斥的同時(shí)，對系統(tǒng)性炎癥也有抑制作用，可能是通過抑制NF-?資B來改善胰島素敏感性的。

參考文獻(xiàn)

HUANG H C， JAN T R， YEH S F. Inhibitory effect of curcumin， an anti-inflammatory agent， on vascular smooth muscle cell proliferation[J]. Eur J Pharmacol， 1992， 221(3):381-384.

CHEN H W， HUANG H C. Effect of curcumin on cell cycle progression and apoptosis in vascular smooth muscle cells [J]. Br J Pharmacol， 1998， 124(7):1029-1040.

SIDHU G S， MANI H， GADDIPATI J P， et al. Curcumin enhances wound healing in streptozotocin induced diabetic rats and genetically diabetic mice[J]. Wound Repair Regen， 1999， 7(7):362-374.

NAITO M， WU X， NOMURA H，et al. The protective effects of tetrahydrocurcumin on oxidative stress in cholesterol-fed rabbits [J]. J Atheroscler Thromb， 2002， 11(9):243-250.

SHARMA S， CHOPRA K， KULKARNI S K，et al. Resveratrol and curcumin suppress immune response through CD28/CTLA-4 and CD80 co-stimulatory pathway [J]. Clin Exp Immunol， 2007， 147(7):155-163.

JAGETIA G C， AGGARWAL B B. “Spicing Up” of the Immune System by Curcumin [J]. J Clin Immunol， 2007， 27(7):19-35.

YUAN M， KONSTANTOPOULOS N， LEE J， et al. Reversal of obesity-and diet-induced insulin resistance with salicylates or targeted disruption of Ikkbeta [J]. Science， 2001， 293(5535):1673-1677.

CAI D， YUAN M， FRANTZ D F， et al. Local and systemic insulin resistance resulting from hepatic activation of IKK-beta and NF-kappaB [J]. Nat Med， 2005， 11(7):183-190.

程 樺， 嚴(yán) 勵(lì)， 傅祖植. 糖尿病綜合研究10年（1992-2001年）［J］． 中山大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)科學(xué)版，2003，24（1）：1-6.

FERN CNDEZ-REAL J M， RICART W. Insulin resistance and chronic caridovascular inflammatory syndrome [J]. Endocrine Reviews， 2003， 24(4):278-301.

免疫抑制劑范文第5篇

[關(guān)鍵詞] 皮膚移植；免疫抑制；雷公藤內(nèi)酯醇；作用機(jī)制

[中圖分類號(hào)] R657.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2014）08（b）-0012-04

Immunosuppressive effect and mechanism of Triptolide on skin allografts in mice

LIANG Kuo1 LIU Shuang1 CUI Yeqing1 SUN Haichen1 LUO Bin1 WAN Suigui2 SUN Xuejing2 LI Fei1

1.Department of General Surgery， Xuanwu Hospital of Capital Medical University， Beijing 100053， China； 2.Department of Hematology， Xuanwu Hospital of Capital Medical University， Beijing 100053， China

[Abstract] Objective To investigate the immunosuppressive effect and the possible mechanism of Triptolide on skin allografts in murine model. Methods BALB/c mice to C57BL/6 mice skin allografting models were created. The recipients were divided into three groups. The mice in the treatment groups were injected intraperitoneally with Triptolide at 100 μg/kg （low-dose Triptolide group， L-Tri group） or 200 μg/kg （high-dose Triptolide group， H-Tri group） daily in the first 6 days （0-5 days）； while the mice in control group were given vehicles （1% Tween 80）. The median survival time of skin allografts in each group was monitored. The proportion of CD4+ CD25+ Foxp3+ regulatory T cells in spleen tissue were tested by flow cytometry. Results The median survival time of skin allografts in the control group， L-Tri group and H-Tri group were （8.3±1.2）， （12.4±1.9） d and （14.9±2.2） d respectively. The percentage of CD4+ CD25+ Foxp3+ regulatory T cells in spleen tissues of three groups were （5.6±0.8） %， （12.6±1.5）% and （16.1±2.1）% respectively. Compared with control group， the L-Tri group and H-Tri group show significantly prolonged skin allograft survival time （P < 0.05）， increased percentage of CD4+ CD25+ Foxp3+ regulatory T cells （P < 0.05）. Conclusion Tri can inhibit immune rejection， prolong the skin allograft survival time in mice. The anti-rejection effect of Tri may be attributed to the upregulation of regulatory T cells. In addition， the immunosuppressive effect of triptolide shows dose-dependent.

[Key words] Skin transplantation； Immunosuppression； Triptolide； Mechanism

同種器官移植已成為治療人類腎臟、心臟及肝臟等嚴(yán)重疾病的一種重要手段。但是，由于目前臨床應(yīng)用的免疫抑制劑長期使用時(shí)具有一定的毒副作用，因此研制開發(fā)新型、高效、低毒的免疫抑制劑，一直是臨床關(guān)注的熱點(diǎn)[1-2]。雷公藤內(nèi)酯醇（Triptolide，Tri）是從我國傳統(tǒng)中藥雷公藤中分離出來的含有三個(gè)環(huán)氧基的二萜內(nèi)酯化合物，具有較強(qiáng)的抗炎、抗腫瘤和免疫抑制作用[3-4]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)其在心臟[5-6]、腎臟[7]、肝臟[8]、肺臟[9]、胰島[10-11]等多種移植模型中均具有較好的抗排斥作用，是一種極有潛力的免疫抑制藥物。但目前國內(nèi)外學(xué)者對于Tri在移植中的抗排斥作用機(jī)制仍然存在較多爭論[12]。本研究旨在通過觀察Tri在小鼠同種異體皮膚移植中的抗排斥效果，初步探討其可能的免疫作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

近交系雄性BALB/c小鼠（H-2d）8只為供體，雄性C57BL/6（H-2b）24只為受體，均為8～12周齡，體重22～25 g，購自北京維通利華公司。飼養(yǎng)于恒溫（25～27℃）、恒定濕度（45%～55%）、無特定病原體（SPF級(jí)）環(huán)境中。

1.2 主要試劑

Tri購自中國藥品生物制品檢定所，吐溫80購自北京思語偉業(yè)生物公司，鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）、膠原酶Ⅴ購自Sigma公司，F(xiàn)icoll 400購自瑞典Pharmacia公司，胎牛血清購自Gibco公司，免疫組化試劑購自邁新公司。藻紅蛋白（PE）標(biāo)記的抗小鼠Foxp3單克隆抗體（mAb）、異硫氰酸熒光素（ FITC）標(biāo)記的抗小鼠CD4單克隆抗體（mAb）、別藻青蛋白（APC）標(biāo)記的抗小鼠CD25單克隆抗體（mAb）等免疫熒光染料均購自eBioscience公司。

1.3 皮膚移植與分組

供體（BALB/c）脫椎法處死后，取尾部皮膚，剪成0.8 cm×0.8 cm大小的皮片置于無菌PBS中備用。C57BL/6受鼠給予4%水合氯醛腹腔注射（10 μL/g）麻醉。制備受鼠背部移植床，將供體皮片置于移植床，6-0絲線縫合固定，皮片表面敷蓋凡士林油紗并用無菌紗布包扎覆蓋，創(chuàng)可貼包扎固定，單籠飼養(yǎng)。3 d后去掉凡士林油紗和無菌紗布，逐日觀察移植物排斥狀況。以皮片結(jié)痂、變硬、壞死、縮小到初始測量尺寸的50%時(shí)，定義為移植皮膚被排斥標(biāo)準(zhǔn)[13]。術(shù)后分成對照組和治療組[包括L-Tri組（100 μg/kg）和H-Tri組（200 μg/kg）]。治療組術(shù)后連續(xù)6 d腹腔注射Tri，對照組給予等體積溶劑（1%吐溫80）。

1.4 流式細(xì)胞術(shù)

移植術(shù)后第7天，分別制備各組小鼠的脾淋巴細(xì)胞懸液，將濃度調(diào)制5×106/mL。然后取1 mL細(xì)胞懸液加入FITC-抗CD4單抗（0.25 μg/106個(gè)細(xì)胞）和APC-抗CD25單抗（0.125 μg/106個(gè)細(xì)胞），室溫共孵育15 min，F(xiàn)oxp3-PE標(biāo)記參照試劑盒操作指南進(jìn)行破膜標(biāo)記。標(biāo)記后的細(xì)胞用冷PBS緩沖液（pH 7.4）洗2次。1%多聚甲醛300 μL重懸固定，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106個(gè)/mL，取400 μL上FACScan流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。每份標(biāo)本均設(shè)同型對照，取2次檢測結(jié)果均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。以流式細(xì)胞儀雙色、三色分析法分別分析CD4+ CD25+ Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件及Graphpad Prism 5.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Tri對移植皮膚存活時(shí)間的影響

對照組移植皮膚平均存活時(shí)間為（8.3±1.2）d，L-Tri組為（12.4±1.9）d，H-Tri組為（14.9±2.2）d；與對照組相比，L-Tri組和H-Tri組移植皮膚平均存活時(shí)間明顯延長，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）；與L-Tri組相比，H-Tri組移植皮膚平均存活時(shí)間明顯延長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見圖1。

A B

A：三組移植皮膚的生存曲線；B：三組移植皮膚的平均生存時(shí)間，*P < 0.05，**P < 0.01

圖1 Tri對小鼠同種異體移植皮膚生存時(shí)間的影響

2.2 流式細(xì)胞檢測結(jié)果

皮膚移植術(shù)后第7天，Tri處理組脾細(xì)胞CD4+ CD25+ Foxp3+ T reg的比例明顯增加，H-Tri組為（16.1±2.1）%，明顯高于L-Tri組[（12.6±1.5）%]（P=0.00），且兩組均明顯高于對照組[（5.6±0.8）%]（P=0.01）。見圖2。

3 討論

器官移植已經(jīng)成為治療終末期器官衰竭的最有效手段，但移植術(shù)后的免疫排斥反應(yīng)卻長期影響著移植效果和患者的生存質(zhì)量，免疫抑制藥物的合理應(yīng)用是移植成敗的關(guān)鍵。目前常用的免疫抑制劑的作用效果仍不十分理想，長期應(yīng)用可造成肝、腎功能受損、感染風(fēng)險(xiǎn)增加、腫瘤發(fā)生率增加等一系列不良反應(yīng)。因此，研究開發(fā)新型、低毒、高效的抗排斥藥物，探索更為有效的免疫抑制方案仍然是當(dāng)前迫切需要解決的問題[6]。

近幾年的研究顯示，Tri在體內(nèi)、體外均具有較好的免疫抑制活性[14]，在器官移植領(lǐng)域有一定應(yīng)用前景。在大鼠同種異體心臟移植模型中，Tri能夠明顯延長移植心臟的存活時(shí)間，并與他克莫司和環(huán)孢霉素均具有明顯協(xié)同作用[5]。在小鼠同種異體心臟移植研究中，Tri能夠延長移植心臟存活時(shí)間，并與雷帕霉素顯示出了良好的協(xié)同作用[6]。有學(xué)者研究顯示，在大鼠同種異體腎臟移植中，Tri同樣能夠明顯延長移植腎臟的存活時(shí)間[7]。鄭樹森等[8]研究證實(shí)，雷公藤多苷能夠輕度抑制大鼠異種原位肝移植排斥反應(yīng)。He等[9]研究發(fā)現(xiàn)，Tri能夠減輕移植肺臟的缺血再灌注損傷，改善移植肺功能。本研究將Tri應(yīng)用于小鼠同種異體皮膚移植模型，觀察到Tri能夠抑制其免疫排斥反應(yīng)，有效延長移植物的存活時(shí)間，并且隨著Tri劑量的增加，其免疫抑制作用也明顯增強(qiáng)，提示Tri的抗排斥作用與藥物劑量有一定相關(guān)性。但Tri發(fā)揮免疫抑制作用的機(jī)制尚未完全闡明，國內(nèi)外學(xué)者仍然存在較多的爭論。

近年來研究顯示，作為一種新的免疫抑制劑，Tri可抑制T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)T細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞（DC）的凋亡，抑制抗原遞呈細(xì)胞的抗原遞呈，抑制DC表達(dá)主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類和Ⅱ類分子[15]，抑制IL-2、IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α等細(xì)胞因子的產(chǎn)生[16]。CD4+ CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是Sakaguchi 等于1995 年首先發(fā)現(xiàn)，存在于外周血及脾臟組織的CD4+ T細(xì)胞中的一類具有獨(dú)特抑制功能的T細(xì)胞亞群。在小鼠體內(nèi)占CD4+ T細(xì)胞的5%～10%，而在人體內(nèi)只占2%～3%。近年來研究發(fā)現(xiàn)，CD4+ CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞作為一群具有免疫負(fù)調(diào)控功能的T細(xì)胞亞群，通過抑制其他免疫效應(yīng)細(xì)胞的激活和增殖，對抑制移植排斥反應(yīng)和誘導(dǎo)移植免疫耐受起重要作用[17-18]，而輸注CD4+ CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可以促進(jìn)移植物存活[19]。在同種移植中，有研究證實(shí)，CD4+ CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對于預(yù)防或糾正慢性移植物抗宿主反應(yīng)（GVHD）有重要作用[20]。許多研究表明，CD4+ CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亦可以影響巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞等的功能[6，21]。Foxp3（forkhead/winged helix transciption factor）作為叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子，為CD4+CD25+ T細(xì)胞的發(fā)育和功能所必需[22]。Tri能夠促進(jìn)Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的產(chǎn)生[23-24]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，給予皮膚移植小鼠應(yīng)用不同劑量Tri，能夠提高受體小鼠脾臟CD4+ CD25+ Foxp3+ T細(xì)胞的數(shù)量，延長移植皮膚的存活時(shí)間，并具有一定劑量依賴效應(yīng)。由此推斷，Tri可能通過增加移植受體CD4+ CD25+ Foxp3+ T細(xì)胞的數(shù)量，誘導(dǎo)免疫耐受，從而發(fā)揮延長移植物存活時(shí)間的作用。但Tri誘導(dǎo)CD4+ CD25+ Foxp3+ T細(xì)胞上調(diào)的分子機(jī)制目前尚不清楚，還需進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Hardinger KL，Brennan DC. Novel immunosuppressive agents in kidney transplantation [J]. World J Transplant，2013，3（4）：68-77.

[2] Silva HT Jr，F(xiàn)elipe CR，Garcia VD，et al. Planned randomized conversion from tacrolimus to sirolimus-based immunosuppressive regimen in de novo kidney transplant recipients [J]. Am J Transplant，2013，13（12）：3155-3163.

[3] 任曉榮，樊紅翠，尉杰忠，等.雷公藤內(nèi)酯醇對EAE小鼠脊髓IL-10、IFN-γ表達(dá)的影響[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010， 7（15）：18-20.

[4] 張劍宇，彭嵐，劉定華.雷公藤對重癥肌無力外周血T淋巴細(xì)胞亞群的影響[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，5（6）：80-81.

[5] Li R，Takazawa K，Suzuki H，et al. Synergistic effect of triptolide and tacrolimus on rat cardiac allotransplantation [J]. Jpn Heart J，2004，45（4）：657-665.

[6] Liu Y，Chen Y，Liu FQ，et al. Combined treatment with triptolide and rapamycin prolongs graft survival in a mouse model of cardiac transplantation [J]. Transpl Int，2008，21（5）：483-494.

[7] Zhang G，Chen J，Liu Y，et al.Triptolide-conditioned dendritic cells induce allospecific T-cell regulation and prolong renal graft survival [J]. J Invest Surg，2013，26（4）：191-199.

[8] 鄭樹森，郭華，俞軍，等.雷公藤多甙抑制大鼠異種肝移植急性排斥的研究[J].中華器官移植雜志，2003，24（6）：223-225.

[9] He JK，Yu SD，Zhu HJ，et al. Triptolide inhibits NF-kappaB activation and reduces injury of donor lung induced by ischemia/reperfusion [J]. Acta Pharmacol Sin，2007，28（12）：1919-1923.

[10] Huang SH，Lin GJ，Chu CH，et al. Triptolide ameliorates autoimmune diabetes and prolongs islet graft survival in nonobese diabetic mice [J]. Pancreas，2013，42（3）：442-451.

[11] Xin MJ，Cui SH，Liu S，et al. Triptolide prolonged allogeneic islet graft survival in chemically induced and spontaneously diabetic mice without impairment of islet function [J]. Hepatobiliary Pancreat Dis Int，2010，9（3）：312-318.

[12] Wang Y，Jia L，Wu CY. Triptolide inhibits the diferentiation of Th17 cells and suppresses collagen-induced arthritis[J]. Scand J Immunol，2008，68（4）：383-390.

[13] 張進(jìn)生，管德林，許建軍，等.1，25-（OH）2D3對小鼠皮膚移植后脾T細(xì)胞亞群、MLR及NK細(xì)胞活性的影響[J].中華器官移植雜志，2003，24（4）：226-229.

[14] Han R，Rostami-Yazdi M，Gerdes S，et al. Triptolide in the treatment of psoriasis and other immune-mediated inflammatory diseases [J]. Br J Clin Pharmacol，2012，74：424-436.

[15] Zhu K，Shen Q，Chang H，et al. Triptolide affects the differentiation，maturation and function of human dendritic cells [J]. Int Immunopharmaco1，2005，5（9）：1415-1426.

[16] Liu Q. Triptolide and its expanding multiple pharmacological functions [J]. Int Immunopharmacol，2011，11（3）：377-383.

[17] Oliver K，Lisa M，Ebert，et al. Flt3 ligand expands CD4+FoxP3+ regulatory T cells in human subjects [J]. European Journal of Immunology，2013，43（2）：533-539.

[18] Jiang X，Sun W，Guo D，et al. Cardiac allograft acceptance induced by blockade of CD40-CD40L costimulation is dependent on CD4（+）CD25（+）regulatory T cells [J]. Surgery，2011，149（3）：336-346.

[19] Joffre O，Santolaria T，Calise D，et al. Prevention of acute and chronic allograft rejection with CD4+ CD25+ Foxp3+ regulatory T lymphocytes [J]. Nat Med，2008，14（1）：88-92.

[20] Piotr T，Anna DM，Maria B，et al. Treatment of Graft-versus-Host Disease with Naturally Occurring T Regulatory Cells [J]. BioDrugs，2013，27（6）：605-614.

[21] Trzonkowski P，Szarynska M，Mysliwska J，et al. Ex vivo expansion of CD4（+）CD25（+）T regulatory cells for immune-suppressive therapy [J]. Cytometry，2009，75（3）：175-188.

[22] Hori S，Nomura T，Sakaguchi S. Control of regulatory T cell development by the transcription factor FoxP3 [J]. Science，2003，299：1057-1061.

[23] Zhang G，Liu Y，Guo H，et al. Triptolide promotes generation of FoxP3+ T regulatory cells in rats [J]. J Ethnophar macol，2009，125（1）：41-46.