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鼓勵學(xué)生的話范文第1篇

1、倚勢而凌人，勢敗而人凌，恃財(cái)而侮人，財(cái)散而人悔。循環(huán)之路，我爭者，人必爭，雖力爭之，未必得；我讓者，人必讓，雖力讓之，未必失。

2、不要因?yàn)楸娚臒o知，而痛苦自己。

3、要成為的成功者，不一定智商高才可以獲得成功機(jī)會，如果你情商高，懂得如何去發(fā)掘自己身邊的資源，甚至利用有限的資源拓展新的天地，滾雪球似地積累自己的資源，那你也將走向成功。

4、聞謗不怒，雖讒言焰熏天，如舉火焚空，終將自熄。聞謗而怒，雖巧辯，如蠶作繭，自取纏綿。

5、高能力不能和高績效直接掛鉤，能力的發(fā)揮也是在一定的機(jī)制、環(huán)境、工作內(nèi)容與職責(zé)之內(nèi)的，沒有這些平臺和環(huán)境，再高的能力也只能被塵封。

6、疲勞是最舒適的枕頭，努力工作吧。

7、鍛煉自己即刻行動的能力。充分利用對現(xiàn)時的認(rèn)知力。不要沉浸在過去，也不要耽溺于未來，要著眼于今天。當(dāng)然要有夢想、籌劃和制訂創(chuàng)造目標(biāo)的時間。不過，這一切就緒后，一定要學(xué)會腳踏實(shí)地、注重眼前的行動。要把整個生命凝聚在此時此刻。

8、懂得珍惜把握每一個機(jī)會，就應(yīng)該勤奮，勤奮并不需要有推動力，只要你能欣賞人生。你能欣賞日出日落。你懂得珍惜，你自然會勤奮，因?yàn)槟悴粫膊幌Ｍe過生命送給你的每一個機(jī)會！只要你心存希望與信心。

9、多一份心力注意別人，就少一份心力反省自己。

10、大多數(shù)人希望自己的生活富有意義。但是生活不在未來。我們越是認(rèn)為自己有充分的時間去做自己想做的事，就越會在這種沉醉中讓人生中的絕妙機(jī)會悄然流逝。只有重視今天，自我激勵的力量才會讓你得到最好的成果！

11、避開折磨是生命的最佳選擇，一旦躲避不開，就讓折磨變作美麗人生的養(yǎng)分，此亦是生命的最佳選擇。之所以說此亦是生命的最佳選擇，乃是因?yàn)?，人們在陷進(jìn)折磨時，他面對的選擇不止一個，比如說痛苦、焦灼、失戀、迷茫、束手無策或一蹶不振，而這些選擇，就沒有一個具有積極的性質(zhì)，皆是對人生的消沉與頹廢。比起這些選擇，惟有選擇讓折磨變作美麗人生的養(yǎng)分，方才算是最佳。

12、人總是在遭遇一次重創(chuàng)之后，才會幡然醒悟，重新認(rèn)識自己的堅(jiān)強(qiáng)和堅(jiān)忍。所以，無論你正在遭遇什么磨難，都不要一味抱怨上蒼不公平，甚至從此一蹶不振。人生沒有過不去的坎，只有過不去的人。

13、把握住自己的今天，那么明天一定會更美好。你改變不了環(huán)境，但可以改變自已。人生總會經(jīng)歷一些事情，比如事業(yè)的成敗，愛情的喜憂，友情的得失，但至少，無論在任何時候，無論你做什么事情，你都要有勇氣去面對和承受，這才是最重要的。

14、恒心鋪就通天路，持久方可登頂峰！

15、當(dāng)你在猶豫的時候，這個世界就很大；當(dāng)你勇敢踏出第一步的時候，這個世界就很小。等到有一天你變成了你喜歡的自己的時候，誰還會質(zhì)疑你的選擇不靠譜呢？你已經(jīng)變成更好的你了，一定會遇到更好的人的。你是誰，就會遇到誰。

16、在現(xiàn)代社會，擁有強(qiáng)健的身體已經(jīng)不是最重要的，健康的心理越來越被提上日程，處理復(fù)雜的人際關(guān)系、承受挫折與痛苦、緩解壓力與抑郁，這些都將成為工薪族乃至學(xué)生們常常面對的問題。為了防止英年早逝、過勞死，還是多注意一下身體和心理的健康投資吧。

17、今天是一個結(jié)束，又是一個開始。昨天的成功也好，失敗也好，今天都可以重新開始，重新開拓自己的人生。昨天失敗了，不要緊，今天忘了它，總結(jié)失敗的教訓(xùn)，繼續(xù)新的努力。即便昨天是成功的，今天依舊要重新開始，在成功的基礎(chǔ)上繼續(xù)努力，爭取更輝煌的進(jìn)步。

18、一時的挫折往往可以通過不屈的搏擊，變成學(xué)問及見識

19、即使快樂的人生，也會有痛苦，有的人能直面挫折，化解痛苦；有的人卻常?？浯蟠煺?，放大痛苦?？梢?，面對挫折，我們可以有不同的選擇。但是，給挫折一個微笑，或許是對它最致命的打擊。

20、努力向上的開拓，才使彎曲的竹鞭化作了筆直的毛竹。

21、創(chuàng)造自我，如繪巨幅畫一樣，不要怕精工細(xì)筆。如果把自己當(dāng)作一幅正在描繪中杰作，你就會樂于從細(xì)微處做改變。一件小事做得與眾不同，也會令你興奮不已?？傊瑹o論你有多么小的變化，點(diǎn)點(diǎn)都于你很重要。

22、人不怕痛苦，只怕丟掉剛強(qiáng)，不怕磨難，只怕失去希望。面對種種磨難，我們不能逃避，也不要屈服，要把經(jīng)歷的每一次磨難看作是生命的一種嘗試，當(dāng)作人生的又一新課題，不斷的攻克它，戰(zhàn)勝它。我們就永遠(yuǎn)是生活的強(qiáng)者。

23、人比文憑更重要。很多成功的人在回頭的時候都說自己太關(guān)注工作和事業(yè)了，最遺憾的是沒有好好陪陪父母、愛人、孩子，往往還傷心落淚，何必呢，早意識到這些，多給生活一些空間和時間就可以了。我們沒有必要活得那么累。

24、給挫折一個微笑，它能給你戰(zhàn)勝挫折的意志。我們前進(jìn)的腳步總是讓挫折絆住。但是我們要做生活的主人，不要坐在絆腳石的面前唉聲嘆氣而耗盡了自己，學(xué)會微笑著用有限的生命來超越無限的自己。

25、你曾經(jīng)以為不可以放手的東西，只是生命瞬間的一塊跳板。所有的哀傷、痛楚，所有不能放棄的事情，不過是生命里一個過渡，你跳過了，就可以變得更精采。

26、不要仰望高山的雄奇，即使你是一粒微塵，忘卻自我渺小，依舊可以堆砌一個星球；不要羨慕蒼松的挺拔，就算你是一株小草，忘卻自我平凡，仍然可以裝點(diǎn)一方土地；()不要向往大海的洶涌，縱使你是一滴雨露，忘卻自我普通，還是可以滋潤一片泥壤。

27、成功是一種快樂，成功也是我們夢寐以求的，只不過每一位追求成功的人都有可能會遇到失敗，也害怕過失敗。

28、道德是提升自己的明燈，不該是呵斥別人的鞭子。

29、把握每一個機(jī)會，希望與信心就會并存，心存希望就會讓我們不再迷茫，就算沒了希望也別絕望，死路往往也是一個出口。只要我們有信心。

30、不要像玻璃那樣脆弱。有的人眼睛總盯著自己，所以長不高看不遠(yuǎn)；總是喜歡怨天尤人，也使別人無比厭煩。沒有苦中苦，哪來甜中甜？不要像玻璃那樣脆弱，而應(yīng)像水晶一樣透明，太陽一樣輝煌，臘梅一樣堅(jiān)強(qiáng)。既然睜開眼睛享受風(fēng)的清涼，就不要埋怨風(fēng)中細(xì)小的沙粒。

31、只有腳踏實(shí)地的人，才能夠說：路，就在我的腳下。

32、選擇了就不后悔，渡過今天的艱難，迎來明天的輝煌

33、磨難是禍，也是福，它可以鍛煉我們的意志。生命中充滿坎坷曲折，人的價值才能充分體現(xiàn)出來。旅途上遇有艱險，人生才更有滋味。有了磨難才會懂得生活的意義，從而更熱愛和珍惜生活。

34、活在人類世界，沒有任何一個人可以是高枕無憂，沒有哪一個人能夠永遠(yuǎn)的一帆風(fēng)順，但是，遇到挫折沒關(guān)系，應(yīng)該打起精神，善待一切，安安靜靜的能夠坦然的面對，你自身的堅(jiān)強(qiáng)與否完全有可能就決定了你的最后的成敗。

35、希望，只有和勤奮作伴，才能如虎添翼。

36、古今庸人，敗于“惰”字；古今才人，敗于“傲”字。

37、貧而好施，功倍于富。貴而好聚，惡倍于貧。

鼓勵學(xué)生的話范文第2篇

2、在我人生成長的歷程中，許多的事都會令我很開心，快樂在我的生活中無處不在，每當(dāng)我遨游在知識的海洋里，沉浸在書的字里行間中，這時就是我最最快樂的時光了。我如饑似渴地啃食著，我閱讀，所以我快樂！

3、面對人生的磨難，請用你的毅力創(chuàng)造生命的奇跡吧！

4、書，給我一次快樂閱讀旅程，讓我成長，讓我快樂，讓我?guī)е鴫粝腼w翔。

5、小疑有小進(jìn)，大疑有大進(jìn)！

6、成長的路上，不缺乏鮮花，也少不了荊棘，充滿了幸福，也一定有創(chuàng)傷。但不要只盯著不幸和痛苦，只要經(jīng)過風(fēng)雨的磨礪，我們才能煥發(fā)出生命的光彩和偉大，要知道，美麗的彩虹只會出現(xiàn)在雨后！

7、盡管你是一個強(qiáng)者，可是一定還有比你更強(qiáng)的人，所以不要在別人面前驕傲自滿，自己夸耀自己。

8、成功，這是至高無尚；振奮與喜悅；勤勞與汗水的代名詞，有多少人為它而不斷奮斗，有多少人為它而不斷成長，人只要努力就會成功！

9、行勝于言，超越自我，知識啟迪智慧。

鼓勵學(xué)生的話范文第3篇

【關(guān)鍵詞】 雙丹口服液 環(huán)磷酰胺 碳酸鈣維D 大鼠 骨礦物質(zhì) 骨生物力學(xué)

Abstract:ObjectiveTo study osteoporosis of cyclophosphamide and investigate the preventive effects of Shuangdan oral liquid on rats.MethodsCyclophosphamide at the dose of 4.5 mg·kg-1·d-1 was given to the rats orally for 15 days while Shuangdan oral liquid and calcium and vitamin D3 were given to cyclophosphamide-treated rats orally. At the experiment， bone biomechanics analysis of the right femur were performed in fresh sections. Then the hydroxyproline， Ca， P， Mg of bone were tested.ResultsBiomechanics property and bone mineral on femur of rats decreased significantly.ConclusionShuangdan oral liquid can prevent osteopathologic change from cyclophosphamide-induced on rats.

Key words:Shuangdan oral liquid; Cyclophosphamide; Calcium and vitamin D3; Rats; Bone mineral; Bone biomechanics

雙丹口服液記載于2005版《中國藥典》，由丹參和牡丹皮兩味中藥組成，是著名的中藥方劑。已有報道雙丹口服液具有清除氧自由基，改善血流循環(huán)，增強(qiáng)免疫，以及抗炎、抗腫瘤等作用。其有效成分包括丹參素、丹參酮、丹皮酚、芍藥苷等，本課題組曾報道丹參素能提高成骨細(xì)胞的活性，防治糖皮質(zhì)激素大鼠所致的骨質(zhì)疏松［1］，還報道了環(huán)磷酰胺可導(dǎo)致大鼠和小鼠產(chǎn)生骨質(zhì)疏松毒性［2，3］，發(fā)現(xiàn)環(huán)磷酰胺有抑制成骨細(xì)胞活性而導(dǎo)致骨丟失的作用，對骨的影響皆類似于老年型骨質(zhì)疏松的病理改變。本實(shí)驗(yàn)觀察雙丹口服液對環(huán)磷酰胺介導(dǎo)的骨質(zhì)疏松大鼠股骨的影響，并與陽性藥物碳酸鈣維D進(jìn)行比較。現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

1.1.1 藥品 丹參、牡丹皮等中藥材購自本地藥房，產(chǎn)地為四川。環(huán)磷酰胺：江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號：403501。碳酸鈣維D片：美國安士制藥公司，批號：5B16656，每片相當(dāng)于鈣300mg，VitD100單位。

1.1.2 試劑 丹參素標(biāo)準(zhǔn)品：中國藥品生物制品檢定所，批號110855-200304；甲醇（色譜純，天津四友化學(xué)試劑公司）；水為三蒸水；冰醋酸（分析純，汕頭隴西化工廠）；羥脯氨酸試劑盒（堿水解法，南京建成生物技術(shù)有限公司）。

1.2 儀器 AE240電子天平(梅特勒-托利多儀器公司上海分公司生產(chǎn))，高效液相色譜儀：Agilent1100系列四元梯度泵、Agilent1100手動進(jìn)樣器， Agilent1100系列一極管陣列檢測器， Agilent1100工作站( Agilent公司);超聲波清洗器，858 Mini Bionix 型材料測試系統(tǒng)（MTS，USA）；電感偶合等離子體發(fā)射光譜儀（ICP，美國TJA公司）；UV-752紫外分光光度計(jì)（上海第三醫(yī)學(xué)儀器廠）。

1.3 方法

1.3.1 藥物制備雙丹口服液的制備工藝：參照2005年版《中國藥典》的方法提取，取丹參600 g，牡丹皮300 g，牡丹皮蒸餾，收集蒸餾液。藥渣和丹參加水煎煮兩次，第1次2 h，第2次1 h，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.15的清膏，加乙醇使含醇量達(dá)60%，冷藏24 h，濾過，濾液回收乙醇至相對密度1.15的清膏，加入牡丹皮蒸餾液，最后將提取液濃縮至每100 ml含生藥191.7 g，密封消毒，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

雙丹口服液的質(zhì)量控制：雙丹口服液的指紋圖譜用高效液相法檢測，色譜柱：Agilient C18（250 mm×4.65 mm，5 μm）;流動相：甲醇(A)－1％冰醋酸（B），程序梯度洗脫：10%A(5 min)-30%A(15min)；流速：1ml/min；溫度為室溫；檢測波長：280 nm。精密稱取0.104，0.208，0.312，0.520，0.624，0.728 mg的丹參素鈉標(biāo)準(zhǔn)品用三蒸水定容至5 ml，分別精密吸取上述對照品20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積對丹參素溶液濃度(μg/ml)進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得線性回歸方程：Y＝11 981X+11.492（r=0.999 9）。再根據(jù)指紋圖譜中丹參素的峰面積，計(jì)算雙丹口服液每毫升的丹參素含量。

1.3.2 動物與分組 3月齡大鼠40只，雌雄各半，體重（208±28）g，由廣東醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，SPF級，動物合格證號：2005A023。按體重對等原則隨即分成4組，每組10只。正常對照組: 灌胃給予5 ml·kg-1·d-1生理鹽水；環(huán)磷酰胺組: 灌胃給予環(huán)磷酰胺4.5 mg·kg-1·d-1；碳酸鈣維D組：灌胃給予環(huán)磷酰胺4.5 mg·kg-1·d-1及碳酸鈣維D 0.4 mg·kg-1·d-1；雙丹預(yù)防組：灌胃給予環(huán)磷酰胺4.5 mg·kg-1·d-1及雙丹口服液5 mg·kg-1·d-1。4組動物均自由飲水和進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)飼料。實(shí)驗(yàn)共給藥15 d，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，取右側(cè)股骨用生理鹽水紗布、錫紙包裹于-20℃保存，待骨生物力學(xué)檢測及骨有機(jī)質(zhì)和礦物含量檢測。

1.3.3 骨生物力學(xué)檢測［4］ 檢測時，將-20℃保存的股骨常溫解凍，生理鹽水復(fù)濕。用858 Mini Bionix型材料測試系統(tǒng)監(jiān)測和分析大鼠右側(cè)股骨的生物力學(xué)性能。將股骨置于流變儀上進(jìn)行三點(diǎn)彎曲實(shí)驗(yàn)，加載速度為0.01 mm/s，跨距為15 mm。記錄應(yīng)力-應(yīng)變曲線，從曲線上讀取及計(jì)算彈性強(qiáng)度、最大強(qiáng)度、斷裂強(qiáng)度、剛性系數(shù)、彎曲能量及斷裂能量吸收等指標(biāo)。

1.3.4 骨有機(jī)質(zhì)和礦物含量檢測 將生物力學(xué)檢測后的骨材料80℃烘干至恒重，用AE240電子天平稱重;然后，每份骨樣本加6 mol/L HCl在108℃溫度下消化16 h后，把消化液分成兩份。一份稀釋后用ICP測定骨Ca，P，微量元素的含量，與骨干重進(jìn)行比較，用骨礦物元素量(mg)/骨干重(g)的比值來作為骨礦物質(zhì)含量的指標(biāo)，骨礦物元素量/骨干重的比值越大，說明骨礦物質(zhì)在骨中所占的比例越大。另一份消化液過濾后調(diào)pH值至6，然后，經(jīng)《中國藥典》法測定羥脯氨酸吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出其含量。由于骨有機(jī)質(zhì)中骨膠原占90%以上，骨膠原中羥脯氨酸含量比較穩(wěn)定，約占12.5%，因此，根據(jù)骨羥脯氨酸的含量可推算出骨有機(jī)質(zhì)的相對含量。即骨有機(jī)質(zhì)=骨羥脯氨酸/12.5%/90%。用骨有機(jī)質(zhì)/骨干重的比值作為骨有機(jī)質(zhì)含量的指標(biāo)。其比值越大，說明骨有機(jī)質(zhì)含量越高。

1.3.5 數(shù)據(jù)處理 參數(shù)值用(±s)表示，用SPSS12.0進(jìn)行方差分析。用變化率表示各實(shí)驗(yàn)組大鼠相對參數(shù)的變化〔如：變化率A=(待比較組/A組-1)×100%〕。

2 結(jié)果

2.1 雙丹口服液的制備及質(zhì)量控制根據(jù)1.3.1項(xiàng)方法制備了供實(shí)驗(yàn)用的雙丹口服液，用高效液相色譜儀檢測得到的指紋圖譜見圖1，丹參素標(biāo)準(zhǔn)品的圖譜見圖2。經(jīng)檢測及計(jì)算，雙丹口服液每毫升含丹參素2.431 09 mg。

圖1 雙丹口服液的高效液相指紋圖譜（略）

圖2 丹參素標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相質(zhì)量控制圖譜（略）

2.2 雙丹口服液對環(huán)磷酰胺大鼠股骨生物力學(xué)指標(biāo)的影響 結(jié)果見表1。

表1 雙丹口服液對環(huán)磷酰胺大鼠股骨生物力學(xué)的影響（略）

n=10;A、B C為變化率:A是與對照組比較；B是與環(huán)磷酰胺模型組比較;C是與碳酸鈣維D組比較；*P

由表1可見，環(huán)磷酰胺組大鼠股骨的一系列生物力學(xué)性能均較正常大鼠呈下降趨勢，其中最大強(qiáng)度、剛性系數(shù)的差別具有顯著性，且斜型斷裂面明顯多于正常和藥物組大鼠；提示環(huán)磷酰胺可使大鼠股骨的生物力學(xué)性能明顯減弱，易產(chǎn)生粉碎性骨折。陽性藥物碳酸鈣維D組的生物力學(xué)性能指標(biāo)除斷裂吸收能量外，均較環(huán)磷酰胺組大鼠顯著性增加，且與正常大鼠相當(dāng)；提示碳酸鈣維D可有效拮抗環(huán)磷酰胺造成的大鼠生物力學(xué)性能下降。雙丹預(yù)防組生物力學(xué)性能指標(biāo)的改變均同陽性藥物一致，且數(shù)值與陽性藥物相當(dāng)，提示雙丹口服液亦可有效拮抗環(huán)磷酰胺造成的大鼠生物力學(xué)性能下降，其作用效果與陽性藥物相當(dāng)。

2.3 雙丹口服液對環(huán)磷酰胺大鼠股骨骨代謝生化指標(biāo)的影響 結(jié)果見表2。

表2 雙丹口服液對環(huán)磷酰胺大鼠股骨有機(jī)質(zhì)和骨礦含量的影響（略）

n=10；A，B， C為變化率：A是與對照組比較，B是與環(huán)磷酰胺模型組比較；C是與碳酸鈣維D組比較，*P

由表2可見，環(huán)磷酰胺使大鼠股骨骨有機(jī)質(zhì)/骨干重以及鈣、磷、鎂三項(xiàng)骨礦物指數(shù)均較正常大鼠顯著下降，且差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

3 討論

3.1 雙丹口服液制備工藝穩(wěn)定，質(zhì)量可控雙丹口服液的制備工藝是依據(jù)2005版《中國藥典》所記載的雙丹口服液的方法進(jìn)行提取制備，該方法對丹參和牡丹皮分別采用針對其藥材成分特點(diǎn)的提取步驟，有利于藥材成分的有效提取。而本試驗(yàn)所使用的質(zhì)量控制方法，其流動相采用了梯度洗脫，較藥典的固定洗脫更有利于色譜峰的分離。且在標(biāo)準(zhǔn)品的制備上考慮到丹參素為水溶性成分，雙丹口服液也為水相提取，因而改用三蒸水溶解。檢驗(yàn)結(jié)果顯示每毫升雙丹口服液含丹參素2.431 09 mg，符合《中國藥典》工藝的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。但丹參素并不一定是雙丹口服液中唯一對抗骨丟失的有效成分，故其與骨質(zhì)疏松的譜效關(guān)系有待進(jìn)一步地研究完善。

3.2 環(huán)磷酰胺可致大鼠股骨骨生物力學(xué)性能下降，雙丹口服液有預(yù)防作用股骨是大鼠主要的承力組織，其骨干包圍著厚而致密的骨密質(zhì)，堅(jiān)硬牢固，抗沖擊力強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)采用三點(diǎn)彎曲法來研究股骨的材料和結(jié)構(gòu)力學(xué)特性。結(jié)果顯示，環(huán)磷酰胺可導(dǎo)致正常大鼠的一系列生物力學(xué)指標(biāo)呈現(xiàn)下降趨勢，其中表示抗骨能力的最大強(qiáng)度以及代表骨材料硬度的剛性系數(shù)分別下降14.8%，27.7%（P

補(bǔ)充鈣與維生素D是各類骨質(zhì)疏松的基礎(chǔ)治療，可有效促進(jìn)骨形成和抑制骨吸收，從而提高骨骼結(jié)構(gòu)性能，降低骨折風(fēng)險的目的。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也顯示，碳酸鈣維D除能顯著對抗環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的最大強(qiáng)度和剛性系數(shù)下降之外，還能使抗變形能力的彈性強(qiáng)度和彎曲能量，抗斷裂能力的斷裂強(qiáng)度以及代表骨材料可塑性的斷裂應(yīng)變等一系列力學(xué)指標(biāo)呈現(xiàn)顯著性上升，說明碳酸鈣維D可有效對抗環(huán)磷酰胺所導(dǎo)致大鼠股骨的生物力學(xué)性能下降，減少骨折發(fā)生的可能，與其作為骨質(zhì)疏松基礎(chǔ)治療藥物的作用一致。

雙丹預(yù)防組的上述性能指標(biāo)改變均與陽性藥物的影響一致，說明雙丹口服液同碳酸鈣維D一樣具有對抗環(huán)磷酰胺大鼠股骨的生物力學(xué)性能下降的作用，并可有效降低骨折的發(fā)生。可能與雙丹口服液基礎(chǔ)藥材的有效成分［5，6］能改善血流微循環(huán)，減輕化療對骨髓的損傷及丹參抑制血管異位鈣化，使鈣沉積到骨骼［7］，從而促進(jìn)骨重建和骨礦化等作用有關(guān)。

3.3 雙丹口服液對環(huán)磷酰胺致大鼠股骨和腰椎骨礦物質(zhì)丟失的拮抗作用鈣、磷等無機(jī)礦物質(zhì)主要通過骨礦化作用儲存沉積于骨骼中，而成骨細(xì)胞分泌Ⅰ型膠原相互交聯(lián)形成間隙為0.5 nm的骨基質(zhì)框架是骨礦化發(fā)生的特定環(huán)境。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，環(huán)磷酰胺組大鼠股骨和腰椎骨的鈣、磷、鎂均明顯丟失，提示環(huán)磷酰胺可使大鼠骨骼的骨礦物質(zhì)丟失。碳酸鈣維D組的骨有機(jī)質(zhì)和骨礦物質(zhì)均較環(huán)磷酰胺組明顯增加，提示碳酸鈣維D可有效拮抗環(huán)磷酰胺大鼠的骨丟失作用，其可能與維生素D可增加腸道對鈣、磷的吸收利用，以及促進(jìn)骨膠原的形成礦化作用有關(guān)。而雙丹預(yù)防組對骨有機(jī)質(zhì)和礦物質(zhì)的影響與陽性藥物一致，說明雙丹口服液也可有效拮抗環(huán)磷酰胺所引起的骨丟失作用。其可能原因：環(huán)磷酰胺所致的高濃度超氧自由基是造成骨髓損傷的主要機(jī)制之一［8］，自由基的大量沉積，勢必將造成骨基質(zhì)框架結(jié)構(gòu)的破壞，使骨中礦物質(zhì)沉積減少而導(dǎo)致骨鈣、磷、鎂的流失。雙丹藥材［6，9］的有效成分均具有明顯清除氧自由基的作用，拮抗對成骨細(xì)胞的損傷，有效地對抗自由基大量沉積而造成的骨礦物在骨基質(zhì)中的礦化沉積減少。

環(huán)磷酰胺致大鼠骨質(zhì)疏松主要通過抑制骨形成［2］，該模型的特點(diǎn)是骨礦物的丟失，骨質(zhì)變得薄而易碎，錐體易壓縮變形，骨折風(fēng)險率顯著增高，對骨的病理改變類似于老年性骨質(zhì)疏松的特點(diǎn)。碳酸鈣維D因其具有增強(qiáng)骨形成和降低骨吸收的作用，從而被臨床廣泛用于治療各型骨質(zhì)疏松的基礎(chǔ)藥物。而在本實(shí)驗(yàn)中雙丹口服液表現(xiàn)出與碳酸鈣維D相當(dāng)?shù)膶弓h(huán)磷酰胺大鼠的骨丟失及骨生物力學(xué)性能下降的作用。提示雙丹口服液可能成為臨床抗骨質(zhì)疏松的骨形成促進(jìn)劑和用于治療老年性骨質(zhì)疏松的有效藥物。

【參考文獻(xiàn)】

Abstract:ObjectiveTo study osteoporosis of cyclophosphamide and investigate the preventive effects of Shuangdan oral liquid on rats.MethodsCyclophosphamide at the dose of 4.5 mg·kg-1·d-1 was given to the rats orally for 15 days while Shuangdan oral liquid and calcium and vitamin D3 were given to cyclophosphamide-treated rats orally. At the experiment， bone biomechanics analysis of the right femur were performed in fresh sections. Then the hydroxyproline， Ca， P， Mg of bone were tested.ResultsBiomechanics property and bone mineral on femur of rats decreased significantly.ConclusionShuangdan oral liquid can prevent osteopathologic change from cyclophosphamide-induced on rats.

Key words:Shuangdan oral liquid; Cyclophosphamide; Calcium and vitamin D3; Rats; Bone mineral; Bone biomechanics

雙丹口服液記載于2005版《中國藥典》，由丹參和牡丹皮兩味中藥組成，是著名的中藥方劑。已有報道雙丹口服液具有清除氧自由基，改善血流循環(huán)，增強(qiáng)免疫，以及抗炎、抗腫瘤等作用。其有效成分包括丹參素、丹參酮、丹皮酚、芍藥苷等，本課題組曾報道丹參素能提高成骨細(xì)胞的活性，防治糖皮質(zhì)激素大鼠所致的骨質(zhì)疏松［1］，還報道了環(huán)磷酰胺可導(dǎo)致大鼠和小鼠產(chǎn)生骨質(zhì)疏松毒性［2，3］，發(fā)現(xiàn)環(huán)磷酰胺有抑制成骨細(xì)胞活性而導(dǎo)致骨丟失的作用，對骨的影響皆類似于老年型骨質(zhì)疏松的病理改變。本實(shí)驗(yàn)觀察雙丹口服液對環(huán)磷酰胺介導(dǎo)的骨質(zhì)疏松大鼠股骨的影響，并與陽性藥物碳酸鈣維D進(jìn)行比較?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

1.1.1 藥品 丹參、牡丹皮等中藥材購自本地藥房，產(chǎn)地為四川。環(huán)磷酰胺：江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號：403501。碳酸鈣維D片：美國安士制藥公司，批號：5B16656，每片相當(dāng)于鈣300mg，VitD100單位。

1.1.2 試劑 丹參素標(biāo)準(zhǔn)品：中國藥品生物制品檢定所，批號110855-200304；甲醇（色譜純，天津四友化學(xué)試劑公司）；水為三蒸水；冰醋酸（分析純，汕頭隴西化工廠）；羥脯氨酸試劑盒（堿水解法，南京建成生物技術(shù)有限公司）。

1.2 儀器 AE240電子天平(梅特勒-托利多儀器公司上海分公司生產(chǎn))，高效液相色譜儀：Agilent1100系列四元梯度泵、Agilent1100手動進(jìn)樣器， Agilent1100系列一極管陣列檢測器， Agilent1100工作站( Agilent公司);超聲波清洗器，858 Mini Bionix 型材料測試系統(tǒng)（MTS，USA）；電感偶合等離子體發(fā)射光譜儀（ICP，美國TJA公司）；UV-752紫外分光光度計(jì)（上海第三醫(yī)學(xué)儀器廠）。

1.3 方法

1.3.1 藥物制備雙丹口服液的制備工藝：參照2005年版《中國藥典》的方法提取，取丹參600 g，牡丹皮300 g，牡丹皮蒸餾，收集蒸餾液。藥渣和丹參加水煎煮兩次，第1次2 h，第2次1 h，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.15的清膏，加乙醇使含醇量達(dá)60%，冷藏24 h，濾過，濾液回收乙醇至相對密度1.15的清膏，加入牡丹皮蒸餾液，最后將提取液濃縮至每100 ml含生藥191.7 g，密封消毒，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

雙丹口服液的質(zhì)量控制：雙丹口服液的指紋圖譜用高效液相法檢測，色譜柱：Agilient C18（250 mm×4.65 mm，5 μm）;流動相：甲醇(A)－1％冰醋酸（B），程序梯度洗脫：10%A(5 min)-30%A(15min)；流速：1ml/min；溫度為室溫；檢測波長：280 nm。精密稱取0.104，0.208，0.312，0.520，0.624，0.728 mg的丹參素鈉標(biāo)準(zhǔn)品用三蒸水定容至5 ml，分別精密吸取上述對照品20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積對丹參素溶液濃度(μg/ml)進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得線性回歸方程：Y＝11 981X+11.492（r=0.999 9）。再根據(jù)指紋圖譜中丹參素的峰面積，計(jì)算雙丹口服液每毫升的丹參素含量。

1.3.2 動物與分組 3月齡大鼠40只，雌雄各半，體重（208±28）g，由廣東醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，SPF級，動物合格證號：2005A023。按體重對等原則隨即分成4組，每組10只。正常對照組: 灌胃給予5 ml·kg-1·d-1生理鹽水；環(huán)磷酰胺組: 灌胃給予環(huán)磷酰胺4.5 mg·kg-1·d-1；碳酸鈣維D組：灌胃給予環(huán)磷酰胺4.5 mg·kg-1·d-1及碳酸鈣維D 0.4 mg·kg-1·d-1；雙丹預(yù)防組：灌胃給予環(huán)磷酰胺4.5 mg·kg-1·d-1及雙丹口服液5 mg·kg-1·d-1。4組動物均自由飲水和進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)飼料。實(shí)驗(yàn)共給藥15 d，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，取右側(cè)股骨用生理鹽水紗布、錫紙包裹于-20℃保存，待骨生物力學(xué)檢測及骨有機(jī)質(zhì)和礦物含量檢測。

1.3.3 骨生物力學(xué)檢測［4］ 檢測時，將-20℃保存的股骨常溫解凍，生理鹽水復(fù)濕。用858 Mini Bionix型材料測試系統(tǒng)監(jiān)測和分析大鼠右側(cè)股骨的生物力學(xué)性能。將股骨置于流變儀上進(jìn)行三點(diǎn)彎曲實(shí)驗(yàn)，加載速度為0.01 mm/s，跨距為15 mm。記錄應(yīng)力-應(yīng)變曲線，從曲線上讀取及計(jì)算彈性強(qiáng)度、最大強(qiáng)度、斷裂強(qiáng)度、剛性系數(shù)、彎曲能量及斷裂能量吸收等指標(biāo)。

1.3.4 骨有機(jī)質(zhì)和礦物含量檢測 將生物力學(xué)檢測后的骨材料80℃烘干至恒重，用AE240電子天平稱重;然后，每份骨樣本加6 mol/L HCl在108℃溫度下消化16 h后，把消化液分成兩份。一份稀釋后用ICP測定骨Ca，P，微量元素的含量，與骨干重進(jìn)行比較，用骨礦物元素量(mg)/骨干重(g)的比值來作為骨礦物質(zhì)含量的指標(biāo)，骨礦物元素量/骨干重的比值越大，說明骨礦物質(zhì)在骨中所占的比例越大。另一份消化液過濾后調(diào)pH值至6，然后，經(jīng)《中國藥典》法測定羥脯氨酸吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出其含量。由于骨有機(jī)質(zhì)中骨膠原占90%以上，骨膠原中羥脯氨酸含量比較穩(wěn)定，約占12.5%，因此，根據(jù)骨羥脯氨酸的含量可推算出骨有機(jī)質(zhì)的相對含量。即骨有機(jī)質(zhì)=骨羥脯氨酸/12.5%/90%。用骨有機(jī)質(zhì)/骨干重的比值作為骨有機(jī)質(zhì)含量的指標(biāo)。其比值越大，說明骨有機(jī)質(zhì)含量越高。

1.3.5 數(shù)據(jù)處理 參數(shù)值用(±s)表示，用SPSS12.0進(jìn)行方差分析。用變化率表示各實(shí)驗(yàn)組大鼠相對參數(shù)的變化〔如：變化率A=(待比較組/A組-1)×100%〕。

2 結(jié)果

2.1 雙丹口服液的制備及質(zhì)量控制根據(jù)1.3.1項(xiàng)方法制備了供實(shí)驗(yàn)用的雙丹口服液，用高效液相色譜儀檢測得到的指紋圖譜見圖1，丹參素標(biāo)準(zhǔn)品的圖譜見圖2。經(jīng)檢測及計(jì)算，雙丹口服液每毫升含丹參素2.431 09 mg。

圖1 雙丹口服液的高效液相指紋圖譜（略）

圖2 丹參素標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相質(zhì)量控制圖譜（略）

2.2 雙丹口服液對環(huán)磷酰胺大鼠股骨生物力學(xué)指標(biāo)的影響 結(jié)果見表1。

表1 雙丹口服液對環(huán)磷酰胺大鼠股骨生物力學(xué)的影響（略）

n=10;A、B C為變化率:A是與對照組比較；B是與環(huán)磷酰胺模型組比較;C是與碳酸鈣維D組比較；*P

由表1可見，環(huán)磷酰胺組大鼠股骨的一系列生物力學(xué)性能均較正常大鼠呈下降趨勢，其中最大強(qiáng)度、剛性系數(shù)的差別具有顯著性，且斜型斷裂面明顯多于正常和藥物組大鼠；提示環(huán)磷酰胺可使大鼠股骨的生物力學(xué)性能明顯減弱，易產(chǎn)生粉碎性骨折。陽性藥物碳酸鈣維D組的生物力學(xué)性能指標(biāo)除斷裂吸收能量外，均較環(huán)磷酰胺組大鼠顯著性增加，且與正常大鼠相當(dāng)；提示碳酸鈣維D可有效拮抗環(huán)磷酰胺造成的大鼠生物力學(xué)性能下降。雙丹預(yù)防組生物力學(xué)性能指標(biāo)的改變均同陽性藥物一致，且數(shù)值與陽性藥物相當(dāng)，提示雙丹口服液亦可有效拮抗環(huán)磷酰胺造成的大鼠生物力學(xué)性能下降，其作用效果與陽性藥物相當(dāng)。

2.3 雙丹口服液對環(huán)磷酰胺大鼠股骨骨代謝生化指標(biāo)的影響 結(jié)果見表2。

表2 雙丹口服液對環(huán)磷酰胺大鼠股骨有機(jī)質(zhì)和骨礦含量的影響（略）

n=10；A，B， C為變化率：A是與對照組比較，B是與環(huán)磷酰胺模型組比較；C是與碳酸鈣維D組比較，*P

由表2可見，環(huán)磷酰胺使大鼠股骨骨有機(jī)質(zhì)/骨干重以及鈣、磷、鎂三項(xiàng)骨礦物指數(shù)均較正常大鼠顯著下降，且差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

3 討論

3.1 雙丹口服液制備工藝穩(wěn)定，質(zhì)量可控雙丹口服液的制備工藝是依據(jù)2005版《中國藥典》所記載的雙丹口服液的方法進(jìn)行提取制備，該方法對丹參和牡丹皮分別采用針對其藥材成分特點(diǎn)的提取步驟，有利于藥材成分的有效提取。而本試驗(yàn)所使用的質(zhì)量控制方法，其流動相采用了梯度洗脫，較藥典的固定洗脫更有利于色譜峰的分離。且在標(biāo)準(zhǔn)品的制備上考慮到丹參素為水溶性成分，雙丹口服液也為水相提取，因而改用三蒸水溶解。檢驗(yàn)結(jié)果顯示每毫升雙丹口服液含丹參素2.431 09 mg，符合《中國藥典》工藝的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。但丹參素并不一定是雙丹口服液中唯一對抗骨丟失的有效成分，故其與骨質(zhì)疏松的譜效關(guān)系有待進(jìn)一步地研究完善。

3.2 環(huán)磷酰胺可致大鼠股骨骨生物力學(xué)性能下降，雙丹口服液有預(yù)防作用股骨是大鼠主要的承力組織，其骨干包圍著厚而致密的骨密質(zhì)，堅(jiān)硬牢固，抗沖擊力強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)采用三點(diǎn)彎曲法來研究股骨的材料和結(jié)構(gòu)力學(xué)特性。結(jié)果顯示，環(huán)磷酰胺可導(dǎo)致正常大鼠的一系列生物力學(xué)指標(biāo)呈現(xiàn)下降趨勢，其中表示抗骨能力的最大強(qiáng)度以及代表骨材料硬度的剛性系數(shù)分別下降14.8%，27.7%（P

補(bǔ)充鈣與維生素D是各類骨質(zhì)疏松的基礎(chǔ)治療，可有效促進(jìn)骨形成和抑制骨吸收，從而提高骨骼結(jié)構(gòu)性能，降低骨折風(fēng)險的目的。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也顯示，碳酸鈣維D除能顯著對抗環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的最大強(qiáng)度和剛性系數(shù)下降之外，還能使抗變形能力的彈性強(qiáng)度和彎曲能量，抗斷裂能力的斷裂強(qiáng)度以及代表骨材料可塑性的斷裂應(yīng)變等一系列力學(xué)指標(biāo)呈現(xiàn)顯著性上升，說明碳酸鈣維D可有效對抗環(huán)磷酰胺所導(dǎo)致大鼠股骨的生物力學(xué)性能下降，減少骨折發(fā)生的可能，與其作為骨質(zhì)疏松基礎(chǔ)治療藥物的作用一致。

雙丹預(yù)防組的上述性能指標(biāo)改變均與陽性藥物的影響一致，說明雙丹口服液同碳酸鈣維D一樣具有對抗環(huán)磷酰胺大鼠股骨的生物力學(xué)性能下降的作用，并可有效降低骨折的發(fā)生?？赡芘c雙丹口服液基礎(chǔ)藥材的有效成分［5，6］能改善血流微循環(huán)，減輕化療對骨髓的損傷及丹參抑制血管異位鈣化，使鈣沉積到骨骼［7］，從而促進(jìn)骨重建和骨礦化等作用有關(guān)。

3.3 雙丹口服液對環(huán)磷酰胺致大鼠股骨和腰椎骨礦物質(zhì)丟失的拮抗作用鈣、磷等無機(jī)礦物質(zhì)主要通過骨礦化作用儲存沉積于骨骼中，而成骨細(xì)胞分泌Ⅰ型膠原相互交聯(lián)形成間隙為0.5 nm的骨基質(zhì)框架是骨礦化發(fā)生的特定環(huán)境。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，環(huán)磷酰胺組大鼠股骨和腰椎骨的鈣、磷、鎂均明顯丟失，提示環(huán)磷酰胺可使大鼠骨骼的骨礦物質(zhì)丟失。碳酸鈣維D組的骨有機(jī)質(zhì)和骨礦物質(zhì)均較環(huán)磷酰胺組明顯增加，提示碳酸鈣維D可有效拮抗環(huán)磷酰胺大鼠的骨丟失作用，其可能與維生素D可增加腸道對鈣、磷的吸收利用，以及促進(jìn)骨膠原的形成礦化作用有關(guān)。而雙丹預(yù)防組對骨有機(jī)質(zhì)和礦物質(zhì)的影響與陽性藥物一致，說明雙丹口服液也可有效拮抗環(huán)磷酰胺所引起的骨丟失作用。其可能原因：環(huán)磷酰胺所致的高濃度超氧自由基是造成骨髓損傷的主要機(jī)制之一［8］，自由基的大量沉積，勢必將造成骨基質(zhì)框架結(jié)構(gòu)的破壞，使骨中礦物質(zhì)沉積減少而導(dǎo)致骨鈣、磷、鎂的流失。雙丹藥材［6，9］的有效成分均具有明顯清除氧自由基的作用，拮抗對成骨細(xì)胞的損傷，有效地對抗自由基大量沉積而造成的骨礦物在骨基質(zhì)中的礦化沉積減少。

鼓勵學(xué)生的話范文第4篇

大家好！

非常感謝大會組委給我區(qū)一個展示、交流的機(jī)會。我發(fā)言的題目是“充分發(fā)揮縣（區(qū)）教師培訓(xùn)機(jī)構(gòu)作用，推動骨干教師‘三位一體’培訓(xùn)時效”。

名師是稀缺的社會公共資源，“名師工作室”作為一種專業(yè)學(xué)習(xí)共同體，它的建立將成為我國促進(jìn)教師專業(yè)發(fā)展的新模式，同時還可以實(shí)現(xiàn)名師的社會效益最大化、加快構(gòu)筑區(qū)域教育人才高地。我省2010年中小學(xué)骨干教師省級培訓(xùn)采取以“名師工作室”為核心的“三位一體”培訓(xùn)模式，我個人非常認(rèn)同。我區(qū)近幾年的培訓(xùn)也是圍繞著發(fā)揮名師作用來開展的。

天河區(qū)現(xiàn)有11名在職特級教師，如何發(fā)揮他們的引領(lǐng)、輻射、示范作用，切實(shí)提高中小學(xué)骨干教師培訓(xùn)培養(yǎng)的質(zhì)量和效益，構(gòu)筑天河教育人才高地？經(jīng)過深入調(diào)研，2010年9月，我區(qū)印發(fā)了《天河區(qū)中小學(xué)特級教師工作室建設(shè)與管理方案》，明確了工作室的建立、培養(yǎng)模式、主要任務(wù)，培養(yǎng)對象的選拔和工作室的組織管理與措施保障。根據(jù)該方案，經(jīng)學(xué)校推薦、專家選拔、領(lǐng)導(dǎo)研究，我區(qū)已在2010年1月成立了天河區(qū)王志遠(yuǎn)、游彩云特級教師工作室?！疤丶壗處煿ぷ魇摇庇芍鞒秩撕团囵B(yǎng)對象共同組成，通過集中培訓(xùn)、分類指導(dǎo)、觀摩示范、考察交流、巡回講座等形式開展培訓(xùn)活動。我區(qū)要求每個工作室及其培養(yǎng)對象明確三年工作目標(biāo)和學(xué)年的計(jì)劃，印制了《特級教師工作室團(tuán)隊(duì)工作目標(biāo)一覽表》、《特級教師工作室培養(yǎng)對象年度目標(biāo)達(dá)成一覽表》、《特級教師工作室工作年度考評表》等系列表格，幫助工作室及其成員建立了專項(xiàng)管理檔案，加強(qiáng)對工作室培訓(xùn)業(yè)務(wù)的過程管理。今后我區(qū)還將陸續(xù)成立其它特級教師工作室。

根據(jù)“廣東省2010年中小學(xué)骨干教師省級培訓(xùn)項(xiàng)目”的要求，我區(qū)有三個“名師工作室”已經(jīng)和即將掛牌開始正式運(yùn)作。《廣東省中小學(xué)骨干教師省級培訓(xùn)（2010-2013年）實(shí)施方案》的出臺，進(jìn)一步明確了縣（區(qū)）教師培訓(xùn)機(jī)構(gòu)對“名師工作室”業(yè)務(wù)管理的職責(zé)。作為“三位一體”培訓(xùn)體系中的一員，責(zé)任重大，我校將充分發(fā)揮組織、管理、協(xié)調(diào)的功能，力爭為“廣東省中小學(xué)骨干教師省級培訓(xùn)”做到“三好”。一是搞好服務(wù)。為進(jìn)入我區(qū)“名師工作室”跟崗學(xué)習(xí)的全省骨干教師安排好學(xué)習(xí)、生活，組織好考察、交流，努力營造一個寬松、舒心的學(xué)習(xí)環(huán)境。二是開好課程。為骨干教師們精心開設(shè)地方性課程；通過集體備課、雙向聽課、說課評課、案例分析、課例開發(fā)、課題研究、教學(xué)沙龍和專題講座等形式，引導(dǎo)骨干教師形成自己的教學(xué)風(fēng)格；同時關(guān)注薄弱地區(qū)，組織雙向交流、異地教學(xué)和專題講座，共享優(yōu)質(zhì)教育資源。三是做好管理。協(xié)助省級培訓(xùn)部門制定相關(guān)的培訓(xùn)指導(dǎo)方案；加強(qiáng)對每個工作室培訓(xùn)的過程管理，印發(fā)“名師工作室”培訓(xùn)前后目標(biāo)達(dá)成的考核、評價的系列表格，做好“名師工作室”培訓(xùn)過程的檔案積累，特別是骨干教師培訓(xùn)中形成的教育教學(xué)成果；利用網(wǎng)絡(luò)優(yōu)勢，建立“名師工作室”博客群，展示、交流，共享優(yōu)質(zhì)教育資源，答疑、解惑，突破教育教學(xué)“瓶頸”，記錄團(tuán)隊(duì)成員成長過程的點(diǎn)點(diǎn)滴滴，形成每個培養(yǎng)對象的電子檔案袋。

鼓勵學(xué)生的話范文第5篇

甲鈷胺(mecobalamin)是一種周圍神經(jīng)障礙治療藥物,是維生素B12的甲基衍生物,臨床主要用于治療糖尿病神經(jīng)障礙及多發(fā)性神經(jīng)炎等周圍神經(jīng)疾病,也用于治療因缺乏維生素B12引起的巨紅細(xì)胞性貧血。與其他維生素B12相比,甲鈷胺對神經(jīng)組織具有更好的傳遞性,在體內(nèi)通過甲基轉(zhuǎn)換反應(yīng)可促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的核酸-蛋白質(zhì)-脂質(zhì)代謝以及神經(jīng)髓鞘的合成,修復(fù)被損害的神經(jīng)組織,改善代謝障礙。此外甲鈷胺還可以抑制神經(jīng)組織傳導(dǎo)的異常興奮,促進(jìn)正紅血母細(xì)胞的成熟與分裂,促進(jìn)血紅素的合成, 改善貧血者的血象[1-3]。甲鈷胺制劑的主藥含量為每片500μg,給藥后體內(nèi)血藥濃度極低( ng·L-1級),很難用一般的方法進(jìn)行檢測。本試驗(yàn)建立了甲鈷胺血藥濃度的化學(xué)發(fā)光微粒子免疫測定方法(chemiluminescentmicrop- article immunoassay,CMIA),并對甲鈷胺膠囊的生物等效性進(jìn)行研究。目前國內(nèi)外尚未見有關(guān)于該方法測定甲鈷胺人體內(nèi)血藥濃度的報道。

1　材料與方法

1·1　儀器 ARCHITECTTMi2000SR(ABBOTT LABORATO- RIES,USA);YKH-Ⅱ型液體快速混合器(江西醫(yī)療器械廠); KQ-50型超聲清洗儀(上海超聲波儀器廠);TGL-16C型高速臺式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。

1·2　藥品和試劑甲鈷胺標(biāo)準(zhǔn)對照品(北京市福瑞康正醫(yī)藥技術(shù)研究所,純度99·2%,批號: 030611); B12試劑盒(批號: 11001M300);B12Controls(批號: 10845M100);B12 MasterCalibrators(批號: 04444M100);預(yù)激發(fā)液(批號: 05454M100);激發(fā)液(批號: 06725M100);清洗液(08317M102),美國雅培制藥有限公司生產(chǎn)。試驗(yàn)制劑:國產(chǎn)甲鈷胺膠囊(500μg,福建華海藥業(yè)有限公司,批號: 030301;參比制劑:彌可保[500 μg,衛(wèi)材(蘇州)制藥有限公司,批號: 020173]。

1·3　受試者選擇本試驗(yàn)經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn),試驗(yàn)方案經(jīng)北京大學(xué)第三醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。20名健康成年男性志愿者經(jīng)全面體格檢查,心電圖、血壓、血尿常規(guī)及肝腎功能等各項(xiàng)指標(biāo)均正常;受試者年齡(22·7±1·4)歲,身高(1·72±0·06)m,體重 (63·6±5·9)kg。受試者均無吸煙、飲酒史,受試前兩周內(nèi)未服用過任何藥物,各受試者均自愿參加試驗(yàn)并于試驗(yàn)前由本人簽署知情同意書。

1·4　給藥方法與樣本采集本試驗(yàn)采用2制劑、2周期的隨機(jī)交叉給藥方案。入選受試者于每周期試驗(yàn)前1 d晚入?、衿诓》?禁食過夜后于次日清晨,以200 mL溫水送服單劑量1 500μg的甲鈷胺試驗(yàn)或參比制劑。分別于服藥前及服藥后0·5, 1, 1·5, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 12, 24, 48及72 h各采取前臂靜脈血4 mL,靜置2 h后 4 000 r·min-1離心10 min,分離血清置-40℃冰箱保存待測。在整個試驗(yàn)過程中樣品注意避光,以避免藥物降解。試驗(yàn)期間受試者進(jìn)統(tǒng)一飲食。給藥后2 h進(jìn)早餐、給藥后4 h進(jìn)午餐、給藥后10 h進(jìn)晚餐,給藥后 2 h后可自由飲水。受試者在試驗(yàn)期間禁煙、酒;禁服含咖啡因、可可堿、茶堿的飲品;禁食含B12的動物性食品,如肉、蛋、牛奶;禁止劇烈運(yùn)動。

1·5　甲鈷胺血藥濃度測定方法的建立

1·5·1　血清樣品的處理　定量移取血清樣品 300μL至反應(yīng)杯,加入包被內(nèi)源性因子的磁性微粒子進(jìn)行結(jié)合;用清洗液清洗后,加入吖啶共軛物、預(yù)激發(fā)液和激發(fā)液進(jìn)行免疫反應(yīng);將反應(yīng)液用ARCHI- TECTTMi2000SR進(jìn)行測定。

1·5·2　甲鈷胺標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備　吸取0, 100, 250, 500,1 000, 2 000 ng·L-16個質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)液置樣品杯中,按血清樣品處理程序操作,于ARCHI- TECTTMi 2000SR分析儀中測定。ARCHITECTTMi 2000SR采用4-參數(shù)對數(shù)轉(zhuǎn)換法(4PLC)及線性轉(zhuǎn)換 (LT)技術(shù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,標(biāo)準(zhǔn)曲線經(jīng)B12Controls和 MasterCalibrators校準(zhǔn),通過程序處理判斷標(biāo)準(zhǔn)曲線是否合格,若合格則存儲該標(biāo)準(zhǔn)曲線,并以此對未知樣品進(jìn)行測定。

1·5·3　方法精密度和準(zhǔn)確度　分別配制低、中、高 (200, 400, 800 ng·L-1)3種質(zhì)量濃度的血清質(zhì)控樣品,按標(biāo)準(zhǔn)曲線方法分別于日內(nèi)和日間處理測定, 并計(jì)算日內(nèi)和日間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差,評價方法精密度。 同法配制低、中、高3種質(zhì)量濃度的血清樣品,按標(biāo)準(zhǔn)曲線方法分別處理測定,計(jì)算其回收率,評價方法準(zhǔn)確度。

1·5·4　樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)　取口服甲鈷胺制劑后采集的受試者血清樣品于室溫避光放置,按標(biāo)準(zhǔn)曲線方法分別于0, 2, 6, 9 h測定,考察樣品的穩(wěn)定性。 1·5·5　方法質(zhì)量控制　在每批血清樣品測定時建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線,并于每日測定樣品時平行測定低、中、高(200, 400, 800 ng·L-1)3種質(zhì)量濃度的質(zhì)控樣品,質(zhì)控樣品數(shù)大于被測定樣品總數(shù)的5%。

1·6　數(shù)據(jù)處理將受試者口服單劑量1 500μg的甲鈷胺試驗(yàn)或參比制劑后的血藥濃度列表,計(jì)算血清中甲鈷胺濃度增加值(ρ),并繪制平均血藥濃度(ρ)-時間曲線。計(jì)算每1個受試者的有關(guān)藥動學(xué)參數(shù),并求出參數(shù)的平均值及標(biāo)準(zhǔn)差。相對生物利用度F 用各受試者的AUC0-t和AUC0-∞分別計(jì)算,并求其平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。F0-t= [(AUC0-t)T/ (AUC0-t)R]×100%;F0-∞= [(AUC0-∞)T/ (AUC0-∞)R]×100%。用3P97軟件對受試者血清中甲鈷胺濃度增加值(ρ)-時間數(shù)據(jù)進(jìn)行處理, 分析甲鈷胺在人體內(nèi)的藥物動力學(xué)特征。將AUC和ρmax數(shù)據(jù)進(jìn)行對數(shù)轉(zhuǎn)換,然后進(jìn)行方差分析及雙單側(cè)t檢驗(yàn)處理,tmax用非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,對甲鈷胺試驗(yàn)制劑與參比制劑的生物等效性進(jìn)行評價。

2　結(jié)　果

2·1　甲鈷胺血藥濃度測定標(biāo)準(zhǔn)曲線甲鈷胺血藥濃度測定后經(jīng)B12Controls和Master Calibrators校準(zhǔn)合格,符合測定要求,ARCHITECTTM i2000SR將試驗(yàn)制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線自動存儲,結(jié)果見表 1。本試驗(yàn)建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為100~2 000 ng·L-1。

2·2　方法精密度和準(zhǔn)確度甲鈷胺血藥濃度測定方法的精密度和準(zhǔn)確度結(jié)果見表2。結(jié)果表明,本試驗(yàn)建立的甲鈷胺血藥濃度化學(xué)發(fā)光微粒子免疫測定方法準(zhǔn)確、可靠。

2·3　穩(wěn)定性試驗(yàn)及質(zhì)量控制甲鈷胺血清樣品室溫避光放置時,在9h內(nèi)測定結(jié)果的RSD為7·16%,結(jié)果表明,血清樣品在本試驗(yàn)測定過程中穩(wěn)定。本試驗(yàn)在測定過程中,于每日平行測定低、中、高濃度的質(zhì)控樣品,質(zhì)控樣品的測得值均在其真實(shí)值的±20%范圍內(nèi)。

2·4　血藥濃度-時間曲線將測得的給藥后血清中甲鈷胺濃度減去給藥前血清本底中的B12濃度,即得口服甲鈷胺制劑后的血藥濃度(ρ)。經(jīng)研究,口服單劑量1 500μg的甲鈷胺試驗(yàn)或參比制劑后平均血清藥物濃度(ρ)-時間曲線見圖1。

2·5　藥動學(xué)隔室模型的擬合本試驗(yàn)采用簡均數(shù)據(jù)法(na ve average data, NAD)將給藥后每個時間點(diǎn)的各個個體的血藥濃度數(shù)據(jù)進(jìn)行平均作為主數(shù)據(jù),然后用3P97軟件進(jìn)行隔室模型擬合,根據(jù)AIC值、r2和擬合優(yōu)度等擬合結(jié)果進(jìn)行判斷。結(jié)果表明,甲鈷胺口服給藥后其血藥濃度- 時間數(shù)據(jù)符合權(quán)重因子為1/ρ2的口服二室模型。

2·6　有關(guān)藥動學(xué)參數(shù)根據(jù)血清中增加的甲鈷胺的血藥濃度(ρ)-時間曲線末端直線部分的試驗(yàn)點(diǎn),以ln(ρ)對t進(jìn)行回歸,求得消除速率常數(shù)ke;ρmax、ρmax、tmax為試驗(yàn)的實(shí)測值;用梯形面積法計(jì)算樣品的AUC0–t, AUC0–∞,AUC0–∞=AUC0–t+ρt/ke,有關(guān)的藥動學(xué)參數(shù)見表3。

2·7　生物等效性評價單劑量口服試驗(yàn)和參比甲鈷胺制劑后的 AUC0-t、AUC0–∞和ρmax經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析,結(jié)果表明本試驗(yàn)中處方間和周期間均無顯著性差異,個體間有顯著性差異;再采用雙單側(cè)t檢驗(yàn)法對試驗(yàn)制劑與參比制劑的生物等效性進(jìn)行評價,結(jié)果見表4。采用SPSS軟件對口服甲鈷胺試驗(yàn)和參比制劑后的tmax進(jìn)行Mann-Whitney秩和檢驗(yàn), 結(jié)果表明,兩種制劑的tmax沒有顯著性差異。由統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果可知,試驗(yàn)和參比甲鈷胺制劑生物等效。