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螞蟻和大象范文第1篇

大森林里，大象的力氣最大，這不僅是大象自己認(rèn)為的，而且還是動(dòng)物們的共識(shí)。但是，螞蟻樂(lè)樂(lè)不服氣了。樂(lè)樂(lè)到大象那里，對(duì)大象說(shuō):"聽(tīng)說(shuō)大象的力氣最大，但我不這么認(rèn)為。我們螞蟻可以舉起比大象舉起的更重的東西。“大象一聽(tīng)，十分不高興，說(shuō)：”怎么可能呢？螞蟻那么小，怎么可能舉起比大象舉起的更重的東西呢？那么讓我看看你們是不是真的有那么大的力量吧。“

大象和樂(lè)樂(lè)來(lái)到了象王的王宮。象王走出王宮，聽(tīng)說(shuō)大象和螞蟻要比力氣，頓時(shí)有了興趣。象王決定舉行一場(chǎng)比賽，大象和螞蟻分別舉起象王看誰(shuí)能舉起誰(shuí)的力氣就更大。大象先開(kāi)始，大象剛開(kāi)始還非常自信，認(rèn)為自己能舉起象王，可是費(fèi)了半天勁，象王紋絲不動(dòng)，沒(méi)有舉起象王。

該螞蟻舉起了。螞蟻樂(lè)樂(lè)吹了一個(gè)口哨，一下子來(lái)了一大群螞蟻，螞蟻們排好隊(duì)，井然有序。螞蟻們輕而易舉地就舉起了象王。大象十分吃驚。象王哈哈大笑，宣布螞蟻的力氣更大。象王說(shuō)：”不要小看小小的螞蟻，當(dāng)一群螞蟻團(tuán)結(jié)一致的時(shí)候，就能達(dá)到意想不到的奇跡。“

螞蟻和大象范文第2篇

“大眾創(chuàng)業(yè)、萬(wàn)眾創(chuàng)新”，這是時(shí)代的主題，幾乎所有的創(chuàng)業(yè)都是從小微企業(yè)起步的。那么，如何讓小微企業(yè)變得強(qiáng)大？讓他們?cè)陉?yáng)光雨露中茁壯成長(zhǎng)？這是企業(yè)成長(zhǎng)過(guò)程中需要破解的難題。

不久以前，創(chuàng)始人空間孵化器首席執(zhí)行官史蒂文?霍夫曼講述了美國(guó)硅谷的小微初創(chuàng)企業(yè)的成立路徑，以及他們快速發(fā)展的原因。

創(chuàng)業(yè)鏈條可能是失敗-嘗試-再失敗-再嘗試

史蒂文?霍夫曼以Founders Space為例，這是一家在美國(guó)舊金山和硅谷非常知名的孵化器、加速器。這里有超過(guò)300多位導(dǎo)師、顧問(wèn)和教練分布在全球各地。Founders Space非常關(guān)注對(duì)小微初創(chuàng)公司的創(chuàng)業(yè)教育和培養(yǎng)。

“每一個(gè)人、每一個(gè)年輕人都可以成為非常成功的創(chuàng)業(yè)者，他們成功的原因不是因?yàn)樗麄冇袆?chuàng)業(yè)的空間，他們需要的是成熟的創(chuàng)業(yè)家的經(jīng)驗(yàn)和智慧?！?/p>

在過(guò)去的五年當(dāng)中，F(xiàn)ounders Space培育和孵化加速了成千上萬(wàn)個(gè)創(chuàng)業(yè)者，他們大多數(shù)都獲得了成功。它不僅在美國(guó)的硅谷有機(jī)構(gòu)，而且在亞洲、歐洲乃至全球各地都非常知名。《福布斯》雜志把Founders Space評(píng)為孵化器第一名。它不僅跟世界各地孵化器有合作，而且與當(dāng)?shù)卣⒏咝：推髽I(yè)都有深切的合作關(guān)系。它在韓國(guó)和日本挑選當(dāng)?shù)刈钣泻鹆康某鮿?chuàng)公司，把他們帶到美國(guó)硅谷。

現(xiàn)在，F(xiàn)ounders Space看中了孵化排名第一的中國(guó)。史蒂文?霍夫曼強(qiáng)調(diào)，在全世界，只有兩個(gè)地方可以誕生超過(guò)十億美金的“獨(dú)角獸”的地方，一個(gè)是美國(guó)，一個(gè)就是中國(guó)。

Founders Space與北京大學(xué)創(chuàng)新中心合作，在北京中關(guān)村落地，這是它在中國(guó)成立的第一家孵化器。Founders Space希望把這個(gè)模式在全國(guó)拓展開(kāi)來(lái)?！拔覀儠?huì)把在美國(guó)硅谷舊金山成功的模式搬到中國(guó)來(lái)，目的不僅是孵化初創(chuàng)公司，還要給年輕人成功的經(jīng)驗(yàn)和培育課程?！?/p>

創(chuàng)業(yè)者的成功不僅要有經(jīng)驗(yàn)，人際關(guān)系同樣重要。我在硅谷有多年的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，同樣與北大有非常好的合作關(guān)系，雙方強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)合。我們的發(fā)展目標(biāo)是把來(lái)自全球最前沿的科技，比如以色列、德國(guó)、美國(guó)硅谷的技術(shù)，帶到中國(guó)，讓創(chuàng)業(yè)者可以快速地發(fā)展和壯大。

“我有四次創(chuàng)業(yè)經(jīng)歷，有三次是由硅谷的孵化基金幫助孵化的。其中幾次是取得了非常大的成功，但是也有幾次滿是挫折，非常艱難。很多創(chuàng)業(yè)者問(wèn)我在成立初創(chuàng)公司的時(shí)候，自己應(yīng)該先做什么？我說(shuō)他需要有與死神吃飯的勇氣，也就是說(shuō)要有承擔(dān)失敗的承受力。創(chuàng)業(yè)是一項(xiàng)充滿了風(fēng)險(xiǎn)和不確定性的一項(xiàng)工作，創(chuàng)業(yè)者永遠(yuǎn)不知道他的下一步是順利還是挫折。但是他必須不斷地去往前走，硬著頭皮往前走。創(chuàng)業(yè)者不能感覺(jué)害怕，必須一直保持不斷地往前走。”史蒂文?霍夫曼強(qiáng)調(diào)。

如果創(chuàng)業(yè)是一項(xiàng)很容易的事情，所有人都可能成為億萬(wàn)富翁。很多人不會(huì)選擇創(chuàng)業(yè)這條路，因?yàn)檫@個(gè)太辛苦了。但是這不是問(wèn)題，大不了從頭來(lái)過(guò)。失敗是非常重要的，而且是必須的，如果創(chuàng)業(yè)者想成功，首先要嘗到失敗的滋味。一般而言，創(chuàng)業(yè)者獲得成功之前可能已經(jīng)失敗了上百次，這是非常重要的。

為什么要在創(chuàng)業(yè)的時(shí)候講失??？因?yàn)楹芏嗳藙?chuàng)業(yè)只是踩在失敗人的肩膀上繼續(xù)去革命性地去探索新的產(chǎn)品，完善它，取得新的成功。抄襲、復(fù)制非常容易，這也是很多人正在做的事情。

在硅谷，創(chuàng)新不是直接地照搬、拷貝、復(fù)制，而是不斷地去失敗、嘗試，再失敗，再嘗試，經(jīng)過(guò)多次這樣的經(jīng)歷后，創(chuàng)業(yè)者才能知道什么才是成功的?！叭绻粋€(gè)人真的想成為一個(gè)成功的創(chuàng)業(yè)者，他首先要告訴自己不要害怕失敗。如果他是一個(gè)膽小害怕失敗的人，就永遠(yuǎn)不會(huì)成為一個(gè)成功的創(chuàng)業(yè)者。”

天生的天才也要有一群龐大的執(zhí)行者

創(chuàng)業(yè)者要在開(kāi)始創(chuàng)業(yè)前，制定自己的計(jì)劃?！霸诠韫?，我們做的計(jì)劃從來(lái)不會(huì)做超過(guò)五年以上的計(jì)劃。這個(gè)世界變化非?？?，你可能永遠(yuǎn)不知道一年甚至兩年之后世界會(huì)變成什么樣。所以，我們從來(lái)不做長(zhǎng)期規(guī)劃，只做短期規(guī)劃，例如三個(gè)月的計(jì)劃。但是，制定三個(gè)月的計(jì)劃過(guò)程中，創(chuàng)業(yè)者可能會(huì)做幾次更改，正是因?yàn)閯?chuàng)業(yè)者的工作不斷地嘗試和失敗，他計(jì)劃才會(huì)不斷地更新。如果創(chuàng)業(yè)者從年初做一個(gè)計(jì)劃，到年尾從來(lái)沒(méi)有變過(guò)，這不是一個(gè)好的計(jì)劃。如果一個(gè)人做一年的計(jì)劃，中間絲毫沒(méi)有改變過(guò)，要么是創(chuàng)業(yè)者特別幸運(yùn)，要么創(chuàng)業(yè)者是一個(gè)墨守成規(guī)，不會(huì)創(chuàng)新的人。”

如果創(chuàng)業(yè)者想成為一個(gè)成功的創(chuàng)業(yè)者，首先就要做他自己。創(chuàng)業(yè)者不能做他的能力達(dá)不到的事情，每個(gè)人擅長(zhǎng)的地方不一樣，有的人擅長(zhǎng)做銷(xiāo)售，有的人擅長(zhǎng)做計(jì)劃，有的人擅長(zhǎng)出創(chuàng)意，就讓擅長(zhǎng)的人做他擅長(zhǎng)的事情。沒(méi)有一個(gè)人可以做所有的事情，一定要找到自己最擅長(zhǎng)的點(diǎn)，創(chuàng)業(yè)者要知曉自己的優(yōu)勢(shì)所在，然后去發(fā)揮它，然后組建一個(gè)團(tuán)隊(duì)，讓那些人做自己擅長(zhǎng)的事情。

如果創(chuàng)業(yè)者是一個(gè)做策略、做計(jì)劃性的人的話，他可以找一些細(xì)節(jié)性強(qiáng)、有執(zhí)行性的工作?！拔铱吹胶芏嗥髽I(yè)家的失敗，是因?yàn)樗麄兎浅ＥΦ卦谧鲆恍┧麄兏静簧瞄L(zhǎng)的事情。如果他真的不擅長(zhǎng)的話，就應(yīng)該放棄，讓真正擅長(zhǎng)的人幫創(chuàng)業(yè)者一起完成，反而是最節(jié)約時(shí)間和節(jié)約成本的做法。”

史蒂文?霍夫曼說(shuō)，“我每年會(huì)見(jiàn)成百上千的企業(yè)家，我發(fā)現(xiàn)他們總是在做一些不擅長(zhǎng)的事情，這點(diǎn)也是他們失敗很重要的一點(diǎn)，有很多企業(yè)家總是說(shuō)服自己去做他們根本不擅長(zhǎng)的事情。他們應(yīng)該讓真正擅長(zhǎng)的人來(lái)做適合這些方面的工作。”

創(chuàng)業(yè)者要建立自己的團(tuán)隊(duì)，哪怕他是一個(gè)天生的天才，一個(gè)人也不可能完成十億美金以上的工作。十億以上規(guī)模的工作量是由來(lái)自不同領(lǐng)域的優(yōu)秀的人才團(tuán)隊(duì)一起來(lái)完成的。馬云非常優(yōu)秀，他是個(gè)天才，但是他現(xiàn)在的成就不是壯大自己就能夠完成的，他背后有一個(gè)非常優(yōu)秀的團(tuán)隊(duì)。這也適用于Facebook的扎克伯格，創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)就需要有創(chuàng)意的新人來(lái)幫創(chuàng)業(yè)者一起完成工作。

“創(chuàng)業(yè)者需要有三位不同杰出的人士。其中一個(gè)人非常懂得商業(yè)運(yùn)作，懂得銷(xiāo)售，懂得公司管理。創(chuàng)業(yè)者還需要有一類(lèi)技術(shù)型人才，他可能有點(diǎn)兒像書(shū)呆子，不擅長(zhǎng)跟人打交道，但他在技術(shù)上非常棒。第三位是個(gè)瘋狂的人，他每天有很多新鮮的想法，剛開(kāi)始很多人不理解他，但是創(chuàng)業(yè)者需要一類(lèi)每天有新奇創(chuàng)新想法的人。如果創(chuàng)業(yè)者想他的企業(yè)成功，這三位不同的杰出人士都需要在他的團(tuán)隊(duì)里，他們?nèi)齻€(gè)是三種完全不同的人，把他們組合在一起，將會(huì)迸發(fā)出神奇的力量。也許這個(gè)團(tuán)隊(duì)可以從三人變成兩人，也可以從三人擴(kuò)展成五人，但是不要?jiǎng)傞_(kāi)始人數(shù)一定不要太多，尤其是公司核心團(tuán)隊(duì)成員，要小而精。”

如果公司里有龐大的系統(tǒng)和執(zhí)行體系，創(chuàng)業(yè)者可以仔細(xì)觀察自己體系當(dāng)中有哪些可以改善的地方，哪些地方可以做得更好，這就是公司自己的創(chuàng)新。在承諾之前先做大，當(dāng)你想成為一個(gè)創(chuàng)業(yè)者你就要“快”。當(dāng)今社會(huì)，沒(méi)有任何一個(gè)商業(yè)模式可以在很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)被大家認(rèn)可，這個(gè)世界每天都在發(fā)生日新月異的變化。當(dāng)創(chuàng)業(yè)者產(chǎn)生一個(gè)絕好的想法時(shí)，就要以最快的速度去發(fā)展它，而不要延遲半步。如果創(chuàng)業(yè)者發(fā)現(xiàn)一個(gè)很好的機(jī)會(huì)，可能需要一百人來(lái)完成，但此時(shí)他只有五到十人的團(tuán)隊(duì)時(shí)，也不要遲疑，先抓住機(jī)會(huì)再說(shuō)，人數(shù)的問(wèn)題事后再商量。

顛覆與叛逆合作與分享

當(dāng)創(chuàng)業(yè)的浪潮席卷而來(lái)，創(chuàng)業(yè)者建立初創(chuàng)公司之時(shí)，他需要強(qiáng)大的力量來(lái)支撐自己。創(chuàng)業(yè)很像是在沖浪，創(chuàng)業(yè)者每次沖浪的時(shí)候都會(huì)有風(fēng)浪席卷而來(lái)，他需要做的就是逆著風(fēng)浪繼續(xù)前行。如果他想成為獨(dú)角獸公司，就需要踩上最大的浪，因?yàn)樽畲蟮睦瞬拍馨阉偷阶钸h(yuǎn)的地方。這個(gè)風(fēng)浪可能瞬間就被淹沒(méi)了，局勢(shì)隨時(shí)都會(huì)變化，創(chuàng)業(yè)者要抓住機(jī)會(huì)?，F(xiàn)在，社會(huì)呈現(xiàn)的一個(gè)大的浪潮是物聯(lián)網(wǎng)、大數(shù)據(jù)、人工智能、大健康和金融科技。不僅是美國(guó)硅谷，全球都在爭(zhēng)搶這些機(jī)會(huì)。這個(gè)浪潮正從美國(guó)席卷全世界。

創(chuàng)業(yè)的浪潮來(lái)得如此猛烈，創(chuàng)業(yè)者應(yīng)該如何應(yīng)對(duì)？史蒂文?霍夫曼認(rèn)為，創(chuàng)業(yè)者要有非常豐富的想象力，還要擁有強(qiáng)大的力量，能夠獲得非常多的資金來(lái)支持這些技術(shù)的發(fā)展。如今，媒體非常關(guān)注知名投資家會(huì)在哪些行業(yè)投資？當(dāng)很多投資者投將錢(qián)放在某一個(gè)行業(yè)之時(shí)，這個(gè)行業(yè)會(huì)借助媒體的渲染，快速地發(fā)展。創(chuàng)業(yè)者不用擔(dān)心團(tuán)隊(duì)的人多和少，只要選了正確的領(lǐng)域和投資人，他的企業(yè)也會(huì)像臉書(shū)和蘋(píng)果一樣快速向前發(fā)展。

如果創(chuàng)業(yè)者所在的領(lǐng)域并不在上述那些范圍內(nèi)，他可能覺(jué)得現(xiàn)在創(chuàng)業(yè)會(huì)非常地艱難。這時(shí)，創(chuàng)業(yè)者應(yīng)該轉(zhuǎn)型到主旋律上面，會(huì)更加容易。“有一個(gè)公司，曾經(jīng)在硅谷發(fā)展地非常迅猛，但是很快就衰弱下來(lái)了，因?yàn)樗龅牟⒉皇悄壳爸髁黝I(lǐng)域。做事情要順勢(shì)而為，不要背道而馳，否則會(huì)讓創(chuàng)業(yè)者花費(fèi)很多的時(shí)間和精力，而且往往得不到自己想要的結(jié)果。”史蒂文?霍夫曼認(rèn)為創(chuàng)業(yè)者要時(shí)刻關(guān)注世界大的發(fā)展潮流。

“創(chuàng)業(yè)者不用每天迸發(fā)出很多新鮮的想法，只要是正確的想法就夠了?！蹦呐聞?chuàng)業(yè)者只有很少的錢(qián)，哪怕只擁有很小的團(tuán)隊(duì)，只要?jiǎng)?chuàng)業(yè)者有正確的想法，就不會(huì)阻礙創(chuàng)業(yè)者今后的成長(zhǎng)。創(chuàng)業(yè)者不要一上來(lái)就說(shuō)他需要五千萬(wàn)美金這樣的想法。因?yàn)閯?chuàng)業(yè)者可能會(huì)因?yàn)槿セI集五千萬(wàn)美金，反而會(huì)阻礙自己的想法和發(fā)展。

如果創(chuàng)業(yè)者的想法與其他人一樣，就不是創(chuàng)新。創(chuàng)業(yè)者要仔細(xì)想想每天做的商業(yè)和工作當(dāng)中的每一項(xiàng)，有哪些可以改進(jìn)，哪些可以去掉，哪些可以讓他更好地發(fā)展，這就是創(chuàng)新。例如，創(chuàng)業(yè)者每天都會(huì)看一下自己的工作安排，細(xì)到每一個(gè)細(xì)節(jié)，他可以問(wèn)自己這樣的事情是否必須要這樣做，可不可以讓他以更高的效率或者投入更少的錢(qián)去做，加入新科技，讓創(chuàng)業(yè)者更好地發(fā)展，這些都是創(chuàng)新。當(dāng)創(chuàng)業(yè)者靜下心來(lái)想這些事情的時(shí)候，就會(huì)想到很多的新想法。

“要想改變世界，我們最缺乏什么樣的創(chuàng)新，創(chuàng)新的關(guān)注點(diǎn)在什么地方？我看到一種顛覆的力量和叛逆的精神?！惫韫韧顿Y人吳軍強(qiáng)調(diào)。

做顛覆式創(chuàng)新的原因很簡(jiǎn)單，在一個(gè)現(xiàn)有的組織結(jié)構(gòu)，不管是經(jīng)濟(jì)體、學(xué)校、公司里面，只要定好一個(gè)游戲規(guī)則，一定是自發(fā)地就往山頂走。顛覆和叛逆是硅谷最成功的經(jīng)驗(yàn)。

吳軍認(rèn)為，叛逆的力量造就了硅谷長(zhǎng)盛不衰的原因。18世紀(jì)是西班牙大帆船的時(shí)代，它不但是海上的霸主，也是高科技的產(chǎn)品，后來(lái)小的蒸汽船戰(zhàn)勝了大帆船，機(jī)械技術(shù)大爆發(fā)，大帆船很難從機(jī)械進(jìn)步中獲得優(yōu)勢(shì)，結(jié)果這個(gè)顛覆就完成了。今天大帆船退出了歷史舞臺(tái)。到了信息時(shí)代，60、70年代世界上最了不起的計(jì)算機(jī)公司都是IBM，當(dāng)時(shí)市值占到美國(guó)GDP的3%，現(xiàn)在連1%都占不到了。微軟顛覆了IBM。

顛覆式創(chuàng)新，首先來(lái)自于外部，然后會(huì)出現(xiàn)低品質(zhì)、高風(fēng)險(xiǎn)、低利潤(rùn)、窄眾市場(chǎng)的商品，這是一個(gè)很重要的特征。顛覆式創(chuàng)新有一個(gè)共同的特點(diǎn)，蒸汽船利用機(jī)械的進(jìn)步，微軟的東西利用摩爾定律，Google 能利用互聯(lián)網(wǎng)，利用現(xiàn)有的技術(shù)很快的進(jìn)行超越。所謂的顛覆式創(chuàng)新不是把現(xiàn)有的行業(yè)完全取代掉，而恰恰是以合作的形式。并不是所有傳統(tǒng)產(chǎn)業(yè)都做互聯(lián)網(wǎng)，而恰恰是借助互聯(lián)網(wǎng)的平臺(tái)成為一個(gè)新公司、新產(chǎn)業(yè)，這是“互聯(lián)網(wǎng)+”所要做的一件事情。

“回顧過(guò)去50年，世界經(jīng)濟(jì)發(fā)展的定律是摩爾定律。我們現(xiàn)有的行業(yè)要加上新技術(shù)，產(chǎn)生新行業(yè)，這是現(xiàn)有行業(yè)加上技術(shù)，才能最快速的帶動(dòng)全球經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)。這就是合作經(jīng)濟(jì)。我們只有把資源拿出來(lái)分享，拿出來(lái)重復(fù)利用，才能使真正的全球經(jīng)濟(jì)變得更加綠色，效率更加高，這是未來(lái)創(chuàng)業(yè)創(chuàng)新將來(lái)發(fā)展的一個(gè)方向。”

“以小見(jiàn)大”而非“求大求全”

在硅谷，為什么那些只有三個(gè)人的初創(chuàng)公司可以打敗上億美金的大公司？就是因?yàn)樾∮行〉暮锰?，小團(tuán)隊(duì)的勇氣更大，哪怕失敗了也不怕從頭再來(lái)。但是大公司害怕失敗，它沒(méi)有勇氣像小公司一樣從頭再來(lái)。小公司的價(jià)值鏈比大公司強(qiáng)很多，他們采取全球免費(fèi)。所以，很多小團(tuán)隊(duì)獲得了巨大的成功，變成了大公司。

很多創(chuàng)業(yè)者在創(chuàng)業(yè)初期想的就是籌錢(qián)，不要只想一味的籌錢(qián)，商業(yè)的真正成功并不是拿到越多的錢(qián)就越成功，而在于創(chuàng)業(yè)者的創(chuàng)新之處。很多人在創(chuàng)業(yè)初期很幸運(yùn)地拿到大量資金，但是反而這些資金會(huì)阻礙他創(chuàng)新的腳步。比如創(chuàng)業(yè)者會(huì)安于享樂(lè)，急速擴(kuò)建他的團(tuán)隊(duì)，這些都是阻擋他去創(chuàng)新。很多年輕人創(chuàng)業(yè)初期非常幸運(yùn)拿到500、1000萬(wàn)美金，可是他們完全沒(méi)有想清楚自己做什么，自己的市場(chǎng)策略是什么，拿到這么多錢(qián)反而讓他們加速失敗。很多年輕人拿到這些錢(qián)之后想到的第一個(gè)做法是擴(kuò)張自己的隊(duì)伍、租辦公室、給自己購(gòu)很多不需要的東西，完全沒(méi)有商業(yè)模式來(lái)支撐他的公司。商業(yè)模式最終是支撐創(chuàng)業(yè)者是否成功的重要因素。

“如果創(chuàng)業(yè)者跟扎克伯格或比爾蓋茨一起吃飯，他就會(huì)非?？鞓?lè)地找到創(chuàng)業(yè)的想法。他們見(jiàn)過(guò)很多創(chuàng)業(yè)者說(shuō)自己只有500萬(wàn)美元，這些人只知道怎么花這些錢(qián)讓自己的公司快速成長(zhǎng)。但是很多成功人士在創(chuàng)業(yè)初期可能都沒(méi)有500萬(wàn)美元，可是后來(lái)一樣成功了?？梢猿晒Φ南敕ǎ刻煊谐汕习偃f(wàn)個(gè)，不要認(rèn)為只是選那些初期就需要500萬(wàn)美元、5000萬(wàn)美元的主意才能成功，可以選一些小投入的領(lǐng)域開(kāi)始創(chuàng)業(yè)。我見(jiàn)過(guò)一個(gè)很硅谷創(chuàng)業(yè)成功的公司，最初團(tuán)隊(duì)只有五個(gè)人，沒(méi)有多少創(chuàng)業(yè)資金。他們從大數(shù)據(jù)分析開(kāi)始，慢慢找到投資人，拿到錢(qián)，使企業(yè)快速發(fā)展起來(lái)了?！?/p>

很多O2O模式很快就消失了，很多人失敗了，就是因?yàn)樗麄兲斓啬玫搅顺跗谫Y金，但是他們根本沒(méi)有想清楚接下來(lái)怎么去擴(kuò)大自己的業(yè)務(wù)。由此看來(lái)，擁有大量的錢(qián)對(duì)沒(méi)有完全成長(zhǎng)的創(chuàng)業(yè)者來(lái)講，不全都是好事，反而有時(shí)候會(huì)阻礙創(chuàng)業(yè)者。

究竟什么是有效的創(chuàng)業(yè)方法？

那就是從小處開(kāi)始著手，不要特別宏偉的目標(biāo)。世界上很多非常大的創(chuàng)新都來(lái)自于非常小的事件，比如美國(guó)推特，這個(gè)程序在一周之內(nèi)就可以寫(xiě)出來(lái)，只是一個(gè)非常小的想法。YouTube也是源于一個(gè)非常小的想法，創(chuàng)業(yè)者想把它做成在線視頻相親網(wǎng)站，后來(lái)發(fā)現(xiàn)人們并不喜歡通過(guò)視頻約會(huì)或者相親，所以改變成上傳視頻的網(wǎng)站，這是YouTube慢慢發(fā)展起來(lái)的原因。扎克伯格是臉書(shū)創(chuàng)始人，他在哈佛大學(xué)校友錄上只看到每個(gè)人的照片，就想怎么讓哈佛大學(xué)校友能夠互相之間認(rèn)識(shí)呢？所以做出了Facebook。例如，打車(chē)軟件Uber，初期是一個(gè)很小的公司，Uber并沒(méi)有去買(mǎi)很多的車(chē)來(lái)支撐他的打車(chē)體系，只是提供了中間的橋梁，APP來(lái)連接司機(jī)和打車(chē)的人。

大樹(shù)下，螞蟻收獲了一顆米粒。米粒重達(dá)88毫克，是這只螞蟻體重的4倍。

河岸邊，大象收割了一筐香草，約10公斤，重量不足象之半腿。

驕陽(yáng)似火，螞蟻吃力地馱著米粒，一步一步地爬行，那速度可笑煞蝸牛、氣死烏龜。

螞蟻和大象范文第3篇

關(guān)鍵詞：連續(xù)箱梁；掛藍(lán)；設(shè)計(jì)

中圖分類(lèi)號(hào)：U215.14 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：

1.工程概況

成綿樂(lè)鐵路客運(yùn)專(zhuān)線CMLZQ-6標(biāo)新津金馬河特大橋105#～109#墩上部結(jié)構(gòu)采用預(yù)應(yīng)力混凝土連續(xù)梁跨越成雅高速和S103省道，跨徑布置為（63.2+2×64+68）m，設(shè)計(jì)采用掛藍(lán)懸澆施工。

連續(xù)梁為變截面單箱單室連續(xù)梁，采用垂直腹板。箱梁頂寬11.80m，底寬6.4m，翼緣板長(zhǎng)2.7m，支點(diǎn)處梁高5.6m，跨中梁高3.2m。腹板厚75cm（支點(diǎn)）～55cm（跨中），底板厚度為70cm～44cm，頂板厚度厚度為35cm。

箱梁0#塊梁段長(zhǎng)度為12m，邊、中跨合攏段長(zhǎng)度為2m；掛藍(lán)懸臂澆注箱梁最重塊段為3#塊，其重量為119.8t。

2. 掛藍(lán)設(shè)計(jì)

根據(jù)幾種類(lèi)型掛藍(lán)的優(yōu)缺點(diǎn)及現(xiàn)有資源、成本等方面考慮采用菱形掛藍(lán)施工。

菱形掛藍(lán)設(shè)計(jì)思路：自重輕、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、受力明確、堅(jiān)固穩(wěn)定、變形小、前移和裝拆方便、具有較強(qiáng)的可重復(fù)利用性。

2.1 掛藍(lán)設(shè)計(jì)參數(shù)

⑴掛藍(lán)混凝土懸灌最大節(jié)段重量1909.6KN；施工機(jī)具和人群荷載重2.5KPa。

⑵砼自重GC＝26.5kN/m3。

⑶鋼材彈性系數(shù)E=2.1×105MPa；剪切模量G=8.1×104MPa；泊松比γ=0.3。

⑷材料容許應(yīng)力見(jiàn)《鐵路橋涵鋼結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)規(guī)范》TB10002.2-2005；

臨時(shí)結(jié)構(gòu)材料容許應(yīng)力提高系數(shù)：1.3。

⑸荷載系數(shù)

①澆筑混凝土?xí)r的動(dòng)力系數(shù)：1.2；

②掛藍(lán)空載行走時(shí)的沖擊系數(shù)1.3；

③澆筑混凝土和掛藍(lán)行走時(shí)的抗傾覆穩(wěn)定系數(shù)：2.0；

④自錨固系統(tǒng)的安全系數(shù)為2；

⑤上水平限位安全系數(shù)為2；

⑥掛藍(lán)質(zhì)量與梁段混凝土比值宜控制在0.3～0.5間，特殊情況不超過(guò)0.7。

⑹結(jié)構(gòu)剛度

①構(gòu)件承受荷載后彈性撓度為相應(yīng)結(jié)構(gòu)的1/400。

②底模板本身的最大計(jì)算撓度變形

③結(jié)構(gòu)表面外露的模板撓度為模板構(gòu)造撓度的1/400。

④結(jié)構(gòu)表面的模板撓度為模板構(gòu)件的1/250。

2.2掛藍(lán)結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)

2.2.1掛藍(lán)主桁尺寸的選擇

掛藍(lán)主桁架尺寸選取原則主要基于以下2點(diǎn):

⑴掛藍(lán)應(yīng)滿足澆筑箱梁分段長(zhǎng)度3 m、3.5 m、4m的條件。

⑵掛藍(lán)澆筑箱梁高度變化范圍4.8m～8.25 m,且梁體按二次拋物線變化，箱梁底寬6.7m,頂寬11.8m。

2.2.2掛藍(lán)的結(jié)構(gòu)形式

菱形掛藍(lán)由主桁系統(tǒng)、行走及錨固系統(tǒng)、起吊系統(tǒng)、底藍(lán)系統(tǒng)、模板系統(tǒng)五大部分組成。

(1)主體桁架

主桁架是由兩片外型呈菱形的桁片在其橫向設(shè)置前后橫梁組成一空間桁架，并在前后橫梁上設(shè)置上下兩層平面聯(lián)結(jié)桿件以提高主桁的穩(wěn)定性和剛度。主桁桿件采用雙[20槽鋼組合成型截面，桿件間采用高強(qiáng)銷(xiāo)子銷(xiāo)接，前后橫梁桁片及其平聯(lián)采用鋼板和槽鋼。在前后橫梁下方設(shè)分配梁，用于懸掛底藍(lán)、模板。

圖1 菱形掛藍(lán)正面圖

⑵行走及錨固系統(tǒng)

掛藍(lán)在懸澆完一段箱梁，預(yù)應(yīng)力筋張拉完畢后開(kāi)始前移。掛藍(lán)前移時(shí)，通過(guò)后錨千斤頂將上拔力轉(zhuǎn)換到行走小車(chē)上，由反扣于工字型鋼軌道上的行走小車(chē)來(lái)平衡傾覆力矩。采用焊接型鋼的軌道分長(zhǎng)軌和短軌兩種，由錨固梁與箱梁豎向預(yù)應(yīng)力筋連接并錨固。澆筑混凝土?xí)r，需通過(guò)箱梁頂板上預(yù)留的孔道，穿錨桿與主桁后結(jié)點(diǎn)錨固。

⑶起吊系統(tǒng)

起吊系統(tǒng)用以連接掛藍(lán)主桁架和底模平臺(tái)，吊桿選用φ32精軋螺紋鋼。吊桿上端懸吊于前后橫梁上，下端與底平臺(tái)或側(cè)模分配梁連接，用千斤頂提升裝置來(lái)調(diào)節(jié)底模系統(tǒng)的標(biāo)高。

⑷底藍(lán)系統(tǒng)

底藍(lán)系統(tǒng)由底藍(lán)前后橫梁、縱梁等組成，模板直接鋪于底平臺(tái)上，前后橫梁懸吊于主桁架，澆筑混凝土?xí)r，后橫梁錨固于前段已完箱梁底板。

⑸模板系統(tǒng)

模板系統(tǒng)包括外模、內(nèi)模、堵頭模板等。

3.掛藍(lán)結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)計(jì)算

根據(jù)菱形掛藍(lán)的受力特點(diǎn),對(duì)掛藍(lán)的主桁系統(tǒng)、底藍(lán)系統(tǒng)、模板系統(tǒng)、橫梁吊帶系統(tǒng)及掛藍(lán)的穩(wěn)定性采用MIDAS軟件進(jìn)行有限元分析。

通過(guò)對(duì)掛藍(lán)的平面和三維分析,得出結(jié)論如下:

⑴掛藍(lán)重量與箱梁之比值為：0.42；

⑵主桁的最大撓度為11.3mm＜14.5mm；

⑶底藍(lán)最大撓度前橫梁為3.4mm＜7mm，后橫梁為1.2mm＜9.6mm；

⑷吊帶應(yīng)力σ=55.5MPa≤1.3×135 MPa=175.5 MPa；

⑸自錨安全系數(shù)2.3＞2.0；

⑹抗傾覆穩(wěn)定系數(shù)為2.5＞2.0。

所有計(jì)算指標(biāo)符合規(guī)范要求。

4.掛藍(lán)拼裝

掛籃拼裝施工工序:軌道安裝、錨固主桁架安裝前后橫梁桁片安裝掛籃后錨安裝外模板系統(tǒng)安裝底籃系統(tǒng)安裝內(nèi)模系統(tǒng)安裝各工作平臺(tái)安裝調(diào)試。

5、掛藍(lán)荷載試驗(yàn)

掛籃拼裝完畢后，必須進(jìn)行靜載試驗(yàn)，以測(cè)定結(jié)構(gòu)彈性值和消除掛籃的非彈性變形值，驗(yàn)證掛籃各部分結(jié)構(gòu)安全性的同時(shí)并為梁段施工預(yù)拱度計(jì)算提供可靠數(shù)值。

采用傳統(tǒng)的加砂袋方式對(duì)掛籃進(jìn)行靜載試驗(yàn)。

本掛籃最終荷載試驗(yàn)結(jié)果: 主桁架平均撓度12.5 mm ,底籃前端平均撓度為4.9 mm,后橫梁撓度為2.1mm?；九c設(shè)計(jì)撓度相符。

6.結(jié)束語(yǔ)

該橋使用的菱形掛籃結(jié)構(gòu)合理、受力清晰、操作方便、自重較輕、施工進(jìn)度快、質(zhì)量好。掛籃主桁架采用精加工銷(xiāo)接,整體箱形節(jié)點(diǎn),其它桿件均采用螺栓聯(lián)結(jié),拆裝方便,易防破損,通用性強(qiáng),便于重復(fù)利用。解決了該橋的跨成雅高速大跨度連續(xù)剛構(gòu)梁懸灌施工難題。

參考文獻(xiàn)：

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[4]GB50017-2003, 《鋼結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)規(guī)范》;

螞蟻和大象范文第4篇

[主題詞]針刺；肥胖；海馬/化學(xué)；一氧化氮/分析；一氧化氮合酶*

Effects of acupuncture on contents of nitric oxide and nitric oxides ynthase

in the hippocampus in the obese rat

Liu Zhicheng1, Sun Fengmin2, Zhu Miaohua1, et al.

(1.Nanjing University ofTraditional Chinese Medicine and Pharmacology, Jiangsu

210029, China; 2.Nanjing Population Administration College)

ABSTRACT Objective To study effect of acupuncture on the c ontent of

nitric oxide (NO) and the activity of nitric oxide synthase (NOS) in the

hippocampus of the obese rat. Methods The changes of body we ight, body fat,

and content of NO and activity of NOS in the hippocampus befor e and after

acupuncture were observed. Results The body weight, body fat, and the content

of NO and the activity of NOS in the hippocampus all were significantly higher

than those in the normal rat; there were high positive correlation of the levels

of NO and activities of NOS in the hippocampus with the body weight, Lee’s

index; after acupuncture treatment, the marked weight reduction effect was

achieved, and the level of NO and the activity of NOS in the hippocampus de

creased significantly. Conclusion Abnormal levels of NO and a ctivities of NOS

in the hippocampus may be an important factor for obesity; the benign

regulation of acupuncture on the level of NO and the activity of NOS in the

hippocampus is possibly one of the central nervous mechanisms of reducing body

weight.

KEY WORDS Acupuncture; Obesity; Hippocampus/chem; Nitric Oxide/anal; Nitric Oxide Synthase*

針灸治療單純性肥胖病及其并發(fā)癥取得了良好的療效，與此同時(shí)，患者的神經(jīng)、內(nèi)分泌、物質(zhì)代謝等得以改善[1]。本研究以實(shí)驗(yàn)性肥胖大鼠為模型，觀察針刺對(duì)實(shí)驗(yàn)性肥胖大鼠海馬組織一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性的影響，探討針刺減肥中樞神經(jīng)的作用機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)肥胖大鼠模型研制

1月齡剛斷乳SD雄性大鼠，體重50～70 g，由總醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。參照劉氏提供的實(shí)驗(yàn)性肥胖造模方法，略加改進(jìn)[2]。

1.2 實(shí)驗(yàn)步驟

(1)動(dòng)物分組 以普通全價(jià)鼠飼料喂養(yǎng)的大鼠作為正常對(duì)照組，簡(jiǎn)稱(chēng)正常組(6只)。將造模成功的實(shí)驗(yàn)性肥胖大鼠隨機(jī)分為兩組，一組不做任何治療，為模型對(duì)照組，簡(jiǎn)稱(chēng)對(duì)照組(6只)；另一組給予針刺治療，為針刺治療組，簡(jiǎn)稱(chēng)針刺組(6只)。

(2)治療方法 分別將針刺組大鼠放入固定器中，取一側(cè)“后三里”(相當(dāng)于足三里)和“內(nèi)庭”穴，用32號(hào)1寸毫針，分別刺入5 mm和3 mm深，然后接通電針儀(電針綜合治療儀G 6805-Ⅲ型，福建省醫(yī)療器械廠生產(chǎn))采用頻率10 Hz，強(qiáng)度1.5 V連續(xù)波，每次治療10分鐘，每日1次，連續(xù)治 療14天，左右側(cè)輪換取穴。

(3)實(shí)驗(yàn)方法 各組大鼠實(shí)驗(yàn)期間均采用普通全價(jià)鼠飼料喂養(yǎng)，自由攝食和飲水，每日更換飼料和水。針刺組大鼠給予針刺治療期間，正常組和對(duì)照組大鼠分別每天放入大鼠固定器中適應(yīng)15分鐘，持續(xù)14天。實(shí)驗(yàn)前后觀察大鼠攝食量、飲水量、大小便、體重、體長(zhǎng)及Lee’s指數(shù)等。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，禁食過(guò)夜，次日斷頭處死，迅速分離心包、腎周和附睪等部位脂肪，稱(chēng)重并記錄；同時(shí)迅速分離腦組織置于液氮中保存；次日取出置于冰碟上分離出海馬組織，稱(chēng)重后用生理鹽水制成海馬組織勻漿。

(4)檢測(cè)方法 海馬組織NO和NOS檢測(cè)方法和試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用多元相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 針刺對(duì)實(shí)驗(yàn)性肥胖大鼠肥胖指標(biāo)的影響(見(jiàn)表1)

表1可見(jiàn)，肥胖大鼠體重和Lee’s指數(shù)均顯著高于正常大鼠水平，針刺治療后，體重和Lee’s指數(shù)顯著回降，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異具有非常顯著性意義。

2.2 實(shí)驗(yàn)各組不同部位脂肪量的比較(見(jiàn)表2)

表2顯示，對(duì)照組三部位脂肪量均顯著高于正常組，針刺組三部位脂肪量均低于對(duì)照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異均具有顯著性和非常顯著性意義。說(shuō)明針刺具有減肥作用。

2.3 實(shí)驗(yàn)各組大鼠海馬組織NO含量和NOS活性的比較(見(jiàn)表3)

表3顯示，對(duì)照組NO含量和NOS活性均顯著高于正常組，針刺組NO含量和NOS活性均明顯低于對(duì)照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異具有顯著性和非常顯著性意義。

2.4 海馬組織NO含量與體重和Lee’s指數(shù)的相關(guān)分析(見(jiàn)表4)

2.5 海馬組織NOS活性與體重和Lee’s指數(shù)的相關(guān)分析(見(jiàn)表5)

表5所示，海馬組織NOS活性與體重和Lee’s指數(shù)高度正相關(guān)。

3 討論

海馬系邊緣葉重要組成部分，其功能比較復(fù)雜，主要包括有調(diào)節(jié)情緒反應(yīng)、內(nèi)臟功能、內(nèi)分 泌激素的合成與釋放、學(xué)習(xí)與記憶、睡眠與覺(jué)醒等功能[3]。

神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)含有種類(lèi)繁多的神經(jīng)信息傳遞物質(zhì)，其中非傳統(tǒng)的中樞信使――NO是細(xì)胞內(nèi)重要 的信號(hào)傳導(dǎo)信使。NO是由NOS降解精氨酸產(chǎn)生NO和瓜氨酸。NO以擴(kuò)散的形式到達(dá)并進(jìn)入靶細(xì)胞發(fā)揮作用。NO沒(méi)有專(zhuān)門(mén)的儲(chǔ)存及釋放調(diào)節(jié)機(jī)制，靶細(xì)胞上NO的多少直接與NO生成有關(guān)，而NO的生成則與NOS的活性密切有關(guān)。NOS分布于神經(jīng)元胞體、末梢、膠質(zhì)細(xì)胞以及內(nèi)皮細(xì)胞。NOS有三種亞型，神經(jīng)NOS(nNOS)、內(nèi)皮細(xì)胞NOS(eNOS)及誘導(dǎo)型NOS(iNOS)。nNOS和eNOS統(tǒng)稱(chēng)為固有型NOS (cNOS)。cNOS通常以非活性形式存在，當(dāng)某些信使物質(zhì)與細(xì)胞上相應(yīng)受體結(jié)合引起細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高時(shí)，cNOS與鈣調(diào)蛋白結(jié)合而迅速激活。一般認(rèn)為，cNOS主要參與機(jī)體內(nèi)環(huán)境調(diào)整有關(guān)的某些快反應(yīng)過(guò)程，如神經(jīng)傳導(dǎo)、腸蠕動(dòng)及血管擴(kuò)張等。大鼠腦組織中神經(jīng)cNOS只存在于神經(jīng)元，多集中在大鼠的大腦皮層、海馬及紋狀體等許多區(qū)域中。海馬中神經(jīng)cNOS主要存在于CAI區(qū)的中間神經(jīng)神經(jīng)元及海馬齒狀回的顆粒細(xì)胞中。NO的生理功能活動(dòng)不經(jīng)受體介導(dǎo)，而是直接作用于胞漿的可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶(sGC)使其活化產(chǎn)生cGMP，作用于cGMP依賴性蛋白激酶(PKG)，從而發(fā)揮生理性興奮的功能活動(dòng)。NO參與多個(gè)系統(tǒng)的正常生理功能(神經(jīng)、免疫、心血管、消化和生殖等系統(tǒng))和異常病理生理活動(dòng)。

實(shí)驗(yàn)資料顯示，NO對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)具有調(diào)節(jié)作用。在海馬薄片標(biāo)本上，NO供體羥胺可促進(jìn)[3H]去甲腎上腺素(NE)及[14C]乙酰膽堿(Ach)的釋放，而血紅蛋白可阻斷羥胺引起的[3H]NE及[14C]Ach 的釋放。說(shuō)明NO參與NE及Ach釋放的調(diào)節(jié)[4]。中樞神經(jīng)遞質(zhì)中，NE對(duì)攝食中樞具有增強(qiáng)作用，導(dǎo)致攝食增加；Ach對(duì)攝食的影響隨著不同動(dòng)物有所差異，有關(guān)大鼠中樞Ach對(duì)攝食中樞的效應(yīng)報(bào)道尚不一致，但是Ach通過(guò)邊緣系統(tǒng)促進(jìn)攝食活動(dòng)，是比較肯定的事實(shí)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，肥胖大鼠海馬組織NO含量和NOS活性顯著高于正常大鼠，說(shuō)明肥胖機(jī)體海馬組織合成釋放NO含量和NOS活性顯著增加。相關(guān)分析顯示，肥胖大鼠海馬組織NO含量和NOS活性均與體重和Lee’s指數(shù)呈高度正相關(guān)。說(shuō)明海馬組織NO含量和NOS活性異常升高，可能是通過(guò)促進(jìn)中樞NE和Ach的釋放，增加攝食，導(dǎo)致肥胖。已知NO在許多病理過(guò)程中的作用是致細(xì)胞死亡的毒性反應(yīng)，在谷氨酸興奮毒性過(guò)程中，NOS在Ca2+超載情況下被激活所產(chǎn)生的NO不走sGC-cGMP-PKG通路，而是經(jīng)過(guò)激活poly ADP-ribose s ynthetase，產(chǎn)生自由基并抑制線粒體產(chǎn)生能量[4～6]。本文所見(jiàn)，海馬組織NO含量和NOS活性異常升高，很可能是通過(guò)抑制線粒體產(chǎn)生能量，即能量消耗減少，產(chǎn)生肥胖。這一結(jié)果與筆者以往實(shí)驗(yàn)中肥胖大鼠細(xì)胞內(nèi)線粒體減少相吻合[7]。筆者以往工作證實(shí)，肥胖機(jī)體存在著糖、脂、水、鹽、能量等諸多方面代謝異常及神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)異常。針刺治療后肥胖大鼠體重、Lee’s指數(shù)、心包脂肪、腎周脂肪、附睪脂肪出現(xiàn)了顯著的回降，說(shuō)明針刺治療肥胖可以取得良好的減肥效應(yīng)；與此同時(shí)肥胖大鼠海馬組織NO含量和NOS活性水平出現(xiàn)明顯回降。提示，肥胖大鼠海馬組織NO含量和NOS活性異常，可能是肥胖發(fā)病的重要因素之一。針刺對(duì)肥胖大鼠海馬組織NO含量和NOS活性的良性調(diào)整作用，可能是針刺減肥中樞神經(jīng)作用機(jī)制的重要組成部分。

4 參考文獻(xiàn)

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螞蟻和大象范文第5篇

【摘要】 目的 研究NMDA受體亞單位2A(NR2A)反義寡核苷酸對(duì)短暫性腦缺血/再灌注大鼠海馬CA1區(qū)NR2A及其mRNA表達(dá)的影響，探討其在腦缺血/再灌注誘導(dǎo)的大鼠海馬神經(jīng)元損傷中的可能作用機(jī)制。方法 健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、假手術(shù)對(duì)照組和缺血/再灌注組。經(jīng)生理鹽水、錯(cuò)義寡核苷酸和反義寡核苷酸預(yù)處理后，以四血管阻斷法建立短暫性前腦缺血(15 min)再灌注(24 h、48 h和72 h)動(dòng)物模型。在確定的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行灌注固定、取材、石蠟包埋和組織切片(片厚8 μm)，然后行原位雜交和免疫組織化學(xué)染色。結(jié)果 短暫性腦缺血/再灌注后，大鼠海馬CA1區(qū)NR2A mRNA的表達(dá)顯著增加，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

【關(guān)鍵詞】 腦缺血;NR2A反義寡核苷酸;NR2A;NR2A mRNA;翻譯抑制

Abstract: Objective To investigate the effect of NMDA receptor subunit 2A (NR2A) antisense oligodeoxynucleotides on the expression of NR2A and its mRNA in rat hippocampal CA1 region following transient cerebral ischemia/reperfusion， and to further probe into the possible mechanism of neuronal cell injury induced by cerebral ischemia and reperfusion in rat hippocampus. Methods Healthy male SD rats were randomized into normal control group， sham operation control group and ischemia/reperfusion group. Following pretreatment with saline， missense oligonucleotide and antisense oligonucleotide， the four-vessel occlusion method was employed to establish transient forebrain ischemia (15 min) and reperfusion (24 h， 48 h and 72 h) animal models. In determining time， the rats were anesthetized， and then underwent perfusion fixation， sample preparation， paraffin-embedding and tissue sections (8 μm of slice thickness). The slices were processed by in situ hybridization staining and immunohistochemical staining. Results Following transient cerebral ischemia/reperfusion， the expression of NR2A mRNA significantly increased in CA1 subfield of rat hippocampus (P

Key words: cerebral ischemia; NR2A antisense oligonucleotides; NR2A mRNA; NR2A; translation inhibition

缺血性腦損傷能夠誘導(dǎo)谷氨酸釋放增加和(或)攝取減少，突觸后谷氨酸受體過(guò)度刺激，引起Ca2+異常內(nèi)流而導(dǎo)致胞內(nèi)鈣超載，超載的Ca2+激活其靶酶，造成自由基積累，并形成惡性循環(huán)，最終導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的損傷和死亡，這就是所謂的谷氨酸興奮毒性[1-2]?？梢?jiàn)，谷氨酸過(guò)度激活其受體是缺血性腦損傷的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。N-甲基-D-天門(mén)冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptor， NMDAR， NR)作為離子型谷氨酸受體的主要類(lèi)型，是一種配基門(mén)控的陽(yáng)離子通道，是引起Ca2+內(nèi)流而誘導(dǎo)產(chǎn)生興奮毒性的主要受體[3-4]。構(gòu)成NMDA受體的亞單位常以受體復(fù)合物的形式存在，其中NR2是受體復(fù)合物的調(diào)節(jié)亞單位，不同NR2的參與可以賦予通道復(fù)合物以不同的電生理學(xué)和藥理學(xué)特性[5]。盡管已經(jīng)明確NMDA受體介導(dǎo)的谷氨酸神經(jīng)興奮毒性在缺血性腦損傷的眾多環(huán)節(jié)中起著關(guān)鍵性的作用[6-7]，但目前有關(guān)NMDA受體調(diào)節(jié)亞單位2A(NR2A)在缺血性腦損傷中的確切作用機(jī)制和作用環(huán)節(jié)仍不明確，關(guān)于NR2A反義寡核苷酸對(duì)腦缺血/再灌注大鼠海馬NR2A及其mRNA表達(dá)的影響尚鮮見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究探討NR2A反義寡核苷酸對(duì)腦缺血/再灌注大鼠海馬NR2A及其mRNA表達(dá)的影響，并探討其在腦缺血/再灌注誘導(dǎo)的大鼠海馬神經(jīng)元損傷中的可能作用機(jī)制，為臨床腦血管病的預(yù)防和治療以及研制和開(kāi)發(fā)針對(duì)NR2A的特異性新藥提供理論基礎(chǔ)和形態(tài)學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 主要試劑和儀器 NR2A反義寡核苷酸序列：5′-CA GTA GCC CAA TCT GCC CAT-3′，NR2A錯(cuò)義寡核苷酸序列：5′-AT GGG CAG ATT GGG CTA CTG-3′(美國(guó)GIBCO)。多克隆羊抗-NR2A(美國(guó)Santa Cruz)，兔抗山羊IgG抗體(英國(guó)Abcam)。原位雜交試劑盒(武漢博士德)，濃縮型DAB試劑盒(北京中杉)。石蠟切片機(jī)(德國(guó)Leica)，顯微攝影系統(tǒng)(日本奧林巴斯)，立體定位儀(日本成茂)，圖像分析軟件(美國(guó)Media Cybernetics)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 健康雄性SD大鼠，體重220～280 g，購(gòu)自徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(清潔級(jí)，合格證號(hào)：蘇SYXK2002-0038)。隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC)、假手術(shù)對(duì)照組(Sham)和缺血/再灌注組(I/R);I/R組又分為I/R 24 h、I/R 48 h和I/R 72 h組。各組動(dòng)物又分別分為反義組(AS)、錯(cuò)義組(MS)和溶劑組(TE)。每小組的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)皆為5，即n=5。

1.3 給藥處理 在腦缺血前3天經(jīng)側(cè)腦室給藥，每天1次。參照Paxinos & Watson所著的《The rat brain in stereotaxic coordinates》選取側(cè)腦室立體定位坐標(biāo)(以Bregma為參照，后0.8 mm，側(cè)1.5 mm，深3.5 mm)[8]。每次給藥量為10 μl(100 μg NR2A反義寡核苷酸溶解在10 μl TE緩沖液中)。錯(cuò)義組與溶劑組分別在相同部位注射相同劑量的錯(cuò)義寡核苷酸和溶劑(TE)。

1.4 模型建立 以改良的四動(dòng)脈阻斷法建立短暫性前腦缺血(15 min)再灌注動(dòng)物模型[9-10]，再灌注時(shí)間為24 h、48 h和72 h。Sham組大鼠除不電凝椎動(dòng)脈和不夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈外，其他手術(shù)過(guò)程同I/R組。

1.5 灌注固定及切片制備 大鼠常規(guī)麻醉，經(jīng)心-升主動(dòng)脈插管灌注固定。取含海馬的腦塊入后固定液(4℃，過(guò)夜)，然后常規(guī)梯度乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟，石蠟包埋。包埋腦塊作連續(xù)冠狀切片，片厚8 μm，切片分4套，分別進(jìn)行原位雜交和免疫組織化學(xué)染色以及陰性對(duì)照染色。

1.6 原位雜交染色 原位雜交按試劑盒說(shuō)明書(shū)和本實(shí)驗(yàn)室方法進(jìn)行[11]，主要步驟如下：以3%H2O2滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，用3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶消化;預(yù)雜交(37℃、3 h)和雜交(41℃、24 h);雜交后洗滌;以5%BSA封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn);加生物素化鼠抗地高辛;加SABC-POD;加生物素化POD;以DAB/H2O2顯色。陰性對(duì)照以0.5 mol/L PBS替代含探針雜交液進(jìn)行雜交，其余步驟相同。

1.7 免疫組織化學(xué)染色 以EDTA抗原修復(fù)液行微波修復(fù)，加3% H2O2(室溫、10 min)，水洗，10%兔血清(室溫1 h)，加一抗(1∶100，以含0.3% Triton X-100的0.01 mol/L PBS稀釋?zhuān)?℃，48 h)，水洗，加生物素化兔抗山羊IgG(1∶200，37℃，30 min)，水洗，加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈酶卵白素液(1∶200，37℃，30 min)，水洗，DAB/H2O2顯色。陰性對(duì)照以一抗稀釋液替代一抗，其余步驟相同。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。多組間比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA)，兩組間比較采用LSD-t檢驗(yàn)，以P

2 結(jié) 果

2.1 NR2A反義寡核苷酸對(duì)腦缺血/再灌注大鼠海馬CA1區(qū)NR2A mRNA表達(dá)的影響 原位雜交結(jié)果顯示，在I/R 24 h、I/R 48 h和I/R 72 h，大鼠海馬CA1區(qū)NR2A mRNA的原位雜交強(qiáng)度顯著增加，與Sham組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

2. 2 NR2A反義寡核苷酸對(duì)腦缺血/再灌注大鼠海馬CA1區(qū)NR2A蛋白質(zhì)表達(dá)的影響 免疫組織化學(xué)研究顯示，在I/R 24 h、I/R 48 h和I/R 72 h，大鼠海馬CA1區(qū)NR2A蛋白質(zhì)的反應(yīng)強(qiáng)度明顯減弱，減弱的幅度依次增加，與Sham組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

3 討 論

NR2A亞單位實(shí)際上也許在谷氨酸興奮毒性中比NR2B亞單位起到更為關(guān)鍵的作用，已經(jīng)證明谷氨酸對(duì)新生鼠CA1區(qū)神經(jīng)元的易損性很低，但對(duì)生后3個(gè)月的大鼠卻很高，這表明NR2A的表達(dá)增加了谷氨酸的興奮毒性[12-13]。文獻(xiàn)報(bào)道在腦缺血小鼠模型中選擇性敲除NMDA受體ε1(NR2A)亞單位后能夠減輕缺血引起的細(xì)胞損傷程度，說(shuō)明NR2A參與了缺血性腦損傷過(guò)程[14]。近年關(guān)于NR2拮抗劑的研究發(fā)現(xiàn)，這類(lèi)化合物具有一定的亞型選擇性，其親和力排序?yàn)椋篘R2A>NR2B>NR2C>NR2D[15]。Novartis公司研制的化合物NVPAAM077是一種具有較強(qiáng)選擇性的競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑，能選擇性阻滯NR2A，該物質(zhì)對(duì)NR2A的選擇性較對(duì)NR2B的選擇性高很多倍[16]。以上研究表明，NR2A在缺血性腦損傷中可能發(fā)揮比NR2B更為重要的作用，針對(duì)NR2A及其拮抗劑或激動(dòng)劑的研究將成為熱點(diǎn)。目前，NR2A在缺血性腦損傷中的確切作用機(jī)制仍不明確，關(guān)于NR2A反義寡核苷酸對(duì)腦缺血/再灌注大鼠海馬NR2A及其mRNA表達(dá)的影響尚鮮見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。盡管有小干擾RNA出現(xiàn)，但對(duì)于在體研究而言反義寡核苷酸技術(shù)仍不失為一種在基因水平進(jìn)行相關(guān)研究的重要方法[17]。既往研究發(fā)現(xiàn)，在缺血/再灌注24 h、48 h和72 h，大鼠海馬CA1區(qū)NR2A mRNA的表達(dá)呈明顯的增高趨勢(shì)[18]，故本研究選擇這3個(gè)時(shí)間點(diǎn)。本研究綜合應(yīng)用反義技術(shù)、動(dòng)物模型、立體定位注射以及原位雜交和免疫組織化學(xué)等方法，研究NR2A反義寡核苷酸對(duì)腦缺血/再灌注大鼠海馬NR2A及其mRNA表達(dá)的影響;探討其在腦缺血/再灌注誘導(dǎo)的大鼠海馬神經(jīng)元損傷中的可能作用機(jī)制，為研制和開(kāi)發(fā)針對(duì)NR2A的特異性新藥以及臨床腦血管疾病的預(yù)防和治療提供理論基礎(chǔ)和形態(tài)學(xué)依據(jù)。

研究發(fā)現(xiàn)，在腦缺血/再灌注24 h、48 h和72 h，大鼠海馬CA1區(qū)NR2A mRNA的表達(dá)顯著增加，且NR2A反義寡核苷酸能夠明顯抑制這種表達(dá)的增加。缺血后調(diào)節(jié)亞單位NR2A mRNA表達(dá)的增加，很有可能在mRNA水平誘導(dǎo)某些凋亡相關(guān)基因如Bad、Bax、Fas、caspase和IEGs等的異常表達(dá)以及相關(guān)激酶如c-jun的異常磷酸化，從而參與腦缺血/再灌注誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷和死亡[19-20]。NR2A反義寡核苷酸抑制缺血后NR2A mRNA表達(dá)的增加，一方面說(shuō)明這種針對(duì)NR2A mRNA的反義寡核苷酸具有特異性和有效性，為探索缺血性腦損傷的反義治療提供了形態(tài)學(xué)依據(jù);另一方面間接說(shuō)明了NR2A反義寡核苷酸特異性阻斷缺血后NR2A mRNA的表達(dá)很有可能對(duì)腦缺血/再灌注誘導(dǎo)的大鼠海馬CA1細(xì)胞損傷具有重要的神經(jīng)保護(hù)作用。

本研究還發(fā)現(xiàn)，在短暫性腦缺血/再灌注24 h、48 h和72 h，大鼠海馬CA1區(qū)NR2A蛋白質(zhì)的表達(dá)明顯減弱且減弱的幅度依次遞增;NR2A反義寡核苷酸能夠進(jìn)一步增強(qiáng)這種表達(dá)的減弱。這說(shuō)明NR2A反義寡核苷酸對(duì)腦缺血/再灌注后大鼠海馬CA1區(qū)蛋白質(zhì)的表達(dá)具有顯著的抑制作用，進(jìn)一步證明NR2A反義寡核苷酸作為藥物使用的有效性。結(jié)合本課題組的既往研究[18，21]，有力地證明短暫性腦缺血/再灌注以后在易損傷的大鼠海馬CA1區(qū)存在轉(zhuǎn)錄和翻譯不平行即轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)而翻譯抑制現(xiàn)象。文獻(xiàn)認(rèn)為，翻譯和轉(zhuǎn)錄不平行這一現(xiàn)象不僅是時(shí)間依賴性的，而且很可能是細(xì)胞特異性的，對(duì)缺血高度敏感的易損神經(jīng)元中存在翻譯抑制現(xiàn)象，且該現(xiàn)象往往發(fā)生在易損的神經(jīng)元壞死之前[22-23]。本研究證實(shí)了這一論點(diǎn)，不但證明在缺血性腦損傷中存在翻譯抑制現(xiàn)象，而且證明NR2A參與了這一過(guò)程，提示NR2A在腦缺血/再灌注誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞死亡中發(fā)揮極其重要的作用。腦缺血/再灌注過(guò)程中，產(chǎn)生轉(zhuǎn)錄和翻譯不平行這一現(xiàn)象的原因顯然與腦缺血時(shí)蛋白質(zhì)的翻譯而非轉(zhuǎn)錄減弱有關(guān)。目前，缺血性腦損傷易損神經(jīng)元翻譯抑制的機(jī)制尚不清楚，但在翻譯抑制和神經(jīng)元易損性這一驚人的聯(lián)系中，前者可能在導(dǎo)致缺血性細(xì)胞死亡的級(jí)聯(lián)反應(yīng)中發(fā)揮更為關(guān)鍵的作用[23-24]。本研究提示，如果在缺血性腦損傷的進(jìn)程中采取適當(dāng)?shù)姆绞揭种埔讚p神經(jīng)元的這種翻譯抑制，也許能有效地抑制易損神經(jīng)元的凋亡和壞死。這也為未來(lái)缺血性腦損傷神經(jīng)保護(hù)機(jī)制的研究提供了一個(gè)新的方向。

以上結(jié)果提示，短暫性腦缺血/再灌注后，在大鼠海馬CA1區(qū)存在轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)而翻譯抑制的現(xiàn)象。NR2A反義寡核苷酸能特異性地抑制NR2A mRNA表達(dá)的增加，同時(shí)能夠增強(qiáng)NR2A蛋白表達(dá)的降低。至于NR2A參與翻譯抑制的具體機(jī)制及其與海馬CA1區(qū)選擇性易損傷以及反義抑制之間的關(guān)系，有待從蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)方面做進(jìn)一步深入研究。

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