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摘要：目的建立香連素片的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法鑒別香連素片中的木香；采用高效液相色譜法測(cè)定香連素片中鹽酸小檗堿的含量。結(jié)果在薄層色譜中檢出了木香；鹽酸小檗堿的進(jìn)樣量在0.0378～0.378μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r＝0.9997），平均回收率為101.49%，RSD為1.97％（n＝6）。結(jié)論本方法專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為香連素片的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞：香連素片；木香；薄層色譜法；鹽酸小檗堿；高效液相色譜法

Abstract:ObjectiveToestablishamethodforqualitycontrolofXiangliansutablets.MethodsRadixAuckiandiaeinthetabletswasidentifiedbyTLC.ThecontentofberberinehydrochlorideinthetabletswasdeterminedbyHPLC.ResultsRadixAuckiandiaecouldbeidentifiedbyTLC.Berberinehydrochlorideshowedagoodlinearcorrelationovertherangeof0.0378-0.378μg(r=0.9997).Theaveragerecoveryofberberinehydrochloridewas101.49%withRSD1.97%(n=6).ConclutionsThemethodisspecific,accurateandreproduciblefortheequalitycontrolofXiangliansutablets.

Keywords:Xiangliansutablets；berberinehydrochloride；HPLC；Radixauckiandiae；TLC

香連素片是廣東萬(wàn)年青制藥有限公司的產(chǎn)品，具有清熱燥濕、行氣止痛的功效，臨床用于濕熱型痢疾、里急后重、腹痛泄瀉。其處方為木香500g、鹽酸小檗堿75g。原藥品標(biāo)準(zhǔn)［1］鑒別木香用試管反應(yīng)，鹽酸小檗堿的含量用紫外分光光度法測(cè)定，方法專屬性較低且影響因素多。本文采用薄層色譜法鑒別木香、高效液相色譜法測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果表明操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，為該品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步修訂提供了依據(jù)。

1儀器與試藥

1.1試藥

香連素片（批號(hào)：030801、030802、030803、040701、041002、050601、050802、060601、060602、060603）均為廣東萬(wàn)年青制藥有限公司產(chǎn)品；木香對(duì)照藥材（批號(hào)：921-9201）及鹽酸小檗堿對(duì)照品（批號(hào)：110713-200609）均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所；硅膠G預(yù)制板及硅膠G均由青島海洋化工廠生產(chǎn);乙腈為色譜純;其他試劑與試藥均為分析純。

1.2儀器

LC2010A高效液相色譜儀(日本島津),UV2501PC紫外分光光度儀（日本島津）,CQ15A超聲波清洗器（上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)器材廠）。

2薄層鑒別［2］

取本品2片，研成細(xì)粉，加三氯甲烷10mL，超聲（功率120W，頻率50Hz）處理30min，濾過，濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液。另取木香對(duì)照藥材0.2g、不含木香的陰性樣品，同法分別制成對(duì)照藥材溶液及陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各3μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷環(huán)己烷（體積比5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。置可見光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾，見圖1。

3含量測(cè)定

3．1色譜條件

色譜柱：phenomenexC18（150mm×4.6mm，5μm）流動(dòng)相：以磷酸鹽緩沖溶液［0.05mol/L磷酸二氫鉀和0.01mol/L十二烷基磺酸鈉（體積比1∶1），含0.2%三乙胺］乙腈（體積比60∶40），用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0為流動(dòng)相；流速：1.2mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：266nm，柱溫：室溫，進(jìn)樣量：10μL，理論塔板數(shù)不低于1500。

3．2溶液的制備

3.2.1對(duì)照品溶液的制備

取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，精密稱定，加乙醇制成每1mL含120μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.2．2供試品溶液的制備

取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于鹽酸小檗堿60mg），置索氏提取器中，加鹽酸甲醇（體積比1∶100）適量，加熱回流提取至提取液無(wú)色，將提取液（必要時(shí)濃縮）移至50mL量瓶中，用少量鹽酸甲醇（1體積比∶100）的混合液洗滌容器，洗液并入提取液中，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1mL，置10mL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得。

3.2.3陰性對(duì)照溶液的制備

按照本品的處方、制法制備缺少鹽酸小檗堿的模擬樣品，按“3.2.2”項(xiàng)方法制成陰性對(duì)照溶液。

3.3專屬性試驗(yàn)

分別取供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照對(duì)鹽酸小檗堿測(cè)定無(wú)干擾，說明方法專屬性強(qiáng)。結(jié)果見圖2。

3.4線性關(guān)系的考察

精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，用乙醇溶解制成質(zhì)量濃度為37.8μg/mL的溶液，分別精密吸取1、2、4、6、8、10μL注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定色譜峰面積，以進(jìn)樣量（m）為橫坐標(biāo)，色譜峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)線性回歸，得線性回歸方程為Y=2.88725×106m-5586.84，r=0.9997，表明鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.0378～0.378μg范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系。3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一批供試品溶液各10μL，按上述色譜條件，每隔1h測(cè)1次峰面積，結(jié)果表明鹽酸小檗堿在24h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.66%。

3.6重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品共6份，分別按“3.2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行制備溶液，并按上述色譜條件測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果RSD=0.90%,表明方法重現(xiàn)性良好。

3.7回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品（批號(hào)：030802）共6份，分別精密加入對(duì)照品適量，按“3.2.2”項(xiàng)下方法制備溶液并按上述色譜條件測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，計(jì)算加入量的回收率。結(jié)果見表1。表1鹽酸小檗堿加樣回收率試驗(yàn)（略）

3.8準(zhǔn)確度考察

以含量限度下限的50%為范圍低限、以含量限度上限的150%為范圍高限，考察測(cè)定范圍的準(zhǔn)確度。

精密稱取已知含量的樣品（批號(hào)：030802），按含量范圍高、低限折算取樣量，各6份，分別精密加入對(duì)照品適量，按“3.2.2”項(xiàng)下方法制備溶液并按上述色譜條件測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，計(jì)算加入量的回收率。結(jié)果見表2。表2準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果（略）

3.9樣品的測(cè)定

取10批樣品，分別按“3.2.2”項(xiàng)下方法制備溶液，分別精密量取供試品溶液及對(duì)照品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，并按上述色譜條件，測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果見表3。表3樣品中鹽酸小檗堿的含量（略）

4討論

4.1采用薄層色譜法鑒別木香時(shí),分別采用自制板及預(yù)制板同時(shí)展開、預(yù)平衡與未平衡的條件展開，層析結(jié)果表明：自制板與預(yù)制板的層析結(jié)果無(wú)差別，兩種展開條件均可檢出木香特征斑點(diǎn)，但以未平衡的條件展開，結(jié)果容易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，故展開時(shí)預(yù)平衡10min較好。

4.2薄層層析的環(huán)境影響

分別在冰箱、室溫、相對(duì)濕度45%和75%的環(huán)境條件下展開，結(jié)果表明：在上述環(huán)境條件展開，均可檢出木香特征斑點(diǎn)，差異不大，故選用以室溫、相對(duì)濕度45%～75%為展開環(huán)境條件，操作簡(jiǎn)便。

4.3提取方法的選擇

參照國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)［1］，供試品溶液的制備是經(jīng)索氏提取后上氧化鋁柱洗脫，操作較繁瑣。我們對(duì)提取方法進(jìn)行了優(yōu)化，只經(jīng)索氏提取后直接測(cè)定，并與原提取方法的HPLC測(cè)定結(jié)果作對(duì)比。結(jié)果表明：只經(jīng)索氏提取與原提取方法的測(cè)定結(jié)果一致，因此樣品的提取采用索氏提取法。

4.4測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

取對(duì)照品溶液，在200～500nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，在349、266、231nm均有最大吸收，經(jīng)HPLC試驗(yàn)比較，鹽酸小檗堿在266nm波長(zhǎng)的峰面積值最大，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為266nm。

4.5流動(dòng)相的選擇

參考文獻(xiàn)［3,4］，采用磷酸鹽緩沖溶液［0.05mol/L磷酸二氫鉀和0.01mol/L十二烷基磺酸鈉（1∶1），含0.2%三乙胺］乙腈（60∶40）,分別用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0、3.2、3.5為流動(dòng)相，經(jīng)試驗(yàn)，當(dāng)流動(dòng)相的pH值為3.0時(shí)對(duì)照品及樣品的峰形對(duì)稱，重復(fù)性好，陰性對(duì)照無(wú)干擾，故確定流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖溶液［0.05mol/L磷酸二氫鉀和0.01mol/L十二烷基磺酸鈉（1∶1），含0.2%三乙胺］乙腈（60∶40），用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0。

4.6耐用性考察

4.6.1柱溫的考察

柱溫分別為室溫、40℃時(shí)，色譜峰的分離度、峰形及峰面積基本一致，故以室溫作為柱溫，操作較簡(jiǎn)便。

4.6.2流速的考察

分別設(shè)定流速為1.0、1.2及1.5mL/min進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明：當(dāng)流速為1.0mL/min時(shí)保留時(shí)間太長(zhǎng)，當(dāng)流速分別為1.2及1.5mL/min時(shí)色譜峰的峰形及峰面積無(wú)甚差別，且前者的保留時(shí)間短一些，故選擇流速為1.2mL/min。

4.6.3色譜柱的考察

選用3種不同廠牌的色譜柱：phenomenexC18(150mm×4.60mm,5μm)、DiamonsilTMC18(250mm×4.60mm,5μm)和SpherisorbC18(250mm×4.60mm,5μm)，測(cè)定同一批樣品（批號(hào)：060602）的含量，結(jié)果3種色譜柱測(cè)得含量的RSD=0.61%（n=2），表明換用不同廠牌的色譜柱，均可得到滿意的色譜圖，故本法的耐用性好。

【參考文獻(xiàn)】

［1］WS3—B—2572—97.國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn):衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)第十三冊(cè)［S］.1997:140.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2005年版一部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：41.

［3］龐小雄，宋粉云，鐘兆健，等.HPLC法測(cè)定拈痛丸中鹽酸小檗堿的含量［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2007,23(3):240-242.