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【摘要】目的：觀察葛根素注射液對去卵巢大鼠血清雌二醇(E2)水平的影響。方法：大鼠50只，分為葛根素高劑量組、葛根素低劑量組、倍美力組、模型組、假手術(shù)組，每組10只。除假手術(shù)組外，均摘除大鼠卵巢造成去勢模型。造模后第7天，檢測大鼠血清E2水平，確定造模成功后，相應(yīng)予葛根素注射液、倍美力水溶液、生理鹽水灌胃。各組用藥后30天測血E2含量。結(jié)果：用藥30天后，模型組大鼠血清E2水平明顯低于其它四組，差異有顯著性意義(P<0.01)。結(jié)論：葛根素注射液可以提高去卵巢大鼠血清E2水平，具有雌激素樣作用。

【關(guān)鍵詞】大鼠圍絕經(jīng)期葛根素注射液雌激素樣作用

AbstractObjective:Toinvestigatetheeffectofpuerarininjectiononserumestradiolinfemaleratswithovaryremoved.Methods:SDratsweredividedtohighdosepueraringroup,lowdosepueraringroup,premaringroup,controlgroup,andshamoperationgroup,10ratsineach.Ovariectomizedmodelwasestablishedinallgroupsexceptshamoperationgroup(asuccessfulmodelwasidentifiedbydetectingthelevelofestradiolonthe7thpostoperativeday).Thelevelofestradiolwasdeterminedonthe30thdayafteradministrationofpuerarininjection,premarinsolution,andsaline,respectively.Results:Thelevelofestradiolwassignificantlylowerinthecontrolgroupcomparedtoother4groups(P<0.01).Conclusion:Puerarininjectionhasestrogenlikeeffectbyincreasingtheserumlevelofestradiolinovariectomizedrats.

Keywordsratperimenopausepuerarininjectionestrogenlikeeffect

圍絕經(jīng)期綜合征是指婦女在圍絕經(jīng)期過程中，由于卵巢功能衰退，體內(nèi)雌激素水平降低導(dǎo)致神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)功能失調(diào)，引起植物神經(jīng)功能紊亂和精神神經(jīng)癥狀等一系列臨床癥候群。雌激素替代療法(ERT)是目前臨床上治療婦女圍絕經(jīng)期綜合征的經(jīng)典方法。但長期使用雌激素可能增加乳腺癌及子宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險，即使與孕激素合用也不能完全消除這種危險[1]。因此尋找一種理想的ERT藥物，能選擇性地作用于心、腦、骨骼等器官，又盡可能減少對子宮、卵巢、乳房的副作用，是ERT研究的重要任務(wù)。目前國內(nèi)外研究顯示某些植物激素(如大豆異黃酮)具有雌激素相似的作用，卻沒有誘發(fā)腫瘤之虞[2，3]。

從中藥葛根中所提取的葛根素，其結(jié)構(gòu)與大豆異黃酮相似，而其異黃酮的含量為大豆的幾十甚至上百倍[3]。本研究采用去卵巢大鼠模型模擬絕經(jīng)后大鼠，用葛根素注射液灌胃，觀察其對去卵巢大鼠雌激素分泌水平的影響，觀察葛根素注射液是否具有雌激素樣作用，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

1.1實驗動物健康雌性SD大鼠50只,清潔級,18月齡(相當(dāng)于生育期),體重220～250g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供。

1.2實驗藥物葛根素注射液(浙江康恩貝制藥股份有限公司，每2ml約含葛根素100mg，批號：020710);倍美力片劑(美國惠氏艾爾斯特公司艾爾斯特大藥廠，每片含有0.625mg雌二醇，批號：0509125);生理鹽水(石家莊四藥股份有限公司，批號041018502)。

1.3試劑和儀器E2試劑盒(大連泛邦化工技術(shù)開發(fā)有限公司);20℃科龍BCD246AK3低溫冰箱(廣東科龍電器股份有限公司)。

1.4實驗方法

1.4.1動物造模健康雌性SD大鼠50只，稱重編號后，隨機抽取10只為假手術(shù)組。余40只大鼠開腹，結(jié)扎切除卵巢，造大鼠去勢模型。假手術(shù)組不切卵巢，僅切除卵巢周圍少許脂肪。

1.4.2分組給藥去勢大鼠隨機分葛根素高劑量組、葛根素低劑量組、陽性對照組、模型組，每組10只。造模后第7天開始，葛根素高劑量組予葛根素注射液120mg/(kg·d)，葛根素低劑量組予葛根素注射液60mg/(kg·d)，倍美力組予倍美力水溶液0.07mg/(kg·d)，模型組與假手術(shù)組予生理鹽水2ml，灌胃，均1天1次。各組在造模后7天及用藥后30天分別取血，用酶聯(lián)法測血E2含量。

1.4.3標(biāo)本采集于毛細(xì)血管眼底靜脈叢采血1.5ml，靜置1小時后，用離心機3000r/min離心20min，取上清液于安倍管，20℃冰箱保存。

1.4.4血情E2測定根據(jù)試劑盒的要求，檢測血清標(biāo)本中的E2含量。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS11.5軟件處理。計量資料以(±s)表示，采用單因素方差分析(OneWayAnova)，進(jìn)行不同組間均數(shù)兩兩比較,以P<0.05為差異有顯著性意義，P<0.01為差異有高度顯著性意義。

2實驗結(jié)果

2.1造模后第7天大鼠血清E2水平各組去卵巢大鼠血清E2水平均低于假手術(shù)組，差異有顯著性意義(P<0.01)，說明造模成功。見表1、圖1。表1造模后第7天血清E2水平比較與其他四組比較，△△P<0.01圖1五組大鼠造模7天血E2值

2.2用藥30天后大鼠血清E2水平與模型組比較，葛根素高、低劑量組，倍美力組和假手術(shù)組大鼠血清E2水平均明顯增高，差異有顯著性意義(P<0.01)，見表2、圖2。表2用藥30天后大鼠血清E2水平比較與其他四組比較,△△P<0.01圖2五組大鼠治療30天后血E2值

3討論

植物雌激素(PE)是一類廣泛存在于植物、水果和蔬菜中的非甾體類化合物，其結(jié)構(gòu)和生物活性均類似于雌激素。植物雌激素依據(jù)分子結(jié)構(gòu)的不同主要分為三大類：異黃酮類、木脂素類和香豆素類[4]，均以無活性的前體形式存在于植物中。其中，最受關(guān)注的是異黃酮類化合物。近年來，已認(rèn)識到植物雌激素是具有雌激素效能的天然化合物，可以從植物中獲取并將其活化，發(fā)揮雌激素作用[5]。國內(nèi)外較多學(xué)者關(guān)注利用這些雌激素樣作用預(yù)防和治療雌激素缺乏相關(guān)疾病，用以取代激素替代療法(HRT)以減少其副作用。植物雌激素被作為激素替代治療的“天然”代用品，在預(yù)防和治療婦女圍絕經(jīng)期綜合征方面也受到大量研究。大豆異黃酮是植物雌激素的最主要來源。有資料顯示，大豆異黃酮對雌性動物的內(nèi)分泌有調(diào)節(jié)作用[6，7]，可作為雌激素的替代物。葛根素(puerarin)由豆科葛屬植物中提取，成分為4,7二羥基8βD葡萄糖基異黃酮。目前國內(nèi)已有學(xué)者應(yīng)用葛根素治療去卵巢大鼠鼻黏膜萎縮和預(yù)防骨質(zhì)疏松[8，9]，均取得了肯定的效果，推測可能與葛根素的雌激素樣活性有關(guān)。

大鼠卵巢切除術(shù)(ovariectomy，去勢)是一種良好的雌激素缺乏模型[10]，是國際上研究婦女圍絕經(jīng)期內(nèi)分泌特點所普遍采用的造模方法。本實驗應(yīng)用此模型來探討葛根素與倍美力(倍美力是從孕馬血清中提純的結(jié)合雌激素，是一種動物源性雌激素制劑，含多種成分，主要為17β雌二醇和雌酮)的雌激素樣作用的異同，以更好地了解葛根素的雌激素樣作用及其作用機制。實驗結(jié)果顯示，造模后第7天去卵巢大鼠血清E2水平均低于假手術(shù)組，差異有顯著性意義(P<0.05)，說明造模成功。假手術(shù)組因為保留卵巢，仍具有正常激素水平，故E2水平顯著高于其它各組。各組用藥30天后，葛根素注射液高、低劑量組、倍美力組、假手術(shù)組的E2水平均高于模型組，差異有顯著性意義(P<0.05)，而此四組之間無顯著性差異。提示大鼠去卵巢后導(dǎo)致血清E2水平下降，補充雌激素使血清E2水平明顯升高，葛根素具有與倍美力相同的上調(diào)血清E2水平的作用，這對于維持去卵巢大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)具有重要意義。

本研究結(jié)果提示，葛根素具有雌激素樣作用，但并未顯示出一定的量效關(guān)系。其次，葛根素和倍美力分別是植物源性雌激素和動物源性雌激素，它們與兩種雌激素受體ERα和ERβ的親和力是否相同，是否與同種雌激素受體結(jié)合起作用，有待進(jìn)一步探討。

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