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一、資料與方法

1、挑選本院2010年6月至2012年12月送檢病理科支氣管鏡刷檢細(xì)胞學(xué)標(biāo)本252例。所有的患者最后均確診為肺癌。男184例，女68例，年齡44～85歲，(平均66．3歲)。所有的患者行支氣管鏡刷檢，同時(shí)薄層液基細(xì)胞學(xué)涂片與傳統(tǒng)涂片。

2、儀器:美國(guó)SurPathTMPrepstain全自動(dòng)液基薄層細(xì)胞制片染片機(jī)(BDTriPath，BurlingtonNC，USA)及相關(guān)耗材。采用奧林巴斯電子支氣管鏡(BF-260或1T260工作鏡)進(jìn)行檢查。鏡下發(fā)現(xiàn)肺癌的直接征象或間接征象者，根據(jù)胸部CT提示的病變行透視下支氣管鏡肺活檢。所有患者均在活檢部位采用南京微創(chuàng)一次性保護(hù)型細(xì)胞刷刷檢，將毛刷頭直接在玻片上常規(guī)涂片1張。再將毛刷頭置于盛有10mlCyteRichRed固定液的50ml離心管中充分震蕩漂洗收集細(xì)胞。

3、制片方法

3.1傳統(tǒng)涂片方法:纖維支氣管鏡刷頭直接涂抹于載玻片上，涂片1張，干燥，95%乙醇固定10min，常規(guī)HE染色鏡檢。

3.2BDTriPath制片方法:標(biāo)本加入專(zhuān)用50ml離心管中，使用程控離心機(jī)以Hettich3#程序600r/min離心10min，迅速管架倒置180°傾出上清液，加入CyteRichRed固定液20ml，靜置30min，Hettich的3#程序以600r/min離心10min，迅速管架倒置180°傾出上清液，渦漩混合器振蕩均勻，加入10mlTris緩沖液，混均，移至12ml的離心管，Hettich的4#程序以600r/min離心5min，迅速管架倒置180°傾出上清液，渦漩混合器振蕩(15±5)s。管架放在PrePStain系統(tǒng)上，靜置10min，等待上機(jī)自動(dòng)制片染色。

4、判斷標(biāo)準(zhǔn):涂片診斷采用正常、可疑癌細(xì)胞、癌細(xì)胞三種分類(lèi)方法，后兩項(xiàng)為陽(yáng)性標(biāo)本。盡量由同一位醫(yī)師操作電子支氣管鏡采集標(biāo)本，由兩位細(xì)胞病理學(xué)醫(yī)師同時(shí)閱片鏡檢，以找到癌細(xì)胞為陽(yáng)性。

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)采用SPSS10．0軟件包進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

兩種涂片質(zhì)量比較:傳統(tǒng)涂片，涂片范圍大小不一，涂片背景紅細(xì)胞白細(xì)胞多，細(xì)胞分布厚薄不均，胞質(zhì)核漿結(jié)構(gòu)對(duì)比不明顯，胞核染色質(zhì)均一模糊、核仁不清;支氣管鏡刷檢細(xì)胞標(biāo)本LCT制片后，細(xì)胞集中于涂片范圍直徑15mm專(zhuān)用玻片上，細(xì)胞界限清楚，涂片背景干凈清晰，細(xì)胞分布單個(gè)散在或成團(tuán)分布，有立體感，胞質(zhì)著色鮮艷、易于觀(guān)察，胞核核膜分明，核內(nèi)染色質(zhì)及核仁清晰可見(jiàn)。薄層液基細(xì)胞學(xué)涂片診斷肺癌陽(yáng)性率為58．33%，(146/252)，其中中央型肺癌98例，周?chē)头伟?8例。傳統(tǒng)涂片診斷肺癌的陽(yáng)率為33．19%，(84/252)，其中中央型肺癌68例，周?chē)头伟?6例。液基薄層細(xì)胞學(xué)與傳統(tǒng)涂片的陽(yáng)性率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0．05。

三、討論

支氣管鏡刷檢細(xì)胞學(xué)標(biāo)本應(yīng)用傳統(tǒng)涂片方法制片，受細(xì)胞新鮮程度、細(xì)胞量、出血及炎性背景、制片技術(shù)等因素影響，造成背景不清晰、涂片細(xì)胞易重疊、厚薄不均、細(xì)胞形態(tài)不易觀(guān)察、有意義細(xì)胞數(shù)量偏少，容易出現(xiàn)假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果，漏診重要病變。液基薄層細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)(LCT)是近年來(lái)出現(xiàn)一種制片技術(shù)的革新，明顯優(yōu)于傳統(tǒng)巴氏涂片的檢查方法，其中有代表性的是BDThiPth離心沉降技術(shù)和新柏氏(ThiPthTCT)模式技術(shù)。兩種方法工作原理不同，分別為重力沉降式和過(guò)濾膜式，已經(jīng)廣泛成熟應(yīng)用于宮頸細(xì)胞學(xué)檢查和TBS診斷報(bào)告，對(duì)比傳統(tǒng)巴氏涂片，宮頸癌及癌前病變(低度鱗狀上皮內(nèi)病變和高度鱗狀上皮內(nèi)病變)檢出率大大提高，標(biāo)本采集及制片質(zhì)量的優(yōu)越性是傳統(tǒng)涂片技術(shù)無(wú)法比擬的，特別是BDThiPth制片技術(shù)在細(xì)胞數(shù)量、背景去除非診斷性雜質(zhì)、全自動(dòng)制片染色及診斷質(zhì)量尤為突出。美國(guó)FDA認(rèn)證:超柏式液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查是所有液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)中檢出率最高的技術(shù)。2005年美國(guó)病理協(xié)會(huì)非婦科細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室比較液基制片方法與傳統(tǒng)制片方法在體液樣本檢測(cè)能力，證實(shí)液基制片方法更容易檢出腫瘤。

對(duì)比傳統(tǒng)涂片，LCT制片使細(xì)胞在載玻片上分布均勻，厚薄一致，細(xì)胞數(shù)量多，集中于15mm范圍內(nèi)易于閱片，核染色質(zhì)著色鮮明，核漿對(duì)比效果好，易于觀(guān)察核結(jié)構(gòu)，染色背景清晰，制片質(zhì)量十分滿(mǎn)意，陽(yáng)性率顯著提高。LCT制片技術(shù)和診斷質(zhì)量體會(huì):支氣管鏡刷檢由于全部收集或大部分收集送檢標(biāo)本，最大程度保留病變細(xì)胞，尤為適用LCT制片方法;液基涂片中的細(xì)胞核可能不如傳統(tǒng)涂片中那樣深染，但細(xì)胞核異型性是判讀惡性或可疑惡性病變的重要重要標(biāo)準(zhǔn)，一般認(rèn)為核占優(yōu)勢(shì)、核漿比例高、核膜不規(guī)則、染色質(zhì)凝塊狀、核仁清或多個(gè)小核仁為惡性證據(jù);巴氏染色胞漿在區(qū)分腺癌或分化鱗癌很有幫助，前者胞漿見(jiàn)空泡，后者胞漿橘黃色、含角蛋白;仔細(xì)觀(guān)察成團(tuán)核深染的細(xì)胞，如懷疑異常，在背景中全面尋找單個(gè)異型細(xì)胞更有意義;提高制片質(zhì)量顯著，但診斷陽(yáng)性率的改善還需病理診斷醫(yī)師勤于積累，LCT在支氣管鏡刷檢細(xì)胞標(biāo)本應(yīng)用時(shí)間及應(yīng)用范圍還比較晚，對(duì)同一份標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行普通涂片，以積累經(jīng)驗(yàn)，減少誤診。

支氣管鏡檢查是目前診斷肺癌的常規(guī)檢查方法，刷檢聯(lián)合組織活檢的重要手段。傳統(tǒng)支氣管鏡黏膜細(xì)胞學(xué)檢查是在支氣管鏡檢查過(guò)程中用支氣管毛刷直接在普通玻片上涂片，診斷率低。LCT對(duì)肺癌有更高的診斷率。國(guó)內(nèi)也有少量文獻(xiàn)報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)與組織病理學(xué)對(duì)照，普通涂片法檢出敏感度為33．19%，而LCT檢出敏感度為58．33%，較普通涂片法提高了25．14%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

四、總結(jié)

細(xì)胞病理學(xué)是腫瘤病理診斷的重要組成部分，應(yīng)用LCT明顯增加腫瘤細(xì)胞數(shù)和改善涂片質(zhì)量，便于觀(guān)察核漿結(jié)構(gòu)，顯著提高診斷陽(yáng)性率，拓寬了支氣管鏡刷檢細(xì)胞學(xué)檢查的技術(shù)手段，有利于細(xì)胞病理學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化發(fā)展，值得臨床推廣使用。

作者：蔡志明劉建南吳琪茵