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本文作者：劉永濤1,2艾曉輝1,2索紋紋1,3余少梅1,3楊秋紅1,2作者單位：1中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水研究中心2中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所3華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院

標(biāo)準(zhǔn)曲線方程與相關(guān)系數(shù)

在1～20.0ng/mL和50.0～1000.0ng/mL范圍內(nèi)aoz線性關(guān)系良好，低濃度線性方程為Y=0.0843381+0.355336x;高濃度線性方程為Y=1.08424+4.42862x，相關(guān)指數(shù)r2均大于0.9994。

方法檢測限、回收率與精密度

本試驗(yàn)條件下，血液、肌肉、肝臟、腎臟和皮膚組織中AOZ方法檢測限均為0.5μg/kg。各組織中5個(gè)質(zhì)量濃度加標(biāo)水平的AOZ平均回收率為89.42%～109.53%，測得的日內(nèi)精密度與日間精密度均小于10%，分析方法滿足分析要求。

AOZ在斑點(diǎn)叉尾血液中的濃度

將測到的AOZ的峰面積分別與其氘代同位素內(nèi)標(biāo)峰面的比值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，可以求出AOZ在斑點(diǎn)叉尾血液中的濃度值(見表3)。由表3可以看出，AOZ峰濃度出現(xiàn)在4h，濃度為(2649.0±463.1)ng/mL，1440h(60d)時(shí)濃度為(6.66±4.47)ng/mL，2160h(90d)后才檢測不到AOZ。由于AOZ與血液中蛋白質(zhì)結(jié)合緊密，只有在強(qiáng)酸性條件下才能被水解下來，而魚體血液一般成弱堿性，因此，AOZ不易被消除。

AOZ在斑點(diǎn)叉尾組織中分布和消除規(guī)律

AOZ在斑點(diǎn)叉尾肌肉中4h達(dá)到峰濃度(1169.37±194.45)μg/kg，1440h(60d)時(shí)濃度為(4.50±1.55)μg/kg，2160h(90d)時(shí)肌肉中未檢出AOZ。AOZ在斑點(diǎn)叉尾皮膚中4h達(dá)到峰濃度(2308.49±100.45)μg/kg，1440h(60d)時(shí)濃度為(33.65±15.53)μg/kg，2160h(90d)時(shí)皮膚中未檢出AOZ。AOZ在斑點(diǎn)叉尾肝臟中4h達(dá)到峰濃度(7816.2±568.5)μg/kg，1440h(60d)時(shí)濃度為(17.1±9.8)μg/kg，2160h(90d)時(shí)肝臟中未檢出AOZ。斑點(diǎn)叉尾腎臟中AOZ在4h達(dá)到峰濃度為15938.13μg/kg，1440h(60d)時(shí)濃度為21.30μg/kg，2160h(90d)時(shí)腎臟中未檢出AOZ(表4)。上述結(jié)果表明AOZ在斑點(diǎn)叉尾各組織中不易消除，各組織中AOZ至少需要2754℃•d才能消除。數(shù)據(jù)經(jīng)回歸處理得到組織中藥物濃度(C)與時(shí)間(t)關(guān)系的消除曲線方程、相關(guān)指數(shù)(r2)及消除半衰期(T1/2)，(見表5)。AOZ在4種組織中的消除半衰期T1/2皮膚＞肌肉＞血液＞肝臟＞腎臟。圖1－圖6中每個(gè)圖的4個(gè)離子色譜峰分別為AOZ的母離子m/z236，2個(gè)子離子m/z104、m/z134的色譜峰和AOZ-D4的子離子m/z134的色譜峰。根據(jù)歐盟96/23/EC［16］指令附錄Ⅰ的A組物質(zhì)(包括AOZ)的確認(rèn)需要最少4個(gè)識(shí)別點(diǎn)，而LC-MS-MS1個(gè)母離子+2個(gè)子離子的識(shí)別點(diǎn)數(shù)為4，因此，采用該方法可以對AOZ進(jìn)行定性定量分析。

呋喃唑酮原藥在動(dòng)物體內(nèi)被迅速代謝，被代謝的主要產(chǎn)物為AOZ，而AOZ在動(dòng)物體內(nèi)卻很難消除。歐盟、美國、日本和我國等國家和組織均通過檢測呋喃唑酮的主要代謝物AOZ來監(jiān)測呋喃唑酮的使用情況，并規(guī)定硝基呋喃類藥物的代謝物作為殘留檢測的標(biāo)示物其最高殘留限量(MRL)為1μg/kg［17］。徐維海等［13］報(bào)道，給羅非魚投喂劑量為30mg/(kg•d)的呋喃唑酮藥餌7d，實(shí)驗(yàn)水溫為(27±2)℃，羅非魚肌肉中AOZ最高濃度為(31.19±9.68)μg/kg，建議羅非魚的休藥期至少為22d;譚志軍等［5］報(bào)道，在水溫保持在(17±1)℃，投喂(400.0±50.0)g大菱鲆15mg/kg藥餌，每天投喂2次，投喂5d，其肌肉中的AOZ最高濃度為(1201.93±36.24)μg/kg，185d時(shí)仍有(29.68±4.11)μg/kg;而本試驗(yàn)AOZ在斑點(diǎn)叉尾肌肉中的最高濃度為(1169.4±194.5)μg/kg，60d時(shí)AOZ仍有(4.50±1.55)μg/kg，90d時(shí)才未檢測到，從上述試驗(yàn)結(jié)果可以看出水產(chǎn)動(dòng)物品種、規(guī)格不同，試驗(yàn)水溫等條件都會(huì)造成AOZ在魚體中殘留濃度和時(shí)間存在較大差異，但總體來看AOZ在水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)殘留時(shí)間較長，這與AOZ與動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合緊密不易被代謝和排泄的存在狀態(tài)有關(guān)。

本試驗(yàn)在設(shè)計(jì)水產(chǎn)動(dòng)物藥物代謝及殘留試驗(yàn)時(shí)盡量按照生產(chǎn)實(shí)際的用藥方式和養(yǎng)殖方式進(jìn)行，以期獲得與實(shí)際生產(chǎn)情況接近的數(shù)據(jù)。在本試驗(yàn)條件下血液、肌肉、皮膚、肝臟、腎臟中AOZ均在停藥后4h時(shí)達(dá)到最高濃度，1440h(60d)時(shí)血液和各組織中AOZ均有檢出濃度，分別是其判定限1μg/kg的6.66、4.5、33.7、17.1和21.3倍。血液和各組織中AOZ在2160h(90d)時(shí)才未被檢測到。按組織中AOZ濃度水平由高到低排列的順序?yàn)槟I臟＞肝臟＞皮膚＞血液＞肌肉，同一時(shí)間點(diǎn)腎臟組織較其它組織濃度高，這可能與腎臟組織作為AOZ的排泄組織，并蓄積了較高濃度的AOZ有關(guān)。消除半衰期從試驗(yàn)結(jié)果來看皮膚的消除半衰期最長，其次為肌肉組織，這2種組織的消除半衰期均長于肝臟和腎臟。主要原因可能是AOZ通常在體內(nèi)以共價(jià)鍵形式與蛋白質(zhì)結(jié)合緊密形成較穩(wěn)定的殘留，肝臟中肝微粒體可以將部分AOZ降解成乙醇肼［18］，而腎臟可以排泄部分AOZ，因此，其消除半衰期較皮膚和肌肉短。皮膚作為可食組織的一部分AOZ的濃度高于肌肉組織，而目前我國對于水產(chǎn)品中AOZ的監(jiān)控主要是魚體的肌肉組織，因此，建議相關(guān)部門將水產(chǎn)動(dòng)物的可食組織皮膚和肌肉一起列為檢測靶組織。