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軍人同志范文第1篇

根據(jù)國務(wù)院《退役士兵安置條例》和《省人民政府關(guān)于做好我省年冬季退役士兵接收安置工作的通知》（府〔〕80號(hào)）精神，結(jié)合我市實(shí)際，現(xiàn)就做好我市年冬季退役士兵接收安置工作通知如下：

一、接收安置對象

年冬季退役士兵接收安置對象為：符合國務(wù)院《退役士兵安置條例》和《省人民政府關(guān)于做好我省年冬季退役士兵接收安置工作的通知》（府〔〕80號(hào)）規(guī)定的年冬季退出現(xiàn)役的士兵。

二、安置原則

年冬季退役士兵安置工作實(shí)行“扶持就業(yè)為主，重點(diǎn)安置為輔”的安置原則。對重點(diǎn)安置對象實(shí)行“按系統(tǒng)分配任務(wù)，包干安置”的原則，由各級(jí)政府下達(dá)指令性計(jì)劃一次性安置就業(yè)，并務(wù)必于接收退役士兵的6個(gè)月內(nèi)，開出安置介紹信，并督促有關(guān)單位盡快落實(shí)，確保退役士兵真正上崗就業(yè)。待安置工作期間，由安置地人民政府按最低生活保障標(biāo)準(zhǔn)發(fā)給其生活補(bǔ)助費(fèi)。對于無正當(dāng)理由不服從分配者，政府不再負(fù)責(zé)安置。本人選擇自謀職業(yè)的，按規(guī)定發(fā)給一次性安置補(bǔ)助金。一般安置對象，沒有選擇自主就業(yè)的城鎮(zhèn)退役士兵，可領(lǐng)取自謀職業(yè)一次性安置補(bǔ)助金，選擇自主就業(yè)的城鎮(zhèn)退役士兵，可領(lǐng)取一次性經(jīng)濟(jì)補(bǔ)助金；沒有選擇自主就業(yè)的農(nóng)村退役士兵，可領(lǐng)取一次性生產(chǎn)生活補(bǔ)助金，選擇自主就業(yè)的農(nóng)村退役士兵，可領(lǐng)取一次性經(jīng)濟(jì)補(bǔ)助金。一般安置對象由政府提供優(yōu)惠政策扶持就業(yè)。

（一）重點(diǎn)安置對象（符合下列條件且未選擇自主就業(yè)安置的退役士兵，可以選擇由政府安排工作或者自謀職業(yè)的方式安置）。

1、服現(xiàn)役滿12年的士官；

2、服現(xiàn)役期間獲得大軍區(qū)以上（含大軍區(qū)）單位授予榮譽(yù)稱號(hào)、平時(shí)榮立二等功以上獎(jiǎng)勵(lì)或者戰(zhàn)時(shí)榮獲三等功以上獎(jiǎng)勵(lì)的士兵；

3、因戰(zhàn)致殘被評(píng)定為5級(jí)至8級(jí)殘疾等級(jí)的士兵；

4、烈士子女士兵；

5、服現(xiàn)役滿10年、11年符合全程退役條件的士官；

6、服現(xiàn)役滿上士軍銜規(guī)定年限的直接從非軍事部門招收的士官；

7、因公致殘被評(píng)定為5級(jí)至8級(jí)殘疾等級(jí)的士兵；

8、退出現(xiàn)役前父母已雙亡的退伍義務(wù)兵和退出現(xiàn)役前父母已雙亡的未婚退役士官。

（二）除重點(diǎn)安置對象外，其余的退役士兵為一般安置對象。

（三）年冬季開始，在退出現(xiàn)役1年內(nèi)，退役士兵可自主選擇參加高等職業(yè)教育、成人高等教育、普通高等教育和最短不少于3個(gè)月職業(yè)技能培訓(xùn)，每人只能選擇其中1項(xiàng)，退出現(xiàn)役1年以上的，參加職業(yè)技能培訓(xùn)按《國務(wù)院關(guān)于加強(qiáng)職業(yè)培訓(xùn)促進(jìn)就業(yè)的意見》（國發(fā)〔〕36號(hào)）規(guī)定執(zhí)行。

三、補(bǔ)助金標(biāo)準(zhǔn)及資金來源

（一）、和區(qū)補(bǔ)助金標(biāo)準(zhǔn)

1、城鎮(zhèn)退役士兵一次性安置補(bǔ)助金（一次性經(jīng)濟(jì)補(bǔ)助金）標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)全市上年度在崗職工人均工資收入水平確定，即中心城區(qū)城鎮(zhèn)退伍義務(wù)兵、服役滿一、二期的城鎮(zhèn)復(fù)員士官基本補(bǔ)助金標(biāo)準(zhǔn)按我市上年度在崗職工人均工資收入的100%發(fā)放，轉(zhuǎn)業(yè)士官基本補(bǔ)助金按我市上年度在崗職工人均工資收入的150%發(fā)放，從服滿義務(wù)兵年限后第一年算起，每多服役一年，增加上年度在崗職工人均一個(gè)月工資的補(bǔ)助。

2、農(nóng)村退役士兵一次性生產(chǎn)生活補(bǔ)助金（一次性經(jīng)濟(jì)補(bǔ)助金）標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)當(dāng)?shù)厣夏甓绒r(nóng)村居民人均純收入確定，即農(nóng)村退伍義務(wù)兵、服役滿一、二期的復(fù)員士官基本補(bǔ)助金按照當(dāng)?shù)厣夏甓绒r(nóng)村居民人均純收入的100%發(fā)放，從服滿義務(wù)兵年限后第一年算起，每多服役一年，增加上年度農(nóng)村居民人均一個(gè)月純收入。

3、獲得大軍區(qū)以上（含大軍區(qū)）單位授予榮譽(yù)稱號(hào)或榮立二等功（含二等功）以上的、烈士子女、弟妹接槍入伍、退役時(shí)父母已雙亡的退役士兵，以及七、八、九、十級(jí)殘疾軍人增發(fā)20%的補(bǔ)助金；五、六級(jí)殘疾軍人增發(fā)50%的補(bǔ)助金。

（二）、和區(qū)經(jīng)費(fèi)來源

金平、龍湖和濠江區(qū)的城鎮(zhèn)退役士兵的一次性安置補(bǔ)助金（一次性經(jīng)濟(jì)補(bǔ)助金）及市舉辦的職業(yè)技能培訓(xùn)費(fèi)用（培訓(xùn)標(biāo)準(zhǔn)每人按800元計(jì)），由市、區(qū)財(cái)政按1:1比例負(fù)擔(dān)。農(nóng)村退役士兵一次性生產(chǎn)生活補(bǔ)助金（一次性經(jīng)濟(jì)補(bǔ)助金）由區(qū)財(cái)政負(fù)擔(dān)，省財(cái)政按照當(dāng)?shù)厣夏甓绒r(nóng)村人均純收入的50%給予補(bǔ)助。

（三）、、區(qū)和縣可根據(jù)上述（一）、（二）原則，制定具體補(bǔ)助標(biāo)準(zhǔn)，資金來源按原財(cái)政渠道解決。

軍人同志范文第2篇

【關(guān)鍵詞】人格教育；心理素質(zhì)

一、通過人格教育構(gòu)建學(xué)員健全的心理結(jié)構(gòu)

人格是人的素質(zhì)的重要組成部分，是人心理面貌的集中反映。人格教育是著眼于發(fā)展受教育者全部心理面貌的教育，其目標(biāo)是使個(gè)體具有良好的心理素質(zhì)與健康的心理狀態(tài)，促進(jìn)個(gè)體心理結(jié)構(gòu)的健全發(fā)展，構(gòu)建一個(gè)多層次、高效能的心理調(diào)節(jié)與控制系統(tǒng)，使個(gè)體潛力得到最大的發(fā)揮。通過人格教育可以促進(jìn)知、情、意協(xié)調(diào)統(tǒng)一，建立一種完整和健全的心理結(jié)構(gòu)，提高人的總和心理素質(zhì)，從而有助于個(gè)體更好地適應(yīng)社會(huì)環(huán)境。軍隊(duì)院校人格教育的基本內(nèi)容應(yīng)該從認(rèn)知、情感和自我意識(shí)三個(gè)方面入手。首先是認(rèn)知教育。軍校教育不僅要幫助學(xué)員掌握先進(jìn)的軍事理論和廣泛的軍事知識(shí)，更要培養(yǎng)學(xué)員適應(yīng)未來現(xiàn)代化戰(zhàn)爭所應(yīng)具備的快速的思維能力、精準(zhǔn)的判斷力，合理的認(rèn)知方式和健全的認(rèn)知結(jié)構(gòu)。其次是情感教育。情緒是心理健康的晴雨表，要使學(xué)員認(rèn)識(shí)常見的負(fù)性情緒，學(xué)會(huì)調(diào)節(jié)和控制自己的情緒，防止負(fù)性情緒對心理健康的傷害，使自己經(jīng)常保持穩(wěn)定的情緒狀況，以適應(yīng)高強(qiáng)度、超負(fù)荷的現(xiàn)代化戰(zhàn)爭。第三是自我意識(shí)教育。自我是人格的核心，只有正確地認(rèn)識(shí)自己，才能形成健全的人格，正確的自我認(rèn)知是心理全面發(fā)展的基礎(chǔ)。對自己能有正確認(rèn)識(shí)的人是自尊、自強(qiáng)、自信的人。能正確認(rèn)識(shí)自己的人往往具有較強(qiáng)的親和力與團(tuán)隊(duì)合作精神，具備自我調(diào)控能力，能努力改變和發(fā)展自身的能力素質(zhì)，適應(yīng)不斷變化的客觀環(huán)境。

二、通過人格教育鍛造學(xué)員堅(jiān)韌的意志品質(zhì)

學(xué)員健康人格的形成是與克服脆弱、魯莽、多疑等性格弱點(diǎn)和各種困難相聯(lián)系的。戰(zhàn)爭是以鮮血和生命為代價(jià)的激烈角逐，學(xué)員身系重大責(zé)任，將面對未來高技術(shù)戰(zhàn)爭下異常的心理壓力，因而必須塑造他們勇敢頑強(qiáng)、堅(jiān)忍不拔的意志品質(zhì)。堅(jiān)韌的意志品質(zhì)不是與生俱來的，只有經(jīng)過后天的培養(yǎng)和有意識(shí)、有目的的磨礪才能獲得。這就要求在教學(xué)與訓(xùn)練中要有意識(shí)地創(chuàng)設(shè)困難情境，指導(dǎo)、鼓勵(lì)學(xué)員刻苦磨練，鍛造他們堅(jiān)毅頑強(qiáng)的優(yōu)良性格。實(shí)踐證明，在越困難的環(huán)境下，越有能力克服困難完成任務(wù)的人，人格越完善，才能是越有希望取得成功的人。具有堅(jiān)韌意志品質(zhì)的軍人，往往有更強(qiáng)的心理承受能力，面對各種應(yīng)激事件時(shí)能應(yīng)付自如，處變不驚，臨危不懼，更好的適應(yīng)戰(zhàn)場環(huán)境，完成任務(wù)使命。因此，鍛造堅(jiān)韌的意志品質(zhì)應(yīng)成為軍校學(xué)員人格教育的一項(xiàng)重要內(nèi)容。

三、通過人格教育幫助學(xué)員樹立堅(jiān)定、正確的信念。保持統(tǒng)一的人格

信仰危機(jī)最容易造成人們心理上的崩潰，沒有了精神支柱，人很難承受各方面強(qiáng)大的心理壓力。軍校學(xué)員正處在人生觀、價(jià)值觀的形成時(shí)期。作為年輕人他們看問題往往容易偏激和片面，常常不能正確對待和處理好自己在現(xiàn)實(shí)生活中遇到的挫折和困難，以致引起心理沖突和矛盾，如果長時(shí)間不能排解，就有可能積聚成心理疾患。同時(shí)，由于他們的知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)有限，對復(fù)雜社會(huì)問題的分析判斷能力還不高，對不健康的思想意識(shí)往往缺乏分辨力和抵抗力，容易形成一些錯(cuò)誤的態(tài)度，甚至做出非理性的行為。因此，通過人格教育，幫助學(xué)員樹立和鞏固正確的人生價(jià)值目標(biāo)的同時(shí)，引導(dǎo)他們把個(gè)人理想與遠(yuǎn)大理想、社會(huì)期望結(jié)合起來，把個(gè)人的興趣、愛好同軍隊(duì)發(fā)展的實(shí)際結(jié)合起來，引導(dǎo)他們從點(diǎn)滴做起，從現(xiàn)在做起，要讓他們真正明白由“小”到“大”、不積跬步，無以至千里的道理。最終要落實(shí)在具體行動(dòng)上，落實(shí)在日常的學(xué)習(xí)、訓(xùn)練、生活中，在實(shí)踐中不斷完善自己的人格，保持主觀世界客觀世界的和諧統(tǒng)一。

軍人同志范文第3篇

【摘要】 目的 了解門診婦科病人兩種不同PH值范圍真菌感染狀況，為臨床婦科醫(yī)生治療這類病人提供參考資料。方法 收集門診婦科白帶常規(guī)檢查病人的白帶鏡檢資料，同時(shí)對每個(gè)送檢標(biāo)本用3.8—5.4的PH精密試紙進(jìn)行白帶的PH直接測試，而后，將所有的檢查資料分成PH≤4.5或PH＞4.5兩個(gè)PH值范圍進(jìn)行歸類統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 總?cè)舜沃蠵H≤4.5的白帶1128人次，PH＞4.5的白帶856人次。PH≤4.5的白帶中有真菌感染的病人352人次，占PH≤4.5的白帶的32%。PH＞4.5的白帶中真菌感染的病人328人次，占PH＞4.5的白帶的39%，兩個(gè)百分率的卡方值為：x2=0.0800 P ＞0.05。結(jié)論 門診婦科病人白帶不同PH范圍真菌感染率無顯著性差異，兩種不同PH狀況下存在同樣的感染風(fēng)險(xiǎn)。

【關(guān)鍵詞】 菌群失調(diào) 真菌感染 PH值

【Abstract】Goal: Understood that outpatient service gynecology department patient two kind of different PH the value scope fungal infections condition， treats this kind of patient for clinical gynecology department doctor to provide the reference. Method: The collection outpatient service gynecology department leucorrhea routine inspection patient's leucorrhea microscopic exam material， simultaneously delivers examines the specimen to each to carry on the leucorrhea with 3.8-5.4 PH precise indicator papers the PH direct test， then， all inspection material will pide into PH≤4.5 or PH>4.5LIANG the PH value scope carries on the classification statistical analysis. Finally: Always people of PH≤4.5 leucorrhea 1128 people， PH>4.5 leucorrhea 856 people. PH≤4.5 in the leucorrhea has the fungal infections patient 352 people， occupies PH≤4.5 leucorrhea 32%. In the PH>4.5 leucorrhea fungal infections's patient 328 people， occupy PH>4.5 the leucorrhea 39%， two percentage card Fang Zhiwei: x2=0.0800 P>0.05. Conclusion: The outpatient service gynecology department patient leucorrhea different PH scope fungus infection percentage non-significance difference， under two kind of different PH conditions has the similar infection risk.

【Key words】flora fungal infection PH value

門診婦科病人白帶常規(guī)檢查中真菌感染的感染率相當(dāng)高，但這種感染在正常PH范圍與異常PH范圍兩種狀況下是否存在差別？差別有多大？帶著這樣的問題我們進(jìn)行了調(diào)查，現(xiàn)將調(diào)查與分析情況作如下報(bào)導(dǎo)：

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1 標(biāo)本來源 收集門診婦科1984例白帶常規(guī)鏡檢結(jié)果

1.1.2 PH精密試紙：上海三愛思試劑有限公司（原上海試劑三廠生產(chǎn)的“試三牌”）（PH3.8-5.4）精密試紙。

1.2 方法 對送檢白帶進(jìn)行常規(guī)檢查，并同時(shí)對每個(gè)送檢標(biāo)本用3.8—5.4的PH精密試紙進(jìn)行白帶的PH直接測試，而后將所得的資料進(jìn)行歸類統(tǒng)計(jì)和分析。

2 結(jié)果

將其分成PH≤4.5和PH＞4.5兩種狀況，進(jìn)行兩樣本率的比較其結(jié)果：x2=0.0800;P＞0.05，兩者沒有明顯的差別，也就是說兩種PH狀況下具有同等的感染真菌的機(jī)會(huì)。

3 討論

霉菌性陰道炎又稱為“假絲酵母菌性陰道炎”，是門診婦科病人中最常見的一種婦科炎癥，其發(fā)病率有逐年升高的趨勢，且反復(fù)發(fā)作的病例非常常見，這些都提示著感染的真菌的耐藥趨勢在增強(qiáng)。正常的陰道內(nèi)環(huán)境是否對霉菌感染有抵御作用？婦科病人的白帶兩種不同PH值范圍真菌感染狀況如何？兩種狀況的感染率是否存在差別，差別是否存在顯著性差異，都是我們這次調(diào)查想要了解的內(nèi)容。正常的陰道內(nèi)環(huán)境變化可以從白帶PH的變化很直觀的表現(xiàn)出來，因此，我們從2008年7月1日至2008年10月30日，共收集門診白帶常規(guī)檢查的病人資料1984人次，對這1984名做門診白帶常規(guī)檢查的病人的白帶進(jìn)行PH值測定，其中PH≤4.5的1128人次，占總?cè)舜蔚?7%，PH＞4.5的856人次，占總?cè)舜蔚?4%，從PH值測定的情況看，大部分病人的白帶PH值在正常范圍，小部分病人的白帶PH值高出了正常范圍，但在正常范圍和高于正常范圍的都有真菌感染陽性病例出現(xiàn)，PH值高于正常范圍的陽性率與正常范圍的陽性率比較， 經(jīng)卡方檢驗(yàn)：x2=0.0800 P＞0.05兩者沒有顯著性差異，于是認(rèn)為兩種不同的PH 范圍具有同等的感染機(jī)會(huì)。霉菌性陰道炎大部分是由于接觸感染所致，文獻(xiàn)介紹的很多感染途徑都沒有離開這一點(diǎn)，我們的調(diào)查也顯示不管是正常PH范圍（PH≤4.5），還是異常PH范圍（PH≤4.5），都存在同樣的感染風(fēng)險(xiǎn)。 參 考 文 獻(xiàn)

[1] 呂榮.1006例白帶異常分泌物的病原學(xué)分析[J].中國醫(yī)學(xué)文摘（計(jì)劃生育婦產(chǎn)科學(xué)），2008，（06）.

[2] 李晶，苗志峰.女性陰道分泌物涂片染色結(jié)果分析[J].中國婦幼保健 ，2007，（26）.

[3] 范文燕，袁兆康.已婚育齡婦女生殖道感染現(xiàn)狀及干預(yù)研究[J].實(shí)用臨床醫(yī)學(xué) ，2006，（06）.

軍人同志范文第4篇

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  軍隊(duì)人員級(jí)別｜政府工作人員津貼、工資級(jí)別  ｜    附        注

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    團(tuán)｜正  團(tuán)｜          14              ｜

      ｜副  團(tuán)｜          15              ｜1．軍齡滿五年以上之老戰(zhàn)士，按副班級(jí)待遇；

    級(jí)｜準(zhǔn)  團(tuán)｜          16              ｜

－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－－｜    滿三年以上不足五年者，按老戰(zhàn)士待遇；

    營｜正  營｜          17              ｜

    級(jí)｜副  營｜          18              ｜    不足三年者按新戰(zhàn)士待遇。

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    連｜正  連｜          19              ｜2．準(zhǔn)師級(jí)以上人員轉(zhuǎn)業(yè)者，按其新任職務(wù)，符

    級(jí)｜副  連｜          20              ｜

－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－－｜    合其具體條件評(píng)定。

    排｜正  排｜          21              ｜

    級(jí)｜副  排｜          22              ｜3．轉(zhuǎn)業(yè)到不執(zhí)行各級(jí)人民政府工作人員津貼、

－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－－｜

    班｜正  班｜          23              ｜    工資標(biāo)準(zhǔn)之單位的人員，不適用此比照表，

    級(jí)｜副  班｜          24              ｜

－－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－－－－｜    可按其所在單位執(zhí)行之工資標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定工資。

    戰(zhàn)｜老戰(zhàn)士｜          25              ｜

軍人同志范文第5篇

[摘要] 目的 探討姜黃素對銅綠假單胞菌（pseudomonas aeruginosa，Pa）感染的肺上皮細(xì)胞的體外抗炎效應(yīng)。 方法 體外培養(yǎng)肺上皮細(xì)胞系NCI-H292，加入姜黃素和培養(yǎng)的Pa感染不同時(shí)間。Western blot檢測和實(shí)時(shí)定量PCR分別檢測NCI-H292細(xì)胞中紅素氧合酶1（Heme oxygenase-1，HO-1）mRNA和蛋白表達(dá)情況；ELISA檢測IL-1β和IL-8的產(chǎn)生。同時(shí)采用RNA干擾HO-1表達(dá)后，觀察對Pa誘導(dǎo)IL-1β和IL-8產(chǎn)生的影響。 結(jié)果 Pa感染NCI-H292細(xì)胞后，IL-1β和IL-8含量分別為（87.52±7.96）pg/mL和（205.63±34.25）pg/mL，50 μg/mL姜黃素孵育8 h后，其含量分別降至（15.78±10.74）pg/mL和（49.82±14.28）pg/mL，處理前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。同時(shí)，姜黃素能在轉(zhuǎn)錄翻譯水平分別調(diào)控HO-1 mRNA和蛋白表達(dá)，其中50 μg/mL姜黃素能將HO-1 mRNA增高19倍，蛋白表達(dá)水平提高4.8倍（P < 0.05）。HO-1 siRNA沉默HO-1表達(dá)后，與Pa組相比，IL-1β和IL-8分泌進(jìn)一步增高。 結(jié)論 姜黃素可能通過上調(diào)HO-1的表達(dá)而發(fā)揮對肺上皮細(xì)胞的抗炎作用。

[關(guān)鍵詞] 血紅素氧合酶-1；姜黃素；銅綠假單胞菌；肺上皮細(xì)胞；白介素-1β；白介素-8

[中圖分類號(hào)] R734.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2013）11（b）-0013-04

Study of molecular mechanism of the effect of Curcumin on pseudomonas aeruginosa-induced cytokines production in lung epithelial cells

LI Bo LUO Jinhua HE Zhiguo

Department of Infectious Diseases， the Third Affiliated Hospital， University of South China， Hu′nan Province， Hengyang 421000， China

[Abstract] Objective To investigated the anti-inflammatory effects of Curcumin in pseudomonas aeruginosa -infected lung epithelial cells in vitro. Methods Lung epithelial cell line NCI-H292 was cultured in vitro， and was incubated with Curcumin and pseudomonas aeruginosa for various times. Expression of Heme oxygenase-1 （HO-1） mRNA and protein was detected by real-time PCR and Western blot， respectively； production of IL-8 and IL-8 was detected by ELISA. RNA interference was used to silent HO-1 expression， and pseudomonas aeruginosa-induced production of IL-1β and IL-8 were detected. Results After pseudomonas aeruginosa infection， the concentration of IL-1β and IL-8 was （87.52±7.96） pg/mL and （205.63±34.25） pg/mL， respectively. When incubated with 50 μg/mL Curcumin for 8 h， IL-1β and IL-8 decreased to （15.78±10.74） pg/mL and （49.82±14.28） pg/mL （P < 0.05）. Curcumin could also induce NCI-H292 cells expression of HO-1 mRNA at the transcriptional and translational level， and 50 μg/mL Curcumin increased the mRNA and protein 19 and 4.8 fold， respectively （P < 0.05）. Furthermore， silencing of HO-1 expression could increase NCI-H292 cell secretion of IL-1β and IL-8， as compared with pseudomonas aeruginosa group. Conclusion Curcumin exhibits anti-inflammatory activity through induction of HO-1 expression in lung epithelial cells.

[Key words] Heme oxygenase-1； Curcumin； Pseudomonas aeruginosa； Lung epithelial cells； IL-1β； IL-8

[基金項(xiàng)目] 湖南省衡陽市科學(xué)技術(shù)發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)2012KJ28）。

血紅素氧合酶（Heme oxygenase-1，HO-1）是催化血紅素降解為CO、Fe2+和膽紅素的限速酶，并在機(jī)體的抗炎癥、抗氧化損傷中發(fā)揮重要作用[1]。研究顯示，銅綠假單胞菌（pseudomonas aeruginosa，Pa）感染后，肺上皮細(xì)胞可反饋性表達(dá)HO-1從而在一定程度上對抗Pa感染所誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷[2-3]。因此，以HO-1為出發(fā)點(diǎn)，尋求相應(yīng)的誘導(dǎo)劑，可能對Pa感染所導(dǎo)致的肺黏膜損傷具有重要意義。姜黃素（Curcumin）是從姜科姜黃屬植物的根莖中提取的一種植物多酚，大量研究證明，姜黃素具抗氧化、抗炎、清除自由基、抗腫瘤、抗炎癥以及對心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等多方面藥理作用[4-5]。本研究旨在探討姜黃素對肺上皮細(xì)胞表達(dá)HO-1的影響，并觀察其是否能抑制Pa感染所誘導(dǎo)的細(xì)胞因子產(chǎn)生。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

姜黃素購自Sigma公司。SYBGREEN PCR Mix購自ABI，TRIZol為Invitrogen產(chǎn)品。cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自Fermentas；RIPA裂解液、ECL試劑盒為Pierce產(chǎn)品；IL-1β和IL-8 ELISA購自深圳博盛生物科技有限公司。BCA試劑盒購自江蘇碧云天生物技術(shù)公司，HO-1和β-actin多克隆抗體購自Santa Cruz。RPMI1640培養(yǎng)基和胎牛血清購自Gibco。

1.2 細(xì)胞和Pa菌培養(yǎng)

人肺上皮NCI-H292細(xì)胞細(xì)胞系購自中科院上海細(xì)胞庫，細(xì)胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基，在37℃ 5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)。獲取Pa單菌落，接種于LB液體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)3 h。隨后取200 μL菌液接種至LB瓊脂平板中，37℃條件下過夜培養(yǎng)。洗脫并收集平板上細(xì)菌，10 000 r/min條件下離心5 min，隨后用無菌PBS洗滌2次。采用分光光度計(jì)于650 nm波長下測定菌液OD值并計(jì)算細(xì)菌的濃度。

1.3 Pa感染和姜黃素處理

NCI-H292細(xì)胞鋪于96孔板（1×106/mL，0.1 mL），24孔板（1×106/mL，1 mL），或者6孔板（1×106/mL，2 mL），培養(yǎng)48 h，當(dāng)其達(dá)到80%匯合度后，用無菌PBS漂洗，當(dāng)細(xì)胞生長成片生長時(shí)，加入培養(yǎng)的Pa（1×109 cfu/mL）以及不同濃度（10、30 μg/mL和50 μg/mL）的姜黃素處理并繼續(xù)培養(yǎng)24 h。

1.4 實(shí)時(shí)定量PCR檢測HO-1 mRNA的表達(dá)

細(xì)胞處理結(jié)束后，根據(jù)試劑盒操作說明提取總RNA并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，產(chǎn)物用RNA酶處理。設(shè)計(jì)特異性引物用于檢測HO-1 mRNA表達(dá)的定量。HO-1其正向引物：5′ - GCTCAAAAAGATTGCCCAGA -3′；反向引物：5′ - GCGGTAGAGCTGCTTGAACT - 3′。50 μL反應(yīng)體系包括：25 μL 2 × SYBR Green Master Mix（200 nmol/L dATP、dGTP和dCTP；400 nmol/L dUTP；2 mmol/L MgCl2，0.25 U UNG，0.625 U AmpliTaq Gold DNA聚合酶，25 pmol正向和反向引物，2 μL cDNA。利用ABI Prism 5700儀對HO-1進(jìn)行擴(kuò)增。首先50℃ 2 min，95℃ 10 min。隨后95℃ 15 s；60℃變形、延伸60 s，共40個(gè)循環(huán)。同時(shí)采用β-actin為內(nèi)參。mRNA表達(dá)倍數(shù)改變采用2ΔCt表示，ΔCt=（Ct對照基因-Ctβ-acin）-（Ct待測基因-Ctβ-acin）。

1.5 Western blot分析HO-1蛋白表達(dá)

6孔板中細(xì)胞經(jīng)PBS漂洗后，加入RIPA細(xì)胞裂解液裂解30 min，4℃ 12 000 g離心15 min，上清即為細(xì)胞總蛋白。裂解液中的蛋白用Bradford試劑在分光光度計(jì)中測定OD595處吸光度。50～70 μg總蛋白在5%～10%聚丙烯酰胺凝膠中電泳，并轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，經(jīng)5%無脂牛奶封閉后，分別用孵育一抗，二抗。ECL發(fā)光，顯影。

1.6 IL-1β和IL-8檢測

收集感染后24孔板中細(xì)胞上清液，按照ELASA 試劑盒說明書檢測IL-1β和IL-8水平。即100 μL細(xì)胞上清液加入到每個(gè)捕獲抗體包被的微孔板中，室溫孵育2 h。洗板后，加入100 μL檢測抗體，室溫繼續(xù)孵育2 h。隨后棄混合物，每孔加入100 μL streptavidin-HRP，室溫避光孵育20 min。最后，每孔加入100 μL底物，室溫避光孵育20 min，然后加入50 μL終止液，分光光度計(jì)檢測450 nm處OD值。

1.7 HO-1基因沉默實(shí)驗(yàn)

HO-1基因特異性siRNA序列由Invitrogen公司合成（forward：5′-AACUUUCAGAAGGGCCAGGUGTT-3′，reerse：5′-CACCUGGC CCUUCUG AAAGUUTT-3′），轉(zhuǎn)染方法按照Ambion公司提供的試劑盒說明進(jìn)行。生長于100 mm培養(yǎng)皿中的NCI-H292細(xì)胞加入0.5 mL瞬時(shí)轉(zhuǎn)染液（含8 μL siPORT Amine，20 nmol/L siRNA），使siRNA轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi)。37℃、5% CO2條件下孵育5 h后，加入1.5 mL完全培養(yǎng)基并繼續(xù)孵育48 h，HO-1的干擾效果采用Western blot加以驗(yàn)證。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組比較采用單因素方差分析并行Student's t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 姜黃素下調(diào)Pa感染所誘導(dǎo)的細(xì)胞因子產(chǎn)生

ELISA結(jié)果顯示，NCI-H292細(xì)胞未刺激時(shí)IL-1β和IL-8水平較低。Pa感染能顯著促進(jìn)其分泌細(xì)胞因子。而經(jīng)不同濃度姜黃素處理后，細(xì)胞因子產(chǎn)生顯著降低，見表1。

表1 姜黃素對Pa感染誘導(dǎo)細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響（pg/mL，x±s）

注：與對照組比較，*P

2.2 姜黃素誘導(dǎo)NCI-H292細(xì)胞表達(dá)HO-1 mRNA

Pa感染雖然能輕度上調(diào)HO-1 mRNA表達(dá)，但經(jīng)10～50 μg/mL姜黃素孵育8 h后，real-time PCR結(jié)果顯示，30 μg/mL姜黃素能使HO-1 mRNA增高2.4倍，而50 μg/mL姜黃素處理后，HO-1 mRNA增高了19倍，見圖1。

與Pa感染組比較，*P < 0.05；1.陰性對照組；2.Pa感染組；3.Pa+10 μg/mL姜黃素組；4.Pa+30 μg/mL姜黃素組；5.Pa+50 μg/mL姜黃素組；Pa：銅綠假單胞菌

圖1 姜黃素對NCI-H292細(xì)胞表達(dá)HO-1 mRNA的影響

2.3 姜黃素對NCI-H292細(xì)胞HO-1蛋白表達(dá)的影響

如圖2所示，不同濃度的姜黃素刺激NCI-H292細(xì)胞后，HO-1蛋白的表達(dá)量隨其濃度的遞增而增高，其中50 μg/mL姜黃素能將HO-1蛋白表達(dá)水平提高4.8倍。而內(nèi)參β-acin在所有處理組中保持恒定。

1.陰性對照組；2.Pa感染組；3.Pa+10 μg/mL姜黃素組；4.Pa+30 μg/mL姜黃素組；5.Pa+50 μg/mL姜黃素組；Pa：銅綠假單胞菌

圖2 不同濃度對姜黃素誘導(dǎo)NCI-H292細(xì)胞表達(dá)HO-1蛋白的影響

2.4 RNA干擾HO-1表達(dá)后對Pa誘導(dǎo)IL-1β和IL-8的影響

HO-1 siRNA沉默HO-1表達(dá)后（圖3A），與Pa感染組相比，IL-1β和IL-8分泌進(jìn)一步增高（圖3B）。

3 討論

HO-1 是一種誘導(dǎo)性表達(dá)酶。基因定位于染色體22q12，幾乎表達(dá)于所有組織，以內(nèi)質(zhì)網(wǎng)含量最高，在各種損傷性刺激下表達(dá)增高，又稱為熱休克蛋白32（HSP32）。HO-1能催化血紅素降解為CO、亞鐵離子和膽綠素，膽綠素隨后在膽綠素還原酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)槟懠t素。研究表明HO-1及其代謝產(chǎn)物在維護(hù)細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的過程中具有抗炎、抗增殖、抗氧化以及抗凋亡等作用[6]。例如，HO-1表達(dá)的降低或缺失（藥物性抑制作用或HO-1基因敲除小鼠）使機(jī)體對氧化應(yīng)激的耐受性降低，從而誘發(fā)廣泛的氧化性損傷或器官衰竭[7]。Zhang等[8]的實(shí)驗(yàn)證實(shí)了HO-1源性CO能加強(qiáng)cav-1和TLR4的相互作用，進(jìn)一步減弱了LPS誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)。此外，HO-1源性膽紅素既可直接清除氧自由基，還可以通過抑制補(bǔ)體活化而減少炎癥細(xì)胞的聚集[1]。本實(shí)驗(yàn)中以Pa感染的NCI-H292細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對象，結(jié)果顯示，Pa感染后能增加IL-1β和IL-8水平，姜黃素能誘導(dǎo)NCI-H292細(xì)胞表達(dá)HO-1mRNA和蛋白，RNA干擾HO-1表達(dá)后，Pa誘導(dǎo)的IL-1β和IL-8的產(chǎn)生進(jìn)一步增高，這表明HO-1能一定程度上對抗Pa感染所誘導(dǎo)的細(xì)胞因子表達(dá)，同時(shí)也從側(cè)面說明姜黃素可能通過上調(diào)HO-1表達(dá)從而具有一定的抗炎癥效應(yīng)[9]，從這種意義上講，姜黃素誘導(dǎo)產(chǎn)生的HO-1可能是抑制肺炎癥損傷的重要因素。同時(shí)本研究也發(fā)現(xiàn)，RNA干擾HO-1表達(dá)后，不能完全抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生，這表明HO-1可能不是唯一調(diào)控IL-1β和IL-8產(chǎn)生的因素。因?yàn)榧?xì)胞因子基因的上游也存在NF-κB、AP-1等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，因此也可能參與IL-1β和IL-8的基因表達(dá)同時(shí)，HO-1產(chǎn)物膽紅素和CO具有抗氧化、抗炎癥、抗凋亡和舒血管活性，可對拮抗各種損傷因素導(dǎo)致的肺黏膜損傷[10]。此外，體內(nèi)外研究證明，通過胃腸道給予動(dòng)物和人服用高劑量姜黃素后，尚未發(fā)現(xiàn)明顯的毒性。這表明姜黃素具有良好的安全性，同時(shí)也有臨床實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，給予志愿者單次口服高達(dá)8000 mg的姜黃素，均沒有出現(xiàn)明顯的毒性作用。姜黃素在胃腸道的吸收率為60%～66%。給藥后，主要通過腸道排泄，而靜脈給藥則主要通過膽汁排泄[11-12]，而本研究采用的最高濃度為50 μg/mL，因此即便服用也可達(dá)到誘導(dǎo)HO-1表達(dá)所需要的濃度。總之，Pa感染的肺腺癌細(xì)胞中，姜黃素通過上調(diào)HO-1表達(dá)，抑制了細(xì)胞因子的過度分泌。由于細(xì)胞因子過度分泌是各種感染性疾病發(fā)生的重要機(jī)制，此從這種意義上講，誘導(dǎo)姜黃素誘導(dǎo)的HO-1產(chǎn)生對于各種感染性疾病的防治可能具有重要意義。

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