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螞蟻與大象范文第1篇

近來(lái)，圍繞著蘋(píng)果iPad在中國(guó)大陸的商標(biāo)所有權(quán)糾紛受到了極大的關(guān)注。在私下暗斗了兩年之后。唯冠和蘋(píng)果的這出好戲終于從幕后轉(zhuǎn)為臺(tái)前。

唯冠PK蘋(píng)果的這出商業(yè)諜戰(zhàn)既有蘋(píng)果的克敵先機(jī)。又有唯冠的后發(fā)制人，更兼兩者均是IT界廝混多年的角色，你來(lái)我往，針?shù)h相對(duì)，雙方的奪“標(biāo)”大戰(zhàn)日趨白熱化，一眾看客們也大呼過(guò)癮。

蘋(píng)果“雙翼”巧奪商標(biāo)

此次iPad商標(biāo)之爭(zhēng)要追溯到10年前。2000年唯冠國(guó)際旗下子公司深圳唯冠在中國(guó)申請(qǐng)iPad文字商標(biāo)和文字圖形結(jié)合商標(biāo)的商標(biāo)專用權(quán)，2001年獲得核準(zhǔn)注冊(cè)。之后將該商標(biāo)使用在其自行研發(fā)的液晶顯示器等電子產(chǎn)品上。

唯冠國(guó)際系香港上市公司，在中國(guó)大陸、香港、中國(guó)臺(tái)灣、美國(guó)、英國(guó)等7個(gè)國(guó)家和地區(qū)設(shè)有子公司。2001年至2004年，唯冠國(guó)際旗下另一子公司臺(tái)灣唯冠在歐盟、韓國(guó)、墨西哥、新加坡等國(guó)家共獲得8個(gè)“iPad”相關(guān)注冊(cè)商標(biāo)專用權(quán)。

唯冠國(guó)際、臺(tái)灣唯冠、深圳唯冠的實(shí)際控制人均為楊榮山。深圳唯冠曾經(jīng)推出自己的iPad電腦。不過(guò)國(guó)內(nèi)當(dāng)時(shí)由于市場(chǎng)環(huán)境并不成熟，因此唯冠科技iPad電腦的銷售并不太好。

有消息顯示。在蘋(píng)果公司策劃其iPad平板電腦進(jìn)入歐洲市場(chǎng)之時(shí)。發(fā)現(xiàn)iPad商標(biāo)已經(jīng)被唯冠注冊(cè)。在英國(guó)，蘋(píng)果公司曾以撤銷閑置不用商標(biāo)等理由將唯冠告上法庭，但是最后該場(chǎng)官司以唯冠勝訴而告終。

據(jù)楊榮山最近在北京新聞會(huì)上介紹的信息。唯冠的iPad是公司1998年下半年開(kāi)始研發(fā)的一款產(chǎn)品。全名為Internet PersonaI Acess Device，定位于一款網(wǎng)絡(luò)終端設(shè)備，是唯冠iFamlly系列產(chǎn)品之一，這一系列產(chǎn)品唯冠曾投入超3000萬(wàn)美元開(kāi)發(fā)。

楊榮山介紹。在本次糾紛發(fā)生前。雙方2003年就結(jié)下了“梁子”。當(dāng)年，蘋(píng)果在歐洲注冊(cè)iPod商標(biāo)時(shí)，曾因與唯冠iPad的商標(biāo)相似，而發(fā)生訴訟?！拔ü诨舜罅烤ψ钃籼O(píng)果。但最后選擇放棄”。這之后，才是目前紛紛擾擾的iPad商標(biāo)案。

2009年。蘋(píng)果公司律師在英國(guó)設(shè)立了IP申請(qǐng)發(fā)展有限公司，并與臺(tái)灣唯冠公司聯(lián)系。當(dāng)年12月23日，唯冠國(guó)際CEO兼主席楊榮山授權(quán)員工麥?zhǔn)篮旰炇鹣嚓P(guān)協(xié)議，將10個(gè)商標(biāo)的全部權(quán)益轉(zhuǎn)讓給英國(guó)口公司，其中包括中國(guó)內(nèi)地的商標(biāo)轉(zhuǎn)讓協(xié)議。協(xié)議簽署之后，英國(guó)IP公司向中國(guó)臺(tái)灣唯冠公司支付了3.5萬(wàn)英鎊購(gòu)買所有的iPad商標(biāo)，然后英國(guó)IP公司以10美元(也有稱是10英鎊)的價(jià)格，將iPad商標(biāo)的所有權(quán)益轉(zhuǎn)讓給了蘋(píng)果。

對(duì)于此樁交易，楊榮山2月17日稱，“當(dāng)時(shí)蘋(píng)果那個(gè)小公司來(lái)和我們談判時(shí)，只是表示因?yàn)樵摴镜拿挚s寫(xiě)是iPad才要買，而且承諾其業(yè)務(wù)不會(huì)和臺(tái)灣唯冠競(jìng)爭(zhēng)。這樣的行為，蘋(píng)果有欺詐的嫌疑?！蔽ü凇昂笫帧狈锤暌粨?/p>

2010年1月27日，在美國(guó)舊金山芳草地藝術(shù)中心所舉行的蘋(píng)果公司新聞會(huì)上，iPad正式并由此開(kāi)始引導(dǎo)“平板電腦”的發(fā)展潮流。

原本奇貨可居的iPad全球商標(biāo)以3.5萬(wàn)英鎊出售，面對(duì)如此暗虧，唯冠對(duì)此有何感想不得而知。但是令蘋(píng)果沒(méi)有想到的是，不知道出于有意還是無(wú)意，唯冠在這次普通的商業(yè)交易中留了“后手”。

深圳唯冠認(rèn)為，深圳唯冠和臺(tái)北唯冠雖同屬香港唯冠國(guó)際的子公司，但二者并不是隸屬關(guān)系，是兩個(gè)完全不同的民事主體，因此盡管蘋(píng)果公司和臺(tái)灣唯冠公司簽署了合同，購(gòu)買了iPad商標(biāo)專用權(quán)，但這一合同對(duì)深圳唯冠公司并不具有約束力。

針對(duì)愈演愈烈的商標(biāo)權(quán)糾紛，蘋(píng)果在2月14日晚間了一份簡(jiǎn)短聲明：“多年前，我們購(gòu)買了唯冠在全球十個(gè)不同國(guó)家的iPad商標(biāo)權(quán)。唯冠拒絕承認(rèn)和履行涉及中國(guó)部分的協(xié)議。香港法院已支持蘋(píng)果，我們?cè)谥袊?guó)內(nèi)地的訴訟仍在進(jìn)行中?！?/p>

站在蘋(píng)果公司的角度來(lái)看，在IP公司與臺(tái)灣唯冠簽署的協(xié)議中，的確包括一份《中國(guó)商標(biāo)轉(zhuǎn)讓協(xié)議》，其中約定臺(tái)灣唯冠以1英鎊的對(duì)價(jià)將相關(guān)商標(biāo)轉(zhuǎn)讓給口公司。

但從技術(shù)細(xì)節(jié)分析，按照中國(guó)法律，“商標(biāo)權(quán)的轉(zhuǎn)讓以登記為要件，不經(jīng)國(guó)家工商主管部門(mén)的登記，權(quán)利并不發(fā)生轉(zhuǎn)移”，這意味著中國(guó)內(nèi)地的Wad商標(biāo)權(quán)如果沒(méi)有經(jīng)過(guò)主管部門(mén)批準(zhǔn)，是無(wú)法被認(rèn)定已經(jīng)從深圳唯冠轉(zhuǎn)讓至蘋(píng)果公司的。

深圳唯冠正是抓住了這一點(diǎn)，堅(jiān)稱中國(guó)內(nèi)地的iPad商標(biāo)權(quán)并沒(méi)有被轉(zhuǎn)讓。而深圳唯冠的現(xiàn)狀，決定了該公司必須抓住這最后一根救命稻草，目前該公司流動(dòng)負(fù)債凈額達(dá)28.7億元，38億元貸款逾期未償還，另對(duì)中國(guó)銀行、民生銀行等8家銀行的負(fù)債大約為1.8億美元。

在本次iPad商標(biāo)糾紛中，對(duì)于蘋(píng)果最為不利的就是蘋(píng)果拿不出和深圳唯冠的商標(biāo)轉(zhuǎn)讓合同。從蘋(píng)果公司利用殼公司購(gòu)買iPad商標(biāo)的過(guò)程來(lái)看，蘋(píng)果在知識(shí)產(chǎn)權(quán)方面還是花了很多心思的，但為何在內(nèi)地的商標(biāo)轉(zhuǎn)讓過(guò)程中出現(xiàn)了如此低級(jí)的失誤?對(duì)此蘋(píng)果公司的解釋是，當(dāng)時(shí)商標(biāo)權(quán)轉(zhuǎn)讓請(qǐng)的是英國(guó)律師，不懂中文，所以對(duì)中國(guó)法律的理解有差異，但這樣的辯解太過(guò)牽強(qiáng)。

螞蟻和大象的博弈

唯冠PK蘋(píng)果，在很多人看來(lái)，有如螞蟻和大象的較量。然而，幾經(jīng)交手之后，蘋(píng)果如今已經(jīng)焦頭爛額，有苦難言。

事實(shí)上，唯冠并不是一家普通的公司。唯冠公司成立于1989年，是全球四大顯示器生產(chǎn)商之一，產(chǎn)品銷往50余個(gè)國(guó)家。截至2006年10月，唯冠公司在全球約有11000名員工。全球11個(gè)國(guó)家和地區(qū)擁有17處分公司，在全球5個(gè)國(guó)家共計(jì)擁有7處生產(chǎn)基地。

可以說(shuō)，唯冠也曾經(jīng)是IT界的風(fēng)云人物，只不過(guò)后來(lái)突如其來(lái)的全球金融危機(jī)，導(dǎo)致唯冠國(guó)際最大客戶寶麗來(lái)破產(chǎn)，欠款無(wú)法收回，公司經(jīng)營(yíng)由盛轉(zhuǎn)衰。2010年8月，唯冠破產(chǎn)。但是，曾經(jīng)的業(yè)界經(jīng)歷足以令唯冠在應(yīng)對(duì)與蘋(píng)果的商標(biāo)糾紛時(shí)進(jìn)遇自如。

按照慣例來(lái)講，通常這類涉及商標(biāo)權(quán)的官司都是可以用錢(qián)解決的問(wèn)題。例如iPhone正式進(jìn)入中國(guó)之前，漢王科技搶先在電話、手機(jī)等商品領(lǐng)域注冊(cè)了i-phone商標(biāo)。最后雙方經(jīng)過(guò)協(xié)商，漢王公司將“i-phone”商標(biāo)賣給了蘋(píng)果。

實(shí)際上蘋(píng)果公司不是沒(méi)有嘗試過(guò)與深圳唯冠達(dá)成和解，據(jù)深圳唯冠的律師謝湘輝透露，2009年蘋(píng)果公司曾與深圳唯冠接觸，協(xié)商iPM商標(biāo)的使用權(quán)問(wèn)題，當(dāng)時(shí)深圳唯冠的開(kāi)價(jià)是幾百萬(wàn)美元。但蘋(píng)果公司沒(méi)有同意，而是一邊打官司一邊賣iPad。

螞蟻與大象范文第2篇

隨著城市化發(fā)展的推進(jìn)，越來(lái)越多公共場(chǎng)合廁所安裝上了馬桶，本來(lái)是希望給人們帶來(lái)更舒適的如廁享受，卻因?yàn)樾l(wèi)生問(wèn)題和使用習(xí)慣使得大家對(duì)公廁的馬桶聞之色變。公廁里裝馬桶，到底對(duì)大家來(lái)說(shuō)是享受還是折磨？從趨勢(shì)來(lái)看，公廁安裝馬桶成為潮流，但從使用體驗(yàn)來(lái)說(shuō)，公廁到底應(yīng)不應(yīng)該安裝馬桶？

隨著城市化發(fā)展的推進(jìn)，越來(lái)越多公共場(chǎng)合廁所安裝上了馬桶，本來(lái)是希望給人們帶來(lái)更舒適的如廁享受，卻因?yàn)樾l(wèi)生問(wèn)題和使用習(xí)慣使得大家對(duì)公廁的馬桶聞之色變。公廁里裝馬桶，到底對(duì)大家來(lái)說(shuō)是享受還是折磨？從趨勢(shì)來(lái)看，公廁安裝馬桶成為潮流，但從使用體驗(yàn)來(lái)說(shuō)，公廁到底應(yīng)不應(yīng)該安裝馬桶？

正方觀點(diǎn)：應(yīng)裝馬桶

外觀時(shí)尚符合城市發(fā)展需求

現(xiàn)代的抽水馬桶是由英國(guó)人發(fā)明的，后來(lái)才傳入亞洲國(guó)家，目前馬桶在歐美、日韓等地普及率非常高。自發(fā)明那天馬桶就被稱為偉大的發(fā)明，它解決了人自身吃喝拉撒的進(jìn)出問(wèn)題，它的出現(xiàn)也人類讓如廁快速進(jìn)入文明時(shí)代。評(píng)價(jià)一個(gè)地方的文明程度，只要看廁所就可以了。隨著現(xiàn)代化的進(jìn)步，馬桶以其舒適、美觀、大方、干凈、衛(wèi)生等眾多優(yōu)勢(shì)擊敗傳統(tǒng)蹲便器，成為現(xiàn)代文明的代表。

目前眾多高檔場(chǎng)合如星級(jí)酒店、高檔寫(xiě)字樓、高級(jí)食市等地都會(huì)按照建筑定位安裝馬桶，以求符合建筑整體形象。座便器的外形時(shí)尚美觀，可以和多種風(fēng)格的裝修搭配，適合愛(ài)美的年輕人。而事實(shí)上，蹲廁從已經(jīng)難以適應(yīng)現(xiàn)在如廁享受，而且相比馬桶也會(huì)有比較低級(jí)的印象。

使用舒適 適合各類人群需求

就使用體驗(yàn)來(lái)說(shuō)，馬桶明顯比蹲廁更為舒適，也更為人性化。特別對(duì)行動(dòng)不便的老人、肥胖者、孕婦或者殘疾人來(lái)說(shuō)，下蹲如廁非常困難，而公廁安裝馬桶，可以有效滿足各個(gè)群體的需求，減少了因如廁時(shí)間太長(zhǎng)雙腳發(fā)麻、壓迫靜脈等情況出現(xiàn)，讓如廁成為一種享受。另外，馬桶配置的蓋板也能讓馬桶內(nèi)部的排泄物與外間隔離，讓空間更為干凈衛(wèi)生。

安裝便捷無(wú)需建臺(tái)階

由于座便器與蹲便器的構(gòu)造差異，蹲便器排水管以及主要構(gòu)造都是彎曲向下，而一般的建筑大廈衛(wèi)生間都沒(méi)有沉箱，安裝蹲廁必須安裝15～20厘米的臺(tái)階。若公廁安裝馬桶則無(wú)此麻煩，直接鋪好排水管道就可以安裝，對(duì)工程方施工而言更加方便快捷。而且，專家分析目前沖水馬桶在沖水力度方面要比蹲便器好，長(zhǎng)期使用也不容易造成管道的阻塞。

新聞連線——

擔(dān)心旅館的馬桶不衛(wèi)生，顧客雙腳踩在馬桶上如廁，結(jié)果馬桶翻倒摔破，劃傷顧客。昨日，受傷顧客張女士反映：旅館該不該承擔(dān)她的醫(yī)藥費(fèi)？

反方觀點(diǎn)：不應(yīng)裝馬桶

各種親密接觸 容易傳播疾病

座便器最大的缺點(diǎn)就是不衛(wèi)生，特別是在公共場(chǎng)所使用座便器讓“人心惶惶”。馬桶上容易附細(xì)菌、寄生蟲(chóng)等，很容易造成交叉感染。

廣東省中醫(yī)院皮膚科主任醫(yī)師遲鳳好認(rèn)為通過(guò)馬桶傳染疾病的機(jī)會(huì)確實(shí)存在的，一般人的臀部或大腿受到細(xì)菌感染，接觸馬桶，然后另一個(gè)人緊接著也接觸同一個(gè)馬桶，這樣傳染的幾率是比較大的。目前國(guó)內(nèi)公共馬桶普遍并沒(méi)有馬桶紙墊，女孩如廁時(shí)更需要注意衛(wèi)生，避免感染疾病。

習(xí)慣難改 蹲馬桶導(dǎo)致公廁更臟亂

從使用習(xí)慣上來(lái)說(shuō)，中國(guó)人習(xí)慣蹲廁，這是全世界都知道的。越來(lái)越多的公廁安裝馬桶，不一定能表現(xiàn)城市的現(xiàn)代化程度，反而因?yàn)槭褂貌涣?xí)慣而凸顯出更多的陋習(xí)。騰訊網(wǎng)亞太家居調(diào)查顯示，90%以上的人都不愿意直接與公廁的馬桶親密接觸，一半以上的人嘗試過(guò)蹲在馬桶上面如廁。蹲馬桶直接造成馬桶圈臟得慘不忍睹，而且也極容易將贓物弄到馬桶外，而往往這些公共場(chǎng)合使用頻率太高無(wú)法頻繁清潔，于是安裝馬桶的公廁成為臟亂差的代表。由于使用習(xí)慣無(wú)法短期改變，市民寧愿排隊(duì)等候蹲廁都不愿意使用馬桶，公廁安裝馬桶就是勞民傷財(cái)不好看也不好用的“面子工程”。

價(jià)格昂貴難清潔 后期保養(yǎng)成本高

螞蟻與大象范文第3篇

【摘要】 ：目的 圍繞海馬結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)研究定志小丸的抗抑郁機(jī)制。方法 40只雌性大鼠分為對(duì)照組、抑郁癥模型組(模型組)、蒸餾水組(DW組)和定志小丸組(中藥組)，Open field法檢測(cè)行為學(xué)得分，ELISA法檢測(cè)血清皮質(zhì)醇和雌二醇(E2)含量，HE染色和電鏡技術(shù)觀察海馬CA3區(qū)神經(jīng)元形態(tài)，免疫組化技術(shù)檢測(cè)齒狀回神經(jīng)干細(xì)胞(NSC)增殖。結(jié)果 與對(duì)照組比較，模型組和DW組行為學(xué)得分及血清E2含量顯著下降，皮質(zhì)醇水平升高和NSC增殖明顯降低，海馬CA3區(qū)神經(jīng)元損傷明顯；中藥組行為學(xué)得分和血清E2含量無(wú)明顯變化，皮質(zhì)醇明顯減少，NSC增殖顯著增加，海馬CA3區(qū)神經(jīng)元基本正常。結(jié)論 定志小丸能夠保護(hù)海馬結(jié)構(gòu)，這可能是其抗抑郁機(jī)制之一。

【關(guān)鍵詞】 抑郁癥　定志小丸　雌二醇　神經(jīng)干細(xì)胞　皮質(zhì)醇　大鼠

Abstract：Objective To study the anti-depression mechanism of Dingzhixiaowan concerning on histology of hippocampal formation. Methods 40 female rats were pided into control， depression model group (model group)， distilled water group (DW group) and Dingzhixiaowan group (Chinese herb group). Behavior points were measured by open field method. Serum concentrations of cortisol and estradiol (E2) were checked with ELISA. HE staining and electron microscopy were applied to observe the histology of neurons in hippocampal formation. Immunohistochemistry method was employed to detect Nestin expression. Results Compared with the control， behavior points， serum E2 level and Nestin expression decreased obviously and serum cortisol level increased markedly， CA3 neurons were seriously damaged in model and DW groups. While behavior points， serum E2 level did not change， Nestin expression increased obviously and serum cortisol level decreased markedly， CA3 neurons were basically normal in Chinese herb groups. Conclusion Dingzhixiaowan can protect hippocampal formation， which might be one of the anti-depression mechnisms.

Key words：depression；Dingzhixiaowan；estradiol；neural stem cell；cortisol；rat

目前認(rèn)為，慢性應(yīng)激刺激造成的海馬結(jié)構(gòu)損傷是抑郁癥發(fā)病的主要原因。對(duì)海馬結(jié)構(gòu)來(lái)說(shuō)，糖皮質(zhì)激素是損傷激素，雌激素為保護(hù)激素，而女性的雌激素水平變化較大，其保護(hù)作用時(shí)常減弱，這可能是女性抑郁癥發(fā)病率較高的原因。本研究以此為出發(fā)點(diǎn)，研究定志小丸的抗抑郁機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組

成年Wistar雌性大鼠(230±20)g，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號(hào)：SCXK(遼)2004-0018。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，選擇體重和行為學(xué)得分相近的40只大鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、蒸餾水組(DW組)和定志小丸組(中藥組)，每組10只。對(duì)照組每籠5只飼養(yǎng)，其余3組每籠1只飼養(yǎng)。

1.2 抑郁癥模型的建立

除對(duì)照組外，其余3組動(dòng)物均接受慢性應(yīng)激刺激，復(fù)制慢性不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激模型。其方法是：在21 d內(nèi)施加電擊足底(36 V交流電，5 min)、冰水游泳(4 ℃，5 min)、搖晃(1 min)、夾尾(1 min)、禁水(24 h)、禁食(24 h)等刺激，每種刺激3～4次。

1.3 給藥

對(duì)照組不給藥；模型組只施加灌胃動(dòng)作；DW組灌服1 mL蒸餾水；中藥組灌服定志小丸。定志小丸為人參、茯苓、遠(yuǎn)志、石菖蒲的標(biāo)準(zhǔn)提取物(購(gòu)于安徽宣城百草生物有限公司，提純比例為5∶1)，劑量分別是10、10、6、6 g，溶于適量水中，加熱后濃縮為1 kg/L。按成人用量折算成灌胃劑量[1 mL/100(g? d)]，于刺激前1 h灌服。

1.4 大鼠行為學(xué)檢測(cè)

采用Open field法檢測(cè)，以3 min內(nèi)大鼠水平穿越方格數(shù)作為水平活動(dòng)得分，以前肢抬起次數(shù)為垂直活動(dòng)得分。檢測(cè)過(guò)程中保證時(shí)間、光照、溫度及環(huán)境噪音的一致性。檢測(cè)由3人同時(shí)完成，1人負(fù)責(zé)計(jì)時(shí)，1人負(fù)責(zé)觀察大鼠的水平活動(dòng)，1人負(fù)責(zé)計(jì)數(shù)垂直活動(dòng)。正式檢測(cè)前，3人首先熟悉檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，并進(jìn)行多次訓(xùn)練，盡量減少人為誤差。

1.5 血清皮質(zhì)醇和雌二醇檢測(cè)

在第22天，大鼠腹腔注射20%氨基甲酸乙酯(0.4 mL/100 g)麻醉后，腹主動(dòng)脈取血，離心后取血清，凍存?zhèn)溆谩Ｓ诳傖t(yī)院內(nèi)分泌實(shí)驗(yàn)室采用ELISA方法檢測(cè)血清皮質(zhì)醇和雌二醇(E2)含量。

1.6 海馬組織學(xué)觀察

將取血后的大鼠用150 mL生理鹽水經(jīng)主動(dòng)脈快速?zèng)_洗，取一側(cè)海馬行常規(guī)HE染色，另一側(cè)于掃描電鏡下觀察形態(tài)學(xué)變化。

1.7 齒狀回神經(jīng)干細(xì)胞(NSC)增殖檢測(cè)

采用Nestin免疫組化方法，取經(jīng)生理鹽水快速?zèng)_洗后的海馬，4%多聚甲醛固定4～6 h，30%蔗糖溶液沉底。冰凍連續(xù)切片，片厚25 μm，隔4片取1片。將切片置含新鮮0.5% H2O2的純甲醇中30 min；0.1% Triton溶液中30 min；正常山羊血清60 min；兔抗鼠Nestin一抗(1∶2000，Sigma)，25 ℃孵育1 h，4 ℃過(guò)夜；生物素化山羊抗兔IgG(博士德二抗試劑盒)，室溫下60 min；SABC復(fù)合物，室溫60 min；DAB顯色(博士德)。染色對(duì)照：用正常山羊血清和PBS代替Nestin一抗作孵育，其余步驟同上。利用BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，采用SPSS11.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)變化

光鏡下可見(jiàn)，對(duì)照組CA3區(qū)有大量致密錐體細(xì)胞，排列整齊，細(xì)胞完整，邊緣清晰，死亡細(xì)胞較少；模型組和DW組可見(jiàn)細(xì)胞層次減少、紊亂、中斷，大量細(xì)胞壞死；中藥組神經(jīng)元形態(tài)與對(duì)照組基本接近。電鏡下可見(jiàn)，對(duì)照組細(xì)胞器豐富，輪廓清晰，細(xì)胞核呈圓形，核膜清晰光滑完整，核染色質(zhì)分布均勻；模型組和DW組細(xì)胞器減少，線粒體空泡化，細(xì)胞核變小，不規(guī)則，且核膜增厚，核周電子密度降低；中藥組與對(duì)照組基本相同。

2.2 各組大鼠齒狀回Nestin表達(dá)

鏡下可見(jiàn)Nestin免疫陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物呈棕黃色，環(huán)形分布于核膜周圍。對(duì)照組鏡下可見(jiàn)較多的棕黃色反應(yīng)物，邊緣相對(duì)清晰，細(xì)胞大小相近；模型組和DW組棕黃色反應(yīng)物較少，邊緣不清，細(xì)胞大小不一致；中藥組鏡下可見(jiàn)大量棕黃色反應(yīng)物，邊緣清晰，細(xì)胞大小一致。各組Nestin陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)見(jiàn)表1。表1 各組大鼠Nestin陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(略)注：與對(duì)照組比較，*P

2.3 各組大鼠行為學(xué)得分

(見(jiàn)表2)表2 各組大鼠的行為學(xué)得分(略)注：與本組第0天比較，P

2.4 各組大鼠血清皮質(zhì)醇和雌二醇含量

(見(jiàn)表3)表3 各組大鼠血清皮質(zhì)醇和雌二醇含量變化(略)

3 討論

海馬結(jié)構(gòu)具有調(diào)節(jié)內(nèi)臟功能、情緒和行為的多種作用，主要由海馬和齒狀回組成。齒狀回存在NSC，能夠增殖、遷移至海馬CA3區(qū)，分化形成新的神經(jīng)細(xì)胞。因?yàn)橐种讫X狀回NSC增殖后，許多抗抑郁藥物會(huì)失效，所以，海馬CA3與齒狀回的關(guān)系在抑郁癥發(fā)病中的作用逐漸受到重視。抑郁癥的發(fā)病機(jī)制目前認(rèn)為是慢性應(yīng)激刺激引起腎上腺皮質(zhì)過(guò)度分泌糖皮質(zhì)激素，繼而損傷海馬神經(jīng)元。本實(shí)驗(yàn)也觀察到同樣現(xiàn)象。由于高水平的糖皮質(zhì)激素還能抑制齒狀回NSC增殖，從而降低了海馬結(jié)構(gòu)的自我修復(fù)能力[1]，繼而導(dǎo)致海馬結(jié)構(gòu)出現(xiàn)不可逆損傷。因此，抑郁癥的根治應(yīng)圍繞保護(hù)海馬成熟神經(jīng)元和齒狀回NSC兩方面進(jìn)行。

定志小丸由遠(yuǎn)志、石菖蒲、茯苓和人參組成，具有祛痰開(kāi)竅、健脾益智作用，主治心氣不定、五臟不足、憂悲不樂(lè)等。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方能夠?qū)孤詰?yīng)激對(duì)大鼠行為學(xué)的影響，具有抗抑郁作用，這可能與其保護(hù)海馬CA3區(qū)神經(jīng)元和齒狀回NSC增殖有關(guān)。盡管定志小丸不能抑制皮質(zhì)醇的過(guò)度分泌，但其維持E2水平的作用可能更為重要，因此，該方可能是替代雌激素的一種選擇，成為治療女性抑郁癥的備選藥物。

螞蟻與大象范文第4篇

關(guān)鍵詞： 運(yùn)動(dòng)；慢性應(yīng)激抑郁模型；神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)

中圖分類號(hào)： G804.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A文章編 號(hào)： 1007-3612(2011)05-0043-05

Effect of Exercise on Neurotrophic Signal Pathway in ChronicaleUnpredictablly Stressed Rats

WEI Hongwen1, JIAO Wei1, ZHANG Youzhi2, ZHANG Liming 2, CHEN Hongxia2, XUE Rui2

(1.Beijing SportUniversity，Beijing 100084，China;2Institute of Pharmacology and Toxicology，Academy of Military Medical Science，B eijing 100850，China)

Abstract:Objective: To investigate the effect of exercise on neurotrophic signal pathwayin the chronically unpredictable stress (CUS) animal model of depression, and di scuss partial antidepressant mechanism of exercise.Methods: 56 male SD rats wer e divided into seven groups: Control, CUS, Fluoxetine (Flu), low intensity tread mill running (LIR), moderate intensity treadmill running (MIR), Flu+LIR and Flu+ MIR.After four weeks of CU S, hippocampal brain-derived neurotrophic factor (BDNF), extracellular signal re gulated kinase (ERK1/2) and phosphor-extracellular signal regulated kinase(pERK 1/2), and neuropeptide VGF expression were tested using western-blotResults:1) CUS down-regulated significantly the expression of pERK, BDNF and VGF in hip pocampusFlu, MIR, Flu+LIR and Flu+MIR could improve these changes obviouslyFlu+LIR up-reguated the expression of hippocampal pERK and BDNF but did notaffect the expression of hippocampal VGF markedly.2) The up-regulaed effect o f MIR and Flu+LIR on the expression of hippocampal pERK was better than that ofLIRThe up-regulated effect of Flu+MIR on the expression of hippocampal BDNF w as better than that of Flu or MIR respectively; Flu+LIR was better than LIR.Co nclusions: The antidepressant mechanisms of exercise may be related to following : exercise can antagonize the chronic stress-induced hipocampal impairment via:1) up-regalting the expression of hippocampal BDNF, pERK and VGF which were rel ated to BDNF’s signal pathway may be underlying the neurotrophic and neuroplast ic effects of exercise;2) The neurotrophic effect of fluoxetine can be enhance d further by exercise

Key words:depression; exercise; neurotrophy

目前研究認(rèn)為，抑郁癥的發(fā)生不僅與腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)及其受體有關(guān)，還涉及受體后信號(hào)傳 導(dǎo)系統(tǒng)及基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程，從而引起特定腦區(qū)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)障礙，神經(jīng)可塑性下降等改變［1 ］。神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子及其信號(hào)傳導(dǎo)通路可能參與并介導(dǎo)了抗抑郁劑的作用［2］。

適量運(yùn)動(dòng)可以通過(guò)保護(hù)神經(jīng)元［3］、促進(jìn)神經(jīng)再生［4］和增加海馬腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)的表達(dá)［5 ］來(lái)促進(jìn)腦可塑性。本課 題組前期對(duì)大鼠慢性應(yīng)激抑郁模型施加運(yùn)動(dòng)干預(yù)，行為學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果顯示運(yùn)動(dòng)對(duì)慢性應(yīng)激抑 郁模型具有抗抑郁樣作用［6］。本實(shí)驗(yàn)旨在前期研究的基礎(chǔ)上，從神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)通路重 要分子表達(dá)水平出發(fā)，探討運(yùn)動(dòng)抗抑郁作用可能存在的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)雄性SD大鼠56只，購(gòu)入時(shí)體重150～160 g。購(gòu)自維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，飼養(yǎng) 于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。大鼠每籠4只群養(yǎng)，自由攝食飲水，室溫22～24℃，濕度5 0%±10%，自然晝夜節(jié)律光照。

1.2 主要儀器設(shè)備 DSPT-202動(dòng)物跑臺(tái)(杭州段氏，中國(guó))，大鼠穿梭箱反應(yīng)儀(Med Associate，美國(guó))，噪 聲儀(中國(guó))，恒溫振蕩器(江蘇太倉(cāng)實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠，中國(guó))，Model 4001P穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀(LifeTechnologies，美國(guó))，DYCZ-24D垂直板電泳槽，DYCP-40C型石墨半干轉(zhuǎn)移槽，WD-9405型 水平搖床(北京六一儀器廠，中國(guó))，超聲波細(xì)胞破碎儀(Sonic，美國(guó))，Olympus BX-50普通 生物學(xué)顯微鏡(Olympus，日本)，A20005電子天平(Sartrious，德國(guó))，UV160-A型紫外分光 光度計(jì)(島津，日本)，Microprocessor PH Meter(HANNA PH123)。

1.3 主要試劑 小鼠抗MAP-2C多克隆抗體(Neomarker公司)、兔抗ERK多克隆抗體、小鼠抗pERK單克隆 抗體、兔抗BDNF多克隆抗體、羊抗VGF多克隆抗體(Santa Cruz公司)、辣根酶標(biāo)記山羊抗兔I gG、辣根酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG、辣根酶標(biāo)記兔抗山羊IgG(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司) ，脫脂奶粉、硝酸纖維素膜(北京普利萊基因技術(shù)有限公司)，SuperECL底物化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試 劑(北京蓋寧生物科技有限公司)，預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)(Fermantas SM0671)(北京百匯中源 生物科技有限公司)，醫(yī)用X射線膠片(Kodak公司)，其它化學(xué)試劑均為分析純。

1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.4.1 大鼠慢性應(yīng)激模型的建立 參考文獻(xiàn)方法［7,8］，并盡量使應(yīng)激程序符合不可預(yù)知性的特點(diǎn)，連續(xù)4周每天下 午時(shí) 間采用1～2種給予大鼠如下刺激：禁食24 h、禁水24 h、潮濕飼養(yǎng)(200 mL水加到150 g墊料 )+孤養(yǎng)24 h、鼠籠45°傾斜24 h、夾尾1 min、電擊(0.8 mA，電擊15次/min，共30 min)、 通宵照明12 h、白噪音(110分貝)1 h、10℃冰水游泳6 min、制動(dòng)1～2 h。

動(dòng)物按照體重均衡分為7組，每組8只。各組之間體重沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。各組 具體情況見(jiàn)表1。

1.4.2 藥物干預(yù) Flu組、Flu+LIR組、Flu+MIR組每次應(yīng)激前1 h給予氟西汀(Fluoxetine Hydrochloride， 批號(hào)000530，白色粉末，純度>99%，由常州第四制藥廠惠贈(zèng))，灌胃給藥(10 mg/kg)，給藥 體積2 mL/kg，1次/d。其余組大鼠灌胃給予相應(yīng)體積的生理鹽水。

1.4.3 跑臺(tái)訓(xùn)練每天上午8:30-12:30進(jìn)行跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)。具體訓(xùn) 練負(fù)荷安排見(jiàn)表2。

1.4.4 蛋白免疫印跡分析 大鼠海馬組織總蛋白提取按Western細(xì)胞裂解液說(shuō)明書(shū)操作。考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白濃 度，加入6×上樣緩沖液，沸水浴變性5 min，-70℃凍存?zhèn)溆谩?0 組織總蛋白在10%(測(cè) 定 MAP-2C、VGF)、12%(測(cè)定ERK1/2和pERK1/2)、15%(測(cè)定BDNF)的SDS-聚丙烯酰胺凝膠中電泳 分離。而后將凝膠半干式電轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜(NC膜)。取出NC膜，浸于含5%脫脂奶粉的Tr is緩沖生理鹽水(Tris buffered saline，TBS)中室溫輕搖封閉1 h，用含0.05%的吐溫-20 ℃的TBS(TBS-T)緩沖液漂洗干凈，浸入TBS-稀釋的一抗(兔抗人BDNF抗體1：1 000；山羊抗 人-actin抗體1：2 000；小鼠抗人pERK抗體1：1 000；兔抗人ERK抗體1：1 000)， 4℃孵育 15 h。用TBS-T漂洗NC膜3次，在TBS-T稀釋的HRP標(biāo)記的二抗溶液(山羊抗兔IgG1∶2 000；兔 抗山羊IgG 1：2 000；山羊抗小鼠IgG 1：2 000)中室溫孵浴1 h。NC膜用TBS-T緩沖液 漂洗2次，再用TBS漂洗1次，用ECL檢測(cè)試劑盒顯色，曝光、顯影和定影。

信號(hào)條帶經(jīng)數(shù)碼相機(jī)拍照后，用NIH Image J圖像分析軟件進(jìn)行定量分析。以各組目的 蛋白條帶光密度值對(duì)內(nèi)參蛋白光密度值計(jì)算相對(duì)比值，再以對(duì)照組比值作為100％，其余各 組與之相比再次計(jì)算比值作為該組目的蛋白相對(duì)光密度值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)以“X ±S”表示。統(tǒng)計(jì)分析用Windows SAS 6.12軟件完成。Control 與CUS組之 間的比較，方差齊性的數(shù)據(jù)采用T檢驗(yàn)，方差非齊性的數(shù)據(jù)采用Mann-Whitney Rank SumTest。其余各組之間的分析，進(jìn)行two-way ANOVA檢驗(yàn)。顯著性水平P

2 結(jié) 果

2.1 對(duì)慢性應(yīng)激大鼠海馬ERK蛋白表達(dá)水平的影響 與Control組相比，CUS組海馬ERK表達(dá)沒(méi)有顯著性變化(P>0.05)；Flu、LIR、MIR、Flu +LIR、Flu+MIR干預(yù)均沒(méi)有顯著影響CUS大鼠海馬ERK的表達(dá)(P>0.05)(圖1)。 2.2 對(duì)慢性應(yīng)激大鼠海馬pERK蛋白表達(dá)水平的影響 與Control組相比，CUS組海馬pERK表達(dá)顯著減少(P

2.3 對(duì)慢性應(yīng)激大鼠海馬BDNF蛋白表達(dá)水平的影響 與Control組相比，CUS組海馬BDNF表達(dá)顯著減少(P

圖1 慢性應(yīng)激及氟西汀、運(yùn)動(dòng)伴隨干預(yù)對(duì)大鼠海馬ERK表達(dá)的影響

A：western-blotting 蛋白條帶；B：蛋白表達(dá)水平光密度分析

圖2 慢性應(yīng)激及氟西汀、運(yùn)動(dòng)伴隨干預(yù)對(duì)大鼠海馬pERK表達(dá)的影響

A：western-blotting 蛋白條帶；B：蛋白表達(dá)水平光密度分析2.4 對(duì)慢性應(yīng)激大鼠海馬VGF蛋白表達(dá)水平的影響 與Control組相比，CUS組海馬VGF表達(dá)顯著減少(P

3 討 論

腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素家族 中的主要成員之一，BDNF與其特異性受體結(jié)合后，激活受體內(nèi)在的酪氨酸激酶，繼而啟動(dòng)細(xì) 胞內(nèi)多條信號(hào)通路。MEK-ERK-CREB通路是介導(dǎo)BDNF活性的重要途徑［9］，抑郁癥存 在該信號(hào) 通路的功能失調(diào)，該失調(diào)與BDNF的下調(diào)相關(guān)［10］。上調(diào)BDNF系統(tǒng)揭示了抗抑郁 治療的新機(jī)制，選擇性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的激活成為抗抑郁治療的新靶點(diǎn)［11］。

圖3 慢性應(yīng)激及氟西汀、運(yùn)動(dòng)伴隨干預(yù)對(duì)大鼠海馬BDNF蛋白表達(dá)水平的影響

A：western-blotting 蛋白條帶；B：蛋白表達(dá)水平光密度分析

圖4 慢性應(yīng)激及氟西汀、運(yùn)動(dòng)伴隨干預(yù)對(duì)大鼠海馬VGF蛋白表達(dá)水平的影響

A：western-blotting 蛋白條帶；B：蛋白表達(dá)水平光密度分析

應(yīng)激、抑郁癥下調(diào)海馬BDNF表達(dá)，而抗抑郁劑可以逆轉(zhuǎn)這些變化。慢性應(yīng)激抑郁動(dòng)物模 型其腦內(nèi)BDNF水平下降［12］；將BDNF注入大鼠海馬齒狀回可以在獲得性無(wú)助(learn ed helpl essness)和強(qiáng)迫游泳(forced swimming test)模型上產(chǎn)生抗抑郁樣作用［13］；慢性 應(yīng)激抑郁 模型所出現(xiàn)的海馬神經(jīng)元萎縮和細(xì)胞丟失是由于海馬BDNF表達(dá)下降導(dǎo)致的［14］。抑 郁癥患者 與正常對(duì)照者相比其血清BDNF降低；抗抑郁治療能提高抑郁癥患者血清BDNF水平，改善抑郁 癥患者的抑郁狀態(tài)、降低漢密爾頓抑郁量表得分［15］。細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激 酶(extra cellular signal-regulated protein kinase，ERK)功能及其通路在抑郁癥的發(fā)病和治療過(guò) 程都起著重要作用。抑郁病自殺者額葉皮層和海馬ERK活性明顯下降；束縛應(yīng)激導(dǎo)致大鼠額 葉皮層磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(phosphorylation extracellular signal-regulatedk inase，pERK)顯著減少，抑郁模型大鼠額葉皮層和海馬pERK水平減少［14］。抗抑郁 劑可以增強(qiáng)ERK1/ERK2的活性［8］。

VGF神經(jīng)肽，首先是作為被神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor，NGF)在PC12細(xì)胞中誘 導(dǎo)的基因而引起注意，它具有調(diào)節(jié)能量平衡、參與調(diào)解循環(huán)血葡萄糖水平及機(jī)體胰島素敏感 性等功能［16］。VGF是一種在腦內(nèi)表達(dá)的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，在神經(jīng)元分化和存活中起 著重要作 用，其功能可能與海馬神經(jīng)元的突觸功能調(diào)節(jié)有關(guān)［17］。VGF可能涉及情感性疾病 的發(fā)病機(jī) 制，VGF可能具有抗抑郁作用；慢性給予抗抑郁劑丙咪嗪、電驚厥療法均能夠增加海馬VGF表 達(dá)［18］。VGF可能作為BDNF的下游基因，通過(guò)神經(jīng)可塑性方式，加強(qiáng)海馬區(qū)神經(jīng) 元再生來(lái) 發(fā)揮其抗抑郁作用；VGF基因的下調(diào)參與了抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，而增加腦中VGF表達(dá)水平，則 出現(xiàn)抗抑郁樣效應(yīng)［19,20］。

本研究結(jié)果表明，CUS顯著下調(diào)海馬BDNF表達(dá)，CUS伴隨給予氟西汀，進(jìn)行中、小強(qiáng)度跑 臺(tái)訓(xùn)練，以及氟西汀分別聯(lián)合中、小強(qiáng)度跑臺(tái)訓(xùn)練，均能夠逆轉(zhuǎn)CUS所致的海馬BDNF表達(dá)的 下調(diào)。CUS及氟西汀、運(yùn)動(dòng)伴隨干預(yù)、氟西汀聯(lián)合運(yùn)動(dòng)干預(yù)，對(duì)海馬ERK表達(dá)均沒(méi)有顯著性影 響；而CUS顯著下調(diào)海馬pERK表達(dá)，CUS伴隨給予氟西汀，中、小強(qiáng)度跑臺(tái)訓(xùn)練，氟西汀分別 聯(lián)合中、小強(qiáng)度跑臺(tái)訓(xùn)練，均能夠逆轉(zhuǎn)CUS所致的海馬pERK表達(dá)的下調(diào)。

目前運(yùn)動(dòng)對(duì)BDNF影響的絕大多數(shù)研究采用動(dòng)物自主、隨意的轉(zhuǎn)輪跑方式。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明 ，中、小強(qiáng)度跑臺(tái)訓(xùn)練、自愿轉(zhuǎn)輪跑均能夠上調(diào)正常大鼠海馬BDNF表達(dá)［5］。 轉(zhuǎn)輪跑 也逆轉(zhuǎn)慢性應(yīng)激引起的大鼠海馬BDNF mRNA 表達(dá)的降低［21］。但是，轉(zhuǎn)輪跑這種運(yùn) 動(dòng)方式只 能用距離表達(dá)運(yùn)動(dòng)量，無(wú)法進(jìn)行運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的評(píng)估，這就局限了該方法及其研究結(jié)果的進(jìn)一步 推廣運(yùn)用。運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度是運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練的核心因素，跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)(treadmill exercise)可通過(guò)調(diào)節(jié)速 度改變運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度。于是近年來(lái)，利用動(dòng)物跑臺(tái)研究運(yùn)動(dòng)負(fù)荷與BDNF表達(dá)的研究逐漸開(kāi)展起來(lái) 。研究結(jié)果一致表明，小強(qiáng)度的跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)對(duì)增加大腦BDNF表達(dá)的效果優(yōu)于中等強(qiáng)度和大強(qiáng)度 ［22-24］。BDNF表達(dá)的上調(diào)被認(rèn)為與神經(jīng)可塑性有關(guān)，而神經(jīng)可塑性受損是抑郁癥 的發(fā)病 機(jī)制之一，所以，運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)的BDNF表達(dá)的上調(diào)促進(jìn)了中樞神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)調(diào)節(jié)功能，這可能也是運(yùn) 動(dòng)抗抑郁作用的機(jī)制之一。

本研究結(jié)果還表明，對(duì)pERK、BDNF表達(dá)的上調(diào)，中等強(qiáng)度跑臺(tái)訓(xùn)練優(yōu)于小強(qiáng)度訓(xùn)練，與 文獻(xiàn)［23,24］報(bào)道不一致。有研究表明［22］，跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)對(duì)海馬BDNF mRNA的 表達(dá)與運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度有 關(guān)，小強(qiáng)度的跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)對(duì)BDNF mRNA表達(dá)的促進(jìn)作用最為顯著，而大強(qiáng)度的跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)則對(duì)海 馬BDNF mRNA 的表達(dá)沒(méi)有產(chǎn)生促進(jìn)作用。分析認(rèn)為是由于他們的研究對(duì)象是正常大鼠，訓(xùn)練 周期較短(7 d)等因素有關(guān)。本研究以慢性應(yīng)激抑郁模型為對(duì)象，慢性應(yīng)激伴隨進(jìn)行規(guī)律性 跑臺(tái)訓(xùn)練，隨著實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，大鼠對(duì)運(yùn)動(dòng)逐漸適應(yīng)，運(yùn)動(dòng)能力得以提高，實(shí)驗(yàn)初期的中等強(qiáng) 度負(fù)荷逐漸變?yōu)樾?qiáng)度負(fù)荷。

本研究還顯示，氟西汀聯(lián)合運(yùn)動(dòng)干預(yù)對(duì)于pERK、BDNF的上調(diào)，顯著優(yōu)于氟西汀或運(yùn)動(dòng)的 單一干預(yù)。氟西汀能夠有效地抑制神經(jīng)元從突觸間隙攝取5-HT，增加間隙中可供實(shí)際利用的 5-HT，可有效保護(hù)慢性應(yīng)激所致的ERK-CREB信號(hào)通路的損傷［25］，從而改善情感狀 態(tài)，治療 抑郁性精神障礙。適量運(yùn)動(dòng)也顯著增加腦區(qū)單胺類遞質(zhì)的水平［26,27］。所以，運(yùn) 動(dòng)與氟西 汀的聯(lián)合干預(yù)可能進(jìn)一步提高了腦區(qū)5-HT水平，并同時(shí)增強(qiáng)了NE、5-HT介導(dǎo)的BDNF表達(dá)上調(diào) 的信號(hào)通路，和/或保護(hù)慢性應(yīng)激所致的ERK相關(guān)信號(hào)通路損傷，從而進(jìn)一步增加了BDNF的表 達(dá)、提高了ERK相關(guān)信號(hào)通路的活性，最終表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)與氟西汀的聯(lián)合干預(yù)上調(diào)BDNF的表達(dá) 不僅優(yōu)于單一的運(yùn)動(dòng)療法，也優(yōu)于氟西汀的單獨(dú)治療?？傊?，規(guī)律性的運(yùn)動(dòng)通過(guò)增強(qiáng)pERK表 達(dá)來(lái)上調(diào)BDNF的表達(dá)，運(yùn)動(dòng)進(jìn)一步強(qiáng)化了氟西汀的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用。

盡管研究顯示VGF可能參與抑郁癥的發(fā)病機(jī)制和抗抑郁應(yīng)答反應(yīng)，但目前缺乏慢性應(yīng)激 抑郁模型VGF的變化、長(zhǎng)期給予抗抑郁劑后VGF如何調(diào)節(jié)抗抑郁應(yīng)答，以及VGF抗抑郁應(yīng)答的 信號(hào)通路方面的研究。本研究首次觀察了慢性應(yīng)激對(duì)海馬VGF表達(dá)的影響，以及運(yùn)動(dòng)和氟西 汀干預(yù)對(duì)CUS抑郁模型大鼠海馬VGF表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)慢性應(yīng)激顯著下調(diào)海馬VGF表達(dá)，慢性 應(yīng)激伴隨給予氟西汀，中等強(qiáng)度跑臺(tái)訓(xùn)練，氟西汀分別聯(lián)合中、小強(qiáng)度跑臺(tái)訓(xùn)練，均能夠逆 轉(zhuǎn)慢性應(yīng)激所致的海馬VGF表達(dá)的下調(diào)。

VGF是BDNF的靶基因［19］，而VGF既是MEK-ERK信號(hào)通路的上游調(diào)節(jié)劑，又是MEK-ERK 信號(hào) 通路的下游靶基因［20］。因此本研究的結(jié)果：慢性應(yīng)激下調(diào)VGF、運(yùn)動(dòng)和氟西汀干 預(yù)上調(diào)VGF 的表達(dá)，我們認(rèn)為與pERK-BDNF通路活性下降有關(guān)，而且pERK、BDNF、VGF三者之間存在相互 的影響，即：慢性應(yīng)激下調(diào)了pERK和BDNF的表達(dá)，進(jìn)而導(dǎo)致了VGF表達(dá)的下降，VGF的下調(diào)反 過(guò)來(lái)又影響pERK和BDNF的表達(dá)，形成一個(gè)類似于反饋的調(diào)節(jié)環(huán)路。運(yùn)動(dòng)、氟西汀均能夠上調(diào) pERK-BDNF通路，進(jìn)而增加了VGF的表達(dá)；上調(diào)了的VGF又促進(jìn)pERK-BDNF通路的表達(dá)。

4 結(jié) 論

1)運(yùn)動(dòng)可以上調(diào)慢性應(yīng)激大鼠海馬BDNF及其相關(guān)的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)通路重要信號(hào)分子pERK和VGF 的表達(dá)。這有利于保護(hù)應(yīng)激狀態(tài)下海馬結(jié)構(gòu)和功能的進(jìn)一步被破壞，促進(jìn)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和神經(jīng)可 塑性。

2)運(yùn)動(dòng)能夠增強(qiáng)氟西汀的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用。

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螞蟻與大象范文第5篇

【摘要】 探討柴郁溫膽湯及其拆方對(duì)抑郁大鼠血清ACTH、COR和海馬cAMP的影響。［方法］健康雄性SD大鼠84只，隨機(jī)分為正常組、模型組、柴郁溫膽湯組、化痰組、調(diào)氣血組、養(yǎng)心脾組、馬普替林組。參照Katz刺激方法制備慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激(CUMS)抑郁模型。采用放射免疫法測(cè)血清ACTH、COR和大鼠海馬cAMP含量。［結(jié)果］與正常組相比，模型組大鼠血清ACTH和COR水平明顯升高、海馬cAMP含量明顯降低。同模型組相比，柴郁溫膽湯組及調(diào)氣血組能明顯降低ACTH濃度(P

【關(guān)鍵詞】 柴郁溫膽湯；組分；抑郁癥；HPA軸；ACTH；COR；cAMP

UniversityAbstract:［Objective］ To explore the effects of the traditional Chinese drugs Chaiyuwendantang (CYWDT) and its component on the plasm levels of ACTH， COR and cAMP in hippocampus of depressed mode. ［Methods］ Eighty-four male rats were pided into seven groups: control group， depressed model group， group of CYWDT， group of HuaTan， group of TiaoQiXue， group of YangXinPi， group of maprotiline equally and made up models in chronic unpredictable mild stress (CUMS). The plasm levels of ACTH， COR and the level of cAMP in hippocampus were detected by radioimmunoassay. ［Results］ We found that the plasm levels of ACTH， COR were significantly increase and cAMP in hippocampus was significantly decreasd in depression model of rat. CYWDT and TiaoQiXue could significantly decreased the level of ACTH(P＜0.05); CYWDT， HuaTan and TiaoQiXue could significantly decreased the level of COR(P＜0.01). CYWDT， HuaTan and TiaoQiXue could significantly increase the level of cAMP in hippocampus. ［Conclusion］ Chronic unpredictable mild stress can increase the plasm levels of ACTH， COR and the level of cAMP in hippocampus of depression rats. CYWDT could reverse all the changes. The mechanism maybe relatd to regulate hypothalamicpituitaryadrenal axis and signal transmission in cell.

Key words: Chaiyuwendantang; component;depression; hypothalamicpituitaryadrenal axis; adrenocorticotropic hormone; cortisol; cyclic adenosine monophosphate

抑郁癥(depression)是最常見(jiàn)的心境障礙，嚴(yán)重威脅人類的身心健康。我們?cè)谇捌谘芯恐凶C實(shí)柴郁溫膽湯對(duì)腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)代謝紊亂具有良好的調(diào)節(jié)作用，且可明顯增加大鼠海馬部位PKA表達(dá)［1］。本實(shí)驗(yàn)擬觀察柴郁溫膽湯及其拆方對(duì)抑郁大鼠血清ACTH、COR和海馬cAMP的影響。并與四環(huán)類抗抑郁藥馬普替林相對(duì)照，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

(1) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康SpragueDawley(SD)雄性大鼠84只，體重（180±20）g，由南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(許可證號(hào)：SCXK(蘇)20020031)。所有大鼠均用普通飼料喂養(yǎng)兩周后開(kāi)始造模。(2)實(shí)驗(yàn)藥品:柴郁溫膽湯組（柴胡、郁金、半夏、陳皮、竹茹、枳實(shí)、人參、茯苓、炙甘草）濃度為1.84g生藥量/ml?；到M（半夏、陳皮、竹茹）濃度為0.64g生藥量/ml。調(diào)氣血組（柴胡、郁金、枳實(shí)）濃度為0.6g生藥量/ml。養(yǎng)心脾組（人參、茯苓、炙甘草、大棗）濃度為0.5g生藥量/ml。以上藥物的煎制和濃縮均手工操作，所用煎藥器具為陶瓷制品以保證藥物在煎制過(guò)程中的穩(wěn)定性。濃縮后的藥物中每種單味藥的濃度在整方和拆方中均相同，以保證各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可比性。鹽酸馬普替林(北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H19991047)用去離子雙蒸水配制成1mg/ml藥物混懸液。(3)主要實(shí)驗(yàn)試劑和儀器　促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone ACTH)放射免疫分析試劑盒(北京北方生物技術(shù)研究所)、皮質(zhì)醇(cortisol COR)放射免疫分析試劑盒(北京華英室溫技術(shù)研究所)、環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate cAMP)放射免疫分析試劑盒(上海中醫(yī)藥大學(xué)核醫(yī)學(xué)試驗(yàn)室)。儀器：GC911γ放射免疫計(jì)數(shù)器(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組及給藥

選取Openfield評(píng)分相近的大鼠84只，隨機(jī)分為正常組、模型組、柴郁溫膽湯組、化痰組、調(diào)氣血組、養(yǎng)心脾組、馬普替林組，每組12只。各治療組在應(yīng)激的第2天開(kāi)始均按提取液(濃縮后)1ml/100g灌胃給藥；模型組和正常組給予等量生理鹽水。每天上午8時(shí)給藥1次，持續(xù)至實(shí)驗(yàn)的第23天。

1.2.2 模型制備

正常組每籠飼養(yǎng)6只，正常攝水飲食，不給任何刺激。其余各組，每只均單籠飼養(yǎng)，并接受21天各種不同的應(yīng)激刺激，參照Katz方法［2］，每天隨機(jī)給予一種刺激。使大鼠不能預(yù)料刺激的發(fā)生，以避免產(chǎn)生適應(yīng)。

1.2.3 行為學(xué)測(cè)定

Openfield法測(cè)定行為 所用自制敞箱規(guī)格為高40cm、直徑80cm的內(nèi)空?qǐng)A柱桶，周壁為黑色，地面用黑線劃分為面積相等的25塊。以動(dòng)物四肢完全進(jìn)入一個(gè)分區(qū)作為一個(gè)水平活動(dòng)(crossing)得分、以雙前肢完全抬離地面至放下作為一次垂直活動(dòng)(rearing)得分、以及觀察大鼠的理毛(修飾)次數(shù)和大便顆粒數(shù)。每只動(dòng)物僅進(jìn)行一次測(cè)定，每次觀察3min。

1.2.4 糖水消耗實(shí)驗(yàn)

在實(shí)驗(yàn)第22天所有實(shí)驗(yàn)大鼠均單籠飼養(yǎng)并禁食和禁水，只給1%蔗糖溶液150ml，計(jì)算大鼠24h飲用1%蔗糖溶液量。

1.2.5 大鼠血清ACTH和COR測(cè)定

用10%水合氯醛(0.36ml/100g) 給大鼠腹腔注射，麻醉后開(kāi)腹，腹主動(dòng)脈抽取血液5ml，待測(cè)ACTH和COR。按試劑盒方法要求分離血清，采用125I標(biāo)記放免法測(cè)定。

1.2.6 大鼠海馬cAMP含量測(cè)定

按大鼠腦立體定向圖譜(包新民等編著，人民衛(wèi)生出版社，1991年)定位，冰上分離大鼠一側(cè)海馬，裝于凍存管并立即投入液氮中，待固化后稱重，放入-86℃冰箱保存待測(cè)。檢測(cè)時(shí)海馬置于pH4.75的醋酸緩沖液中勻漿，加入無(wú)水乙醇沉淀蛋白，離心取上清液。采用125I標(biāo)記放免法測(cè)定cAMP含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)兩組間均數(shù)進(jìn)行兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和F檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

各組大鼠行為學(xué)變化，見(jiàn)表1。表1 柴郁溫膽湯及其組分對(duì)大鼠行為學(xué)評(píng)分的影響(略)．與正常組比較 P

3 討論

對(duì)于抑郁大鼠的行為學(xué)觀察多采用經(jīng)典的Openfield法，目前比較肯定的觀察指標(biāo)是大鼠的水平運(yùn)動(dòng)得分和垂直運(yùn)動(dòng)得分。本試驗(yàn)觀察了大鼠的修飾次數(shù)以及大便顆粒數(shù)。其中水平得分代表動(dòng)物的活動(dòng)度；垂直得分代表動(dòng)物對(duì)新鮮事物的好奇程度和對(duì)外界環(huán)境的探究興趣［2］。修飾次數(shù)代表了動(dòng)物對(duì)周圍環(huán)境的要求和自身的關(guān)注程度，大便顆粒數(shù)反應(yīng)了CUMS抑郁模型大鼠是否有便秘的抑郁癥常見(jiàn)并發(fā)癥。結(jié)果顯示復(fù)方柴郁溫膽湯能夠顯著提升抑郁模型大鼠的水平得分、垂直得分、修飾次數(shù)和大便顆粒數(shù)。相對(duì)于馬普替林，更是顯示了少或無(wú)馬普替林的抗膽堿能副作用—便秘。

本實(shí)驗(yàn)研究觀察到模型組大鼠血清ACTH和COR濃度較正常組顯著增高，與上述文獻(xiàn)報(bào)道一致，這也進(jìn)一步證實(shí)模型組大鼠存在HPA軸功能亢進(jìn)。柴郁溫膽湯組和調(diào)氣血組能能夠逆轉(zhuǎn)ACTH的升高；柴郁溫膽湯組、化痰組和調(diào)氣血組能逆轉(zhuǎn)大鼠COR水平的增高；馬普替林組能夠同時(shí)逆轉(zhuǎn)ACTH和COR的升高。說(shuō)明柴郁溫膽湯具有調(diào)節(jié)HPA軸功能紊亂的作用，強(qiáng)度與馬普替林相似，其中起主要作用的是化痰和調(diào)氣血組分。

cAMP是細(xì)胞內(nèi)第二信使，可介導(dǎo)多種細(xì)胞內(nèi)激素、神經(jīng)遞質(zhì)及其他信號(hào)分子的作用。本試驗(yàn)研究表明，模型組大鼠海馬cAMP含量較正常組明顯降低。柴郁溫膽湯組、化痰組、馬普替林組均能夠逆轉(zhuǎn)這種改變，提示柴郁溫膽湯參與了細(xì)胞信號(hào)通路的調(diào)節(jié)，其中起主要作用的是化痰藥，可能為其抗抑郁機(jī)理之一。

參考文獻(xiàn)