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蘇武牧羊范文第1篇

1、翻譯 ；衛(wèi)律知道蘇武終究不可脅迫投降，報(bào)告了單于。單于越發(fā)想要使他投降，就把蘇武囚禁起來(lái)，放在大地窖里面，不給他喝的吃的。天下雪，蘇武臥著嚼雪，同氈毛一起吞下充饑，幾日不死。匈奴人認(rèn)為很神奇，就把蘇武遷移到北海邊沒(méi)有人的地方，讓他放牧公羊，等到公羊生產(chǎn)了小羊才準(zhǔn)許蘇武回國(guó)。

同時(shí)把他的部下及其隨從人員?；莸确謩e安置到別的地方。蘇武遷移到北海后，糧食運(yùn)不到，只能掘取野鼠所儲(chǔ)藏的野生果實(shí)來(lái)吃。他拄著漢廷的符節(jié)牧羊，睡覺(jué)、起來(lái)都拿著，以致系在節(jié)上的牦牛尾毛全部脫盡。

2、原文 ：衛(wèi)律知武終不可脅，白單于。單于愈益欲降之，乃幽武，置大窖中，絕不飲食。天雨雪，武臥齧雪，與氈毛并咽之，數(shù)日不死。匈奴以為神，乃徙武北海上無(wú)人處，使牧羝，羝乳，乃得歸。別其官屬?；莸?，各置他所。

武既至海上，廩食不至，掘野鼠，去草實(shí)而食之。杖漢節(jié)牧羊，臥起操持，節(jié)旄盡落。

（來(lái)源：文章屋網(wǎng) ）

蘇武牧羊范文第2篇

蘇武的故事，在中國(guó)幾乎家喻戶(hù)曉婦孺皆知。主要是他奉命出使匈奴時(shí)，表現(xiàn)了堅(jiān)貞的民族氣節(jié)。

蘇武是西漢時(shí)期東南人。出身在將門(mén)家庭，他為人正直，廉潔奉公，有膽有識(shí)，深受漢武帝的賞識(shí)。公元前100年，單于登上了皇位，他怕漢朝進(jìn)攻，就把以前出使匈奴的人送回，表示要和漢朝長(zhǎng)期和好漢武帝讓蘇武作主使去匈奴傳播漢朝文化藝術(shù)，生產(chǎn)工具和先進(jìn)技術(shù)，促進(jìn)匈奴和西漢的友好關(guān)系?？墒堑搅诵倥珪r(shí)有人造起反來(lái)其中他的部下張勝也參與了此事，所以也牽連了蘇武。單于就把蘇武抓了起來(lái)，匈奴勸蘇武投降，蘇武不肯，說(shuō)完就要自殺，可是沒(méi)成功，被勸阻了下來(lái)?？墒翘K武還是想死所以就在身上藏了一把匕首在有人來(lái)勸他投降的時(shí)把匕首往心臟上一插，血都出來(lái)了這把那人給嚇的趕忙叫醫(yī)生來(lái)給蘇武搶救，搶救了半天才搶救過(guò)來(lái)。單于見(jiàn)蘇武不投降就把蘇武流放到北海放羊，在北海的時(shí)候渴了只好吃雪餓了就吞氈，使節(jié)上的旄都落沒(méi)了還沒(méi)有回到自己的國(guó)家后來(lái)匈奴分成了三個(gè)小國(guó)，力量不集中，匈奴怕漢朝進(jìn)攻所以把蘇武送了回去蘇武回到漢朝時(shí)手里還拿著使節(jié)。

大家都說(shuō)蘇武是一個(gè)愛(ài)國(guó)的人，大家都非常敬敬佩他！

蘇武牧羊范文第3篇

縱觀(guān)近幾年來(lái)的學(xué)業(yè)水平考試試題,我們不難發(fā)現(xiàn)有:生物學(xué)學(xué)業(yè)水平試題的難度不大,但是題目的靈活性與開(kāi)放性在逐步加強(qiáng),特別是注重了與學(xué)生的日常生活及具體實(shí)際,命題者越來(lái)越關(guān)注學(xué)生的生物科學(xué)素養(yǎng)、關(guān)注學(xué)生的創(chuàng)新能力以及利用生物學(xué)知識(shí)解決生活中實(shí)際問(wèn)題的能力。鑒于以上特點(diǎn),我在平日的教學(xué)中主要采取了以下措施:

一、加強(qiáng)學(xué)習(xí)、深挖教材,把落實(shí)目標(biāo)貫穿于生物教學(xué)的全過(guò)程

初中生物學(xué)的課程目標(biāo)涵蓋了生物學(xué)知識(shí)、能力及情感、態(tài)度、價(jià)值觀(guān)等方面的基本要求。這個(gè)目標(biāo)是要通過(guò)每節(jié)課或每項(xiàng)活動(dòng)來(lái)逐步完成的。因此,在制定每節(jié)課的教學(xué)目標(biāo)時(shí),要充分考慮課程目標(biāo)的體現(xiàn)和貫穿。

我們?cè)谥贫ń虒W(xué)目標(biāo)時(shí),先要確定單元的教學(xué)目標(biāo),再具體分解到各章和各個(gè)節(jié)去。圍繞教學(xué)目標(biāo),挖掘教材的潛在價(jià)值,重新設(shè)計(jì)教材中的部分內(nèi)容,引導(dǎo)學(xué)生主動(dòng)參與教學(xué)過(guò)程。

二、優(yōu)化課堂教學(xué),積極進(jìn)行探索性學(xué)習(xí),體現(xiàn)自主創(chuàng)新

現(xiàn)代教育對(duì)教師提出了更高的要求,我們不能再墨守成規(guī),對(duì)于舊的不科學(xué)的教學(xué)思想、教學(xué)方法、教學(xué)模式敢于突破。結(jié)合探究性學(xué)習(xí),我們堅(jiān)持“以人為本,關(guān)注生命”的理念。教學(xué)始終發(fā)揮學(xué)生的主體作用,采取以學(xué)生為中心的教學(xué)思路,設(shè)計(jì)以學(xué)生為中心的教學(xué)活動(dòng),在教學(xué)的每一個(gè)環(huán)節(jié)上都考慮學(xué)生的需求。把課堂真正的交給學(xué)生,培養(yǎng)學(xué)生自主學(xué)習(xí),發(fā)現(xiàn)問(wèn)題,解決問(wèn)題的能力。

體現(xiàn)人人自主,全面合作的原則,“先學(xué)后教”使學(xué)生人人都先自主學(xué)習(xí),以此來(lái)加強(qiáng)學(xué)生之間的合作學(xué)習(xí),交流學(xué)習(xí),交叉學(xué)習(xí)。當(dāng)然,要掌握適度的原則,有效控制課堂,發(fā)揮好教師的主導(dǎo)作用,做到動(dòng)靜結(jié)合,不能為活動(dòng)而活動(dòng),要有張有弛,正確處理好基礎(chǔ)知識(shí)與發(fā)展能力之間的關(guān)系。讓課堂教學(xué)煥發(fā)活力,營(yíng)造真正的“互動(dòng)”課堂。

三、注重實(shí)驗(yàn)教學(xué),培養(yǎng)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)?zāi)芰?/p>

實(shí)驗(yàn)教學(xué)作為生物教學(xué)的組成部分,擔(dān)負(fù)著培養(yǎng)學(xué)生實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Φ闹匾蝿?wù)。不僅要學(xué)生掌握規(guī)范的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程及了解實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,重要的是應(yīng)培養(yǎng)學(xué)生形成實(shí)驗(yàn)意識(shí)。

我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中要特別強(qiáng)調(diào)控制變量,設(shè)計(jì)對(duì)照,量的量測(cè),數(shù)據(jù)的整理、分析及表示方式以及書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告等。我們除了重視各個(gè)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)和探究活動(dòng)外,還專(zhuān)門(mén)設(shè)置了技能訓(xùn)練的欄目,強(qiáng)化了科學(xué)方法和技能的訓(xùn)練。

四、加強(qiáng)理論聯(lián)系實(shí)際,注重學(xué)生的情感發(fā)展

在教學(xué)中注重培養(yǎng)學(xué)生學(xué)習(xí)的自信心,促使學(xué)生全面發(fā)展。使學(xué)生在學(xué)習(xí)過(guò)程中不斷體驗(yàn)進(jìn)步和成功,認(rèn)識(shí)自我,建立自信,尤其重視弱勢(shì)群體,使他們有信心,有成就感,產(chǎn)生繼續(xù)學(xué)習(xí)的動(dòng)力。

蘇武牧羊范文第4篇

【摘要】 目的：探討血紅素氧合酶1在LPS誘導(dǎo)急性炎癥中的表達(dá)及臭苜蓿根提取物的干預(yù)作用。方法：通過(guò)脂多糖(LPS)干預(yù)RAW264.7 細(xì)胞系建立炎癥細(xì)胞模型。實(shí)時(shí)熒光定量RTPCR法檢測(cè)血紅素氧合酶1(HO1)的基因表達(dá)差異，Western blot法測(cè)定HO1的蛋白表達(dá)量。結(jié)果：臭苜蓿根提取物明顯升高巨噬細(xì)胞HO1的mRNA表達(dá)水平，Western blot結(jié)果顯示，臭苜蓿根提取物干預(yù)后HO1的蛋白表達(dá)水平也明顯升高。結(jié)論：臭苜蓿根提取物能提高巨噬細(xì)胞HO1基因的表達(dá)，促進(jìn)HO1的釋放而發(fā)揮一定的抗炎作用。

【關(guān)鍵詞】 臭苜蓿根提取物;炎癥;巨噬細(xì)胞;血紅素氧合酶1

[ABSTRACT] Objective: To study the express of HO1 on acute inflammation induced by LPS and the antiinflammatory effect of the melilotus suaveolens extract. Methods: Inflammatory cell model was constructed by LPS acting RAW264.7 cell line. The expression of mRNA and protein of Hemeoxygenase 1(HO1) were detected by realtime PCR and Western blot method. Results: The expression of HO1 mRNA in macrophage cell was significantly enhanced by the melilotus suaveolens extract. The result of Western blot showed that the expression of HO1 protein was significantly increased after the intervention of melilotus suaveolens extract. Conclusion: The melilotus suaveolens extract can resist inflammation by enhancing the expression of HO1.

[KEY WORDS] Melilotus suaveolens extracts; Inflammation; Macrophage cell; HO1

HO1(hemeoxygenase1)是膽紅素形成過(guò)程中的限速酶之一，亦稱(chēng)熱應(yīng)激蛋白32(HSP32)，為可誘導(dǎo)型HO，分子量為32 kD，主要分布于單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的微粒體中，在腦、脊髓、心、肝、脾、肺、胰、腸、皮膚、血管平滑肌以及內(nèi)皮細(xì)胞中均有表達(dá)，在脾臟中活性最高[1]。HO1可在缺氧、缺血等多種應(yīng)激狀態(tài)下表達(dá)[2]。臭苜蓿根，豆科(Leguminosae)草木犀屬(Melilotus suaveolens) 1年生或2年生草本植物，是臨床用于抗炎的一種中草藥。臭苜蓿根產(chǎn)生抗炎作用的分子生物學(xué)機(jī)制還不明確。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)LPS刺激RAW 264.7小鼠巨噬細(xì)胞系建立炎癥細(xì)胞模型[3]，采用實(shí)時(shí)熒光定量RTPCR法﹑Western blot法觀(guān)察HO1在巨噬細(xì)胞中的表達(dá)以及臭苜蓿根提取物在炎癥中的作用。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

RPMI1640、Trizol 購(gòu)自Gibico公司;LPS(Escherichia coli O111:B4)和MTT購(gòu)自Sigma公司;HO1羊抗鼠多克隆抗體購(gòu)自R&D Systems公司;MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶、dNTP購(gòu)自Promega公司;SYBR Green 購(gòu)自Biotium公司;Oligo(dT18)及引物由Invitrogen公司合成。小鼠巨噬細(xì)胞系RAW 264.7 為同濟(jì)醫(yī)學(xué)院凍存。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 臭苜蓿根提取物的制備 取50 g風(fēng)干的臭苜蓿根磨成粉末，用700 mL/L乙醇于85 ℃提取3次(1次500 mL，每次 1.5 h)，真空過(guò)濾濃縮提取液，用去離子水稀釋至1 g/mL(藥材：水)濃度。取5 mL濃縮液至100 mL的分液漏斗中，連續(xù)石油醚提取直至其干重達(dá)0.425 g。用RPMI1640培養(yǎng)基將其稀釋成3種濃度10 mg/L、5 mg/L和1 mg/L備用。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng) 小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7使用RPMI1640培養(yǎng)液(加入100 U/mL青霉素，100 mg/L鏈霉素和100 ml/L胎牛血清)，50 mL/LCO2培養(yǎng)箱中37 ℃培養(yǎng)。

1.2.3 細(xì)胞模型的建立和干涉 LPS處理前24 h將細(xì)胞接種于6、24或96孔板上，24 h后細(xì)胞貼壁后棄上清，加入含LPS10 g/L的培養(yǎng)液和不同濃度的提取物，作用不同時(shí)間后收集細(xì)胞，分別使用實(shí)時(shí)熒光定量RTPCR法、Western blot法檢測(cè)。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)分組 實(shí)驗(yàn)共分4組。(1)陽(yáng)性對(duì)照組：地塞米松(DM) 0.5 g/L作陽(yáng)性對(duì)照;(2)陰性對(duì)照組：黃芪多糖(APS)100 mg/L作為陰性對(duì)照;(3)空白對(duì)照組：只用10 g/L的LPS處理而不加藥物干預(yù);(4)正常對(duì)照組：不用LPS處理也不加藥物干預(yù)。

1.2.5 藥物細(xì)胞毒性的檢測(cè) MTT法，在終止細(xì)胞培養(yǎng)前4 h加入20 L MTT溶液(濃度5 g/L，pH7.4)，終止細(xì)胞培養(yǎng)后每孔加入150 μL DMSO， Spectramax 250全自動(dòng)定量繪圖酶標(biāo)儀測(cè)定A490值。細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect，CPE)檢測(cè)，細(xì)胞在提取液中培養(yǎng)24 h后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)以檢測(cè)細(xì)胞病變。

1.2.6 血紅素加氧酶1(HO1)mRNA水平的檢測(cè) 實(shí)時(shí)熒光定量RTPCR法檢測(cè)HO1的基因表達(dá)。細(xì)胞干預(yù)18 h后提取RNA檢測(cè)HO1的基因表達(dá)量。細(xì)胞總RNA提取采用TRIzol試劑提取法，具體方法參照說(shuō)明書(shū)。將總RNA保存在-80 ℃?zhèn)溆?。RTPCR在ABI Prime 7700 Sequence Detection System進(jìn)行。引物序列：MusHO1:Forward: 5'CACAGATGGCGTCACTTCGTC3'， Reverse: 5'GTGAGGACCCACTGGAGGAG3'， Musβactin: Forward: 5' GCTACAGCTTCACCACCACAG 3'， Reverse: 5' GGTCTTTACGGATGTCAACGTC 3'。RNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA， RT及PCR反應(yīng)體系按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行(常規(guī)PCR以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，實(shí)時(shí)熒光定量RTPCR以常規(guī)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋后為模板)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用ABI Prime 7700 Sequence Detection System自帶軟件對(duì)數(shù)據(jù)自動(dòng)分析后， 用所給Ct值應(yīng)用公式Folds = 2ΔΔCt 進(jìn)行基因表達(dá)差異分析[4]。

1.2.7 HO1蛋白水平的檢測(cè) Western blot法檢測(cè)細(xì)胞中藥物干預(yù)前、后HO1的蛋白表達(dá)量的變化。細(xì)胞干預(yù)24 h后，冷PBS洗滌，加入細(xì)胞裂解液，冰上孵育15 min，使用細(xì)胞刮刮下并收集裂解液，10 000 rpm 4 ℃離心10 min，取上清保存于-20 ℃冰箱。用BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度， 取相同量蛋白質(zhì)用于100 g/L SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳;轉(zhuǎn)移至硝基纖維素膜，50 g/L脫脂奶粉溶液37 ℃封閉1 h;加入羊抗鼠HO1多克隆抗體(1∶200)，4 ℃孵育過(guò)夜，洗膜;應(yīng)用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗(1∶200)室溫孵育1 h，再加入化學(xué)發(fā)光顯色劑顯色， X光片曝光顯影， 凝膠成像分析系統(tǒng)掃描，pro3.0軟件半定量分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件包，采取單因素方差分析對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，以P

2 結(jié)果

2.1 藥物對(duì)細(xì)胞的毒性

MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，3種濃度(10 mg/L、5 mg/L和1 mg/L)藥物干預(yù)細(xì)胞24 h后對(duì)細(xì)胞活性沒(méi)有明顯影響。CPE結(jié)果亦如此(圖1、2)。

2.2 藥物干預(yù)前、后HO1的mRNA水平

藥物提取物干預(yù)后HO1水平明顯升高，并且藥物濃度越高，HO1水平越高，呈現(xiàn)一個(gè)劑量依賴(lài)型關(guān)系(圖3)。

2.3 藥物干預(yù)前、后HO1的蛋白水平

Western blot結(jié)果顯示，藥物干預(yù)后HO1的蛋白水平明顯升高(圖4)，之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

3 討論

巨噬細(xì)胞在炎癥的啟動(dòng)過(guò)程中起著非常關(guān)鍵的作用，它通過(guò)激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，釋放細(xì)胞因子、有生物活性的脂類(lèi)介質(zhì)及活性氧等一系列炎癥介質(zhì)參與炎癥反應(yīng)[5]。根據(jù)其對(duì)炎癥反應(yīng)的促進(jìn)或抑制效應(yīng)的不同，這些炎癥介質(zhì)大致上可分為兩類(lèi)：促炎介質(zhì)和抗炎介質(zhì)，兩者的比例關(guān)系及動(dòng)態(tài)變化是決定炎癥轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵因素[6]。當(dāng)細(xì)胞面臨有毒性的化學(xué)物質(zhì)或病原體侵襲的時(shí)候，機(jī)體的免疫系統(tǒng)會(huì)釋放出HO1。炎癥反應(yīng)過(guò)程中，在炎癥介質(zhì)產(chǎn)生的同時(shí)抗炎因子HO1也被分泌和活化， HO1的過(guò)表達(dá)可直接或間接地抑制炎癥連鎖反應(yīng)。HO1是催化血紅素降解的限速酶，從而生成膽綠素、游離鐵和CO。研究表明，它們不僅能清除機(jī)體的活性氧，還能抑制多種促炎介質(zhì)的產(chǎn)生，促進(jìn)多種抗炎介質(zhì)的表達(dá)，并且拮抗一些炎癥介質(zhì)的細(xì)胞毒效應(yīng)[7，8]。

臭苜蓿根提取物能通過(guò)抑制促炎介質(zhì)和細(xì)胞因子TNFα、IL1、IL6、NO的產(chǎn)生發(fā)揮抗炎作用。同時(shí)，臭苜蓿根提取物也對(duì)抗炎介質(zhì)產(chǎn)生一定的影響。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，臭苜蓿根提取物能促進(jìn)HO1的表達(dá)和釋放，且該作用呈劑量依賴(lài)性。以上結(jié)果表明，臭苜蓿根提取物能通過(guò)促進(jìn)HO1的基因表達(dá)和釋放從而發(fā)揮抗炎作用。本實(shí)驗(yàn)選用地塞米松和黃芪多糖分別作為陽(yáng)性和陰性對(duì)照。地塞米松是傳統(tǒng)的抗炎藥物;黃芪多糖是臨床上用于增強(qiáng)免疫的免疫調(diào)節(jié)劑，能夠增強(qiáng)促炎因子的釋放[9]。

本研究從分子水平探討了臭苜蓿根提取物的體外抗炎活性及其可能的分子機(jī)制。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，臭苜蓿根提取物能抑制促炎癥介質(zhì)的表達(dá)，并促進(jìn)抗炎介質(zhì)的表達(dá)，從而產(chǎn)生廣泛的抗炎作用。

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蘇武牧羊范文第5篇

關(guān)鍵詞：合成（化學(xué)的）；苯并呋喃類(lèi)；苯并二氧六環(huán)類(lèi)；新木脂素；生物活性

中圖分類(lèi)號(hào)：O626.11 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

苯并呋喃和苯并二氫呋喃新木脂素類(lèi)是存在于丹參、百部、龍血巴豆、西洋參、野花椒、水飛薊、牛蒡子等藥用植物中的天然有機(jī)化合物，它們具有良好的生物活性，如抗病毒、抗腫瘤、抗菌、抗氧化、免疫抑制劑、抗血小板聚集活性和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用等＼[1-5＼]. 例如：從南美洲大戟科龍血巴豆樹(shù)莖中分離出來(lái)的苯并呋喃新木脂素3′，4diOmethylcedrusin具有良好的抗腫瘤活性＼[6＼]. 從羊角草中分離得到的苯并二氧六環(huán)新木脂素cleomiscosinde A也具有顯著的抗腫瘤活性＼[7＼]. 從美洲商陸Phytolacca americana L種子中分離得到的苯并二氧六環(huán)新木脂素isoamericanol A，具有營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)的活性，可提高胎鼠大腦半球膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶的活性，改善神經(jīng)條的形態(tài)＼[8＼].

為了研究這類(lèi)化合物的生理活性和構(gòu)效關(guān)系，以及新藥開(kāi)發(fā)的需要，我們探索了簡(jiǎn)便高效的合成苯并呋喃類(lèi)和苯并二氧六環(huán)類(lèi)新木脂素的方法，并進(jìn)一步研究這些化合物的生理活性. 以3，4二羥基苯丙烯酸（咖啡酸）為原料，以仿生氧化偶聯(lián)和DDQ脫氫反應(yīng)為關(guān)鍵步驟，合成了一系列苯并呋喃新木脂素類(lèi)化合物1，3～7和苯并二氧六環(huán)新木脂素類(lèi)化合物2，8～10. 其中5～7，9和10是未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道的新化合物，8為天然產(chǎn)物美洲商陸醇A合成路線(xiàn)如圖1所示.

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑

核磁共振儀：BrukerAV400，400 MHz（各種氘代溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo)）；質(zhì)譜（ESI）用VG Autospec3000，SHIMADZ qp500；紅外光譜用Bruker Tensor27（KBr壓片法）；熔點(diǎn)用XRC1型顯微熔點(diǎn)儀測(cè)定（溫度未校正）. 所用試劑如無(wú)特殊說(shuō)明均為市售化學(xué)純或者分析純；柱層析用硅膠300～400目（青島海洋化工廠(chǎng)產(chǎn)品）. 3，4二羥基苯基丙烯酸甲酯按文獻(xiàn)＼[9＼]

在100 mL的三頸圓底燒瓶中加入化合物32.5 g（12.88 mmol）和新制氧化銀粉末1.99 g（8.59 mmol），再加入無(wú)水丙酮20 mL，無(wú)水甲苯40 mL. 在N2保護(hù)下室溫避光攪拌，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)終點(diǎn). 約48 h后停止反應(yīng)，過(guò)濾，用丙酮洗滌，減壓旋除溶劑，得紅褐色黏稠物. 干法上樣，硅膠柱層析分離＼[洗脫劑：V（石油醚）/V（乙酸乙酯）= 4∶1～3∶1＼]，分別得2 0.9 g 和1 0.96 g，產(chǎn)率分別為36%和39%.

化合物1：黃色黏稠物. 1H NMR （400 MHz， CDCl3） δ（ppm）： 7.56 （1H， d， J=16.0 Hz， 8-H）， 7.04 （1H， s， 4-H）， 6.99 （1H， s， 6-H）， 6.84 （1H， d， J=2.0 Hz， 2

SymbolbB@ -H）， 6.79 （1H， d， J=8.0 Hz， 5′-H）， 6.76 （1H， dd， J=8.0， 2.0 Hz 6′-H）， 6.26 （1H， d， J=16.0 Hz， 9-H）， 6.01 （1H， d， J=7.6 Hz， 2-H）， 4.26 （1H， d， J=7.6 Hz， 3-H）， 3.80 （3H， s， 10-OCH3）， 3.78 （3H， s， 11-OCH

在100 mL的單口燒瓶中加入化合物1 238 mg（0.617 mmol），加入無(wú)水吡啶10 mL將其溶解.室溫?cái)嚢?0 min后，加入乙酸酐5 mL，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)，直至原料點(diǎn)消失. 約3 h后停止反應(yīng)，將反應(yīng)液傾入裝有30 mL冰水的燒杯中攪拌20 min，出現(xiàn)白色渾濁，用乙酸乙酯（3×20 mL）萃取，合并有機(jī)相依次用5%稀鹽酸、飽和食鹽水洗滌，最后用無(wú)水硫酸鎂粉末干燥. 蒸除溶劑得黃色固狀物，用甲醇重結(jié)晶后得白色膨松固體285 mg，產(chǎn)率90%. m.p. 127-128

在100 mL三頸燒瓶?jī)?nèi)加入化合物3 500 mg（0.976 mmol），DDQ（2，3二氯5，6二氰基1，4苯醌 ）2 g（9.76 mmol），在N2氛圍下加入無(wú)水1，4二氧六環(huán)30 mL，繼續(xù)通入N2 5 min，換無(wú)水氯化鈣干燥管.加熱回流，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)，直至原料點(diǎn)基本消失.48 h后停止反應(yīng)，將反應(yīng)液冷卻，過(guò)濾，濾液中倒入溶有NaHSO3 3.05 g（29.33 mmol）的水溶液100 mL，CH2Cl2 200 mL，充分?jǐn)嚢韬蠓忠?水層用二氯甲烷萃?。?×20 mL），有機(jī)相合并用飽和食鹽水洗滌，無(wú)水Na2SO4干燥.硅膠柱層析分離＼[洗脫劑：V（石油醚）/V（乙酸乙酯）=3∶1＼]，得白色固體3 15 mg，產(chǎn)率63%. m.p. 157-158 oC； 1H NMR （400 MHz， DMSO-d6）

3二氫1，4苯并二氧六環(huán)（10）的合成

在100 mL的單口瓶中加入四氫鋁鋰147 mg（3.86 mmol），加入無(wú)水乙醚10 mL于-20 o1.10生物活性測(cè)試

實(shí)驗(yàn)方法：1）接種細(xì)胞：用含10%胎牛血清的培養(yǎng)液（DMEM或者RMPI1640）配成單個(gè)細(xì)胞懸液，以每孔5 000～10 000個(gè)細(xì)胞接種到96孔板，每孔體積100 μL，貼壁細(xì)胞需提前12 h接種培養(yǎng).

2）加入待測(cè)化合物溶液（固定濃度40 μM初篩，于該濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制在50%附近的化合物設(shè)5個(gè)濃度進(jìn)入梯度復(fù)篩），每孔終體積200 μL，每種處理均設(shè)3個(gè)復(fù)孔.

3）顯色：37 oC培養(yǎng)48 h后，每孔加MTT溶液20 μL.繼續(xù)孵育4 h，終止培養(yǎng)，吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，每孔加200 μL的SDS溶液（10%），過(guò)夜孵育（溫度37 oC），使結(jié)晶物充分融解.

4）比色：選擇595 nm的波長(zhǎng)，酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀（BioRad 680）讀取各孔光吸收值，記錄測(cè)定結(jié)果，以濃度為橫坐標(biāo)，細(xì)胞存活率為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)，應(yīng)用兩點(diǎn)法（Reed and Muench法）計(jì)算化合物的IC50值.

2結(jié)果與討論

3，4羥基苯基丙烯酸甲酯在氧化銀催化下，以無(wú)水甲苯和無(wú)水丙酮作為溶劑，得到苯并二氫呋喃環(huán)結(jié)構(gòu)化合物1和苯并二氧六環(huán)類(lèi)化合物2.該步反應(yīng)與天然苯并二氫呋喃和苯并二氧六環(huán)類(lèi)的生物合成途徑類(lèi)似＼[11＼]，屬自由基仿生氧化偶聯(lián)反應(yīng)， 其反應(yīng)機(jī)理如圖2所示.Ag2O催化仿生氧化偶聯(lián)法同時(shí)合成了兩種新木脂素化合物，1和2的產(chǎn)量接近1∶1.該反應(yīng)條件溫和，后處理簡(jiǎn)單，以1/1.5倍當(dāng)量新制氧化銀粉末作催化劑最宜.經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用未重蒸的甲苯和丙酮溶劑對(duì)產(chǎn)率并無(wú)太大影響，因此簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)條件. 此外還發(fā)現(xiàn)，反應(yīng)時(shí)間約40 h可達(dá)到較好收率，反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)對(duì)產(chǎn)率提高不大且有可能增加其它副產(chǎn)物的生成.

化合物1用乙酸酐來(lái)保護(hù)酚羥基和DDQ脫氫反應(yīng)，得到苯并呋喃類(lèi)化合物4，化合物4的成功合成實(shí)現(xiàn)了苯并二氫呋喃向苯并呋喃環(huán)結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)變，這為苯并呋喃新木脂素化合物的合成提供了一種有效的方法. 在對(duì)酚羥基進(jìn)行乙?；Ｗo(hù)的薄層色譜監(jiān)測(cè)過(guò)程中，用稀鹽酸先將反應(yīng)液進(jìn)行酸化，再點(diǎn)板，目的是消除溶劑吡啶在點(diǎn)板觀(guān)察時(shí)的影響，此步反應(yīng)可提高下一步氧化時(shí)的產(chǎn)率. 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，3.5倍當(dāng)量的DDQ（2，3二氯-5，6二氰基1，4苯醌）可將原料全部脫氫氧化，后處理時(shí)以往采用的是硅膠柱過(guò)濾再經(jīng)硅膠柱層析分離，雖然能達(dá)到盡可能除去DDQ的效果，但此過(guò)程需要使用大量的CH2Cl2且操作麻煩. 因此，先用V丙酮/V甲醇=2∶1進(jìn)行重結(jié)晶，再經(jīng)硅膠柱層析分離得到純品.

化合物4在經(jīng)催化氫化得5，5在氫化鋁鋰作用和無(wú)水無(wú)氧操作條件下，室溫進(jìn)行還原反應(yīng)得到含有二個(gè)醇羥基的苯并呋喃新木脂素6，同時(shí)還生成了部分還原的產(chǎn)物7. 在用氫化鋁鋰還原時(shí)，一定要采用重蒸THF作溶劑，將溶有原料的THF溶液在-20 oC的低溫條件下緩慢滴加至氫化鋁鋰的THF溶液中，后處理用水猝滅反應(yīng)時(shí)有大量氫氣放出，所以加水過(guò)程一定要緩慢. 化合物2在氫化鋁鋰作用和無(wú)水無(wú)氧操作條件下，室溫進(jìn)行還原反應(yīng)則得到生物活性苯并二氧六環(huán)類(lèi)天然產(chǎn)物isoamericanol A 化合物2經(jīng)催化氫化和氫化鋁鋰還原分別得到未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道的苯并二氧六環(huán)類(lèi)化合物9和10.

對(duì)所合成的苯并呋喃新木脂素類(lèi)化合物1，3～5使用MTT法進(jìn)行生物活性的測(cè)試. 半數(shù)生長(zhǎng)抑制濃度IC50值表明，化合物1，3，4對(duì)白血病細(xì)胞（HL60）、肺癌細(xì)胞（A549）、乳腺癌細(xì)胞（MCF7）、結(jié)腸癌細(xì)胞（SW480）、肝癌細(xì)胞（SMMC7721）有明顯的體外腫瘤生長(zhǎng)抑制活性；化合物5對(duì)白血病細(xì)胞（HL60）、肺癌細(xì)胞（A549）、乳腺癌細(xì)胞（MCF7）、肝癌細(xì)胞（SMMC7721）有明顯的體外腫瘤生長(zhǎng)抑制活性，其中部分抗腫瘤細(xì)胞活性?xún)?yōu)于對(duì)照藥物順鉑（MW300）（如表1）.

從1，3，4，5化合物的生物活性變化來(lái)看，羥基乙?；慕Y(jié)構(gòu)修飾明顯提高了化合物對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞（SW480）的抑制作用；由苯并二氫呋喃變?yōu)楸讲⑦秽慕Y(jié)構(gòu)變化提高了化合物對(duì)白血病細(xì)胞（HL60）和結(jié)腸癌細(xì)胞（SW480）的生長(zhǎng)抑制活性；8位、9位的乙烯基還原為乙基的結(jié)構(gòu)變化使得化合物5對(duì)肺癌細(xì)胞（A549）、乳腺癌細(xì)胞（MCF7）、結(jié)腸癌細(xì)胞（SW480）和肝癌細(xì)胞（SMMC7721）的生長(zhǎng)抑制活性降低，但其對(duì)白血病細(xì)胞（HL60）的抑制活性?xún)?yōu)于化合物3.

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