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摘要：采用HPLC法對來自美國、日本、四川和廣東等地共27份紫蘇屬材料葉片氨基酸組成及含量進行測定。結果表明，該屬植物葉片中含有17種氨基酸，各氨基酸含量在材料間有較大變異，脯氨酸的變異系數(shù)高達59.19%。來自四川的P06-7其必需氨基酸含量達19.55mg/g，氨基酸總量為57.65mg/g，綜合表現(xiàn)優(yōu)良。試驗結果還表明，野生紫蘇的藥效氨基酸和香甜味氨基酸含量均相對較高，是紫蘇屬植物中氨基酸含量豐富的資源。

關鍵詞：紫蘇；氨基酸；HPLC法

1材料和方法

1.1供試材料

試驗共27份紫蘇屬植物材料，均由四川農業(yè)大學植物教研室楊光輝老師鑒定。本文將紫蘇和白蘇分開研究。其中紫蘇種有7份材料：P06-4來自重慶南川，P06-11紫來自四川雅安，P06-16、P06-17紫來自四川蘆山，P06-18來自四川崇州，P07-1來自四川遂寧，P06-31來自日本；野生紫蘇種有材料6份：P06-6來自四川都江堰，P06-7、P06-9、P06-10來自四川雅安，P06-12紫來自四川資中，P06-15紫來自四川簡陽；回回蘇變種有材料5份：P06-1回來自廣東中山，P06-13來自四川內江，P06-20A、P06-20B、P06-20C來自四川成都；白蘇種有材料有9份：P06-11白來自四川雅安，P06-15白來自四川簡陽，P06-17白來自四川蘆山，P06-30、P06-36來自美國，P06-32來自泰國，P06-33來自韓國，P06-37來自日本，P07-2來自四川廣元。

1.2儀器與試劑

Agilent公司1100型高效液相色譜儀（含脫氣機、四元梯度泵、自動進樣器進樣、柱溫箱、DAD檢測器），Sartorius公司BP211D型電子天平，ICE公司Micromax型離心機，Millipope公司MilliQ型純水儀，Labarey公司微量移液器Autoseienee公司溶劑過濾器，上海精科雷磁公司PHS一2C型酸度計。乙腈、甲醇、四氫呋喃均為色譜純，由TEDIA公司提供，內標物SAR和17種氨基酸混合標樣（含AspGluSerHisGlyThrAlaArgCys-SS-CysTyr、Val、Met、Phe、Ile、Leu、Lys、Pro）以及衍生劑OPA和FMOC均由Agilent公司提供，其余試劑為分析純。

1.3方法

1.3.1供試樣品的制備

采取3個月生植株上的完整健全葉片，在80℃干燥箱中烘干，粉碎，準確稱取0.5g于10mL安瓿瓶中，加入6mol/L的HCl7mL，充入高純N2，將安瓿瓶封口，置于105℃恒溫干燥箱中消化過夜。冷卻后過濾，濾液濃縮近干，加5mL0.1mol/L的HCl溶解，取1.5ml至1.5ml離心管中，10000轉/min離心10min，取上清液900ul加入100ul5nmol/ul內標物SAR，混勻后作為供試樣品。

1.3.2標準溶液的制備

5nmol/L內標液制備：精密稱取SAR22.3mg以0.1mol/LHC1定容至50mL。

500pmol/L內標液制備：精密吸取5nmol/L內標液5mL以0.1mol/LHC1定容至50mL。

900pmol/L氨基酸混合標液制備：精密吸取900ul1000pmol/L氨基酸混合標液加入5nmol/L內標液100ul；

225pmol/L氨基酸混合標液制備：精密吸取900ul250pmol/L氨基酸混合標液加入5nmol/L內標液100ul；

90pmol/L氨基酸混合標液制備：精密吸取900ul100pmol/L氨基酸混合標液加入5nmol/L內標液100ul。

1.3.3色譜條件

樣品自動柱前衍生化程序：吸取硼酸緩沖液5ul，再吸取OPA試劑1ul，洗針1次，吸取樣品1ul，原位混合6次。吸取FMOC試劑1ul，洗針1次，原位混合3次，進樣。

色譜柱：HypersilAA-ODSC182．1×200mm

流動相A：醋酸鈉1.36±0.025g，加入純水500mL溶解，加EDTA溶液50ul，再加三乙胺90ul，用1％-2％醋酸調pH=7.20±0.05，再加入四氫呋喃1.5mL，混合均勻。

流動相B：醋酸鈉1.36±0.025g，加入純水100mL溶解，用1％一2％醋酸調pH=7.20±0.05，將此溶液加至乙腈200mL和甲醇200mL的混合物中，并混合均勻。

柱溫：40℃紫外檢測波長：338nm；

梯度洗脫：流動相A：以0.45ml/min在0-17min由100%減至40%，17min-18min由40%減少至0；流動相B：以0.45ml/min在0-17min由0增至60%，17min-18min由60%增至100%，18.1min-23.9min流速由0.45ml/min-0.80ml/min，運行至24min結束。

1.3.4測定方法和數(shù)據(jù)處理

分別精密量取對照品溶液和供試樣品各1ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至脯氨酸峰出峰后即得。以3種濃度的標樣制作校正表，按Agilent公司提供的氨基酸分析軟件包進行數(shù)據(jù)處理。

2結果與分析

2.1紫蘇屬植物葉片中氨基酸組成及含量比較

27份材料葉片中均測得17種氨基酸，其氨基酸種類較齊全。所測氨基酸中以甘氨酸平均含量最高，達6.68mg/g，其次是亮氨酸和谷氨酸，分別為4.77mg/g和4.59mg/g。與人體健康關系最為密切的賴氨酸平均含量有1.87mg/g。7種必需氨基酸總量平均為14.58mg/g，占氨基酸總量的比例為32.43%。

氨基酸總量超過50mg/g的材料共有6份（P06-11紫、P06-6、P06-7、P06-12紫、P06-15紫、P06-13），其中材料P06-7氨基酸總量最高，達57.65mg/g，較總含量最低的材料P06-33多23.07mg/g。17種氨基酸中有9種氨基酸（天冬氨酸、谷氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸）含量均以P06-7最高，而有6種氨基酸（絲氨酸、甘氨酸、酪氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸）含量的最低值出現(xiàn)在P06-33中。必需氨基酸含量變化范圍在11.10-19.55mg/g之間，仍以P06-7為最高。非必需氨基酸含量的變化趨勢與氨基酸總量的變化趨勢大致相同。

食物中必需氨基酸含量以及所占的比例是決定植物營養(yǎng)及食用價值的重要因素。從表3中可以看出，供試材料的必需氨基酸含量占總氨基酸含量的比例在0.30-0.35之間，必需氨基酸與非必需氨基酸的比例在0.42-0.53之間，基本接近與WHO/提出的E/E+N40%，E/N0.6的參考蛋白模式。

各氨基酸在材料間的變異較大。變異系數(shù)最大的是脯氨酸，達59.19%，其次是組氨酸和賴氨酸，分別為29.91%和25.63%。異亮氨酸的變異系數(shù)最小，為11.34%，其它氨基酸的變異系數(shù)均在10%-20%之間。氨基酸總量、必需氨基酸和非必需氨基酸含量的變異系數(shù)在10%-15%之間。2.2紫蘇屬植物葉片氨基酸組成及含量比較

比較紫蘇屬植物不同原（變）種葉片中氨基酸組成及含量發(fā)現(xiàn)，同一氨基酸在各原（變）種間含量不同。17種氨基酸中有12種氨基酸（丙氨酸、絲氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、賴氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸）含量的最高值出現(xiàn)在野生紫蘇中，酪氨酸、脯氨酸、精氨酸、蛋氨酸含量的最高值出現(xiàn)在回回蘇中，組氨酸含量的最高值出現(xiàn)在紫蘇中。而有13種氨基酸（脯氨酸、絲氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、組氨酸、賴氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸、蘇氨酸）含量的最低值出現(xiàn)在白蘇中。

參照王陸黎等文中的氨基酸分析方法，將氨基酸分為半必需氨基酸、必需氨基酸、藥效氨基酸、香甜味氨基酸等幾大類。通過對紫蘇屬不同原（變）種中必需氨基酸、藥效氨基酸、香甜味氨基酸、半必需氨基酸的含量和氨基酸總量比較分析發(fā)現(xiàn)，除半必需氨基酸外，含量由高到低的順序都是野生紫蘇＞回回蘇＞紫蘇＞白蘇。而半必需氨基酸含量的順序是回回蘇＞野生紫蘇＞紫蘇＞白蘇。野生紫蘇中，氨基酸總量達50.23%，必需氨基酸、藥效氨基酸和香甜味氨基酸的含量分別為16.48%、33.24%和45.21%。由此可以看出，野生紫蘇是紫蘇屬植物中氨基酸含量豐富的資源。

3討論

張洪等研究成熟紫蘇葉片中氨基酸含量結果表明，其葉中氨基酸（除色氨酸）含量范圍為0.11%-1.07%，氨基酸總量達7.08%。劉月秀等對3個月生的完整健全紫蘇葉片中氨基酸含量的研究結果表明，其葉片中氨基酸（除色氨酸）含量范圍在0.112%-1.071%之間，氨基酸總量為7.372%。兩者的研究結果基本一致。本實驗對3個月生的紫蘇屬植物葉片中氨基酸含量的研究結果表明，其葉片中氨基酸（除色氨酸因水解被破壞未另作測定）平均含量在1.03-6.68mg/g（即0.103%-0.668%）之間，氨基酸總量僅為44.96mg/g（即4.496%）。本結果偏低于前兩者的研究結果。究其原因，可能一方面與供試材料不同有關，另一方面還可能與栽培條件以及樣品采收時期不同等有關。曾有研究表明，環(huán)境和栽培條件的差異能夠引起作物中蛋白質和氨基酸含量的顯著變異。此外，還可能與氨基酸測定方法不同有一定關系。

作為食物資源的紫蘇屬植物葉片其蛋白質中必需氨基酸含量以及所占的比例是決定紫蘇屬植物營養(yǎng)及食用價值的重要因素。本試驗中，必需氨基酸總量平均為14.58mg/g，占氨基酸總量的比例為32.43%。供試材料中P06-7的必需氨基酸含量達19.55mg/g，氨基酸總量為57.65mg/g，均比其他材料高，且必需氨基酸配比也較為平衡，綜合性狀表現(xiàn)優(yōu)良，可以作為優(yōu)異資源材料加以進一步選育和利用。

紫蘇屬植物不同原（變）種葉片中均含有17種氨基酸（包括7種為人體必需氨基酸），以WHO/提出的E/E+N40%，E/N0.6的參考蛋白模式為FAO標準，本試驗材料基本接近參考蛋白模式，是重要的氨基酸資源。同時，本試驗還發(fā)現(xiàn)紫蘇屬植物葉片中氨基酸含量有較大變異系數(shù)，具有一定的選擇空間，可考慮育成富含各類氨基酸的新品種。

植物體中的氨基酸不僅是蛋白質的組成成分，還是許多植物藥材的藥效物質。如，具有清肺止渴、生津滋補的大葉三七葉其氨基酸總量為6.03%，藥效氨基酸含量占總氨基酸的60.70%；有刺激胰島素分泌、降低血糖作用的桑葉其氨基酸總量達48.75mg/g，藥效氨基酸含量占總氨基酸含量的63.59%。而比較紫蘇屬植物不同原（變）種的各類氨基酸含量，發(fā)現(xiàn)野生紫蘇氨基酸總量達50.23mg/g，藥效氨基酸含量占氨基酸總量的66.17%，香甜味氨基酸含量占總氨基酸的80%。因此，野生紫蘇在開發(fā)氨基酸食品和提取藥效氨基酸上應該具有較大潛力。

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