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【摘要】目的觀察丹參酮ⅡA對(duì)小鼠腦缺血、腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。方法采用小鼠斷頭模型、小鼠腦卒中模型、小鼠腦缺血再灌注模型，觀察丹參酮ⅡA注射乳劑對(duì)小鼠斷頭后存活時(shí)間、喘氣次數(shù)，小鼠腦卒中后的神經(jīng)行為，小鼠腦缺血再灌注后腦內(nèi)SOD活性、MDA含量的影響。結(jié)果丹參酮ⅡA能延長(zhǎng)小鼠斷頭后的存活時(shí)間、增加斷頭后的喘氣次數(shù)，改善腦卒中小鼠的神經(jīng)行為，提高腦缺血再灌注損傷后小鼠腦組織中SOD酶活性,降低MDA含量。結(jié)論丹參酮ⅡA注射乳劑對(duì)小鼠腦缺血及腦缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。

【關(guān)鍵詞】丹參酮ⅡA注射乳劑；腦缺血；腦缺血再灌注；自由基

Abstract：ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofTanshinoneⅡAagainstbraininjuryinmiceinducedbycerebralischemiaorcerebralischemia-reperfusion.MethodsMicewerepretreatedwithTanshinoneⅡAatthedoseof7.8,3.9,1.9mg/kgi.v.respectively.Themodelsofmicecerebralischemiaandcerebralischemia-reperfusionweremade.Thesurvivaltime,gaspingtimebydecapitationandbehaviorwereevaluated.TheSODactivityandMDAcontentweremeasured.ResultsTanshinoneⅡAcouldsignificantlyincreasethesurvivaltimeandgaspingtime,improvethebehaviorofmice.TanshinoneⅡAcouldalsoenhancethesuperoxidedismutase(SOD)activityandreducethemalonyldialdehyde(MDA)contentinmicebraintissueatthesametime.ConclusionTanshinoneⅡAhasprotectiveeffectagainstbraindamageinducedbycerebralischemiaandcerebralischemia-reperfusioninmice.

Keywords:TanshinoneⅡAemulsion;cerebralischemia;cerebralischemia-reperfusion;freeradical

丹參酮（tanshinone）是丹參的有效活性成分，包括丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、丹參酮ⅡB等脂溶性成分和丹酚酸甲、丹酚酸乙、丹參素等水溶性成分，其中丹參酮ⅡA為丹參酮中含量最高的活性成分［1］。為了解決丹參酮ⅡA不溶于水，成鹽后注射給藥不易透過(guò)血腦屏障，將丹參酮ⅡA做成微乳制劑，在不改變其理化性質(zhì)的基礎(chǔ)上，保持其原有的脂溶性和穿過(guò)脂雙層生物膜、透過(guò)血腦屏障的能力。本文利用小鼠腦缺血及腦缺血再灌注模型，觀察丹參酮ⅡA對(duì)腦缺血的保護(hù)作用，探討其作用機(jī)制。

1材料

1.1藥品與試劑

受試品：丹參酮ⅡA注射乳劑（0.3mg·mL-1，批號(hào)200606，北京中海康科技開(kāi)發(fā)公司提供，臨用前用5％葡萄糖注射液稀釋至所需濃度），MDA、SOD試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.2儀器

CL770全自動(dòng)生化分析儀，日本島津公司生產(chǎn)。

1.3動(dòng)物

昆明種小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量18～24g，中國(guó)醫(yī)科大學(xué)第二臨床學(xué)院醫(yī)學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK［遼］2003-0013號(hào)。

1.4統(tǒng)計(jì)方法

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以±s表示，采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析（onewayANOVA），組間比較采用LSD檢驗(yàn),以P<0.05為差異有顯著性。

2方法

2.1小鼠斷頭喘氣模型［2］取體質(zhì)量18～22g的昆明種小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)組分別尾靜脈丹參酮ⅡA注射乳劑7.8、3.9、1.9mg/kg；陽(yáng)性對(duì)照組尾靜脈注射丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液5.2mg/kg；空白對(duì)照組尾靜脈注射等容量的5％葡萄糖注射液20mL/kg。給藥10min后，迅速?gòu)男∈箅p耳后頸部斷頭，觀察小鼠斷頭喘氣的時(shí)間及喘氣次數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行LSD檢驗(yàn)。

2.2小鼠腦卒中模型［3］

取體質(zhì)量22～24g的雄性昆明種小鼠50只，分組、給藥同實(shí)驗(yàn)“2.1”。給藥后10min小鼠用乙醚淺麻醉，分離兩側(cè)頸總動(dòng)脈及迷走神經(jīng)，左側(cè)頸總動(dòng)脈連同迷走神經(jīng)下置一根直徑為0.2mm的細(xì)鋼絲，結(jié)扎后將鋼絲抽出，右側(cè)頸總動(dòng)脈及迷走神經(jīng)完全結(jié)扎。術(shù)后按下述指標(biāo)觀察缺血1.5h內(nèi)卒中指數(shù)，每0.5小時(shí)記錄1次，并計(jì)算3次分?jǐn)?shù)總和。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：

（1）毛蓬亂豎起，動(dòng)作緩慢或活動(dòng)減少，觸耳反應(yīng)加強(qiáng)，眼瞼下垂，腦卒中指數(shù)各1分，總計(jì)4分；

（2）頭翹起，眼球固定，后肢向外向后伸展，轉(zhuǎn)圈，抽搐或痙攣，腦卒中指數(shù)各3分，總計(jì)15分；

（3）昏迷，腦卒中指數(shù)為6分。

2.3小鼠腦缺血再灌注模型［4］

取體質(zhì)量22～24g的雄性昆明種小鼠60只，隨機(jī)分6組，每組10只，實(shí)驗(yàn)組與陽(yáng)性對(duì)照組分組與給藥劑量同實(shí)驗(yàn)“2.1”，假模型組及模型組尾靜脈注射等容量的5％葡萄糖注射液20mL/kg。給藥后10min，各組小鼠用乙醚麻醉，分離兩側(cè)頸總動(dòng)脈并結(jié)扎，導(dǎo)致腦缺血，結(jié)扎20min后松開(kāi)，恢復(fù)頸總動(dòng)脈血流，造成缺血再灌，小鼠手術(shù)后縫合并繼續(xù)飼養(yǎng)。連續(xù)給藥3d，每天1次。假模型組只分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈而不結(jié)扎。末次給藥后30min將各組小鼠處死，取腦，試劑盒測(cè)定MDA的含量及SOD酶活性。

3結(jié)果

3.1丹參酮ⅡA注射乳劑對(duì)小鼠斷頭喘氣時(shí)間及次數(shù)的影響

丹參酮ⅡA注射乳劑7.8、3.9mg/kg可以顯著延長(zhǎng)小鼠斷頭后的存活時(shí)間，增加喘氣次數(shù)，與空白對(duì)照組比較差異顯著（P<0.05,P<0.01）,見(jiàn)表1。

3.2丹參酮ⅡA注射乳劑對(duì)缺血小鼠腦卒中指數(shù)的影響

由表2可見(jiàn)，小鼠腦卒中后腦卒中指數(shù)明顯增加；丹參酮ⅡA預(yù)防給藥后，小鼠腦卒中指數(shù)明顯降低，丹參酮各劑量組腦卒中指數(shù)與模型組比較差異均有顯著性（P<0.05,P<0.01）。

表1丹參酮ⅡA注射乳劑對(duì)小鼠斷頭喘氣時(shí)間及次數(shù)的影響（略）

Tab.1TheeffectofTanshinoneⅡAemulsiononsurvivaltimeandgaspingtimebydecapitationinmice

與5%葡萄糖組比較：*P<0.05;**P<0.01

表2丹參酮ⅡA注射乳劑對(duì)腦缺血小鼠腦卒中指數(shù)的影響（略）

Tab.2TheeffectofTanshinoneⅡAemulsiononstrokeindexinmicesubjectedtocerebralischemia

與模型組比較：*P<0.05;**P<0.01

3.3丹參酮ⅡA注射乳劑對(duì)腦缺血再灌注損傷小鼠腦內(nèi)SOD活性及MDA含量的影響

由表3可見(jiàn)，小鼠在腦缺血再灌注后，腦組織SOD活性明顯下降，MDA含量顯著升高，模型組與假手術(shù)組比較差異顯著（P<0.01）。與模型組比較，丹參酮ⅡA注射乳劑7.8、3.9mg/kg的腦組織SOD活性顯著上升（P<0.05,P<0.01），MDA含量極顯著下降（P<0.01）。提示丹參酮ⅡA注射乳劑能使腦缺血再灌注小鼠的腦組織過(guò)氧化程度受到明顯抑制，提高機(jī)體清除自由基的能力。

表3丹參酮ⅡA注射乳劑對(duì)缺血再灌注小鼠腦SOD和MDA的影響（略）

Tab.3TheeffectofTanshinoneⅡAemulsiononMDAcontentandSODactivityinmicesubjectedtocerebralischemia/reperfusion

與模型組比較：*P<0.05;**P<0.01

4討論

當(dāng)腦缺血發(fā)生時(shí)，腦微血管系統(tǒng)中存在的谷胱甘肽-谷胱甘肽還原酶自由基清除系統(tǒng)的含量下降［5］，再灌注時(shí)則導(dǎo)致微血管周?chē)写罅孔杂苫a(chǎn)生。氧自由基則會(huì)損傷血腦屏障，促進(jìn)腦水腫的形成、血管內(nèi)皮黏附分子的表達(dá)以及白細(xì)胞和血小板與內(nèi)皮的黏附，加重再灌注后腦微循環(huán)障礙［6］，因此自由基損傷也是防治腦缺血再灌注損傷的機(jī)理之一。MDA是自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，它的含量反映氧自由基的水平及脂質(zhì)過(guò)氧化的程度。此外，MDA可與核酸及蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)，使之受損。因此，MDA不僅是細(xì)胞損傷的代謝產(chǎn)物，而且也是導(dǎo)致細(xì)胞損傷的機(jī)制之一。SOD是一種金屬酶，此酶可以催化超氧自由基發(fā)生岐化反應(yīng)，能夠清除氧自由基，保護(hù)生物膜免受自由基的攻擊損害。

本次試驗(yàn)采用小鼠斷頭、小鼠腦卒中及小鼠腦缺血再灌注模型，研究丹參酮ⅡA注射乳劑對(duì)腦缺血及腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。試驗(yàn)結(jié)果表明，丹參酮ⅡA注射乳劑可以升高腦組織內(nèi)SOD酶的活力，降低MDA含量，延長(zhǎng)小鼠斷頭后的存活時(shí)間、增加喘氣次數(shù)，改善腦卒中小鼠的神經(jīng)行為。由此可見(jiàn)，丹參酮ⅡA注射乳劑對(duì)腦缺血及腦缺血再灌注損傷具有明顯的保護(hù)作用，該作用的產(chǎn)生可能與其抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)有關(guān)。

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