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摘要目的：觀察應(yīng)激對(duì)動(dòng)物生殖內(nèi)分泌的影響，建立符合臨床需要的生殖內(nèi)分泌紊亂的動(dòng)物模型。方法：用懸吊和制動(dòng)方法造成動(dòng)物急性或重復(fù)應(yīng)激狀態(tài)，用放射免疫結(jié)合的方法測(cè)定血漿有關(guān)性激素的水平，用陰道涂片的方法觀察雌性動(dòng)物的性周期，用常規(guī)方法觀察雄性動(dòng)物的性行為。結(jié)果：急性制動(dòng)應(yīng)激和急性懸吊應(yīng)激1，2，3h均能使雄性小鼠血漿睪酮水平顯著降低,皮質(zhì)酮水平則明顯升高。大鼠急性制動(dòng)應(yīng)激3h，可見(jiàn)血漿睪酮水平及睪丸中合成酶17α-羥化酶、17,20-羥甾脫氫酶和3β-裂解酶活性顯著降低，皮質(zhì)酮水平則明顯升高。重復(fù)懸吊應(yīng)激可使雄性小鼠性行為低下或缺損，雌性小鼠性周期紊亂，分別可見(jiàn)血漿睪酮和雌二醇水平降低。結(jié)論：應(yīng)激可使生殖內(nèi)分泌功能低下或紊亂，在此過(guò)程中性激素降低起著重要的作用。提示臨床上各種軀體或心理應(yīng)激引起的生殖內(nèi)分泌功能低下或紊亂也與相關(guān)性激素降低或分泌節(jié)律失常有關(guān),應(yīng)激性生殖內(nèi)分泌功能低下或紊亂動(dòng)物模型可供相關(guān)藥物研究。

應(yīng)激是指內(nèi)外環(huán)境劇變刺激時(shí)，機(jī)體出現(xiàn)的包括精神、神經(jīng)、內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)等的綜合應(yīng)答狀態(tài)。強(qiáng)烈身心應(yīng)激尤其是長(zhǎng)期慢性應(yīng)激嚴(yán)重影響著人類(lèi)的身心健康，導(dǎo)致臨床疾病、亞健康狀態(tài)及早衰［1,2］。

生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)對(duì)應(yīng)激刺激尤為敏感，月經(jīng)失調(diào)、高雄激素血癥、閉經(jīng)、不孕、男女性功能障礙等均與身心應(yīng)激密切相關(guān)［3～8］。在“生物醫(yī)學(xué)模式”向“生理、心理和社會(huì)醫(yī)學(xué)模式”轉(zhuǎn)變的今天，應(yīng)激方法尤其是心理應(yīng)激方法在相關(guān)藥物研究中具有十分重要的作用?，F(xiàn)將幾年來(lái)我們建立的及國(guó)外應(yīng)用較多、可操作性強(qiáng)的有關(guān)應(yīng)激性生殖內(nèi)分泌功能低下模型作一介紹［9～11］。

材料與方法

1急性應(yīng)激性睪酮水平低下模型

1.1小鼠制動(dòng)應(yīng)激性睪酮水平低下模型取性成熟昆明種小鼠，體重36～38g，室溫20～23℃，光照（14h光∶10h暗），適應(yīng)環(huán)境3d,d4上午9∶00～12∶00，將小鼠置于50ml茶色瓶中，完全限制其自由活動(dòng)即制動(dòng)應(yīng)激1～3h，應(yīng)激期間不影響動(dòng)物自由呼吸。應(yīng)激結(jié)束即刻取血，肝素抗凝，分離血漿，用放射免疫結(jié)合方法測(cè)定血漿睪酮及皮質(zhì)酮水平。

1.2小鼠懸吊應(yīng)激性睪酮水平低下模型取性成熟昆明種小鼠，體重36～38g，室溫20～23℃，光照（14h光∶10h暗），適應(yīng)環(huán)境3d,d4上午9∶00，以小鼠尾部為支點(diǎn)，將其懸吊于水面上，水溫(25±1)℃，水深20cm，懸吊高度以小鼠前肢剛接觸水面為度，懸吊時(shí)間1～3h，應(yīng)激結(jié)束即刻取血，肝素抗凝，分離血漿，用放射免疫結(jié)合方法測(cè)定血漿睪酮及皮質(zhì)酮水平。

1.3大鼠制動(dòng)應(yīng)激性睪丸功能低下模型取性成熟SD大鼠，體重230～250g，室溫20～23℃，光照（14h光∶10h暗），適應(yīng)環(huán)境3d,d4上午9∶00將動(dòng)物置于透明的聚乙烯圓錐形的制動(dòng)應(yīng)激裝置中，使頭部朝圓錐方向，圓錐大小以完全限制動(dòng)物活動(dòng)為度，位于動(dòng)物鼻部的圓錐體處，開(kāi)一直徑1cm的孔，以保證動(dòng)物自由呼吸，如此應(yīng)激3h。

2重復(fù)應(yīng)激性生殖內(nèi)分泌功能低下模型

2.1重復(fù)應(yīng)激性小鼠性行為低下動(dòng)物模型取性成熟昆明種小鼠，體重36～38g，室溫20～23℃，光照（14h光∶10h暗），適應(yīng)環(huán)境3d。懸吊方法同前，懸吊1次/d，連續(xù)12d，并通過(guò)循序延長(zhǎng)懸吊時(shí)間增加應(yīng)激強(qiáng)度,d1～d3懸吊2h/d，d4～d6懸吊3h/d，d7～d9懸吊4h/d，d10～d12懸吊5h/d，每天應(yīng)激時(shí)間安排在上午9∶00～下午2∶00。d6下午7∶00～9∶00開(kāi)始觀察每天應(yīng)激后及末次應(yīng)激恢復(fù)24h后15min內(nèi)性行為，即舔吻、跨騎、交配的潛伏期、發(fā)生數(shù)及發(fā)生率,部分動(dòng)物于末次應(yīng)激后30min取血，肝素抗凝，分離血漿供血漿中睪酮及皮質(zhì)酮水平測(cè)定。

2.2重復(fù)應(yīng)激性雌小鼠性周期失常、雌二醇降低模型取性成熟昆明種雌性小鼠，體重34～36g，室溫20～23℃，光照（14h光∶10h暗），每天上午7∶30～8∶30陰道涂片，連續(xù)15d。選擇有規(guī)律性周期的動(dòng)物，懸吊方法同前，懸吊1次/d，連續(xù)12d，并通過(guò)循序延長(zhǎng)懸吊時(shí)間增加應(yīng)激強(qiáng)度，d1～d3懸吊1h/d,d4～d6懸吊2h/d,d7～d9懸吊3h/d，d10～d12懸吊4h/d。每天應(yīng)激時(shí)間安排在上午9∶00～12∶00。應(yīng)激期間繼續(xù)每天陰道涂片，觀察性周期應(yīng)激性變化。于應(yīng)激后第2個(gè)動(dòng)情期，取血，肝素抗凝，分離血漿，用放免法觀察血漿中雌二醇水平應(yīng)激性變化。

結(jié)果

1急性應(yīng)激性睪酮水平低下模型

急性制動(dòng)應(yīng)激和懸吊應(yīng)激1,2,3h均能使小鼠血漿睪酮水平顯著降低，相反，皮質(zhì)酮水平則顯著升高。急性制動(dòng)應(yīng)激3h可使大鼠血漿睪酮水平及睪丸中睪酮合成酶17α-羥化酶、17,20-裂解酶和3β-羥甾脫氫酶(3β-HSD)活性顯著降低，而血漿皮質(zhì)酮水平明顯升高。

2重復(fù)應(yīng)激性生殖內(nèi)分泌功能低下模型

連續(xù)懸吊應(yīng)激6d，即可見(jiàn)雄性小鼠性行為降低，應(yīng)激12d性行為進(jìn)一步降低，甚至達(dá)到缺損的程度，同時(shí)血漿睪酮水平降低，而皮質(zhì)酮水平及腎上腺指數(shù)明顯升高。末次應(yīng)激后恢復(fù)24h動(dòng)物性行為仍然處于低下?tīng)顟B(tài)。遠(yuǎn)低于雄性小鼠應(yīng)激強(qiáng)度的重復(fù)應(yīng)激12d可使雌性小鼠性周期延長(zhǎng)或紊亂，陰道涂片可見(jiàn)動(dòng)情期角化上皮細(xì)胞減少，同時(shí)雌二醇水平顯著降低。

討論

下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸功能亢進(jìn)與下丘腦-垂體-性腺（HPG）軸功能降低為機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)的明顯特征。血漿中皮質(zhì)酮水平升高為判斷機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)的經(jīng)典指標(biāo)，而腎上腺指數(shù)升高既可反映慢性應(yīng)激過(guò)程中下丘腦-垂體軸應(yīng)激反應(yīng)對(duì)腎上腺作用的結(jié)果，也與慢性應(yīng)激引起的血漿皮質(zhì)酮水平升高密切相關(guān)?，F(xiàn)有大量研究表明，HPA軸功能應(yīng)激性亢進(jìn)與HPG軸功能應(yīng)激降低密切相關(guān)，應(yīng)激反應(yīng)時(shí)，下丘腦促腎上腺皮質(zhì)釋放激素（CRF）及腎上腺糖皮質(zhì)激素（GCS）大量釋放，CRF和gCS均可在下丘腦、垂體、性腺（睪丸或卵巢）多水平抑制HPG軸功能［12～19］，我們發(fā)現(xiàn)睪酮應(yīng)激性降低與皮質(zhì)酮升高成反比［10］。臨床上許多婦科疾病如閉經(jīng)、多囊卵巢等均伴有腎上腺功能亢進(jìn)［4,5,7,20，21］?？梢?jiàn)，觀察血漿皮質(zhì)酮水平或腎上腺指數(shù)，在應(yīng)激性生殖內(nèi)分泌功能低下或紊亂模型及藥物研究中具有重要的意義。

身心應(yīng)激是生殖內(nèi)分泌疾病、男女性功能低下或障礙的重要誘因。所以，用應(yīng)激方法造成生殖內(nèi)分泌功能低下或紊亂動(dòng)物模型，觀察藥物的作用能很好地預(yù)測(cè)藥物的臨床療效。而且，應(yīng)激性生殖內(nèi)分泌功能低下或紊亂動(dòng)物模型具有穩(wěn)定、重現(xiàn)性好、可操作性強(qiáng)、無(wú)須特殊儀器設(shè)備的優(yōu)點(diǎn)。綜上所述，應(yīng)激性生殖內(nèi)分泌功能低下或紊亂動(dòng)物模型在防治生殖內(nèi)分泌疾病，男女性功能降低及延緩生殖內(nèi)分泌功能衰老的藥物研究中具有重要的作用。

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