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摘要：目的研究加拿大一枝黃花的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳和祛痰作用及毒性，為正確對待這一生物入侵植物提供科學(xué)參考。方法采用熱板法、扭體法觀察鎮(zhèn)痛作用，濃氨水誘咳法觀察鎮(zhèn)咳作用，酚紅排泌法觀察祛痰作用，最大耐受量法觀察急性毒性。結(jié)果首次對國產(chǎn)加拿大一枝黃花進行了體內(nèi)藥理作用研究，發(fā)現(xiàn)加拿大一枝黃花提取物能顯著延長醋酸致小鼠扭體潛伏期，減少扭體次數(shù)；但未明顯提高熱板法實驗小鼠的痛閾值；能顯著抑制濃氨水所致小鼠咳嗽潛伏期和咳嗽次數(shù)；顯著增加小鼠氣管的酚紅排泌量；急性毒性實驗表明加拿大一枝黃花提取物無明顯毒性，既不引起小鼠死亡也不影響小鼠體重正常增加。結(jié)論加拿大一枝黃花具有明顯的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳和祛痰作用，無明顯毒性。

關(guān)鍵詞：一枝黃花鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)咳祛痰急性毒性

加拿大一枝黃花SolidagocanadensisL.為菊科(Compositae)一枝黃花屬(Solidago)植物，作為泌尿疾病和消炎鎮(zhèn)痛治療藥，在歐洲已有幾百年藥用歷史［1］，為《歐洲藥典》收錄的常用植物藥。現(xiàn)代研究證實，歐美等地產(chǎn)加拿大一枝黃花富含黃酮、皂苷及二萜類等化合物，具有抗炎鎮(zhèn)痛、解痙、利尿、抗氧化等廣泛藥理活性［2］，在臨床上廣泛使用。本種1935年作為觀賞花卉被引入我國，20世紀(jì)80年代擴散蔓延為雜草，于近年在我國華東、華北、華南等地大面積爆發(fā)性生長，對我國生態(tài)造成了嚴(yán)重威脅［3］。目前國內(nèi)對國產(chǎn)加拿大一枝黃花的研究多集中在生物學(xué)特性及生態(tài)防治方面，化學(xué)成分和藥理作用方面僅見有揮發(fā)油成分和黃酮類，以及抗菌抗氧化活性的報道［4，5］，其體內(nèi)活性及毒性研究未見報道。我們首次對其鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳、祛痰作用、急性毒性進行了研究。現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1器材

1.1動物清潔級昆明種小鼠，體重（20±2）g，雌雄兼用，由中科院上海實驗動物中心提供（動物合格證號：SCXK滬2003-0003）。

1.2藥物加拿大一枝黃花，200409采于上海，由上海交通大學(xué)藥學(xué)院李曉波教授鑒定。干燥全草粉碎過40目篩，95%乙醇滲漉提取，回收乙醇后得提取物，干燥備用。

1.3試劑吲哚美辛片，上海辛帕斯制藥有限公司，批號050601；阿司匹林片，上海信誼百路達藥業(yè)有限公司，批號0554010；鹽酸依普拉酮片，上海衡山制藥有限公司，批號040201；氨水，分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號050120；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.4儀器YLS-6A智能熱板儀，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院設(shè)備站；754型紫外分光光度計，上海精密科學(xué)儀器有限公司。

1.5統(tǒng)計軟件SPSS11.5，進行One-WayANOVA檢驗。

2方法

2.1鎮(zhèn)痛作用研究［6］

2.1.1對熱刺激小鼠痛閾值的影響將健康雌性小鼠置于(55±0.5)℃熱板儀上,以小鼠舔后足反應(yīng)的潛伏期為痛閾指標(biāo),記錄小鼠痛閾值，剔除痛閾值小于5s或大于30s或跳躍的小鼠,取預(yù)選合格的小鼠間隔5min再重新測定痛閾值一次，取兩次痛閾值的平均值作為該鼠給藥前的平均痛閾值。將符合標(biāo)準(zhǔn)的40只小鼠隨機分為蒸餾水組、吲哚美辛組（50mg/kg）、加拿大一枝黃花低劑量組（相當(dāng)于生藥2g/kg）、加拿大一枝黃花高劑量組（相當(dāng)于生藥6g/kg）4組。灌胃給藥，觀察并記錄給藥后30，60，90，120min的痛閾值，痛閾值大于60s的以60s計。

2.1.2對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響健康小鼠40只，雌雄各半，隨機分為蒸餾水組、阿司匹林組（200mg/kg）、加拿大一枝黃花低劑量組（相當(dāng)于生藥2g/kg）、加拿大一枝黃花高劑量組（相當(dāng)于生藥6g/kg）4組。灌胃給藥30min后，腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml/只，觀察并記錄小鼠首次扭體時間和15min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)。按下式計算鎮(zhèn)痛率：

鎮(zhèn)痛率（%）=蒸餾水組扭體次數(shù)-試藥組扭體次數(shù)蒸餾水組扭體次數(shù)×100%

2.2鎮(zhèn)咳作用研究［6］40只健康小鼠，雌雄各半。隨機分為蒸餾水組、鹽酸依普拉酮組（20mg/kg）、加拿大一枝黃花低劑量組（相當(dāng)于生藥2g/kg）、加拿大一枝黃花高劑量組（相當(dāng)于生藥6g/kg）4組。灌胃給藥30min后，將每只小鼠置于自制的引咳裝置中，使小鼠接受飽和氨水的噴霧刺激5s，從噴霧氨水開始計時，以腹肌收縮，張大嘴為準(zhǔn)，觀察和記錄小鼠的咳嗽潛伏期和2min內(nèi)咳嗽次數(shù)。

2.3祛痰作用研究［7］健康小鼠40只，雌雄各半。隨機分為蒸餾水組、氯化銨組（2g/kg）、加拿大一枝黃花低劑量組（相當(dāng)于生藥2g/kg）、加拿大一枝黃花高劑量組（相當(dāng)于生藥6g/kg）4組。。每只小鼠灌胃給藥30min后，腹腔注射5%酚紅生理鹽水溶液10ml/kg，30min后脫臼處死，剝離氣管周圍組織，剪下自甲狀軟骨至氣管分支處的一段氣管，放入盛有1ml蒸餾水的試管中，再加入1mol/L氫氧化鈉溶液0.1ml，以1ml蒸餾水/0.1ml氫氧化鈉溶液為空白，546nm處測量溶液的吸光度，以吸光度A作為評價指標(biāo)。

2.4急性毒性實驗［6］LD50的測定：健康小鼠30只，雌雄各半，按體重隨機分為5組，每組6只，實驗前禁食12h，可自由飲水；灌胃給藥，劑量分別為：0.1，0.5，2.5，12.5，62.5g/kg，連續(xù)觀察7d，每天記錄小鼠體重及死亡數(shù)目，并觀察小鼠反應(yīng)情況。最大耐受量實驗：健康小鼠20只，雌雄各半，按體重隨機分為蒸餾水組、加拿大一枝黃花組（81.0g/kg），實驗前禁食12h，可自由飲水；灌胃給藥，連續(xù)觀察7d，每天記錄小鼠體重及死亡數(shù)目，并觀察小鼠反應(yīng)情況。7d后處死全部小鼠，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等臟器的變化。

3結(jié)果

3.1鎮(zhèn)痛作用

3.1.1對熱刺激小鼠痛閾值的影響

結(jié)果見表1。與蒸餾水組比較，加拿大一枝黃花高、低劑量組小鼠的痛閾值均無明顯提高。表1加拿大一枝黃花對熱刺激小鼠痛閾值的影響(略)

3.1.2對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

結(jié)果見表2。由表2可見，加拿大一枝黃花明顯延長了醋酸致小鼠扭體的出現(xiàn)時間，抑制其扭體次數(shù)，高劑量組的鎮(zhèn)痛率與陽性藥效果相近，說明加拿大一枝黃花具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。表2加拿大一枝黃花對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響(略)

3.2鎮(zhèn)咳作用

結(jié)果見表3。與對照組相比，高、低劑量的加拿大一枝黃花均能顯著抑制氨水誘發(fā)小鼠的咳嗽潛伏期和咳嗽次數(shù)，提示其具有鎮(zhèn)咳作用。表3加拿大一枝黃花對氨水致小鼠咳嗽反應(yīng)的影響(略)

3.3祛痰作用

結(jié)果見表4。由表4可見高、低劑量的加拿大一枝黃花均能顯著增加小鼠氣管的酚紅排泌量，效果優(yōu)于氯化銨，且呈量-效依賴關(guān)系，提示本品能提高小鼠的氣管分泌功能，具有祛痰作用。表4加拿大一枝黃花的祛痰作用(略)

急性毒性實驗在較大劑量（62.5g/kg）下小鼠無死亡，未能得出LD50，故改做最大給藥量實驗評價其急性毒性，結(jié)果實驗給藥至81.0g/kg也未引起小鼠死亡；除自發(fā)活動輕度減少外，未觀察到其他急性毒性反應(yīng)，即最大耐受量可達81.0g/kg（相當(dāng)于人體常用藥量的324倍）。同時與蒸餾水組相比對小鼠體重增加無明顯影響（見表5），說明不影響小鼠的正常生長，可認為加拿大一枝黃花無明顯急性毒性。表5加拿大一枝黃花對小鼠體重的影響(略)

4討論

一枝黃花屬植物廣泛分布于北半球，我國原產(chǎn)4種，其中一枝黃花SolidagodecurrensL.和毛果一枝黃花SolidagovirgaureaL.在我國均以全草入藥，有退熱行血、疏風(fēng)解毒、消腫止痛的功效。加拿大一枝黃花為生物入侵種，近年在我國部分地區(qū)迅速蔓延，我國規(guī)定其為林業(yè)上的檢疫性有害植物，國內(nèi)未見有藥用報道。但本種也是歐美著名植物藥，已被歐洲藥典收錄，國外對其化學(xué)成分和藥理作用方面的研究較多，而國內(nèi)有關(guān)加拿大一枝黃花的研究相對較少，體內(nèi)藥理作用研究尚未見報道，因此對其進行藥理作用研究具有重要意義。本文從多個方面對其進行了藥理作用研究，首次發(fā)現(xiàn)國產(chǎn)加拿大一枝黃花具有明顯的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳和祛痰作用，且無明顯毒性，與國產(chǎn)同屬植物一枝黃花SolidagodecurrensL.具有相類似的功效，為合理對待這一入侵物種提供了一定的依據(jù)。

加拿大一枝黃花原產(chǎn)于北美，作為一種庭院裝飾植物于18世紀(jì)首次從美洲東北部引入歐洲。在1850年左右從中歐開始傳播,在19世紀(jì)50年代遍布歐洲。據(jù)報道，歐美產(chǎn)加拿大一枝黃花具有廣泛的藥用前景，地上部分具有殺菌消炎,增強腎臟功能的作用，用于治療外傷、慢性腎炎、膀胱炎、尿結(jié)石、風(fēng)濕等疾病,并可用于糖尿病的輔助治療［8］；其揮發(fā)油具有促進循環(huán)，消除疲勞的作用。近年的研究還發(fā)現(xiàn)在其提取物中具有多種能抑制DNA聚合酶和蛋白質(zhì)合成酶活性的物質(zhì)［9］。國產(chǎn)加拿大一枝黃花是否具有相同功效，值得深入研究。國產(chǎn)加拿大一枝黃花如能在我國藥用，一方面可以變廢為寶，另一方面還可有效控制其蔓延，因此加強國產(chǎn)加拿大一枝黃花的藥理作用研究，具有非常重要的意義。

【參考文獻】

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［5］王開金，陳列忠，李寧，等.加拿大一枝黃花黃酮類成分及抗氧化與自由基消除活性的研究［J］.中國藥學(xué)雜志，2006，41（7）：493.

［6］徐叔云，卞如濂，陳修，等.藥理實驗方法學(xué),第3版［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社,2002：882，1362，227.

［7］陳奇，沈映君，孫學(xué)蕙，等.中藥藥實驗［M］.貴陽：貴州人民出版社，1988：158.

［8］McCuneLM,JohnsT.AntioxidantactivityinmedicinalplantsassociatedwiththesymptomsofdiabetesmellitususedbytheindigenouspeoplesoftheNorthAmericanborealforest［J］.JEthnopharmacol，2002，82（23)：197-205.

［9］ChaturvedulaVS,ZhouBN，GaoZ，etal.NewlupanetriterpenoidsfromSolidagocanadensisthatinhibitthelyaseactivityofDNApolymerasebeta［J］.BioorgMedChem，2004，12（23)：6271.