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一、方法
1.分組
依據(jù)電凝時功率(W)/電凝持續(xù)時間(s)/電凝間隔時間(s)3個變量組合將100只KM小鼠隨機分為七組(每只小鼠的電凝次數(shù)固定為5次)。組1-20W/0.5s/0.5s;組2-40W/0.5s/0.5s;組3-20W/1.0s/1.0s;組4-30W/0.5s/2.0s;組5-30W/1.0s/1.0s;組6-40W/0.5s/2.0s;組7為空白組。對除組7外的六組進行單極高頻電凝對小鼠陰莖、腎臟、睪丸損傷的病理實驗研究??瞻捉M不做電凝處理,實驗結(jié)束時與實驗組同時取上述三臟器做病理檢查。實驗組每組16只,其中電凝后即刻處死4只,3d后處死8只,15d后處死4只。
2.小鼠陰莖、腎臟、睪丸電凝損傷動物模型的建立
將小鼠稱重后按4ml/kg計算麻醉劑量,然后以10%水合氯醛腹腔麻醉。使用電動推及脫毛膏對小鼠陰囊及背部備皮,術(shù)者用無菌鑷子夾持皮膚,眼科無菌剪刀將小鼠右側(cè)陰囊縱行剪開一約0.5cm刀口,逐層分離陰囊壁各層直至鞘膜。助手置小鼠于右手掌,右手拇指輕輕擠壓小鼠腹腔,借助腹腔壓力及重力將右側(cè)睪丸擠出。開啟高頻電刀機,調(diào)節(jié)功率,準備計時器,接著,以左手食指及拇指捏住小鼠雙耳,小鼠仰臥位置于絕緣手術(shù)臺,右手持電刀刀柄,開始電凝。電凝時,助手右手拇指同時接觸電刀開關(guān)和秒表開關(guān),觀察秒表的時間顯示,到規(guī)定時間同時放開拇指。統(tǒng)一電凝睪丸中1/3前部5次。電凝后術(shù)者將睪丸輕輕回納入陰囊,以絲線將陰囊皮膚全層間斷縫合。接著同樣方式電凝陰莖側(cè)面包皮,我們選擇靠左上方。然后將小鼠翻過,背側(cè)皮膚安爾碘消毒,術(shù)者于背部略靠右方橫行切開小鼠皮膚,暴露皮下,切口約1cm,于緊靠脊柱附近橫行剪開背部肌肉,此時可看到右側(cè)腎臟埋于肝臟內(nèi)下方,助手以右手食指輕輕將小鼠腹側(cè)向背側(cè)托起,使腎臟擠出,然后小鼠俯臥位置于絕緣手術(shù)臺,左手捏雙耳,右手持刀柄,以同樣方式電凝腎臟的下極5次?;丶{右腎,絲線分別間斷縫合皮下肌肉及皮膚。手術(shù)完成后,立即將小鼠保溫麻醉復(fù)蘇。每組小鼠置于同一籠內(nèi)飼養(yǎng)。
3.小鼠器官病理切片的切取及保存
造模后,分別于術(shù)后即刻、3d、15d,將小鼠斷頸處死,3min內(nèi)迅速取其臟器,打開陰囊,分離出睪丸,然后沿陰莖根部剪下陰莖,最后背部沿傷口處打開皮膚、肌肉,分離腎臟并取出,浸泡在10%的甲醛溶液中。4.病理切片的制作及電凝后顯微鏡下觀察:觀察切片結(jié)果后均請?zhí)K大附一院病理科兩位主治以上醫(yī)師進行核實,以確定觀察結(jié)果。通過顯微鏡下的標尺精確測量壞死面積,以壞死區(qū)的長軸與短軸的乘積表示,在40倍物鏡下,通過目鏡內(nèi)縱向及橫向刻度測量壞死面積,計算時兩者相乘,以mm2為單位。
二、實驗病理結(jié)果
高頻電凝小鼠陰莖、腎臟、睪丸即刻病理結(jié)果:小鼠的陰莖、腎臟、睪丸表面出現(xiàn)細胞消失,結(jié)構(gòu)破壞;內(nèi)部均出現(xiàn)了不同程度的血管擴張、淤血,但均未發(fā)現(xiàn)壞死。陰莖:電凝陰莖包皮后,病理表現(xiàn)燙傷部位呈空泡狀,結(jié)構(gòu)混亂。而陰莖海綿體內(nèi)可見明顯的血管擴張伴淤血。腎臟:腎臟表面出現(xiàn)電凝造成的機械損傷,表現(xiàn)為細胞結(jié)構(gòu)消失,殘余結(jié)構(gòu)染色加深,實質(zhì)內(nèi)腎小球及腎小管無明顯改變,深處血管輕度擴張伴淤血。睪丸:電凝部位呈現(xiàn)空泡狀,結(jié)構(gòu)混亂,伴出血,靠外層的曲細精管受到機械擠壓,睪丸血管可見擴張淤血。
作者:李云龍葉章群李巧星何瑋桂萌王偉錄王勇鄭紅芳嚴春寅單位:蘇州大學(xué)