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方法學(xué)范文第1篇

畢業(yè)于北京市翠微中學(xué)，參加2004年海淀區(qū)中考，以502分的成績(jī)考入首都師范大學(xué)附屬中學(xué)。

要學(xué)好物理，一定要聽好課。這是老生常談，也是我經(jīng)過一段時(shí)間的摸索后得出的結(jié)論。

原來，我也曾嚴(yán)格按照預(yù)習(xí)――聽課――作業(yè)――復(fù)習(xí)的模式學(xué)習(xí)，可是收效甚微，并且出現(xiàn)了很多讓我感到煩惱的問題，比如在預(yù)習(xí)上花了很多時(shí)間，自以為弄懂了的問題其實(shí)并沒有理解；上課時(shí)總想著預(yù)習(xí)時(shí)碰到的問題，自己的思路與老師的思路總是打架，聽課效果不好；回家后由于要預(yù)習(xí)新課，做習(xí)題和復(fù)習(xí)的時(shí)間明顯減少，復(fù)習(xí)效果不佳……總結(jié)起來只有一句話：什么都做了，卻什么都沒做好。于是我決定改變學(xué)習(xí)方法。

我認(rèn)為預(yù)習(xí)還是很有必要的，但只要大概看一下，畫畫概念即可，10分鐘的時(shí)間足夠。要在課后作業(yè)上下工夫，除了老師布置的作業(yè)，應(yīng)爭(zhēng)取再多做一些題。我把這種學(xué)習(xí)方法叫做“前輕后重學(xué)習(xí)法”。即前面的預(yù)習(xí)少花點(diǎn)時(shí)間，要輕；后面的作業(yè)、復(fù)習(xí)要多花點(diǎn)時(shí)間，要重。

其實(shí)，聽課也應(yīng)“前輕后重”。老師在上課時(shí)往往先回顧上節(jié)課的內(nèi)容，再講解新知識(shí)。我的經(jīng)驗(yàn)是：在“溫故”部分不必太集中注意力，將主要精力放在接下來的重頭戲――“知新”上。據(jù)我所知，大多數(shù)同學(xué)恰恰相反，剛上課時(shí)注意力十分集中，聽著聽著就松弛下來了。人的注意力是有限度的，很少有人能夠做到在一堂課上自始至終保持高度興奮，反正我是做不到。

“前輕后重”的學(xué)習(xí)模式可是我的“九陽真經(jīng)”哦！下面再傳授幾招具體的方法。

很多同學(xué)都覺得物理難學(xué)，因?yàn)榕c其他學(xué)科相比，物理的概念太多了。無概念則無物理，因此理解并掌握物理概念是學(xué)好物理的關(guān)鍵。在學(xué)習(xí)物理概念的過程中，我的絕招是――將物理概念層次化。

例如“勻變速直線運(yùn)動(dòng)”，可從以下幾個(gè)層次進(jìn)行理解：

第一層：物體作直線運(yùn)動(dòng)（體現(xiàn)“直”字）；

第二層：物體的速度是變化的（體現(xiàn)“變”字）；

第三層：物體的速度是均勻變化的（體現(xiàn)“勻”字）。

綜合以上三個(gè)層次，很容易得出定義：物體沿直線運(yùn)動(dòng)，如果在任何相等的時(shí)間間隔內(nèi)速度的變化均相等，這樣的運(yùn)動(dòng)叫做勻變速直線運(yùn)動(dòng)。

不管概念分幾個(gè)層次，也不管各層次之間是平行關(guān)系還是層層遞進(jìn)關(guān)系，只要將每一層的含義弄清即可。

另外，概念的內(nèi)容有輕有重，分層也應(yīng)該有主次。應(yīng)抓住本質(zhì)的內(nèi)容，區(qū)別非本質(zhì)、容易混淆的部分。

例如“力是改變物體運(yùn)動(dòng)狀態(tài)的原因”，可分以下幾個(gè)層次：

第一層：力能改變物體速度的大?。ㄈ缙囲o止運(yùn)動(dòng)運(yùn)動(dòng)中止的過程中，速度由小變大再由大變?。?；

第二層：力能改變物體的運(yùn)動(dòng)方向（如汽車左轉(zhuǎn)彎、右轉(zhuǎn)彎）；

第三層：力不是產(chǎn)生運(yùn)動(dòng)的原因，也不是維持運(yùn)動(dòng)的原因。

顯然第一層和第二層是這個(gè)概念的本質(zhì)內(nèi)容，而第三層則是容易混淆的部分。

最后再傳一招：“捧聽”與“追問”法。

所謂“捧聽”，就是上課時(shí)多回答問題，多提問。有時(shí)候，老師就像演員，然而，沒有一個(gè)演員希望觀眾對(duì)自己的作品毫無反應(yīng)。上課時(shí)多提問，多回答，就相當(dāng)于給老師捧場(chǎng)，老師肯定高興，對(duì)你的印象也加深了，何樂而不為呢？

所謂“追問”，就是有問題要追著老師問，別指望老師來找你。我就經(jīng)常對(duì)老師進(jìn)行瘋狂的“圍追堵截”，在辦公室圍著老師問，在走廊上追著老師問，在校門口堵著老師問，在路上攔住老師問……總之，一定不能讓問題累積成災(zāi)！

最后，祝即將參加中考的同學(xué)考試順利，我在重點(diǎn)高中先替你占座了！

方法學(xué)范文第2篇

【關(guān)鍵詞】視覺傳達(dá) 方法學(xué)

設(shè)計(jì)是把設(shè)想、構(gòu)思通過藝術(shù)化的手段表現(xiàn)出來，它是為實(shí)現(xiàn)某個(gè)目標(biāo)而進(jìn)行設(shè)計(jì)，在設(shè)計(jì)的過程中一直是目標(biāo)導(dǎo)向的推理過程。視覺傳達(dá)也同樣是為成功傳遞某類信息而進(jìn)行設(shè)計(jì)的，雖然對(duì)于海報(bào)、招貼、標(biāo)志、包裝而言可能更加注重形式美感，特別是商業(yè)類的相關(guān)設(shè)計(jì)，但是它們同樣也需要成功地幫助人們傳遞一定的思想。那么視覺傳達(dá)所傳遞的信息，就是我們研究的第一步。

1 分解需要傳遞的信息

我們?cè)谶M(jìn)行任何視覺傳達(dá)設(shè)計(jì)前，都會(huì)獲得一定的信息，例如為“節(jié)約用水”設(shè)計(jì)公益海報(bào)，這條信息看起來很簡(jiǎn)單。但是我們需要對(duì)其進(jìn)行分解：（1）海報(bào)設(shè)計(jì)的目的是讓浪費(fèi)水的現(xiàn)象減少。（2）人們看到海報(bào)能認(rèn)可并欣然接受其傳遞的觀點(diǎn)。（3）此海報(bào)設(shè)計(jì)應(yīng)該符合一類人的文化心理。（4）這一海報(bào)風(fēng)格須和恰當(dāng)?shù)目臻g風(fēng)格相統(tǒng)一。根據(jù)第一條命題得出結(jié)論：海報(bào)最好體現(xiàn)浪費(fèi)水源所產(chǎn)生的惡劣后果，用以驚醒人們；根據(jù)第二條命題得出結(jié)論：海報(bào)內(nèi)容最好貼近實(shí)事，避免人們認(rèn)為海報(bào)過度夸張，產(chǎn)生不信任的心理；根據(jù)第三條命題得出結(jié)論：海報(bào)的設(shè)計(jì)風(fēng)格最好貼近一類人群的文化心理；根據(jù)第四條命題得出結(jié)論：海報(bào)最終要擺放在特定的場(chǎng)合，最好能和這些場(chǎng)所的整體風(fēng)格相一致。這個(gè)例子既體現(xiàn)了對(duì)信息的分解，也是設(shè)計(jì)師邏輯思維進(jìn)行的過程，這需要在掌握大量感性材料的基礎(chǔ)上進(jìn)行，通過推理認(rèn)識(shí)事物的本質(zhì)，除了以上這點(diǎn)，我們還需要對(duì)好的設(shè)計(jì)進(jìn)行歸納整理。

2 歸納成功案例的優(yōu)點(diǎn)

成功案例必然有它的可取之處，如果我們能善于總結(jié)和吸取成功設(shè)計(jì)的優(yōu)點(diǎn)，就能踩在巨人的肩膀上前行。例如，孟謝爾在瀏覽了大量成功的色彩設(shè)計(jì)后，提出了互為補(bǔ)色的一對(duì)色彩關(guān)系，如何搭配才會(huì)比較漂亮的公式，即（A的明度×純度）：（B的明度×純度）=B的面積：A的面積，也就是明度和純度越高，面積就越小；明度和純度越低，面積就越大。

一些搜索引擎的記錄資料也可以給我們提供有用的信息，例如哪些海報(bào)、標(biāo)志、包裝用戶點(diǎn)擊最多，評(píng)論最好？它們有沒有共同的優(yōu)點(diǎn)？哪些點(diǎn)擊又最少，評(píng)論最差？

3 設(shè)計(jì)創(chuàng)意

創(chuàng)意不會(huì)憑空而來，它必然是在鎖定了目標(biāo)以后，經(jīng)過大量思索而來的。創(chuàng)意的產(chǎn)生需要通過觀看、體驗(yàn)大量的設(shè)計(jì)作品，以一定的信息內(nèi)容為基礎(chǔ)。創(chuàng)意出現(xiàn)的瞬間，設(shè)計(jì)師需要把它記錄下來，如果聽之任之、無動(dòng)于衷，那好的創(chuàng)意必將離你遠(yuǎn)去。因此，設(shè)計(jì)師最好隨身攜帶筆記本，以便能夠隨時(shí)捕捉靈感。也正像剛才所談，靈感的出現(xiàn)必然是經(jīng)歷了由量變到質(zhì)變的一個(gè)飛躍，量變發(fā)展到一定程度必然引起質(zhì)變，只是人們?cè)诹孔兊倪^程中，大多被繁瑣的思考嚇退了，沒有等到質(zhì)變那一刻。所以我們會(huì)聽說很多偉大的人物在冥思苦想的時(shí)候，會(huì)做出一些讓人啼笑皆非的事情。而這也恰恰是過量思考的體現(xiàn)，一個(gè)偉大的人物尚且如此過量思考，廢寢忘食。我們這些普通人要想產(chǎn)生創(chuàng)意就需要前期進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的思索，那么靈感最終會(huì)在你的腦海中出現(xiàn)。

4 缺點(diǎn)列舉法

缺點(diǎn)的提出，就像“良藥苦口利于病，忠言逆耳利于行”，雖然痛苦，但卻又提高。設(shè)計(jì)師對(duì)于自己親手設(shè)計(jì)的作品，往往由于投入了大量的時(shí)間和精力，產(chǎn)生了深厚的感情。如果此時(shí)要求繼續(xù)挑毛病的話，設(shè)計(jì)師往往很難理解和接受。但是必須挑出毛病，作品才能進(jìn)一步完善，作品才會(huì)呈現(xiàn)得更加完美。缺點(diǎn)列舉法是改進(jìn)和提升設(shè)計(jì)的有效方法。

5 特性列舉法

問題越復(fù)雜，就越需要對(duì)其進(jìn)行分解，縮小問題才能產(chǎn)生創(chuàng)造性地構(gòu)思。在設(shè)計(jì)過程中，有時(shí)我們面對(duì)的設(shè)計(jì)對(duì)象比較復(fù)雜，如果不對(duì)其進(jìn)行分解，很難找出改進(jìn)的落腳點(diǎn)。例如，一個(gè)包裝設(shè)計(jì)，需要解決材料、色彩、字體、圖形、造型等多方面的問題。如果你沒有在最初設(shè)計(jì)時(shí)就劃分不同的設(shè)計(jì)方向，那么你在之后的設(shè)計(jì)中往往會(huì)陷入思維混亂的局面?；麨榱恪⒏鱾€(gè)擊破才是解決復(fù)雜問題的有效途徑。

6 包裝設(shè)計(jì)中的行為模擬

包裝設(shè)計(jì)在使用過程中會(huì)涉及到消費(fèi)者的操作，當(dāng)一些新型的包裝投入市場(chǎng)前，應(yīng)該先進(jìn)行相應(yīng)的消費(fèi)者行為模擬測(cè)試。在模擬測(cè)試中，設(shè)計(jì)師要注意幾個(gè)問題：（1）設(shè)計(jì)師預(yù)期的消費(fèi)者行為是否出現(xiàn)？（2）在實(shí)際操作中，碰到什么問題？（3）預(yù)期的包裝創(chuàng)新設(shè)計(jì)是否發(fā)揮作用？如果測(cè)試結(jié)果和最初的預(yù)期不一致，就應(yīng)該進(jìn)行修正。

方法學(xué)范文第3篇

[關(guān)鍵詞]腳氣散；含量測(cè)定；硼酸

腳氣散由水楊酸、苯甲酸、硼酸等原料制成，具有抗真菌功效，用于腳癬所致的趾間糜爛、奇癢等癥，臨床使用多年，反映效果良好，幾無毒副作用。長(zhǎng)久以來，由于屬于醫(yī)院制劑，應(yīng)用范圍有限，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有建立有效成分的含量測(cè)定方法，根據(jù)目前我國對(duì)醫(yī)院制劑的新要求，筆者對(duì)處方中的水楊酸等有效成分的含量測(cè)定進(jìn)行了方法學(xué)研究，現(xiàn)簡(jiǎn)要介紹如下。

1儀器、試藥與樣品

BS210S電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）；硼酸含量為：99.5%（自貢鴻鶴制藥有限公司、批號(hào)：100311）、苯甲酸含量為：99.1%（鎮(zhèn)江前進(jìn)化工有限公司、批號(hào)：100210）、水楊酸含量為：99.6%（鎮(zhèn)江前進(jìn)化工有限公司、批號(hào)：100405）均為合格藥用原料；其余試劑均為分析純。由達(dá)州市中心醫(yī)院提供腳氣散3批，批號(hào)分別為：091113、091218、100220；達(dá)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院提供腳氣散3批，批號(hào)分別為：100618、100628、100716；規(guī)格：均為每袋裝28g；包裝：藥品包裝用復(fù)合膜，4袋/盒。

2方法擬定

2.1原理：苯甲酸、水楊酸與硼酸是腳氣散的有效成分，雖有文獻(xiàn)【1】【2】【3】記載采用中和法測(cè)定單一成分的含量，但三種成分混合狀態(tài)下的含量測(cè)定還未查閱到相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道，由于水楊酸、苯甲酸溶解性能非常近似，不能進(jìn)行有效分離，故采用氫氧化鈉滴定液滴定測(cè)定二者總量，硼酸能與前二者進(jìn)行有效分離，可單獨(dú)測(cè)定含量，方法簡(jiǎn)便，結(jié)果快速、準(zhǔn)確。具體原理如下。

水楊酸、苯甲酸乙醚層加水，加酚酞指示液，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，生成苯甲酸鈉及水楊酸鈉；微過量的氫氧化鈉溶液顯淡紅色為終點(diǎn)。

反應(yīng)式C7H6O3+NaOHC7H5O3Na+H2O

C7H6O2+NaOHC7H5O2Na+H2O

硼酸（H3BO3）是一種極弱的酸（Ka1=7.3×10-10），因CaKa

反應(yīng)式H3BO3+2C3H8O3[C3H6O3BC3H6O3]-H++3H2O

H++OH-H2O

2.2苯甲酸和水楊酸總量取本品5包研勻，精密稱取約0.3g，置分液漏斗中，加乙醚20ml、新沸過的冷水20ml，振搖使溶。靜置，分取乙醚層，加新沸過的冷水20ml，加酚酞指示液2滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定至水層顯淡紅色。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于12.81mg的C7H6O2及C7H6O3總量。

2.3硼酸含量取上述項(xiàng)下的水層加中性甘油20ml，加新沸過的冷水20ml，加酚酞指示液2滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液顯淡紅色。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于6.183mg的H3BO3。

3驗(yàn)證試驗(yàn)

3.1樣品前處理研究：

3.1.1萃取溶劑的考察

有文獻(xiàn)【1】【2】記載，水楊酸及苯甲酸在乙醚中易溶，硼酸在水中溶解。故本實(shí)驗(yàn)采用乙醚振搖萃取，可使水楊酸及苯甲酸與硼酸得到良好的分離。因水楊酸、苯甲酸溶解性能相近似，不能得到分離，故測(cè)定總量。

3.1.2萃取時(shí)間的考察

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見下表

萃取時(shí)間（分鐘 1 2 8

硼酸含量 98.5% 98.7% 98.9%

水楊酸及苯甲酸總量 98.6% 98.7% 98.5%

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，萃取時(shí)間對(duì)結(jié)果的影響不大，故以充分溶解為度。

3.2、方法學(xué)驗(yàn)證

3.2.1樣品測(cè)定

3.2.1.1硼酸取樣品5包研勻，精密稱取約0.3g，置分液漏斗中，加乙醚20ml、新沸過的冷水20ml，振搖使溶解，分取水層，加中性甘油20ml、新沸過的冷水20ml，加酚酞指示液2滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液顯淡紅色。按每1ml氫氧化鈉液（0.1mol/L）相當(dāng)于6.183mg的硼酸（H3BO3）計(jì)算，其結(jié)果（見表1）。

表1樣品測(cè)定結(jié)果

序號(hào) 樣品批號(hào) 樣品取用量（mg） 樣品硼酸標(biāo)示含量（mg） 測(cè)得硼酸實(shí)際含量（mg） 標(biāo)示百分含量 RSD

001 100618 300.8 129.0 126.5 98.0%

002 100618 300.2 128.8 127.1 98.7% 0.5%

003 100618 301.1 129.2 127.7 98.9%

004 100628 303.5 130.2 128.5 98.7%

005 100628 298.5 128.1 125.5 98.0% 0.4%

006 100628 299.9 128.7 126.1 98.0%

007 100716 300.2 128.8 127.1 98.7%

008

009 100716

100716 301.0

302.2 129.1

129.6 127.8

128.6 99.0%

99.2% 0.3%

3.2.1.2加樣回收

精密稱取在裝有五氧化二磷為干燥劑的干燥器中干燥24h的硼酸，加入樣品中同前法平行測(cè)定，按下列公式計(jì)算回收率，其結(jié)果（見表2）。

表2加樣回收

序號(hào) 加入量

（mg） 測(cè)出量

（mg） 回收率

（%） 平均回收率（%） RSD

001 108.9 107.8 99.0% 99.2% 0.3%

002 106.5 105.3 98.9%

003 151.2 150.7 99.7%

004 150.3 149.0 99.1%

005 201.1 200.3 99.6%

006 200.5 198.5 99.0%

3.2.1.3空白實(shí)驗(yàn)精密稱取在裝有五氧化二磷為干燥劑的干燥器中干燥24h的水楊酸、苯甲酸，按處方比例混合均勻后，同前法平行測(cè)定，其結(jié)果（見表3）。

表3空白實(shí)驗(yàn)

序號(hào) 加入量

（mg） 測(cè)出量

（mg） 測(cè)出量

（%） 平均值

（%）

001 102.0 1.1 1.1% 0.9%

002 151.5 1.4 0.9%

003 201.2 1.6 0.8%

3.2.2樣品測(cè)定

3.2.2.1苯甲酸和水楊酸總量分取2.1項(xiàng)下乙醚層，加新沸過的冷水20ml，加酚酞指示液2滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定至水層顯淡紅色。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于12.81mg的C7H6O2及C7H6O3總量。其結(jié)果（見表4）。

表4樣品測(cè)定結(jié)果

序號(hào) 樣品批號(hào) 樣品取用量（mg） 樣品總量標(biāo)示含量（mg） 測(cè)得總量實(shí)際含量（mg） 標(biāo)示百分含量 RSD

001 100618 300.8 171.8 169.9 98.9% 0.4%

002 100618 300.2 171.4 170.2 99.3%

003 100618 301.1 171.9 169.3 98.5%

004 100628 303.5 173.3 172.5 99.5% 0.4%

005 100628 298.5 170.4 169.3 99.3%

006 100628 299.9 171.2 169.2 98.8%

007 100716 300.2 171.4 169.0 98.6% 0.4%

008 100716 301.0 171.9 169.0 98.3%

009 100716 302.2 172.6 168.8 97.8%

3.2.2.2加樣回收精密稱取在裝有五氧化二磷為干燥劑的干燥器中干燥24h的水楊酸、苯甲酸，按處方比例混合均勻后，加入樣品中同前法平行測(cè)定，其結(jié)果（見表5）。

表5加樣回收

序號(hào) 加入量

（mg） 測(cè)出量

（mg） 回收率

（%） 平均回收率（%） RSD

001 106.1 104.6 98.6% 99.0% 0.3%

002 105.5 104.5 99.0%

003 150.2 148.9 99.1%

004 150.9 148.9 98.7%

005 201.2 200.0 99.4%

006 200.9 199.5 99.3%

3.2.2.3空白實(shí)驗(yàn)精密稱取在裝有五氧化二磷為干燥劑的干燥器中干燥24h的硼酸，同前法平行測(cè)定，其結(jié)果（見表6）

表6空白實(shí)驗(yàn)

序號(hào) 加入量

（mg） 測(cè)出量

（mg） 回收率

（%） 平均值

（%）

001 108.9 1.0 1.0% 0.9%

002 125.9 1.1 0.9%

003 131.2 1.1 0.8%

3.3樣品測(cè)定值與標(biāo)示量比較值

苯甲酸及水楊酸總量和硼酸測(cè)定結(jié)果按標(biāo)示量%計(jì)算，結(jié)果見下表（表7）

批號(hào) 091113 091218 100220 100614 100628 100716

硼酸含量 94.9% 92.5% 98.9% 98.4% 98.3% 98.9%

水楊酸及苯甲酸總量 98.2% 102.2% 92.3% 98.9% 99.1% 98.2%

3.4含量限度的確定

根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，含量測(cè)定限度訂為標(biāo)示量的90.0%～110.0%，收入標(biāo)準(zhǔn)正文。

3.5樣品取用量經(jīng)過實(shí)驗(yàn)得到以下結(jié)果：

樣品量（克） 消耗NaOH滴定液（0.1mol/L）體積（ml）

苯甲酸和水楊酸總量 硼酸

0.2506 11.20 17.40

0.3020 13.50 21.00

0.3511 15.70 24.40

根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，確定樣品取用量約為0.3克較為合理。

4討論

苯甲酸及水楊酸總量滴定度的說明：分別按處方量比例計(jì)算得到，（13.81×214÷571）+（12.21×357÷571）=12.81。

5其他

處方組成：水楊酸適量苯甲酸適量硼酸適量，制成1000g

參考文獻(xiàn)：

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（二部）[M].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005，2：64.321.813.

方法學(xué)范文第4篇

【關(guān)鍵詞】 血氨；方法學(xué)；光密度

正常人體內(nèi)游離血氨（blood ammonia，BA）含量極低（正常值20～60 μmol/L）［1］，其主要來源于體內(nèi)蛋白質(zhì)在代謝過程中產(chǎn)生的氨基酸，以及經(jīng)脫氨作用分解而來的內(nèi)源性氨，正常情況這種氨可形成酰胺及合成其他含氮化合物而不斷地被轉(zhuǎn)化；另一來源是蛋白質(zhì)類食物在腸道內(nèi)經(jīng)細(xì)菌分解而成的外源性氨，正常情況下此氨經(jīng)門靜脈進(jìn)入肝臟被合成為脲，經(jīng)腎臟排出體外。然而在發(fā)生代謝障礙性疾病，如肝性昏迷、肝性腦病、重型肝炎、尿毒癥等由于氨不能正常代謝排出體外而引起B(yǎng)A升高。肝功能極度衰竭或血液不能正常地流經(jīng)肝臟轉(zhuǎn)換等嚴(yán)重肝臟疾病，氨不能從循環(huán)中及時(shí)清除均可使血氨增高［1］。高BA有神經(jīng)毒性，BA的測(cè)定對(duì)于肝硬化門脈高壓、肝昏迷、Reve’s綜合征及兒科的一些先天性代謝紊亂等病的診斷、觀察和預(yù)后判斷有著重要意義［2］。BA的測(cè)定方法有微量擴(kuò)散法、比色法、離子交換法、氨電極法、酶法等。筆者在結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有條件，參考國內(nèi)外有關(guān)文獻(xiàn)建立快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)BA方法，為臨床該類疾病的診斷、治療提供參考。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

電子天平 COBS120型（朝鮮COBS公司），紫外分光光度儀HP8453（美國惠普），離心沉淀器800型（上海手術(shù)儀器廠），YKHI型液體快速混勻器（江西醫(yī)療器械廠），DHW420三用電熱恒溫水箱（北京東霞科學(xué)儀器廠）。

1.2 試藥

鎢酸鈉（天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)030906），硫酸銨（重慶北碚化學(xué)試劑廠，批號(hào)050329），亞硝基鐵氰化鈉（上海三愛思試劑公司，批號(hào)20020204），苯酚（重慶北碚化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20000924），氫氧化鈉（重慶川江化學(xué)試劑廠，批號(hào)20000312），次氯酸鈉（重慶川東化工集團(tuán)化學(xué)試劑廠，批號(hào)20040904），硫酸銨（重慶北碚化學(xué)試劑廠，批號(hào)050329），硫酸（重慶川江化學(xué)試劑廠，批號(hào)20000105），所用試藥均為分析純，水為新制無氨蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 儲(chǔ)備溶液的配制［2］

無氨水的制備：參照文獻(xiàn)［3］取重蒸水1 000 mL，加稀硫酸1 mL與高錳酸鉀試液1 mL，蒸餾即得備用。

酚顯色劑：精取亞硝基鐵氰化鈉25.00 mg，與適量苯酚混合后加無氨水至100 mL，過濾即得。

堿性次氯酸鈉溶液：精取250 mg次氯酸鈉，氫氧化鈉2 500 mg，溶于100 mL無氨水中即得。

0.5 mol/L硫酸溶液、5 mmol/L硫酸銨溶液參照文獻(xiàn)方法［3］配制。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別精取“2.1”項(xiàng)的硫酸銨儲(chǔ)備液20、200、500、1 000、1 500、2 000、4 000 μL置于50 mL容量瓶，立即加無氨水至刻度即得10、20、50、100、150、200、400 μmol/L的硫酸銨系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

取“2.2”項(xiàng)的硫酸銨系列標(biāo)準(zhǔn)溶液各1 mL，分別加入10 %的鎢酸鈉溶液、0.5 mol/L硫酸溶液各0.5 mL，渦旋震蕩1 min，4 000 r/min離心5 min，分取上清液1 mL，依次加入酚顯色劑和堿性次氯酸鈉溶液各1 mL，渦旋1 min后置37 ℃水浴20 min，以空白管校正后于630 nm處測(cè)定OD值；將所測(cè)得的吸收度OD值對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸處理得回歸方程：OD=0.0017C+0.23，相關(guān)系數(shù)r=0.9964，根據(jù)(NH4)2SO4與游離氨的定量關(guān)系，即得游離氨濃度在5～200μmol/L的定量線性范圍（見圖1）。

2.4 臨床樣本的測(cè)定

參考國內(nèi)外有關(guān)文獻(xiàn)，經(jīng)優(yōu)化后測(cè)定BA的方法為：離體血液立即加入過量定量的10%鎢酸鈉及0.5 mol/L硫酸溶液，使蛋白沉淀的同時(shí)，血液中的氨與硫酸形成硫酸銨而存留于血濾液中，再以酚次氯酸鈉顯色劑顯色后于波長(zhǎng)630 nm處測(cè)定OD值，即可定量測(cè)定BA。

2.5 方法的回收試驗(yàn)

按“2.2”項(xiàng)的方法分別配制高、中、低（400、200、40 μmol/L）的硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，各取1mL分別加入1 mL無氨正常血漿，混勻后精密量取1 mL按2.4項(xiàng)下的方法分別精密加入0.5 mL 10 %鎢酸鈉和0.5 mol/L硫酸溶液各0.5 mL，以下按準(zhǔn)曲線項(xiàng)下相應(yīng)的方法處理并分別測(cè)定其OD值，將測(cè)得的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算測(cè)得量與回收率，結(jié)果見表1。表1 血氨回收試驗(yàn)（略）

2.6 精密度試驗(yàn)

配制低、中、高（25、50、75 μmol/L）3個(gè)濃度含無氨正常血漿的硫酸銨溶液各3份，日內(nèi)4 ℃冷藏保存，每間隔1 h按2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的方法測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定5次。另取相同樣品18 ℃冷凍保存，每日測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定5日。所得OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算得游離氨濃度，結(jié)果見表2。表2 血氨精密度試驗(yàn)（略）

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取硫酸銨溶液適量配制成75 μmol/L含無氨正常血漿的硫酸銨溶液，分別置于4 ℃冰水浴和18 ℃條件下儲(chǔ)藏保存，每次平衡5 min后各取1 mL樣品，按“2.6”精密度試驗(yàn)項(xiàng)下的測(cè)定方法，4 ℃下保存的標(biāo)本在1 d內(nèi)每間隔2 h測(cè)定1次，每次平行測(cè)定5份，直至14 h共測(cè)定8次；18 ℃條件下保存的標(biāo)本每天定時(shí)測(cè)定1次，每次平行測(cè)定5份，連續(xù)測(cè)定7 d，將測(cè)得的OD值通過標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算游離氨的實(shí)際含量，結(jié)果見表3。由表可知新鮮血中游離氨極不穩(wěn)定，常溫和4 ℃冷藏保存均不穩(wěn)定，宜在2 h內(nèi)測(cè)定，在18 ℃下保存也宜在24 h內(nèi)測(cè)定。表3 血氨穩(wěn)定性試驗(yàn)（略）

2.6 臨床應(yīng)用

選擇我院近2年來的住院患者，除外肝、膽、腎疾病患者。腦梗塞患者28例，其中男16例，女12例，平均年齡（55.8±10.5）歲；腦溢血患者25例，其中男15例，女10例，平均年齡（60.4±15.4）歲；腦炎患者10例，其中男6例，女4例，平均年齡（39.8±13.5）歲。全部病例均經(jīng)臨床及CT和（或）MRI檢查。對(duì)照組25例，經(jīng)檢查全部健康正常，其中男13例，女12例，平均年齡（57.2±14.3）歲。全部患者均在昏迷期及恢復(fù)期各采取肘靜脈血1～2 mL，肝素抗凝，立即用上述方法測(cè)定血氨，對(duì)照組也同時(shí)采血測(cè)定血氨。

結(jié)果對(duì)照組血氨含量為（56.53±29.15）μmol/L，腦梗塞組昏迷期血氨含量為（179.00±108.59）μmol/L，恢復(fù)期為（66.89±26.67）μmol/L，昏迷期與對(duì)照組經(jīng)χ2檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=12.68，P0.05）。腦溢血組昏迷期血氨含量為（146.97±72.41）μmol/L，恢復(fù)期為（60.46±24.39）μmol/L，昏迷期與和對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=11.78，P0.05）。腦炎組昏迷期血氨含量為（197.17±62.10） μmol/L，恢復(fù)期為（59.83±39.59）μmol/L，昏迷期與對(duì)照組顯著增高（χ2=9.72，P0.05）。

3 討論

由表3結(jié)果表明：標(biāo)本放置時(shí)間越長(zhǎng)，其血氨濃度越高，主要原因可能是血液細(xì)胞自身代謝或部分微生物代謝后產(chǎn)生氨致使其血氨濃度升高。為保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確應(yīng)注明標(biāo)本的采集時(shí)間并立即送檢，送檢標(biāo)本迅速測(cè)定（30 min內(nèi)），同時(shí)進(jìn)行平行質(zhì)控監(jiān)測(cè)。病人標(biāo)本采集后如不能立即測(cè)試，應(yīng)在2～8 ℃冷藏最多3 h測(cè)定，18 ℃冷凍保存最多24 h測(cè)定。

正常情況下，體內(nèi)大部分氨經(jīng)過尿素循環(huán)形成尿素自尿中排出，部分為機(jī)體再利用，不會(huì)產(chǎn)生蓄積，而在尿素循環(huán)障礙疾病時(shí)則將出現(xiàn)血氨蓄積，在新生兒當(dāng)血氨大于150 μmol/L、嬰幼兒大于80 μmol/L、成人大于70 μmol/L可確定為高氨血癥［45］。血氨可干擾腦的能量代謝，腦組織在氨的生成中需消耗某些輔酶、高能磷酸及大量α酮戊二酸，引起高能磷酸化合物濃度的降低，過量氨還可能抑制丙酮酸脫氫酶活力而影響乙酰CoA的生成和乙酰膽堿的合成，干擾三羧酸循環(huán)，氨還可抑制Na+K+ATP酶，直接影響鉀、鈉在神經(jīng)細(xì)胞膜上的正常分布，干擾神經(jīng)傳導(dǎo)活動(dòng)，當(dāng)腦組織炎癥、缺血、缺氧時(shí)就影響了氨的代謝使氨增高。腦缺血后可導(dǎo)致生化代謝方面的變化，影響氨的平衡，腦組織內(nèi)氨水平增高。有實(shí)驗(yàn)表明，大鼠在腦循環(huán)中斷5 min后，其缺血的皮層氨含量從對(duì)照值的0.28 mmol/L升高到1.12 mmol/L。在腦組織內(nèi)，氨的解毒主要靠α酮戊二酸的氨化作用以及氨與谷氨酸結(jié)合生成谷氨酰胺，但后者的反應(yīng)需要消耗ATP，在缺血情況下α酮戊二酸的氨化起主要作用。同時(shí)昏迷患者常常禁食，致使液體攝入減少或用脫水劑過量，從而致使血氨顯著增高。此外，由于感染、高熱等增加機(jī)體代謝，也使內(nèi)源性血氨增高。國外學(xué)者KanamoriK等研究了小鼠體內(nèi)的氨、谷氨酰胺以及谷氨酰胺合成酶與腦病的關(guān)系，表明腦病與氨相關(guān)［6］。國內(nèi)李英杰等［7］測(cè)定22例腦梗塞患者的血氨和CSF氨含量，結(jié)果表明急性期血氨和CSF氨顯著高于對(duì)照組（P

參考文獻(xiàn)

［1］李影林. 臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)手冊(cè)［M］. 第1版. 吉林: 吉林科學(xué)技術(shù)出版社， 1990: 503.

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方法學(xué)范文第5篇

【關(guān)鍵詞】 金標(biāo)法；乙肝表面抗原

乙肝表面抗原（HBsAg）是乙型肝炎病毒外殼蛋白中的主要成分陽性是感染乙肝病毒的標(biāo)志，是檢查乙肝血清標(biāo)志物中較重要的一項(xiàng)［1］。近年來發(fā)展的金標(biāo)法檢測(cè)HBsAg，與傳統(tǒng)的酶免疫法（EIA）相比，具有簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，不需要儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，能滿足臨床急診快速出結(jié)果的需要，且較適合使用于流行病學(xué)調(diào)查，應(yīng)用前景非常寬廣。

1 材料與方法

1.1 材料 （1）金標(biāo)試紙條：上海洪泰生物技術(shù)發(fā)展有限公司產(chǎn)品。（2）HBsAg靈敏度標(biāo)準(zhǔn)參比品：中國藥品生物制品檢定所產(chǎn)品。（3）HBsAg酶免疫診斷試劑盒，HBsAg、HBcAg、HBeAg陽性對(duì)照血清：中外合資上海實(shí)業(yè)科華生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。（4）血清標(biāo)本：1200份體檢及臨床血清標(biāo)本，其中乙型肝炎患者血清172份，健康人血清1028份。

1.2 方法 （1）5ng/ml標(biāo)準(zhǔn)參比品 用生理鹽水分別稀釋成4ng/ml，3ng/ml，2ng/ml，1ng/ml幾種濃度，各取0.1～0.2ml置于潔凈試管中，用金標(biāo)法試紙條進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按照說明書所述，將測(cè)試條有金標(biāo)抗體端插入血清內(nèi)，放置一定時(shí)間后觀察結(jié)果。（2）HBsAg、HBcAg、HBeAg陽性對(duì)照血清各取3份，每份為0.1～0.2ml加入已備好潔凈試管中，用金標(biāo)法對(duì)各份血清進(jìn)行檢測(cè)。（3）分別用金標(biāo)法、EIA法對(duì)1200份體檢及臨床血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。（4）將金標(biāo)試紙條各10條分置于37℃、室溫（25℃）保存5天，做熱穩(wěn)定試驗(yàn)。

2 結(jié)果

（1）用金標(biāo)法對(duì)5種濃度的HBsAg陽性標(biāo)準(zhǔn)參比品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果確定時(shí)間：強(qiáng)陽性參比品（4～5ng/ml）在2min內(nèi)即可在檢測(cè)線見到紅色膠體金顆粒聚集；陽性參比品（3mg/ml）在5min內(nèi)即可出現(xiàn)兩條紫紅色線條，弱陽性標(biāo)本（1～2ng/ml）約需20min確定結(jié)果。說明了金標(biāo)法敏感性較強(qiáng)，靈敏度可達(dá)1ng/ml，可以滿足臨床要求。（2）將金標(biāo)試紙條分別插入HBsAg、HBcAg、HBeAg陽性對(duì)照血清各3份中，結(jié)果只有HBsAg陽性對(duì)照血清管中試紙條出現(xiàn)兩條紅色線，說明該試紙條只與HBsAg有特異性反應(yīng)，特異性強(qiáng)，不易出現(xiàn)假陽性。（3）分別用金標(biāo)法、EIA法對(duì)1200份體檢及臨床血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，所得結(jié)果顯示：金標(biāo)法與EIA法所做結(jié)果有162例陽性結(jié)果一致，有1026例陰性結(jié)果一致，有12份血清兩法檢測(cè)結(jié)果不符，比較兩法檢測(cè)HBsAg的一致性，符合率為99.0%。12份兩法結(jié)果不符的血清中，有5例（乙肝組3份，健康組2份）金標(biāo)法呈弱陽性，而EIA陰性，但這5份血清EIA吸光度值均接近臨界值。另7例（均為乙肝組血清）金標(biāo)法陰性，EIA為HBsAg弱陽性。通過計(jì)算，可得出金標(biāo)法臨床靈敏度為95.9%，臨床特異性為99.8%，臨床準(zhǔn)確度為99.2%，陽性預(yù)測(cè)率為98.8%。（4）將金標(biāo)法試紙于37℃、25℃各10條放置5天后，測(cè)定10份不同血清標(biāo)本（乙肝組與健康組各5例），所得結(jié)果與放置4℃的試紙檢測(cè)結(jié)果無明顯差別。說明金標(biāo)法試紙條性質(zhì)較穩(wěn)定，易保存。

3 討論

HBsAg的檢測(cè)可作為乙型肝炎病毒感染的一個(gè)重要指標(biāo)，目前多采用EIA或EIA一步法，由于其試劑盒中酶標(biāo)試劑不易保存，操作中需通過加樣、加試劑、孵育、洗板等一系列過程，延時(shí)長(zhǎng)，且易引起標(biāo)本間交叉污染或陽性標(biāo)本對(duì)人體的污染，給實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作帶來一些不便，不能滿足臨床急診快速出結(jié)果的要求。

近年來，隨著現(xiàn)代免疫化學(xué)技術(shù)的發(fā)展，出現(xiàn)了膠體金免疫層析法［2］。該法是將羊抗HBs、羊抗鼠IgG分別固定在特制的纖維素試帶上并呈兩條線上下排列，羊抗鼠IgG線在試帶條上方為陰性對(duì)照，抗HBs在下方為測(cè)定。試帶條中含均勻分布的膠體金-抗HBs和無關(guān)的金標(biāo)記鼠IgG。檢測(cè)時(shí)血清沿試帶上行，其中HBsAg在上行過程中與膠體金-抗HBs結(jié)合，待行至羊抗HBs線時(shí)，形成金標(biāo)記抗HBs-HBsAg-抗HBs復(fù)合物而在試帶上顯紅色線，試帶上無關(guān)的金標(biāo)鼠IgG隨血清繼續(xù)上行至羊抗鼠IgG處時(shí)形成紅色金標(biāo)復(fù)合物為陰性對(duì)照。判斷結(jié)果時(shí)，出現(xiàn)兩條紅色線時(shí)為陽性，只在對(duì)照線出現(xiàn)紅色線時(shí)為陰性，如對(duì)照線未出現(xiàn)紅色，則表明該試紙條失效。該法集免疫反應(yīng)與免疫層析的特點(diǎn)，靈敏度高，特異性強(qiáng)，且試紙條輕便易帶易保存、易操作，無需儀器設(shè)備，病人標(biāo)本可隨來隨查，20min內(nèi)即可發(fā)出結(jié)果，適合于大批健康體檢、流行病學(xué)調(diào)查及門診急診標(biāo)本的應(yīng)用。

當(dāng)然，該法與EIA相比，只能作定性檢查，靈敏度稍差，易將少數(shù)弱陽性標(biāo)本忽視，出現(xiàn)假陰性，具體原因及改善辦法，有待進(jìn)一步探討。

【參考文獻(xiàn)】