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轉基因克隆動物技術是轉基因動物技術與克隆動物技術的有機結合,它是以動物體細胞(包括動物成體體細胞、胎兒成纖維細胞等)為受體,將目的基因導入其中,再以這些體細胞為核供體,進行動物克隆。這種結合不僅僅是簡單的技術疊加,而是技術的重組、綜合和優(yōu)化,它實現(xiàn)了高效率、低成本的轉基因動物制作,已成為當前動物生物技術領域研究的新熱點。
1.1轉基因克隆動物技術的發(fā)展歷程
Wilmut研究小組在取得克隆綿羊“多利”后,Schnieke等用陽離子脂質體介導外源基因轉染到培養(yǎng)的綿羊胎兒成纖維細胞中,然后將細胞融入去核卵母細胞中,經(jīng)激活后在體外培養(yǎng)至囊胚期,移入同步受體母羊中,最后獲得6只轉基因綿羊。
Cibelli等用同一方法獲得了3只轉基因牛。
2004年6月21日,日本靜岡縣中小家畜實驗場宣布,該實驗場和北里大學合作,成功克隆出了體內含有水母基因的轉基因豬。該實驗第一次成功地把轉基因技術和體細胞克隆技術有機地結合在一起。
2006年12月24日,我國東北農業(yè)大學劉忠華教授的轉基因克隆豬獲得成功,3頭含綠色熒光蛋白的轉基因克隆豬自然分娩。
1.2轉基因克隆動物培育過程
轉基因克隆動物的培育過程如圖1所示。
2 轉基因克隆動物涉及的生物學問題
2.1生物技術
2.1.1基因工程
圖1中過程A表示目的基因的獲取,目前常用的方法有以下幾種:①從基因文庫中獲取目的基因;②利用PCR技術擴增目的基因;③通過DNA合成儀用化學方法直接人工合成。得到目的基因后,還要構建基因表達載體,才能導入受體細胞。
圖1中過程C表示將目的基因導入受體細胞,常用的方法為顯微注射法。目的基因導入受體細胞后,是否可以穩(wěn)定維持和表達其遺傳特性,還需要對目的基因進行分子水平上的檢測。檢測方法包括:DNA分子雜交法、DNA-RNA雜交法和抗原一抗體雜交法。
2.1.2細胞工程
圖1中過程B表示從供體動物的某一部位取體細胞,在體外進行動物細胞培養(yǎng),得到能進行傳代的體細胞。過程D和E表示采用顯微操作技術,用微型吸管吸出供體細胞的細胞核,注入去核的卵母細胞中(也有人將供體細胞注入受體細胞中)。過程F表示從受體動物中獲得卵巢,再采集卵母細胞,在體外培養(yǎng)成熟,即培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期。過程G表示通過電刺激使兩個細胞融合,得到重組細胞。
2.1.3胚胎工程
圖1中過程H表示胚胎的早期培養(yǎng)。將重組細胞移入發(fā)育培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng),早期胚胎的培養(yǎng)液成分較復雜,除一些無機鹽和有機鹽類外,還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營養(yǎng)成分,以及血清等物質。當胚胎發(fā)育到適宜的階段時,進行胚胎移植(過程I),或將胚胎冷凍保存。在胚胎移植之前,需要對代孕動物用激素進行同期處理,使胚胎在移植前后所處的生理環(huán)境保持一致。胚胎的移植方法有兩種:①手術法:引出受體子宮和卵巢,將胚胎注入子宮角,縫合創(chuàng)口;②非手術法:將裝有胚胎的移植管送入受體母牛子宮的相應部位,注入胚胎。得到早期胚胎后,可通過胚胎分割技術以獲得更多的轉基因動物。
2.2生物遺傳
通過轉基因克隆動物技術獲得轉基因動物的過程屬于無性生殖,后代的遺傳物質除外源基因外,基本與供體動物相同,其核基因型由核移植的供體細胞決定,性別也與其相同。因此,后代的遺傳性狀基本與供體動物一致。該轉基因克隆動物的細胞質基因來自去核的卵母細胞,也在某些方面控制著生物的性狀,這樣,后代與供體動物還是存在少量差異的。這種差異引起的因素還可能來自影響后天生長發(fā)育的外界條件。
3 轉基因克隆動物技術的優(yōu)勢
3.1生產效率高
顯微注射法等傳統(tǒng)的轉基因技術具有隨機性和不可見性,外源基因的拷貝數(shù)和整合位點都是隨機的,還可能出現(xiàn)嵌合體,整合率極低,得到的轉基因動物數(shù)量更少。據(jù)統(tǒng)計有的醫(yī)療公司從1989年至1997年用顯微注射技術生產轉基因動物平均51.4個動物才得到一個轉基因后代,而得到一個轉基因克隆后代只需20.8個母體。
3.2周期短,成本低
通過核移植克隆迅速產生大量同質的轉基因克隆動物,轉基因克隆技術在理論上只需一代時間,就可以產生一個完整的轉基因克隆動物系,從而節(jié)約了時間和成本,由于植入代孕母畜的全是轉基因胚胎,因而提高生產效率,降低費用。
關鍵詞:雪旺細胞基因轉染腦源性神經(jīng)生長因子
中圖分類號:R329.28 文獻標志碼:B 文章編號:1004-7484(2010)12-0029-03
腦源性神經(jīng)生長因子(BDNF)是一種重要的神經(jīng)營養(yǎng)因子,能夠促進創(chuàng)傷后神經(jīng)的修復與再生和減少神經(jīng)元的死亡[2]。本研究通過將攜帶有BDNF基因的重組腺病毒表達載體轉染體外培養(yǎng)的雪旺細胞,以檢測BDNF基因的調控表達情況。探索基因治療外周神經(jīng)損傷的新途徑,為進一步臨床應用治療基因通過腺病毒載體轉染雪旺細胞促進周圍神經(jīng)損傷修復奠定實驗基礎。
1材料與方法
1.1材料
倒置相差顯微鏡;光學顯微鏡;CO2孵箱;超凈工作臺;高速冷凍離心機;DUR530核酸蛋白分析儀;PCR儀;微型垂直平板電泳槽及電轉移系統(tǒng);凝膠成像分析系統(tǒng);酶標儀;DMEM培養(yǎng)液;山羊抗 S-100 多克隆抗體;兔抗 BDNF 多克隆抗體;HRP標記的兔抗山羊IgG抗體;HRP標記的山羊抗兔IgG抗體;DAB顯色劑;總RNA提取試劑盒;RT-PCR反應試劑盒;DNA Marker DL2000;硝酸纖維素膜;胎牛血清;胰蛋白酶;Ⅰ型膠原酶;阿糖胞苷;多聚賴氨酸;Geneticin;牛腦垂體提取物;SABC試劑盒;兔抗S-100單抗; ECL 試劑;鼠BDNF蛋白ELISA試劑盒。
1.2方法
1.2.1SCs分離培養(yǎng)取出生6~7天的SD小鼠,由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供,常規(guī)引頸處死、消毒,取其兩側坐骨神經(jīng),采用0.25%胰蛋白酶與0.15%的Ⅰ型膠原酶混合消化,消化完全后含血清培養(yǎng)液中和、離心,行雙30min差速貼壁法兩次后接種于預鋪有多聚賴氨酸的培養(yǎng)瓶內,37℃、5%CO2孵箱中進行培養(yǎng)。阿糖胞苷與Geneticin進行純化[3,4],牛腦垂體提取物(BPE,100µg/ml)促進SCs增殖。待細胞80%融合時準備病毒轉染。
1.2.2Ad-BDNF轉染雪旺細胞含BDNF基因的重組腺病毒(Ad-BDNF)購自中國軍事醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所。在進行轉染前,按照M.O.I分別為0(即未經(jīng)感染的正常SCs)、50、100、200和400 pfu/cell計算所需的病毒量,用無血清DMEM培養(yǎng)液稀釋Ad-BDNF原液后取相應體積。將病毒加入孔中,輕柔搖晃培養(yǎng)板使病毒平坦的擴散到單層生長細胞上。37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)72小時。將各組SCs用 2.5 g/L 胰酶消化制備成細胞懸液,1000 r/min 離心10 min,PBS 洗滌 1 次,收集細胞沉淀備用。
1.2.3總RNA提取及純度分析按試劑盒說明采用 Trizol液一步法裂解細胞,提取總 RNA。取RNA樣品5 μL用995 μL DEPC水稀釋(1:200)后,用紫外分光光度計測定 260 nm和 280 nm處的吸光度。每個樣品讀取三次,取均值。RNA樣品濃度=200×A260×40mg/L。以A260/A280比值確定RNA純度,比值應在 1.8~2.0 范圍內。連續(xù)進行三次實驗,以消除非特異性差異。
1.2.4cDNA引物設計BDNF cDNA特異性引物序列參照文獻設計[5],由上海生工生物技術公司合成。
上游引物為5’-CACTCTGACCCTGCCCGCCGAG,
下游引 物為5’-GCATTTAGGTGACACTATAG-3’,擴增片段長度為 430 bp。
1.2.5 RT-PCR 反應試驗按Invitrogen公司的RT-PCR反應試劑盒說明書進行。反應條件:94℃變性 1 min,60℃退火1 min,72℃延伸1min,30個循環(huán)。
1.3統(tǒng)計學分析
應用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件,兩組間同一時間點采用配對t檢驗,同組內各時間點采用SNK-q檢驗。
2結果
2.1光鏡觀察
原代培養(yǎng)雪旺細胞成功后,經(jīng)阿糖胞苷、Geneticin聯(lián)合作用,BPE促增殖,傳代,鏡下見第二代雪旺細胞呈典型的長梭形、雙極狀,“肩并肩”排列生長。感染后4小時,鏡下未見有任何細胞形態(tài)變化,狀態(tài)良好;24小時,鏡下見雪旺細胞仍呈雙極狀、“肩并肩”排列生長;48小時,鏡下觀察雪旺細胞亦無明顯的形態(tài)學變化,長勢良好。
2.2感染后SCs中BDNF mRNA的表達
提取感染各組和對照組SCs的總RNA,經(jīng)RT-PCR后均擴增出了約430 bp大小的基因片段,與構建的表達單元大小一致。經(jīng)灰度分析可知,其中DNA 條帶灰度以MOI為200組為著,正常SCs對照組最低(圖1)。此結果證實,經(jīng) Ad-BDNF 感染后的SCs有外源性 BDNF mRNA 的表達,且表達量明顯高于正常SCs;MOI 為 200 感染時,外源性 BDNF 基因轉移效率最高。
M0123 4
圖1:不同MOI感染SC后BDNF mRNA的表達
(0:正常SC對照組;1:MOI=50; 2:MOI=100;3:MOI=200;4:MOI=400;M:DNA Marker)
2.3ELISA檢測培養(yǎng)液上清中BDNF的表達
從感染后3 d開始,感染后SCs培養(yǎng)液上清中BDNF表達量即開始出現(xiàn)升高,6~12 d升高趨勢明顯,15~21 d 升高趨勢減緩,但BDNF表達量能夠維持在較高水平。對照組在各時間點BDNF 表達量均明顯低于感染組(P
表1在不同時間點感染后SC和正常SC培養(yǎng)液上清中BDNF的表達(±s,n=10,μg/L,MOI=200)
時間點(d) 正常SC對照組 感染后 SC 組 P值
3 0.31±0.07 0.63±0.11
6 0.41±0.12 0.90±0.13
9 0.47±0.13 1.52±0.14
12 0.53±0.11 3.18±0.15
15 0.56±0.12 3.39±0.15
18 0.61±0.12 3.45±0.19
21 0.65±0.11 3.57±0.16
3討 論
目前用于感染細胞的病毒載體主要有腺病毒載體系統(tǒng)和逆轉錄病毒載體系統(tǒng)。其中后者只能感染正在分裂的細胞,并且有插入突變及激活癌基因的危險,繁殖滴度低,故不太適合于體內基因治療。而腺病毒載體系統(tǒng)具有穩(wěn)定、安全、滴度高和宿主范圍廣等優(yōu)點,還能感染非分裂期細胞,可直接體內應用,適于臨床神經(jīng)系統(tǒng)的基因治療[6]。在基因轉移效率和蛋白表達效率的平衡點上我們選擇了腺病毒載體,它不僅能夠感染包括神經(jīng)元細胞和膠質細胞在內的多種細胞,而且感染效率高,容易將外源性基因片段轉移到易感細胞中[7]。曹延林等[8]用逆轉錄病毒BDNF基因成功感染脊髓神經(jīng)干細胞。因此,我們嘗試利用重組腺病毒BDNF基因感染體外培養(yǎng)的SC,以期能進一步應用于周圍神經(jīng)的損傷修復。
我們采用解剖顯微鏡下機械性剝除神經(jīng)外膜與束膜、差速貼壁法、阿糖胞苷與Geneticin聯(lián)合應用純化、BPE促進雪旺細胞增殖,可以獲得純度90%以上大量雪旺細胞[9]。
Ad-BDNF感染的SCs,RT-PCR檢測到BDNF mRNA 的表達,且表達量明顯高于正常SCs;ELISA法檢測Ad-BDNF感染后SC培養(yǎng)液上清中高度表達BDNF,而正常SCs對照組未檢測到BDNF,說明外源性BDNF基因確實轉移到SCs體內,并經(jīng)轉錄、翻譯,最終得以表達。與文獻報道的結果相符[10]。Ad-BDNF在MOI為200時轉移BDNF基因效率最高,這可能與制備的Ad-BDNF本身性質以及 SD大鼠源性SCs的易感性有關。
總之,通過重組腺病毒介導外源性 BDNF 基因的轉移,可以獲得能夠長時間高度表達BDNF的SC,這將為進一步修復周圍神經(jīng)損傷和保護受損神經(jīng)元提供保證。此為應用重組腺病毒載體攜帶腦源性神經(jīng)生長因子基因轉染雪旺細胞促進損傷神經(jīng)修復奠定了試驗基礎,探索了基因治療外周神經(jīng)損傷的新途徑。
參考文獻
[1] 韓巖,湯朝伍,王劍波,等.利用Geneticin純化雪旺細胞的實驗研究[J].中華顯微外科雜志,1997,20(4):277-280.
[2] 張勇杰,金巖,聶鑫,等.多步法分離和純化雪旺細胞的實驗研究[J].中華神經(jīng)外科疾病研究雜志,2002,l(4):347-350.
1、生物技術在農業(yè)生產中具體應用
現(xiàn)代生物技術是一門集多項頂尖技術與工程原理、信息科學等為一體的綜合性學科。一般來說現(xiàn)代生物技術主要包括以下七項技術:基因工程、細胞工程、酶工程、發(fā)酵工程、蛋白質工程、分子標記技術、生物芯片技術。上述七項技術彼此之間是相互聯(lián)系,相互滲透的。其中基因工程是核心技術,它能帶動其他技術的發(fā)展。因此本研究以基因工程在農業(yè)中具體應用為例進行系統(tǒng)研究。
(1)基因工程在植物遺傳改良中的應用
我國基因工程在植物遺傳改良中的應用現(xiàn)狀主要包括抗逆作物育種、品質改良育種和固氮育種等。例如在轉基因水稻新品種培育、轉基因玉米新品種培育和轉基因棉花的研究與產業(yè)化等方面都取得了較好的成績。在我國每年植物因病毒、細菌及真菌、害蟲、雜草、旱寒鹽、高溫等因素給糧食作物、園藝作物及經(jīng)濟作物造成了巨大的損失。隨著我國現(xiàn)代農業(yè)生物技術的發(fā)展,以上問題也正在一步步解決之中。目前我國已相續(xù)培育并成功推廣種植了一些轉基因抗病毒作物、轉基因抗細菌及真菌作物、轉基因抗蟲作物、抗除草劑作物、抗鹽堿作物、抗旱作物、抗寒作物、抗高溫作物等。例如在抗鹽堿作物方面,劉巖、玉慧中等將抗逆基因mtlD和gutD基因轉入植物,獲得了煙草、玉米、水稻等植物的耐鹽堿轉基因株系;在抗旱作物方面,我國科學家把美洲擬碟抗凍蛋白基因轉入番茄,得到轉基因抗寒番茄。此外我國還成功培育了煙草、馬鈴薯、黃瓜、番茄等抗病毒作物和將Bt殺蟲劑晶體蛋白基因與豇豆胰蛋白酶抑制劑基因復合在一起的雙價抗蟲棉。在抗逆作物的培育和推廣方面,可以說我國處于世界領先地位。
(2)基因工程在利用農作物生產食品中的應用
利用基因工程技術作用于農作物生產食品和食品添加劑主要包括三方面:改進食品原料的品質、改善果蔬采收后的貯藏保鮮性能和開發(fā)新型功能性食品。利用基因工程技術可對植物的蛋白質、油脂、淀粉、糖類、維生素等品質性狀進行改良,也可延長果實儲存期和改良食品風味。
2、生物技術在農業(yè)生產應用中存在的問題
(1)生物技術研究方面存在的問題
首先,基礎研究比較薄弱。其主要原因:一是由于基礎研究的直接性和可見性成果不是很顯著,所以很多科研人員不愿意扎深根認真從事基礎理論的研究;二是由于絕大多數(shù)人都沒有認識到基礎研究的重要性、基礎性和長遠性,所以我國在基礎研究方面的投入更是微乎其微。由此可知我國在基礎研究方面無論是其重視程度還是資金投入和相關政策體制都存在很多問題。其次,應用研究還很欠缺。一方面是由于基礎理論研究的薄弱決定了基礎應用研究的緩慢發(fā)展。同時基礎應用研究自身也存在很多問題。比如在植物基因工程育種方面存在如下問題:分離植物目的基因困難,導入外源基因的過程及其控制較為復雜。還有基因工程、細胞工程、酶工程、發(fā)酵工程、蛋白質工程、分子標記技術和生物芯片等現(xiàn)代生物技術各分支領域的結合度不高。第三,某些前沿領域的研究相對滯后。雖然我國在轉基因抗蟲棉、轉基因水稻及家蠶基因方面處于國際領先地位,也參與了一些國際重大的基因組破譯計劃。但是我國所真正擁有自主知識產權保護的專項領域還是比較少的。這主要是由于我國的生物技術前沿領域研究較美歐等發(fā)達國家相對滯后。比如說在生物固氮領域研究得不夠深入,影響轉基因效率的各種因素、植物光合作用機理等重大問題的研究尚未突破,特別是生物技術與信息技術、神經(jīng)科學等學科的交叉綜合研究還沒有引起足夠的重視。
(2)生物技術應用所導致的一些問題
首先,對生態(tài)的負面影響?,F(xiàn)代生物技術的發(fā)展和廣泛應用,為我們解決了許多重大的環(huán)保問題,同時也研發(fā)出了不少的新型高效環(huán)保產品。但是不可否認,由于其技術本身的發(fā)展歷程和科學技術在大自然面前的卑微,生物技術的應用也可能引發(fā)一些新的環(huán)境問題。此外隨著全球未來人口數(shù)量的繼續(xù)增加,利用抗逆作物轉基因品種擴大農業(yè)耕地面積的同時,氮素等農業(yè)資源的使用量也隨之加大,造成氮素等礦質營養(yǎng)物質生物化學循環(huán)的改變,對水體的富營養(yǎng)化可能具有潛在的促進效應,產生不利于人類和動植物生存和可持續(xù)發(fā)展的不利后果??梢姡锛夹g在農業(yè)生產中的應用也可能引起降低生物多樣性程度、改變土壤結構、污染環(huán)境等導致生態(tài)失衡的一系列問題。其次,對食物安全的影響。轉基因食品的安全性問題是潛在性的。主要表現(xiàn)在三方面:一是轉基因食品的毒性問題。在這方面,目前只有一些相關的試驗報道,尚無人體的研究報告。研究者用轉基因食物喂養(yǎng)大鼠,結果有的試驗顯示大鼠的免疫系統(tǒng)受到破壞,有的試驗顯示對大鼠沒有影響。二是轉基因食品的過敏反應問題。假如供體基因的作物具有使某一部分人產生過敏的過敏源,那么將此作物的基因轉移到其他作物,這種轉基因作物便具有引發(fā)過敏的能力。三是轉基因食品中的標記基因對抗生素的抵抗作用問題。在這方面,相關研究顯示可能性是比較小的,但是我們也不容忽視。
(3)人才緊缺
根據(jù)孟弘等人在《對我國生物技術人才問題的幾點思考》一文中介紹據(jù)2012年統(tǒng)計,我國設生物科學、生物技術和生物工程三大專業(yè)的高校已從2011年的978所上升至1058所,招生人數(shù)在2011年就超過8萬人。目前估計我國生物專業(yè)在校生總人數(shù)不低于45萬,每年畢業(yè)的人數(shù)5—7萬。估計到2020年,我國培養(yǎng)的生物專業(yè)大學畢業(yè)生總數(shù)不少于40萬,我國生物技術發(fā)展已經(jīng)具有了很好的技術人才儲備。可知我國生物技術方面人才的儲備還是很充足。可是仍然存在以下問題:一方面人才培養(yǎng)的速度遠遠跟不上人才的需求量;另一方面從國外引進的農業(yè)生物技術高端人才更是稀缺。還有我們國家派出到國外學習借鑒的人才也顯得不足。同時在我國,培養(yǎng)既懂科研技術,也知道生產和市場動向的復合型人才體系尚未建立。此外食品安全評估體系人才的培養(yǎng)方案和模式的構建尚未提上議事日程。再者雖然我國生物技術人才的儲備已經(jīng)很充足了,但是這些從高校培養(yǎng)出來的生物技術人才其畢業(yè)后從事農業(yè)生物技術方面工作的人占整個生物技術領域的比重比較小。
二、改進生物技術在農業(yè)生產應用中采取的措施
1、加強農業(yè)生物技術的研究
(1)加強生物技術的基礎研究
由于現(xiàn)代生物技術涉及的領域廣、范圍寬。所以,針對我國在農業(yè)生物技術基礎理論研究方面的薄弱,我們應該繼續(xù)加強分子生物學、細胞生物學、微生物學、免疫生物學、人體生理學、動物生理學、植物生理學、微生物生理學、生物化學、生物物理學、遺傳學等生物科學基礎理論的研究,同時也要加強與生物技術緊密相關的化學、化學工程學、數(shù)學、微電子技術、計算機科學等基礎理論的研究。
(2)注重生物技術的應用研究
在生物技術領域,基礎理論研究的目的是為了更好的服務于基礎應用的研究。所以我們必須將基礎理論的研究與基因工程、細胞工程、酶工程、發(fā)酵工程、蛋白質工程、分子標記技術和生物芯片等現(xiàn)代生物技術的基礎應用研究相結合,進行緊密而系統(tǒng)的研究。進而將這些基礎理論與基礎應用的研究同計算機科學、信息科學和微電子技術等相結合而后應用于生物技術育種、生物飼料、基因工程疫苗和功能性食品的開發(fā)等農業(yè)生物技術重大領域的研發(fā)。從基因組測序的研究轉向基因功能探測和蛋白質功能探測的研究。例如,在生物固氮方面,在我國農區(qū)的布局上,氮含量高的區(qū)域實行豆、禾、經(jīng)濟作物間套輪作,可緩解和排除氨阻遏的障礙,發(fā)揮根瘤菌的固氮作用,實現(xiàn)兩種作物互惠和高產;在有條件的草地發(fā)展一定面積的豆、禾、牧草混播種植制度。
2、采取措施避免應用生物技術所導致的負面影響
(1)現(xiàn)代性與傳統(tǒng)性相結合
除了加強生物技術本身的研究、完善相關體制與法規(guī)、加大人才培養(yǎng)和資金投入以解決生物技術在農業(yè)生產應用中所帶來的一些不良后果、環(huán)境問題等,我們還應該把農業(yè)生物技術的應用與生態(tài)學相結合,把生物技術育種與傳統(tǒng)育種相結合,把生物技術作物種植、養(yǎng)殖與傳統(tǒng)作物種植、養(yǎng)殖相結合。做到充分利用現(xiàn)代高科技術的同時,又順應大自然本身的發(fā)展規(guī)律。
(2)建立健全轉基因食品安全評估體系
針對轉基因食品對我們人體健康的影響是潛在的和隱性的,我國應建立健全轉基因食品安全評估體系。為此,我們要確立科學客觀的評價原則,既不能以偏概全,夸大威脅,也不能漠然視之,回避轉基因產品可能存在的潛在危險。應投???、定專人,將安全性問題設立為一項重要課題。從食品安全、生態(tài)安全著手,實事求是地個案評估,作出科學的評價,盡快制訂和完善國家生物安全管理的法律、法規(guī)體系。使轉基因食品的安全評估落到實處,使老百姓對轉基因食品買得放心、用得安心。一方面我們要科學合理地應用生物技術,建立健全相應的法律、法規(guī)體系和管理機構,加強轉基因生物的進出口管理。另一方面我們要加強、擴大科普宣傳,提高全民對轉基因食品的安全意識。
3、加大人才的培養(yǎng)
本節(jié)是對上一章“日常生活中的生物技術”的延續(xù),同時又是對它的升華;突出了教材注意密切聯(lián)系技術與社會,而且注重知識現(xiàn)代化的特點,使內容充滿了21世紀的時代氣息。本課主要讓學生了解現(xiàn)代生物技術在實際生活中的應用,基于本課的特點,同時結合八年級學生的特點,我主要采取討論、辯論、分析、總結等活潑多樣的教學方式,讓學生參與到教學中。通過學生調查、搜集、分析資料等方式,注重培養(yǎng)學生合作調查、自主分析、整理信息的能力。在完成對高新生物技術知識的認識與理解的同時,重視提高學生的學習興趣和各種能力。
二、教學分析
(一)教學目標
1.知識目標
(1)舉例說出轉基因技術的應用。
(2)舉例說出克隆技術的應用。
(3)關注轉基因技術和克隆技術對人類生活的影響。
2.能力目標
(1)培養(yǎng)學生討論、交流的能力。
(2)培養(yǎng)學生將所學知識運用到實際生活中的能力。
(3)培養(yǎng)學生實事求是的科學態(tài)度。
3.情感態(tài)度與價值觀目標
(1)增強學生團結合作精神。
(2)能正確理解和對待現(xiàn)代生物技術產物對人類生活產生的影響。
(二)教學重、難點
1.教學重點
(1)基因工程及轉基因技術的應用。
(2)細胞工程及克隆技術的應用。
2.教學難點
(1)轉基因抗蟲煙草培育過程。
(2)多利羊的克隆過程。
三、課時計劃
1課時
課前準備
教師準備
多媒體課件
學生準備
搜集、整理相關資料
四、教學流程
(一)導入新課
教師:生物技術是當今國際上重要的技術,生物技術將為人類所面臨的環(huán)境、資源、人口、能源、糧食等危機和壓力提供最有希望的解決途徑。那么今天我們就一起進入第二十一章“現(xiàn)代生物技術”的學習。
教師:通過上一章的學習,你知道的生物技術都有那些?
學生:發(fā)酵工程、基因工程和細胞工程等。
教師:同學們回答得很好,21世紀是生物科學的世紀,生物技術的發(fā)展與研究都已經(jīng)進入到一個快速發(fā)展的階段,各種高新研究成果不斷涌現(xiàn)。今天我們就來具體認識和了解一些現(xiàn)代生物技術及其在生活中的應用。
(二)新課教學
1.基因工程和轉基因技術
教師:請同學們看多媒體展示的“小鼠變大鼠”的圖片,這種變化可不是自然狀態(tài)下形成的,而是人為地采用了某種現(xiàn)代生物技術,這種技術就是我們要了解的基因工程和轉基因技術。
教師:多媒體展示“巨型小鼠”,并講解其產生的過程和原因
教師:多媒體演示轉基因抗蟲煙草培育過程
學生:根據(jù)多媒體演示總結轉基因抗蟲煙草培育過程
教師:根據(jù)這兩個運用基因工程中轉基因技術的事例請同學們回答以下幾個問題:什么是基因?什么是基因工程和轉基因技術?
師生共同討論、交流,總結。
學生:基因――具有遺傳效應的DN段
基因工程――按照人的意愿,運用人工方法,對生物的基因組成進行“移花接木“式改造的重組技術。
轉基因技術――將外源基因直接導入動植物體或它們的受精卵內,并能在細胞中發(fā)揮作用的技術。
教師:基因工程和轉基因技術主要是在分子水平對DNA進行定向改造,達到人們想要的動植物個體。雖然這種技術聽起來挺復雜,但它們離我們的日常生活卻很近。
教師:同學們能否根據(jù)你的課前調查舉例說明。
學生:超市中的轉基因食品,各種不同的轉基因動物、轉基因植物,還有轉基因微生物等。
教師:非常好,導入外源基因的生物稱為轉基因生物,包括轉基因植物、轉基因動物和轉基因微生物。轉基因食品就是用轉基因生物生產和加工的食品。
教師:現(xiàn)代生物技術除了能在分子水平對生物進行改造,同時還能在細胞水平對生物進行改造,下面我們就共同了解在細胞水平對生物進行改造的技術――細胞工程和克隆技術。
教師:多媒體展示細胞工程和克隆技術的概念。
細胞工程――在細胞水平上,有計劃地改造細胞的遺傳結構,培育人類所需要的動植物新品種等的技術。
克隆――不經(jīng)過受精作用而獲得新個體的方法。
教師:多媒體演示,講解“克隆羊多利的誕生”。同時提出:在三只母羊中誰是多利真正的母親?
學生:討論、交流,得出:母羊A提供的是乳腺細胞的細胞核,所以它是多利真正的母親。
教師:多利羊的克隆成功,意味著人類可以利用動物身上的一個體細胞培育出與這一動物幾乎相同的生命體。那么,同學們認為多利羊的誕生對人類社會會產生什么影響?
學生:交流、討論。
學生:多利羊的誕生標志著克隆技術的飛躍發(fā)展,但任何生物技術在造福人類的同時決不能超過法律、道德的底線。
教師:非常好,請同學們閱讀課本14頁最后兩個段落,了解克隆技術發(fā)展的歷史以及現(xiàn)代克隆技術在生活中的廣泛應用。
教師:在了解了基因工程和轉基因技術以及細胞工程和克隆技術之后,它們之間的區(qū)別在哪呢?
學生:討論、交流。
學生:細胞工程是在細胞水平按照人們的意愿改變細胞內的遺傳物質從而獲得產品的技術。
基因工程是在分子水平對DNA的定向改造。
五、課堂小結
1.舉例說明基因工程和轉基因計劃
2.舉例說明細胞工程和克隆技術
3.比較基因工程與細胞工程的區(qū)別
六、板書設計
第一節(jié) 現(xiàn)代生物技術的應用
1.基因工程和轉基因技術
(1)概念:
(2)舉例:巨型小鼠,轉基因抗蟲煙草
(3)應用:農業(yè)等
2.細胞工程和克隆技術
(1)概念:
(2)舉例:克隆羊多利
(3)應用:醫(yī)藥,瀕危動物保護等
七、課堂練習
1.產生克隆羊多利的融合細胞的細胞核來自( )
A.乳腺細胞 B.神經(jīng)細胞 C.生殖細胞 D.其他細胞
2.我國已經(jīng)培育出“青蟲不吃的青菜”。你能利用所學到的知識設計這種青菜的培育過程嗎?
隨著生物技術不斷的發(fā)展和進步,生物技術在農業(yè)種植中得到廣泛應用,主要包括以下幾個方面:
1.1轉基因技術
利用轉基因技術提取植物中的目的基因,并將其轉移到另一農作物上,不僅可以促進農作物的生長,也可以提高農產品產量、質量,因此,轉基因技術應用在農業(yè)種植中具有重要作用,其可以有效促進農業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。隨著我國對生物技術的不斷研究,轉基因技術將會得到進一步發(fā)展,并且轉基因技術的應用規(guī)模也會逐漸擴大,據(jù)資料表明,當前轉基因類植物的種植范圍正在不斷擴大,在我國農業(yè)種植中,利用轉基因技術種植的植物面積呈進一步擴大的趨勢。除此之外,在農業(yè)種植中生物技術最為突出的則屬于雜交育種技術,雜交育種技術與轉基因技術相比,其操作更為簡單,在農業(yè)種植實踐中,雜交育種技術已取得了良好的效果。
1.2組織培養(yǎng)技術
組織培養(yǎng)主要工作原理是在細胞全能性的基礎上利用人工誘導的組織培養(yǎng)技術,這就要求植物細胞需要處于無菌的狀態(tài)下,才能確保植物細胞得到良好的發(fā)育,最終生長成完整的植株。將組織培養(yǎng)技術應用到農業(yè)種植中,既可以加快植物繁殖的速度,也可以在固定的時間內培育出滿足符合當?shù)剞r作物生長優(yōu)良品種,同時還能夠有效防止病毒對農作物幼苗的侵害,因此,針對組織培養(yǎng)技術對農作物生長的有利條件,在今后的農業(yè)種植中,應大力推廣和運用組織培養(yǎng)技術,但是,組織培養(yǎng)技術在農業(yè)種植中,應注意以下幾點:在植物組織培育中,培育植物的陽光溫度、濕度等應滿足植物組織培育的條件,并且培養(yǎng)基組成結構、pH值等化學條件也應符合標準要求,有效控制外界因素對植物組織培育的影響,為植物組織培養(yǎng)發(fā)育提供優(yōu)質的條件,并且在初代培養(yǎng)外植體過程中應做好外植體褐變處理工作,由于外植體在接種過程中容易發(fā)生褐變現(xiàn)象,然而,褐變現(xiàn)象的出現(xiàn)將會影響植物外植體的培育,所以,做好褐變處理工作,以保證植物培養(yǎng)工作順利進行。
1.3生物農藥制作技術
隨著生物技術的出現(xiàn),生物農藥在農業(yè)種植中也得到了應用,其主要是將生物新陳代謝的產物來制作農藥的方法,以達到殺蟲保護農作物的目的,利用生物技術制作農藥,不僅可以有效防止農藥對環(huán)境造成的危害,也可以保護環(huán)境,因此,生物農藥的應用具有重要作用。所以,在生物農藥制作上,應采用生物技術進行生物農藥的開發(fā),由于基因工程中的許多藥品都是從生物組織中提取的材料,但是,該工程的提取比較困難,并且藥品的價格也非常昂貴,然而,微生物可以適用于大規(guī)模工業(yè)化生產。所以,為了加快生物農藥的制作,在生物制藥實踐中,應在微生物細胞中導入生物的基因,使生物基因產生相應的藥物,采用這樣的制作模式,不僅能有效解決材料來源困難的問題,也可以進行大規(guī)模工業(yè)化生產,同時也可以降低生物農藥制作的成本,因此,生物技術在生物農藥制作中發(fā)揮著重要作用。
2結語