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架構(gòu)師學(xué)習(xí)計(jì)劃范文第1篇

關(guān)鍵詞： 化學(xué)制藥 基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn) 形成性評(píng)價(jià)

基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)是化學(xué)制藥技術(shù)專業(yè)的職業(yè)素質(zhì)課程，內(nèi)容涵蓋無(wú)機(jī)化學(xué)實(shí)驗(yàn)、分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)和有機(jī)化學(xué)實(shí)驗(yàn)?；A(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)是化學(xué)制藥技術(shù)專業(yè)學(xué)生步入大學(xué)后接觸的第一門(mén)實(shí)驗(yàn)課程，基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)課程的教學(xué)目標(biāo)是習(xí)得基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)知識(shí)，掌握基本實(shí)驗(yàn)技能，養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)態(tài)度與習(xí)慣，并為后續(xù)的藥物分析、藥物合成等后續(xù)課程打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

一直以來(lái)，化學(xué)制藥技術(shù)專業(yè)的基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)的評(píng)價(jià)考核中都是作為相應(yīng)的理論課程學(xué)業(yè)考評(píng)的一部分進(jìn)行，考核的形式以試卷書(shū)面為主，考核的內(nèi)容主要是實(shí)驗(yàn)的現(xiàn)象與數(shù)據(jù)的處理與運(yùn)算。但基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)作為實(shí)踐課程，僅僅依靠對(duì)學(xué)生試卷完成情況進(jìn)行評(píng)價(jià)并不能客觀、準(zhǔn)確地反映學(xué)生真實(shí)的學(xué)習(xí)水平。為此，筆者探索在化學(xué)制藥技術(shù)專業(yè)的基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)課程的學(xué)業(yè)評(píng)價(jià)體系進(jìn)行改革，以使考核的結(jié)果更能真實(shí)地反映學(xué)生的實(shí)際學(xué)習(xí)情況，提高基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)的教學(xué)質(zhì)量。

1.引入形成性評(píng)價(jià)體系

在化學(xué)制藥技術(shù)專業(yè)的基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)考評(píng)中引入形成性評(píng)價(jià)體系代替?zhèn)鹘y(tǒng)的終結(jié)性評(píng)價(jià)。引入形成性評(píng)價(jià)的目的是通過(guò)師生共同監(jiān)控、反思與調(diào)節(jié)教學(xué)的全過(guò)程，開(kāi)發(fā)學(xué)生的潛力，改進(jìn)學(xué)生的學(xué)習(xí)方法，提高教育教學(xué)質(zhì)量[1]。形成性評(píng)價(jià)可以動(dòng)態(tài)反映學(xué)生學(xué)習(xí)狀態(tài)的評(píng)價(jià)體系，持續(xù)性地從知識(shí)、能力、素質(zhì)等三個(gè)方面動(dòng)態(tài)評(píng)價(jià)，既重視學(xué)生基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)最基本知識(shí)和能力的掌握的情況，又體現(xiàn)以人為本，關(guān)注不同學(xué)生的接受程度，使學(xué)生的培養(yǎng)不拘泥于單一死板的考核指標(biāo)，全面科學(xué)地對(duì)學(xué)生的學(xué)習(xí)情況進(jìn)行評(píng)價(jià)，從而有助于提高學(xué)生的專業(yè)素質(zhì)。

2.實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容革新

基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)考核革新作為化學(xué)制藥技術(shù)專業(yè)課程改革的組成部分，其思路是知識(shí)、能力和素質(zhì)并重，以考核的革新推動(dòng)整個(gè)化學(xué)制藥技術(shù)專業(yè)課程的全面革新。在基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)課程中進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)基本知識(shí)和基本技能的掌握程度考核，2009―2014年我系每年都組織全系性的大型實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)技能大賽，以初賽、決賽和總決賽的形式進(jìn)行層層選拔，對(duì)基本技能掌握優(yōu)異的學(xué)生進(jìn)行獎(jiǎng)勵(lì)和表彰，并將優(yōu)勝者的成績(jī)記入學(xué)業(yè)考評(píng)成績(jī)，極大地提高學(xué)生對(duì)原本單調(diào)、枯燥、重復(fù)的基本技能訓(xùn)練的興趣，學(xué)生間的相互比拼能讓學(xué)生發(fā)現(xiàn)自身實(shí)驗(yàn)技能上存在的不足，更好地幫助學(xué)生提高操作技能。

在加強(qiáng)學(xué)生基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本技能培養(yǎng)的同時(shí)，增加綜合型與設(shè)計(jì)型實(shí)驗(yàn)所占的考評(píng)比例，由于基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)是大一階段開(kāi)設(shè)的課程，學(xué)生開(kāi)展綜合性和探究性實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)還比較欠缺，這個(gè)階段一般可以采取PBL教學(xué)模式，由教師的設(shè)定需要解決的問(wèn)題，學(xué)生以學(xué)習(xí)小組的模式開(kāi)展探究，由小組設(shè)計(jì)初步的實(shí)驗(yàn)方案，師生共同對(duì)方案進(jìn)行討論完善，教師提供創(chuàng)新型實(shí)驗(yàn)活動(dòng)的平臺(tái)，在教師的輔導(dǎo)下學(xué)生小組配合共同完成實(shí)驗(yàn)的探究。教師根據(jù)學(xué)生實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)、團(tuán)隊(duì)協(xié)作和具體實(shí)驗(yàn)操作與數(shù)據(jù)處理分析情況進(jìn)行評(píng)價(jià)，并將評(píng)價(jià)結(jié)果記入學(xué)業(yè)成績(jī)，督促學(xué)生自覺(jué)參與到實(shí)驗(yàn)探究過(guò)程中，增強(qiáng)學(xué)生運(yùn)用自身知識(shí)與技能解決問(wèn)題的能力。

3.開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室改革

基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)由于其內(nèi)容局限于無(wú)機(jī)化學(xué)實(shí)驗(yàn)、有機(jī)化學(xué)實(shí)驗(yàn)和分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)，各實(shí)驗(yàn)室所配置的儀器基本都是以玻璃儀器為主，輔以少量的檢測(cè)、合成設(shè)備的，不能高精度的測(cè)定與大型的綜合合成實(shí)驗(yàn)。一直以來(lái)基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)室的開(kāi)放僅限于相關(guān)課程的使用和少量的學(xué)生課外活動(dòng)，實(shí)驗(yàn)室的開(kāi)放率和設(shè)備的利用率都很低。在基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)考核的改革中，要想真正取得實(shí)效必須堅(jiān)持以人為本，靈活開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，切實(shí)提高實(shí)驗(yàn)室的有效利用率，除保證正常實(shí)驗(yàn)課的使用要求外，合理設(shè)置實(shí)驗(yàn)室值班教師和學(xué)生助理，配合完成實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的革新的學(xué)生自主設(shè)計(jì)完成實(shí)驗(yàn)或者學(xué)生個(gè)人針對(duì)自身實(shí)驗(yàn)技能欠缺所進(jìn)行的針對(duì)性訓(xùn)練。

4.改革基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)的日常教學(xué)與教材

基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)的考核革新要取得實(shí)效，不僅考核的內(nèi)容與形式要革新，而且日常的實(shí)驗(yàn)教學(xué)也要革新。目前的基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)由于實(shí)驗(yàn)涉及的科目與范圍廣，實(shí)驗(yàn)需要完成的內(nèi)容繁重，實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)教師在有限時(shí)間內(nèi)要完成規(guī)定的教學(xué)任務(wù)，多采取實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)場(chǎng)講解與示范的教學(xué)形式。學(xué)生按照教師的示范完成實(shí)驗(yàn)，缺乏獨(dú)立思考與反思，長(zhǎng)此以往，學(xué)生對(duì)教師的講解與示范產(chǎn)生依賴性，懶于預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)，機(jī)械地模仿教師完成實(shí)驗(yàn)，看似規(guī)范的操作與合理的數(shù)據(jù)處理，實(shí)則缺乏獨(dú)立自主的動(dòng)手能力及思維能力，完全流于形式，更談不上培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新意識(shí)，學(xué)生并沒(méi)有真正掌握應(yīng)該實(shí)驗(yàn)?zāi)康乃蟮闹R(shí)與技能。

為了改變這種學(xué)習(xí)狀況，實(shí)現(xiàn)基礎(chǔ)化學(xué)日常教學(xué)的革新，首先必須對(duì)實(shí)驗(yàn)教材進(jìn)行革新，在實(shí)驗(yàn)教材作為實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)的指導(dǎo)教材的基礎(chǔ)上，教師根據(jù)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目所涉及的基本操作和實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目所必須掌握的相關(guān)理論知識(shí)編寫(xiě)講義，在配合實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放的前提下，在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前教師對(duì)于學(xué)生以學(xué)習(xí)小組的形式在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行講解與示范，學(xué)生利用課余時(shí)間自行在實(shí)驗(yàn)室操作練習(xí)和查閱相關(guān)資料學(xué)習(xí)相關(guān)理論知識(shí)，在實(shí)驗(yàn)正式開(kāi)始前完成指定的預(yù)習(xí)任務(wù)。實(shí)驗(yàn)教師在實(shí)驗(yàn)正式開(kāi)始前對(duì)學(xué)生以抽問(wèn)的形式檢查學(xué)生的預(yù)習(xí)情況，并進(jìn)行記錄作為評(píng)價(jià)成績(jī)的組成部分，督促學(xué)生自覺(jué)完成相關(guān)預(yù)習(xí)任務(wù)。在實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目正式開(kāi)始時(shí)，實(shí)驗(yàn)教師將主要精力放在實(shí)驗(yàn)設(shè)備用法、解答學(xué)生在課前練習(xí)中出現(xiàn)問(wèn)題的提問(wèn)、監(jiān)控學(xué)生獨(dú)立完成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的驗(yàn)收和評(píng)定上。這樣的改變既能照顧學(xué)生對(duì)于技能掌握的個(gè)人差異，實(shí)現(xiàn)以人為本，為不同層次的學(xué)生提供充分的練習(xí)機(jī)會(huì)，又能有效利用課堂教學(xué)時(shí)間，實(shí)現(xiàn)基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)課設(shè)定的教學(xué)目標(biāo)，提高實(shí)驗(yàn)課堂教學(xué)效率。

5.形成性評(píng)價(jià)比例的構(gòu)成

為確?；A(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)的教學(xué)質(zhì)量，體現(xiàn)化學(xué)制藥技術(shù)專業(yè)應(yīng)用型的特征，我們?cè)谠O(shè)計(jì)基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)的形成性評(píng)價(jià)分值構(gòu)成按照2∶3∶2∶3的比例進(jìn)行評(píng)價(jià)。其中20%為課前的預(yù)習(xí)情況評(píng)價(jià)，主要對(duì)學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目所必需的技能與知識(shí)的預(yù)習(xí)掌握情況進(jìn)行評(píng)價(jià)；30%為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的具體操作的評(píng)價(jià)，主要是學(xué)生實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的操作流程的規(guī)范性、科學(xué)性及實(shí)驗(yàn)相關(guān)的專業(yè)素養(yǎng)的評(píng)價(jià)；20%為實(shí)驗(yàn)報(bào)告的評(píng)價(jià)，主要是學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象的觀察與記錄，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析與計(jì)算能力，以及科研態(tài)度的評(píng)價(jià)；30%是學(xué)生完成綜合性和設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)的評(píng)價(jià)，主要是學(xué)生運(yùn)用已有知識(shí)與技能，開(kāi)展科學(xué)探究與團(tuán)隊(duì)合作情況的評(píng)價(jià)。

6.新型考核評(píng)價(jià)的效果

通過(guò)化學(xué)制藥專業(yè)的基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)的形成性評(píng)價(jià)體系的革新，更突出了對(duì)學(xué)生的學(xué)習(xí)過(guò)程的評(píng)價(jià)，督促學(xué)生養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)態(tài)度與習(xí)慣，提高學(xué)生的專業(yè)素養(yǎng)，為后續(xù)的實(shí)踐課程的學(xué)習(xí)打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。2010年基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)作為重慶第二師范學(xué)院院級(jí)精品課程《基礎(chǔ)化學(xué)》的實(shí)驗(yàn)部分接受有關(guān)部門(mén)的考核合格。2009―2014年化學(xué)制藥專業(yè)學(xué)生的基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)部分成績(jī)穩(wěn)步提升，在歷年的學(xué)院教學(xué)年度評(píng)比中學(xué)生滿意率保持在98%以上，相關(guān)教師參加學(xué)院各種比賽獲得一、二等獎(jiǎng)三次，取得了優(yōu)異的成績(jī)，有力地促進(jìn)了化學(xué)制藥專業(yè)的教學(xué)改革，提高了教學(xué)質(zhì)量。

經(jīng)過(guò)幾年的不斷探索與完善，在化學(xué)制藥技術(shù)專業(yè)基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)的考核評(píng)價(jià)體系取得初步成功的基礎(chǔ)上，我們?cè)谠搶I(yè)的其他職業(yè)素質(zhì)課也逐步開(kāi)始推廣，并根據(jù)具體的課程特征對(duì)本考核評(píng)價(jià)方案進(jìn)行調(diào)整，以適應(yīng)現(xiàn)代社會(huì)對(duì)化學(xué)制藥專業(yè)人才提出的新要求。

參考文獻(xiàn)：

架構(gòu)師學(xué)習(xí)計(jì)劃范文第2篇

【摘要】

目的： 制備去甲雄三烯醇酮（又稱群勃龍，trenbolone，TR）抗體以建立TR特異性檢測(cè)方法。方法： TR與琥珀酸酐反應(yīng)生成TR半琥珀酸酯（TRHS），采用混合酸酐法和對(duì)乙基N，N二甲基丙基碳二亞胺（EDC）法將TRHS與牛血清蛋白（BSA）偶聯(lián)制備其偶聯(lián)物；質(zhì)譜、核磁共振分析偶聯(lián)結(jié)果；免疫家兔并用雙向免疫擴(kuò)散和ELISA檢測(cè)抗血清效價(jià)，判斷偶聯(lián)物的免疫原性。結(jié)果： 經(jīng)質(zhì)譜鑒定顯示，所獲得的修飾物TRHS相對(duì)分子質(zhì)量為370；核磁共振分析表明，各吸收峰與理論相符；基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜圖譜分析表明，TRBSA相對(duì)分子質(zhì)量明顯增加、紫外最大吸收峰漂移；TR與BSA混合酸酐法和EDC法偶聯(lián)比分別為1∶18和1∶12；混合酸酐法偶聯(lián)物免疫家兔獲得的抗血清效價(jià)ELISA測(cè)得TR特異性抗體效價(jià)為1∶320 000；雙向免疫擴(kuò)散測(cè)得的抗血清效價(jià)為1∶16。結(jié)論: 成功制備了具有明顯免疫原性的TRBSA偶聯(lián)物，為T(mén)R單克隆抗體的制備和建立TR殘留量的快速檢測(cè)方法奠定了基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】 去甲雄三烯醇酮； 半抗原修飾； 偶聯(lián)； 基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜

［Abstract］Objective: To prepare trenbolone(TR) complete antigen and identify the antigenicity of TR. Methods： TRhalfsuccinate(TRHS) was produced by TR reacting with succinic anhydride， the mixed anhydride and the ［3mercaptopropionic acid， 1ethyl3(3diethylaminopropyl) carbodiimide，EDC］ methods were used to couple TRHS and BSA. The antigenicity analysis of TRBSA complex was finished by detecting the titre of antiserum separated from rabbits which was immunized with TRBSA. Results: The TRHS molecular weight was determined as 370 by analysis of mass spectrometry， the absorption peak was in accordance with theoretical results by nuclear magnetic resonance. MALDITOFMS analysis showed that the molecular weight map of TRBSA a marked increase and the UV maximum absorption peak drift; the coupling ratios of mixed anhydride and EDC method were 1∶18 and 1∶12， respectively. The results of ELISA and double immunodiffusion test showed that the titre of antiserum to TR was 1∶320 000，1∶16， respectively. Conclusion: RBSA coupling was successfully prepared， which established the foundation for the antiTR monoclonal antibody preparation as well as the method construction of TR Residues rapid test.

［Key words］trenbolone； hapten modification； coupling； MALDITOFMS

去甲雄三烯醇酮，又稱群勃龍(trenbolone，TR)，是人工合成的甾類男性激素，是家畜的生長(zhǎng)促進(jìn)劑，服用含該激素的肉制品會(huì)給人類的身體健康帶來(lái)危害，同時(shí)也成為體育比賽興奮劑的一個(gè)可能來(lái)源。歐盟禁止進(jìn)口使用該類產(chǎn)品的食品，也是我國(guó)海關(guān)規(guī)定必須檢測(cè)的31種獸藥之一［1］。目前，TR在食品中殘留量的檢測(cè)主要依賴于質(zhì)譜技術(shù)，如氣相色譜質(zhì)譜技術(shù)(GCMS)、液相色譜質(zhì)譜技術(shù)(LCMS)等［2］。近年來(lái)，隨著單克隆抗體技術(shù)、現(xiàn)代免疫測(cè)定技術(shù)的發(fā)展，建立方便于基層檢驗(yàn)檢疫部門(mén)應(yīng)用的快速、靈敏的TR檢測(cè)方法，對(duì)從源頭上監(jiān)測(cè)、控制此類物質(zhì)的擴(kuò)散具有重要意義［3］。TR是小分子化合物，需要與大分子載體(蛋白質(zhì))偶聯(lián)后才具有免疫原性。本研究采用琥珀酸酐對(duì)TR進(jìn)行化學(xué)修飾，并將獲得的TR半琥珀酸酯(TRHS)與牛血清白蛋白(BSA)偶聯(lián)以賦予其免疫原性，經(jīng)注射家兔分析其免疫效果。

1 材料與方法

1.1 主要材料與儀器

紫外掃描儀、核磁共振儀、質(zhì)譜分析儀、基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(MALDITOFMS)；BSA、TR等購(gòu)自Sigma公司；琥珀酸酐、三正丁胺、吡啶、異丙醇均由中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)提供。

1.2 方法

1.2.1 TRHS的制備及鑒定

1.2.1.1 群勃龍結(jié)構(gòu)的修飾

于燒瓶中加入500 mg TR和1 000 mg琥珀酸酐，然后加入2 ml吡啶溶解，80℃攪拌反應(yīng)3 h。反應(yīng)液冷卻至室溫，調(diào)整其pH為3.0，得棕黃色黏稠物，過(guò)夜后變硬。用熱的異丙醇重結(jié)晶提純，紅外燈烘干即為T(mén)RHS(圖1)。

1.2.1.2 修飾物的鑒定

采用質(zhì)譜法對(duì)其相對(duì)分子質(zhì)量進(jìn)行預(yù)測(cè)，并用核磁共振鑒定。

1.2.2 TR的抗原性修飾

1.2.2.1 混合酸酐法［4］

TRHS與BSA按摩爾比100∶1反應(yīng)。取TRHS 5.5 mg 溶于2 ml的N，N-二甲基甲酰胺（DMF）中，置4℃冰箱中預(yù)冷10 min，于冰浴磁力攪拌，加入三丁胺30 μl，再加入氯甲酸異丁酯15 μl，然后將該溶液置4℃冰箱中反應(yīng)1 h即為反應(yīng)Ⅰ液；取20 mg BSA 溶于2 ml蒸餾水，溶解后于冰浴邊攪拌邊用1 mol/L NaOH 調(diào)pH為8.5制得Ⅱ液；邊攪拌邊將Ⅰ液緩慢滴加到Ⅱ液中，于4℃攪拌反應(yīng)過(guò)夜。反應(yīng)產(chǎn)物充分透析，即得TRBSA 偶聯(lián)物溶液，將其冷凍干燥保存。

1.2.2.2 對(duì)乙基-N，N-二甲基丙基碳二亞胺

［3mercaptopropionic acid， 1ethyl3(3diethylaminopropyl) carbodiimide，EDC］法［5］ TRHS與BSA按摩爾比100∶1反應(yīng)。取TRHS，N-羥基琥珀酰亞胺（NHS），EDC按摩爾比1∶1∶1溶于1 ml DMF，混勻后于4℃下活化1 h，此為反應(yīng)Ⅰ液；取10 mg BSA 溶于3 ml雙蒸水中，加DMF 0.5～1.0 ml混勻， 4℃預(yù)冷20 min，得Ⅱ液；邊攪拌邊將Ⅰ液緩慢滴加到Ⅱ液中，于4℃攪拌反應(yīng)過(guò)夜。反應(yīng)產(chǎn)物充分透析，即得TRBSA 偶聯(lián)物，冷凍干燥保存。

1.2.3 TRBSA免疫家兔

將制備的TRBSA用完全福氏佐劑常規(guī)法免疫家兔，獲得的免疫血清用ELISA間接法和雙向免疫擴(kuò)散測(cè)定特異性抗血清效價(jià)，分析其免疫原性并判斷免疫效果。

2 結(jié)果

2.1 群勃龍的化學(xué)修飾與修飾物鑒定

修飾產(chǎn)物質(zhì)譜分析相對(duì)分子質(zhì)量為370，IR（KBr）υmax：3300， 1738 cm-1；1H NMR(400 MHz， CDCl3， rt): δ=0.96(s， 3 H， CH3)， 1.32(m， 1 H， CH2)， 1.54(m， 3 H， CH2)， 1.61(m， 1 H， CH2)，1.93(d， 1 H，J=12.4 Hz， CH2)， 2.27(m， 1 H， CH2)， 2.44～2.60(m， 5 H， CH2)， 2.69～2.72(m， 4 H， CH2)， 2.86(m， 2 H， CH2)， 4.84(t， 1 H， J=7.6 Hz， OCH)， 5.81(s， 1 H， CH)，6.36(d， 1 H， J=9.6 Hz， CH)， 6.44(d， 1 H， J=10.0 Hz，CH)，氫為25（圖2），由于羧基的氫活性太強(qiáng)故未出峰，13C NMR所示碳原子數(shù)為22個(gè)，各根值與理論值相符（圖3）。

2.2 TRBSA的制備

2.2.1 偶聯(lián)物的紫外光譜及偶聯(lián)比［3］

紫外/可見(jiàn)分光光度儀對(duì)BSA進(jìn)行掃描測(cè)定，可見(jiàn)BSA最大吸收峰在278 nm處，TRHS最大吸收峰在353 nm處，混合酸酐法偶聯(lián)物的峰形發(fā)生明顯變化，278 nm吸收峰明顯降低，且在340 nm處吸收值明顯增大，說(shuō)明偶聯(lián)是成功的（圖4）；由圖5可見(jiàn)EDC法偶聯(lián)物的峰形也發(fā)生明顯變化，278 nm吸收峰明顯降低，且在343 nm處吸收值明顯升高，說(shuō)明偶聯(lián)也是成功的（圖5）。

按文獻(xiàn)［7］估算偶聯(lián)比率，選擇20%乙醇為溶劑并以之調(diào)零。混合酸酐法：TRHS濃度為0.035 mg/ml，BSA濃度為2 mg/ml，結(jié)合比約為1∶18；EDC法：TRHS濃度同混合酸酐法，BSA濃度為1.9 mg/ml，結(jié)合比約為1∶12。

2.2.2 BSA，TRBSA相對(duì)分子質(zhì)量

用MALDITOFMS儀檢測(cè)BSA和混合酸酐法制備的TRBSA，兩者的相對(duì)分子質(zhì)量分別為67 146和74 471（圖6）。由此估算偶聯(lián)比率為20.8。

2.3 TR特異性抗血清效價(jià)測(cè)定結(jié)果

TRBSA免疫的家兔血清，經(jīng)ELISA測(cè)得TR特異性抗體效價(jià)為1∶320 000；雙向免疫擴(kuò)散測(cè)得的抗血清效價(jià)為1∶16。

3 討論

群勃龍（TR）是在畜牧業(yè)養(yǎng)殖中經(jīng)常使用的一類人工合成的類固醇激素，這類激素的濫用對(duì)人和畜的健康、社會(huì)和生態(tài)環(huán)境造成直接和潛在的威脅。因此，20世紀(jì)80年代以后許多國(guó)家明令禁止在牲畜的飼養(yǎng)中使用這類激素，但由于利益的驅(qū)動(dòng)，世界范圍仍有許多TR等類固醇激素在使用。國(guó)內(nèi)外關(guān)于尿、血、組織中檢測(cè)到TR等類固醇激素殘留的報(bào)道很多［2， 6，7］。目前關(guān)于TR殘留量的檢測(cè)方法主要依賴于質(zhì)譜技術(shù)。但質(zhì)譜技術(shù)不適用于基層檢驗(yàn)檢疫部門(mén)快速的篩選檢測(cè)。

本研究將TR與琥珀酸酐反應(yīng)并對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物TRHS的性質(zhì)和純度進(jìn)行鑒定。經(jīng)磁共振及質(zhì)譜分析，相對(duì)分子質(zhì)量、氫譜、碳譜均符合TR結(jié)構(gòu)式，并對(duì)修飾產(chǎn)物磁共振氫譜、碳譜與軟件所預(yù)測(cè)的理論值進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示完全一致，由此認(rèn)為本研究所采用的TRHS合成方法是一種實(shí)用、有效的TR修飾方法。鑒定后的修飾產(chǎn)物采用混合酸酐法及EDC法與BSA偶聯(lián)。在混合酸酐法實(shí)施過(guò)程中，嚴(yán)格控制反應(yīng)Ⅰ液無(wú)水，Ⅰ、Ⅱ液混合時(shí)遵循Ⅰ液加入Ⅱ液，以使有機(jī)溶劑得以稀釋。此外，在試驗(yàn)過(guò)程中，溫度的嚴(yán)格控制可保證蛋白質(zhì)性質(zhì)。而在EDC法實(shí)施過(guò)程中，要嚴(yán)格控制EDC使用量［4，5］，因?yàn)镋DC與羧基反應(yīng)所形成的氨基反應(yīng)活性中間體（O酰基脲）很不穩(wěn)定，在水中會(huì)很快水解釋放出羧基以及N?；?。過(guò)量的EDC產(chǎn)生的N酰基脲會(huì)結(jié)合在蛋白疏水區(qū)域的羥基上，導(dǎo)致蛋白自交聯(lián)。NHS的介入，可保持水溶液中中間體的穩(wěn)定，使整個(gè)偶聯(lián)反應(yīng)分成獨(dú)立的兩步反應(yīng)［7］，從而保證偶聯(lián)效果。

理想的偶聯(lián)比率與準(zhǔn)確的偶聯(lián)物相對(duì)分子質(zhì)量的測(cè)定，是構(gòu)成免疫原性的要素［8］。本研究使用MALDITOFMS預(yù)測(cè)偶聯(lián)物相對(duì)分子質(zhì)量，具有靈敏度高、準(zhǔn)確度高及分辨率高等特點(diǎn)，是生命科學(xué)領(lǐng)域一種強(qiáng)有力的分析測(cè)試手段，并正扮演著越來(lái)越重要的作用［9］。MALDITOFMS分析可直觀測(cè)得偶聯(lián)物相對(duì)分子質(zhì)量，并通過(guò)計(jì)算獲得其偶聯(lián)比率。但該法所需設(shè)備昂貴，基層單位難以開(kāi)展。

采用經(jīng)上述方法作抗原性修飾后的TR免疫家兔并用ELISA和雙向免疫擴(kuò)散檢測(cè)其抗血清效價(jià)，結(jié)果表明TR被賦予了明顯的免疫原性，兩種方法測(cè)得的抗TR特異性抗血清效價(jià)分別為1∶320 000和1∶16。TR免疫原性修飾的成功，為進(jìn)一步制備TR單克隆抗體和建立特異性免疫學(xué)檢測(cè)方法奠定了基礎(chǔ)，為食品或其他物品中TR殘留量的分析開(kāi)辟了簡(jiǎn)便、特異、快速、敏感的途徑，可從源頭上監(jiān)測(cè)、控制含有TR等類固醇物質(zhì)食品的擴(kuò)散。

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