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1牙周細(xì)菌克隆的多型性與感染模式

70年代以后，隨著對(duì)厭氧微生物分離、培養(yǎng)和鑒定技術(shù)的發(fā)展，從口腔內(nèi)發(fā)現(xiàn)了三百多種不同種類的細(xì)菌，目前認(rèn)為最可疑的牙周致病菌有：放線共生放線桿菌、牙齦卟啉菌、中間普氏菌、具核梭桿菌、福氏類桿菌、直形彎曲菌、優(yōu)桿菌、溶齒艾肯氏菌、微小消化鏈球菌、月形單胞菌和密螺旋體，其中放線共生放線桿菌作為局限性青少年牙周炎的主要致病菌，牙齦卟啉菌作為成人牙周炎的主要致病菌是被研究得最廣泛，證據(jù)也是最充足的。

在感染微生物學(xué)領(lǐng)域，一個(gè)非常普遍的現(xiàn)象是致病菌往往存在多種克隆型，有些是毒力的，能致病的，稱為毒性克隆，而另一些可能是無(wú)毒力的，非致病的，如流感嗜血桿菌(Hacmophilusinfluenza)的104個(gè)克隆型中只有6個(gè)是有毒力的。因此，牙周致病菌也可能存在多種克隆型，其中有毒性克隆和非毒性克隆。這是一個(gè)非常誘人的假設(shè)，使我們對(duì)牙周致病菌的認(rèn)識(shí)必須進(jìn)入到克隆水平。利用多位點(diǎn)酶型分析、rRNA分析、限制性核酸內(nèi)切酶分析(REA)和限制性片段長(zhǎng)度多形性分析(RFLP)已證實(shí)多數(shù)牙周致病菌存在多種克隆型，如牙齦卟啉菌、放線共生放線桿菌、中間型普氏菌、直形彎曲桿菌等。也有報(bào)道牙周致病種內(nèi)不同亞型間存在毒力差異，如放線共生放線桿菌、牙齦卟啉菌，但牙周致病菌不同克隆型間致病性的差異尚未充分證實(shí)。

對(duì)機(jī)體其它系統(tǒng)感染的重要相關(guān)微生物的研究揭示了克隆學(xué)說(shuō)的兩種主要模式，一是從特定感染部位分離的致病菌具有相同的基因型，即克隆感染，常與外源性致病感染有關(guān)，另一個(gè)相對(duì)模式是多克隆感染，在這型感染中，從病變部位分離到的致病菌具有多種不同的基因類型，這種感染模式多與內(nèi)源性感染相關(guān)。區(qū)分牙周炎是克隆感染還是多克隆感染，對(duì)于牙周炎病因的認(rèn)識(shí)和牙周病的防治具有重要意義。如屬克隆感染，則牙周炎為外源性感染，切斷傳播途徑，消除傳染源將是牙周病防治的重要途徑；如屬多克隆感染，則牙周炎為內(nèi)源性感我們對(duì)親代與子代均檢出中間型普氏菌(Pi)的20個(gè)家庭、59例受試者的73株經(jīng)生化和寡核苷酸探針雜交鑒定的中間普氏菌(Pi)分離株用AP-PCR方法進(jìn)行了Pi的基因型分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)39種不同的擴(kuò)增帶型，9個(gè)家庭的21例成員中，發(fā)現(xiàn)3對(duì)父子(女)，4對(duì)母子(女)及2個(gè)家庭的父母與子女檢出的Pi具有一致的AP-PCR擴(kuò)增帶型，說(shuō)明Pi存在多種不同的克隆型，并可能在有密切接觸的家庭成員中傳播。

2口腔微環(huán)境在牙周炎發(fā)生發(fā)展中的作用

局部微環(huán)境的作用包括局部宿主因素的作用和細(xì)菌間的相互作用

2.1局部宿主因素的作用

致病菌毒性因子的表達(dá)受局部微環(huán)境的溫度、pH值、離子濃度、滲透壓等因素的調(diào)節(jié)。體外研究表明，牙齦卟啉菌在沒(méi)有血紅素條件下培養(yǎng)后則失去毒力，進(jìn)一步的研究證實(shí)，血紅素鐵離子通過(guò)調(diào)節(jié)牙齦卟啉菌外膜蛋白的表達(dá)而影響其毒力。Haffajec等發(fā)現(xiàn)不同個(gè)體或同一口腔不同部位齦下的溫度不同，溫度高的部位易發(fā)生附著喪失，揭示齦下溫度在調(diào)節(jié)致病菌毒性因子表達(dá)中的可能作用。對(duì)齲垢密螺旋體(T.denticola)生長(zhǎng)代謝的體外研究發(fā)現(xiàn)，它的生長(zhǎng)及蛋白分解活性受其環(huán)境中的pH值、氧化還原電勢(shì)、O2分壓的調(diào)節(jié)。此外，局部的SIgA、齦溝液的特異性抗體、中性白細(xì)胞等都會(huì)對(duì)致病菌的定植、生長(zhǎng)和繁殖產(chǎn)生影響。

2.2局部細(xì)菌間的相互作用

牙周致病菌并不孤立地存在于牙菌斑中，在齦溝部位，存在著種類繁多的其它細(xì)菌，有的通過(guò)為致病菌提供附著部位。提供營(yíng)養(yǎng)成份等，對(duì)牙周炎的發(fā)生發(fā)展起協(xié)同作用，也有的通過(guò)抑制致病菌在局部的定植和生長(zhǎng)，對(duì)牙周健康起保護(hù)作用，我們把后一類細(xì)菌稱為牙周有益菌(beneficialspecies)。國(guó)內(nèi)外的研究都已充分證實(shí)，有益菌在局部的優(yōu)勢(shì)狀態(tài)是牙周健康的一個(gè)重要因素。有益菌可能通過(guò)：(1)占據(jù)致病菌的定植部位；(2)抑制致病菌的粘附；(3)抑制致病菌的生長(zhǎng)；(4)抑制致病菌毒性因子的產(chǎn)生；(5)分解致病菌產(chǎn)生的毒性因子等機(jī)理影響牙周病變的發(fā)生。研究得最多的有益菌是血鏈球菌(Streptococcussanguis)，它是牙周健康部位齦下主要優(yōu)勢(shì)菌，而在病變部位明顯減少或消失，體外實(shí)驗(yàn)表明血鏈球菌能抑制多數(shù)牙周致病菌的生長(zhǎng)。因此，有益菌在局部的減少或消失可能是牙周炎的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素，維持和重建有益菌在局部的優(yōu)勢(shì)狀態(tài)則是牙周炎防治的一重要方面。

3牙周病的替代治療

牙周病“替代治療”概念的提出是基于Hillman等人對(duì)局限性青少年牙周炎(LJP)患者的研究發(fā)現(xiàn)，在健康人口腔內(nèi)及LJP患者的健康部位存在能抑制LJP的主要致病菌放線共生放線桿菌(A.a)生長(zhǎng)的細(xì)菌，而LJP的病變部位則缺乏該類細(xì)菌，這類能抑制A.a生長(zhǎng)的細(xì)菌被鑒定為血鏈球菌(S.sanguis)和乳鏈球(S.uberis)。在無(wú)菌大鼠口腔內(nèi)，感染了A.a的大鼠再感染野生型血鏈球菌后A.a的水平下降25倍，而再感染過(guò)氧化氫缺陷型血鏈球菌則A.a的水平不變，說(shuō)明血鏈球菌對(duì)A.a的拮抗作用可能存在于體內(nèi)，其拮抗機(jī)理是產(chǎn)生過(guò)氧化氫。隨后在其它類型的牙周炎，如成人牙周炎、難治性牙周炎，也發(fā)現(xiàn)在患者的牙周健康部位存在能抑制多數(shù)致病菌如P.gingivalis、P.intermedius、F.nucleatum、C.rectus、B.forsythus等生長(zhǎng)的有益菌，如同LJP，它們也是血鏈球菌和乳鏈球菌，而病變部位缺乏這些細(xì)菌。這些研究都說(shuō)明了有益菌對(duì)牙周健康的重要性。

Forsyth牙科中心做的研究更進(jìn)一步說(shuō)明了有益菌的作用，他們發(fā)現(xiàn)牙周炎患者治療后，局部血鏈球菌水平高的部位療效好，附著水平獲得多，而局部鏈球菌水平低的部位療效差，附著水平獲得少。說(shuō)明牙周病治療的成功不僅要去除致病菌，還要獲得有益菌的再定植。因此，有益菌的優(yōu)勢(shì)狀態(tài)是牙周健康所必需的，重建有益菌在局部的優(yōu)勢(shì)狀態(tài)是牙周治療成功的重要方面。

Fiehn等曾嘗試對(duì)SPF大鼠口腔引入血鏈球菌，發(fā)現(xiàn)血鏈球菌在SPF大鼠口腔內(nèi)成功定植后能夠減少牙齦卟啉菌感染造成的牙槽骨吸收，阻止血清中抗牙齦卟啉菌抗體水平的升高。要將牙周病替代治療應(yīng)用到病人，首先要解決的是效應(yīng)株的定植問(wèn)題。Westergren等曾報(bào)道血鏈球菌在健康志愿者口腔內(nèi)成功定植，但隨后無(wú)論在健康人體還是在牙周炎患者都未能重復(fù)出該結(jié)果。如何使血鏈球菌成功地在人口腔內(nèi)定植則是下一步要研究的關(guān)鍵問(wèn)題。

4小結(jié)

口腔是人體四大菌庫(kù)之一，微生物與宿主，微生物相互間存在著廣泛而復(fù)雜的相互制約、相互依賴關(guān)系，共同維持著口腔微生態(tài)的平衡。特別是在齦溝部位，一方面多種微生物不斷地通過(guò)對(duì)粘膜上皮，牙面的選擇性粘附和細(xì)菌間的相互粘附在局部定植、生長(zhǎng)和繁殖，而宿主則通過(guò)上皮細(xì)胞的脫落、唾液和齦溝液的沖刷，其間的抗體、補(bǔ)體、中性白細(xì)胞以及溶菌酶、乳鐵蛋白等多種抗菌因子限制局部細(xì)菌的過(guò)度生長(zhǎng)；不同微生物之間既存在相互凝集、相互提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等相互促進(jìn)的機(jī)制，也存在細(xì)菌素的作用等相互抑制的機(jī)制，這種不同微生物之間的動(dòng)態(tài)平衡、宿主與微生物之間的動(dòng)態(tài)平衡是決定牙周健康的重要因素。近年來(lái)的研究已充分表明，在齦溝微生物中，有能引起牙周病變的致病微生物如牙齦卟啉菌、放線共生放線桿菌等，也存在能抑制致病菌生長(zhǎng)的有益菌群如血鏈球菌。有益菌的減少或消失是牙周病變發(fā)生的重要機(jī)理。保持有益菌群在齦溝部位的優(yōu)勢(shì)狀態(tài)能有效地防止牙周病變的發(fā)生，重建牙周有益菌群的優(yōu)勢(shì)狀態(tài)是牙周病治療成功的關(guān)鍵。因此，進(jìn)一步研究牙周細(xì)菌在局部粘附定植、生長(zhǎng)繁殖的規(guī)律及其調(diào)節(jié)機(jī)制，闡明有益菌與致病菌相互作用的分子機(jī)制及調(diào)節(jié)因素，以及宿主對(duì)細(xì)菌定植、生長(zhǎng)、基因表達(dá)的調(diào)節(jié)，將是今后牙周病微生物病因研究及牙周病微生態(tài)防治研究的重要內(nèi)容。