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【摘要】目的了解天津市地區(qū)3歲以下嬰幼兒病毒性肺炎的病原分類。方法對(duì)天津市兒童醫(yī)院自2005年10月～2006年4月住院的2038例急性呼吸道感染患兒采集的鼻咽分泌物用熒光免疫法（IFA）進(jìn)行7種呼吸道病毒的快速檢查。結(jié)果2038例患兒中，陽(yáng)性標(biāo)本790例，占38.7％。790例陽(yáng)性標(biāo)本中呼吸道合胞病毒感染742例，占93.9％。結(jié)論呼吸道病毒是造成兒童呼吸道感染的主要病因，而在3歲以下嬰幼兒中，病毒性肺炎的病原以呼吸道合胞病毒為主，0～3歲的嬰幼兒的感染率明顯高于3歲以上的兒童，呼吸道病毒感染季節(jié)分布明顯。

【關(guān)鍵詞】熒光免疫法；呼吸道合胞病毒；嬰幼兒；鼻咽分泌物

急性呼吸道感染（acuterespiratorytractinfections，ARI）是兒科常見(jiàn)病，目前已證明95％的急性上呼吸道感染和大部分的下呼吸道感染是由細(xì)菌以外的病原體引起，其中以呼吸道病毒最常見(jiàn)。3歲以下嬰幼兒中以呼吸道合胞病毒（RSV）為主，RSV感染常年均有發(fā)病，冬春季為流行高峰，3歲以下小兒易感率高，臨床表現(xiàn)以低熱、下呼吸道病變多見(jiàn)，嬰幼兒多陣咳、喘憋癥狀明顯。并呈一定的季節(jié)流行趨勢(shì)，且各地區(qū)的流行狀況又不盡一致。以下報(bào)告天津市兒童醫(yī)院自2005年10月～2006年4月用熒光免疫法（IFA）對(duì)住院的急性呼吸道感染的患兒進(jìn)行的7種呼吸道病毒的快速檢查結(jié)果。

1資料與方法

1.1對(duì)象選擇2005年10月～2006年4月因呼吸道感染入院的3歲以下患兒2038例，男1405例，女633例;年齡6天～3歲。

1.2材料熒光顯微鏡（型號(hào)：NikonTE2000-U），離心機(jī)（型號(hào)：BeckmanCOULTERAllegraX-22），旋渦混合器（型號(hào)：QL-901），37℃恒溫箱（型號(hào)：HH-B11海河），一次性嬰兒吸痰器，七孔玻片，病毒診斷試劑盒（DiagnosticRespiratoryInc，D3-DFARespiratoryVirusScreeningUSA）。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集及處理由實(shí)驗(yàn)室工作人員到床旁用一次性嬰兒吸痰器導(dǎo)管經(jīng)鼻腔插入氣管7～8cm，負(fù)壓吸取1～2ml分泌物置于含6～8mlPBS的離心管充分混合。立即送回實(shí)驗(yàn)室用旋渦混合器充分振蕩，2000r/min離心15min，棄去上清，沉淀物中再加入6～8ml的PBS，用玻璃滴管反復(fù)吹打，直至黏液均呈泡沫狀。再次2000r/min離心15min，棄去上清，保留沉淀物。如沉淀較少或不可見(jiàn)，則只留大約0.5mlPBS，用玻璃滴管將懸液吹打至淡云霧狀（如仍有黏液可用上述方法再洗1次）。

1.3.2細(xì)胞片制備用尖頭滴管吸取上述懸液，滴于已備好的七孔玻片上，每孔滴加約25μl，室溫下空氣干燥，用4℃丙酮固定10min。

1.3.3Chemicon免疫熒光試劑染色用內(nèi)含伊文斯藍(lán)熒光素標(biāo)記的RSV、ADV、FluA、FluB、PIV1、PIV2、PIV3型單克隆抗體各25～30μl分別滴加于上述已備好的細(xì)胞片上，37℃孵育30min，用PBS/Tween洗片3次（1min－3min－3min），再用蒸餾水洗片1min?？諝飧稍锖笥梅馄瑒╬H8.5甘油緩沖液）封片。熒光顯微鏡下觀察。

1.3.4陽(yáng)性結(jié)果判定每視野呼吸道上皮脫落細(xì)胞≥20個(gè)，其中細(xì)胞核和（或）胞漿內(nèi)可見(jiàn)明亮的黃綠色熒光和（或）熒光斑點(diǎn)數(shù)目≥2個(gè)為陽(yáng)性。否則為陰性。試劑盒內(nèi)提供陽(yáng)性及陰性質(zhì)量控制對(duì)照片與標(biāo)本同時(shí)染色。

1.3.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理各組感染陽(yáng)性率使用四格表χ2檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1陽(yáng)性標(biāo)本檢測(cè)的2038例標(biāo)本中陽(yáng)性標(biāo)本790例，占38.7％。

2.2各性別組的陽(yáng)性例數(shù)及總陽(yáng)性例數(shù)經(jīng)χ2檢驗(yàn)顯示，性別和病毒感染的陽(yáng)性率差異無(wú)顯著性（χ2=3.69，P>0.05），見(jiàn)表1。表1各性別組呼吸道感染陽(yáng)性率（略）

2.3各年齡組的陽(yáng)性率經(jīng)χ2檢驗(yàn)顯示，0～3歲四個(gè)年齡組感染陽(yáng)性率差異有顯著性（χ2=12.35，P<0.01）。2歲以內(nèi)各組差異無(wú)顯著性（χ2均<3.84，P>0.05）。<2歲的三個(gè)年齡組的陽(yáng)性率與2～3歲相比差異均有顯著性（χ2值為10.53，9.1，8.55。P<0.01），見(jiàn)表2。表2各年齡組呼吸道感染陽(yáng)性率（略）

2.4呼吸道病毒感染的季節(jié)從圖1可見(jiàn)，2005年11月～2006年3月間，為呼吸道病毒感染高發(fā)季節(jié)（見(jiàn)圖1）。而2005年4月～2005年11月間呼吸道病毒陽(yáng)性患者僅為散發(fā)（<10例）。圖1呼吸道病毒感染的季節(jié)分布（略）χ2檢驗(yàn)顯示各季節(jié)呼吸道病毒感染的陽(yáng)性率差異有顯著性（χ2=155，P<0.01），見(jiàn)表3。呼吸道病毒感染尤其是合胞病毒的感染主要集中在11月份中下旬至4月份上旬。表3各月份呼吸道感染陽(yáng)性率（略）2.5呼吸道病毒的構(gòu)成分析2038例患兒中，陽(yáng)性標(biāo)本790例，占38.7％。790例陽(yáng)性標(biāo)本中呼吸道合胞病毒感染742例，占93.9％，且多集中于冬春季節(jié)（11～4月）；流感病毒A共30例，占3.8％，各月均為散發(fā)，在2005年11～12月有短暫流行趨勢(shì)；副流感病毒共12例，占1.5％，腺病毒6例，占0.8％，冬春季節(jié)發(fā)病率極低，且均發(fā)生于11月以前及3月以后。其感染病毒的具體構(gòu)成見(jiàn)示意圖2。圖2呼吸道病毒感染病毒種類示意圖（略）超級(jí)秘書(shū)網(wǎng)

3討論

人類呼吸道合胞病毒（hRSV）是嬰幼兒下呼吸道感染最常見(jiàn)的病原之一，健康兒童第1次感染RSV后約有1/3發(fā)生下呼吸道疾病，0.5%～2%病例因癥狀嚴(yán)重需住院治療［1］。RSV屬副黏液病毒科，電鏡下所見(jiàn)與流感病毒類似，因其在組織培養(yǎng)中能形成特殊的細(xì)胞融合病變而得名。RSV感染非常普遍，90%以上的兒童在2歲以前感染過(guò)RSV。RSV引起的下呼吸道感染多見(jiàn)于3歲以下，發(fā)病高峰為2～6個(gè)月，1～6個(gè)月可見(jiàn)較重病例，男多于女［2］。RSV是世界各地嬰幼兒急性下呼吸道感染最重要的病毒病原，流行面廣，發(fā)病率高［3］。在我國(guó)還是引發(fā)流行性喘憋性肺炎的主要病原，可引起嬰幼兒尤其是新生兒較高的死亡率［4］。其與支氣管哮喘的發(fā)作也存在相關(guān)性［5］。RSV因其抗原性不同可區(qū)分為A和B兩個(gè)亞型，其亞型與疾病的嚴(yán)重程度之間的關(guān)系目前尚無(wú)定論［6］。本文檢測(cè)了7種常見(jiàn)的引起嬰幼兒肺炎的病毒，病毒檢出的陽(yáng)性率達(dá)38.7％。病毒構(gòu)成比顯示：陽(yáng)性標(biāo)本以RSV占首位，達(dá)93.9％，較往年的其他地區(qū)RSV的感染率（81.6％）明顯偏高［7］。分析呼吸道病毒感染和性別季節(jié)的關(guān)系顯示，男、女感染率差異并無(wú)顯著性，但男性患者數(shù)量上明顯高于女性。在季節(jié)分布上，冬春季感染率明顯高于夏秋季。此前許多文獻(xiàn)曾報(bào)告各年齡組兒童呼吸道病毒感染的陽(yáng)性率差異無(wú)顯著性［8］，本文結(jié)果顯示，0～2歲的嬰幼兒的呼吸道病毒感染率明顯高于2～3歲幼兒和3歲以上的兒童，與最新的關(guān)于呼吸道病毒的研究文獻(xiàn)一致［2］。3歲以上的學(xué)齡前期和學(xué)齡期，隨著機(jī)體的免疫功能不斷加強(qiáng)，病毒感染也有顯著下降，以上說(shuō)明嬰幼兒期應(yīng)是病毒感染的重點(diǎn)防御時(shí)期。另外，不同呼吸道病毒感染好發(fā)季節(jié)顯示，流感病毒散發(fā)于全年的各月，僅在冬季（11～12月）有短暫流行趨勢(shì)；腺病毒的感染集中于2005年的1～10月；副流感病毒主要以副流感病毒1和副流感病毒3為主，多發(fā)生在春夏季。急性上呼吸道疾病和大部分的下呼吸道疾病是由病毒所引起，呼吸道病毒檢測(cè)在加強(qiáng)小兒呼吸道疾病病原學(xué)診斷、有效防止交叉感染及抗生素的濫用、加強(qiáng)流感的流行病學(xué)監(jiān)測(cè)及疫苗的研制等方面具有深遠(yuǎn)的臨床意義。美國(guó)DHI公司D3-DFA呼吸道病毒診斷方法率先經(jīng)FDA認(rèn)證，結(jié)果良好，本方法特異性達(dá)86％，敏感性達(dá)95％，而且此方法明顯較其他方法需時(shí)更短，而設(shè)備僅需熒光顯微鏡。故開(kāi)展呼吸道病毒的快速檢驗(yàn)可以及時(shí)地為臨床診斷和治療提供更可靠的依據(jù)。而且，明確各個(gè)病毒的季節(jié)性及易感人群。更可以指導(dǎo)臨床醫(yī)師在流行季節(jié)中更合理地使用抗病毒藥以及采取更加積極的預(yù)防措施。