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摘要：目的觀察運動與中藥聯(lián)合作用對骨質(zhì)疏松大鼠骨組織形態(tài)計量學(xué)的影響。方法雌性SD大鼠隨機分為正常對照組、去卵巢手術(shù)組、雌激素對照組、運動組、中藥組、運動+中藥組。正常對照組行假手術(shù)，其余各組行雙側(cè)卵巢切除術(shù)，術(shù)后3個月開始為期3個月的治療。雌激素對照組用尼爾雌醇治療，中藥組和運動+中藥組應(yīng)用中藥治療，運動組和運動+中藥組按要求進(jìn)行運動。治療結(jié)束后對腰椎骨作骨組織形態(tài)計量學(xué)分析。結(jié)果運動+中藥組骨小梁的數(shù)目在治療各組中最多，骨小梁分離度在各治療組中最小，礦化沉積率在各組最高。結(jié)論運動與中藥聯(lián)合治療方法對骨質(zhì)疏松大鼠腰椎骨，具有促進(jìn)骨形成和抑制骨吸收的雙重作用。

關(guān)鍵詞：骨質(zhì)疏松大鼠;骨組織形態(tài)計量學(xué);運動;中藥

骨質(zhì)疏松是一種多因多果全身性骨骼疾病，其發(fā)病機制目前也不完全清楚，雖然各種方法對骨質(zhì)疏松的預(yù)防和治療均有一定的干預(yù)作用，但從總體上看其療效均較為局限。運動在骨質(zhì)疏松的預(yù)防、治療和康復(fù)過程中均可發(fā)揮積極明顯的作用。中藥骨康具有補腎壯骨、健脾益氣、活血通絡(luò)的作用，是一個較理想的防治骨質(zhì)疏松的藥物。本研究旨在探討運動與中藥聯(lián)合作用對骨質(zhì)疏松的作用及其機制。

1資料與方法

1.1藥物及試劑雌激素尼爾雌醇片(上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)，批號：961001);鹽酸四環(huán)素(上海華舜生物工程有限公司提供，批號：MW.480.9);鈣黃綠素和過氧化苯甲酸(廣州化學(xué)試劑廠提供，批號：200104012和200003012);Goldner′s染色劑(美國Sigma公司);甲基丙烯酸甲酯、鄰苯二甲酸二丁酯(天津化學(xué)試劑一廠提供，批號分別為：040328和20030320);硫酸鉻鉀為汕頭光華化學(xué)廠產(chǎn)品，批號：991001;中性樹膠由上海明膠廠生產(chǎn)，批號10004160B。

1.2主要儀器硬組織切片機(德國LeicaRM2155);慢速鋸(美國BuehlerLTD.);碳化鎢鋼刀(德國Leica)自動圖像數(shù)字化分析儀(德國Leica);計算機(中國方正電腦公司);骨形態(tài)計量學(xué)測量軟件(美國OsteoMetrics，Inc.)。

1.3動物及分組選用6月齡健康雌性SD大鼠67只，體重260～290g，清潔級(由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號：2003A010)。隨機分為6組，正常對照組(11只)、去卵巢手術(shù)組(12只)、雌激素對照組(12只)、運動組(11只)、中藥組(11只)、運動+中藥組(10只)。實驗動物分籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)飼料和飲用水。參照文獻(xiàn)〔3〕制作去卵巢骨質(zhì)疏松模型,用10%水合氯醛溶液按0.33ml/100g腹腔注射麻醉，正常對照組大鼠行假手術(shù)，其余各組大鼠雙側(cè)卵巢完整切除，進(jìn)行手術(shù)造模。手術(shù)后正常飼養(yǎng)3個月后開始治療，治療時間為3個月。正常對照組、去卵巢手術(shù)組和運動組以蒸餾水10ml/kg灌胃，1次/d;雌激素對照組按體重1mg/kg的標(biāo)準(zhǔn)給予濃度為0.167mg/ml的尼爾雌醇灌胃，1次/w，其余各天給予蒸餾水10ml/kg灌胃;中藥組和運動+中藥組按4.8g/kg骨康(相當(dāng)于臨床劑量的10倍)，灌胃給藥，每天1次;運動組和運動+中藥組按要求給予跑步訓(xùn)練。本實驗?zāi)M田徑運動中周期性耐力跑的形式，參照Bedford〔4〕的動物負(fù)荷標(biāo)準(zhǔn)，采用段氏PT98型鼠類跑臺進(jìn)行運動訓(xùn)練。訓(xùn)練大鼠的運動強度逐漸加大，2w內(nèi)達(dá)到設(shè)計負(fù)荷。開始跑速為12m/min，持續(xù)20min，坡度為0°，以后隔日增加運動強度3m/min，增加運動時間10min。2w后達(dá)到跑速20～22m/min，坡度為50，每天1h，每周連續(xù)訓(xùn)練5d，休息2d。在動物處死前14和13d，以及處死前第3天和第4天分別于背部皮下注射25mg/kg鹽酸四環(huán)素和5mg/kg鈣黃綠素進(jìn)行雙熒光標(biāo)記，以測量骨組織動態(tài)參數(shù)。

1.4骨標(biāo)本制備實驗結(jié)束時，處死動物，取其第2腰椎椎體(L2)用低速鋸切開暴露骨髓腔置于福爾馬林緩沖液中固定24h后,經(jīng)乙醇脫水后行不脫鈣骨包埋。包埋塊用硬組織切片機分別切成4μm的薄骨片和8μm的厚骨片。薄片用Goldner染色，透明后封片，用于測量骨形態(tài)計量學(xué)的靜態(tài)參數(shù)。厚片直接透明后封片，用于測量骨小梁變化的動態(tài)參數(shù)。

1.5觀察指標(biāo)測量和觀察第2腰椎骨組織形態(tài)計量學(xué)靜態(tài)和動態(tài)參數(shù)〔5〕。靜態(tài)參數(shù)包括骨組織面積(T.Ar,mm2)、骨小梁面積(Tb.Ar,mm2)、骨小梁周長(Tb.Pm,mm)、破骨細(xì)胞數(shù)量(Oc.No,N)及其相應(yīng)計算參數(shù)。計算參數(shù)為骨小梁面積百分?jǐn)?shù)(Tb.Ar,%)、骨小梁寬度(Tb.Th,μm)、骨小梁數(shù)目(Tb.N,N/mm)、骨小梁分離度(Tb.Sp,μm)、每毫米破骨細(xì)胞

數(shù)(Oc.N,N/mm)、單位骨小梁面積破骨細(xì)胞數(shù)(Oc.N/mm2,N/mm2);動態(tài)參數(shù)包括單熒光周長(sL.Pm,mm)、雙熒光周長(dL.Pm,mm)、雙熒光間距(IL.Wi,μm)及相應(yīng)計算參數(shù)：熒光周長百分?jǐn)?shù)(L.Pm,%)、礦化沉積率(MAR,μm/d)、骨形成率(BFR/BS,μm/d×100;BFR/BV,%/年;BFR/TV,%/年)。

1.6統(tǒng)計學(xué)處理所有數(shù)據(jù)以x±s表示，采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件，組間比較顯著性測定用方差分析和t檢驗。

2結(jié)果

2.1各組大鼠第2腰椎骨組織形態(tài)計量學(xué)靜態(tài)參數(shù)的變化從表1中可見，應(yīng)用雌激素、運動、中藥以及運動+中藥4種治療方法都能提高去勢大鼠的骨小梁百分?jǐn)?shù)，以運動+中藥的療效最好，但仍不能恢復(fù)到正常水平(P<0.01)。4種治療方法在對第2腰椎骨組織形態(tài)計量學(xué)靜態(tài)參數(shù)的影響方面，雌激素以增加去卵巢大鼠腰椎的骨小梁周長為主，中藥治療主要體現(xiàn)在增加骨小梁的寬度上，而運動以及運動+中藥的治療作用主要表現(xiàn)在增加骨小梁的數(shù)目上。參數(shù)骨小梁的分離度由大到小的變化趨勢為：去卵巢手術(shù)組>雌激素對照組>中藥組>運動組>運動+中藥組>正常對照組，其中僅有運動+中藥組與正常對照組比較差異不顯著(P>0.05)，而其他各組均明顯高于正常對照組(P<0.05)。

2.2各組大鼠第2腰椎骨組織形態(tài)計量學(xué)動態(tài)參數(shù)的變化見表2，熒光標(biāo)記百分?jǐn)?shù)的變化，中藥組是各組中最高的，而雌激素對照組在4種治療組最低。運動+中藥組大鼠的骨礦化沉積率明顯提高(P<0.05);而雌激素則對骨礦化有抑制作用，雌激素對照組骨礦化沉積率比去卵巢手術(shù)組還低，與運動組和運動+中藥組比較差異顯著(P<0.05)。運動組、中藥組、運動+中藥組的BFR/BS明顯高于正常對照組和雌激素對照組(P<0.05)。去卵巢手術(shù)組、運動組、中藥組、運動+中藥組表1治療3個月后大鼠第2腰椎靜態(tài)指標(biāo)的變化表2治療3個月后大鼠第2腰椎動態(tài)指標(biāo)的變化與正常對照組相比：1)P<0.01，2)P<0.05;與去卵巢手術(shù)組相比：3)P<0.01,4)P<0.05;與雌激素對照組相比：5)P<0.01,6)P<0.05

BFR/BV明顯高于正常對照組(P<0.05);運動組、運動+中藥組和去卵巢手術(shù)組的BFR/BV還顯著大于雌激素對照組(P<0.05)。中藥組、運動組、運動+中藥組的BFR/TV均較高，與雌激素對照組比較有顯著性差異(P<0.01)。每mm破骨細(xì)胞數(shù)變化趨勢為：正常對照組>去卵巢手術(shù)組>雌激素對照組>運動組>運動+中藥組>中藥組。而單位骨小梁面積破骨細(xì)胞數(shù)變化趨勢為：去卵巢手術(shù)組>正常對照組>雌激素對照組>運動組>運動+中藥組>中藥組。

3討論

有文獻(xiàn)報道〔3〕：3月齡和6月齡大鼠去卵巢6個月，均可發(fā)生骨質(zhì)疏松，6月齡大鼠骨質(zhì)疏松程度更嚴(yán)重。本研究以6月齡大鼠去卵巢6個月后作為實驗對象，骨質(zhì)疏松敏感部位腰椎作為檢測部位，對各種骨質(zhì)疏松干預(yù)方法進(jìn)行骨組織形態(tài)計量學(xué)評價。本實驗結(jié)果顯示6月齡SD大鼠在去卵巢手術(shù)后6月能較好地呈現(xiàn)出絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松的表現(xiàn)，從而進(jìn)一步證實了去卵巢手術(shù)是復(fù)制絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松實驗動物模型的一個成功方法。

近來研究證實〔6～8〕，卵巢功能衰退所引起的雌激素缺乏是導(dǎo)致絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松發(fā)生的主要原因。雌激素已成為目前治療OP的首選藥物之一。長期應(yīng)用雌激素替代治療除具有防止骨丟失和骨折的作用外，尚具有減少更年期癥狀、預(yù)防缺血性心臟病、預(yù)防癡呆等有益作用，但也可引起子宮出血，增加患者子宮肌瘤和乳腺癌的危險及增加深靜脈血栓和肺栓塞的發(fā)生率。本實驗結(jié)果顯示雌激素對去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的治療作用是通過抑制骨轉(zhuǎn)換，即同時減緩骨吸收和骨形成，但以對抗骨吸收為主，從而糾正骨代謝負(fù)平衡，減少骨量丟失，改善骨結(jié)構(gòu)，最終達(dá)到保護(hù)骨的目的。超級秘書網(wǎng)

運動能提供力學(xué)刺激可維持或改善骨健康，有關(guān)研究顯示運動能有效干預(yù)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的形成〔9，10〕。本實驗結(jié)果表明運動能有效減少大鼠去卵巢后的骨丟失，但仍不能使骨量恢復(fù)到正常對照組水平。運動對骨質(zhì)疏松的治療作用機制與雌激素治療有明顯的區(qū)別，雌激素治療時，骨形成和骨吸收均受到抑制，以對抗骨吸收為主，而運動具有增強骨形成和抑制骨吸收的雙重作用。

祖國醫(yī)學(xué)將骨質(zhì)疏松歸于“骨痿”的范疇，中醫(yī)認(rèn)為腎虛、脾虛、血瘀為本癥病機。中藥骨康是以“腎主骨”理論為指導(dǎo)，針對其“多虛多瘀”之病理特點而組方的。全方以淫羊藿、肉蓯蓉、補骨脂補腎壯骨為君，黃芪等健脾益氣為臣，丹參等活血通絡(luò)為使而組成，對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松有較好的干預(yù)作用〔11，12〕。本實驗說明中藥骨康能降低去卵巢大鼠的骨轉(zhuǎn)換，對抗其骨質(zhì)丟失，對骨質(zhì)疏松有一定的治療功效。中藥骨康的治療機制既不同于西藥中抑制骨吸收藥物(雌激素類)，也不同于促進(jìn)骨形成的藥物(氟制劑類)，而是一種對機體有整體調(diào)治功能，具有促進(jìn)骨形成和抑制骨吸收的雙重作用的藥物。中藥對骨的雙重作用與運動對骨的雙重作用比較，中藥治療的促進(jìn)骨形成的作用弱于運動治療。

探索一種“復(fù)合防治方案”，即將多種防治手段有機地結(jié)合起來，使之產(chǎn)生多方位的放大干預(yù)效應(yīng)，是目前研究的一個方向〔13，14〕。在本次實驗選用的各種治療方法中綜合療效是最明顯的，但仍不能使疏松的骨質(zhì)恢復(fù)到正常健康水平。本研究進(jìn)行骨組織形態(tài)計量學(xué)的評價結(jié)果表明，運動和中藥骨康對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的治療機制相似，都具有同時促進(jìn)骨形成和抑制骨吸收的雙重作用，將二者結(jié)合起來，組成運動+中藥骨康聯(lián)合治療方案，能夠充分發(fā)揮運動和中藥骨康的治療優(yōu)勢，起到協(xié)同促進(jìn)的作用，可以提高療效。運動與中藥聯(lián)合作用對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松有較為理想的干預(yù)效果。

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