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1.材料與方法

1.1樣品與預(yù)處理鮮活的草魚購于北京小月河農(nóng)貿(mào)市場，活體運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室后擊斃，去鱗、腮和內(nèi)臟，清洗干凈，切成魚片瀝干后裝入聚乙烯保鮮袋中。魚片質(zhì)量為(264.6±15.0)g，放于(4±1)℃冰箱中貯藏，魚體并排不堆壓，每3d隨機(jī)取出6條魚片，其中3條進(jìn)行感官評價、TVB-N、菌落總數(shù)、汁液流失率以及生物胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定，另外3條魚片先用聚乙烯保鮮袋包裹，然后在恒溫水浴鍋中進(jìn)行85℃、15min的熱處理，取出后待溫度降至室溫時再進(jìn)行生物胺的測定。

1.2測定方法

1.2.1汁液流失率的測定按照AOAC的方法測定［11］:汁液流失率(%)=(貯藏前魚片質(zhì)量－貯藏后魚片質(zhì)量)/貯藏前魚片質(zhì)量×100。

1.2.2菌落總數(shù)的測定參考GB/T4789.2-2010測定。

1.2.3感官評價包括生鮮和水煮2種評價方式，生魚片以色澤、氣味、組織形態(tài)、肌肉彈性為指標(biāo)，熟魚片以氣味、滋味和湯汁形態(tài)為指標(biāo)，由10名評定人員逐項(xiàng)打分，最高分為5分、最低分為1分。感官分值為生鮮和水煮2種評價分值之和。具體參照黃曉春等［12］的評定方法。

1.2.4TVB-N的測定采用凱氏定氮儀按半微量蒸餾法［13］測定。

1.2.5生物胺的測定樣品生物胺的提取及測定參考李凱風(fēng)［14］的方法:取5g絞碎的魚肉，加入10mL0.6mol·L－1的高氯酸勻漿30s，1800g、4℃離心15min，所得沉淀重復(fù)上述步驟，合并上清液。將上清液定容25mL，放入－18℃冰箱保存待測。測定時先解凍后再取0.4mL生物胺提取液(生物胺標(biāo)準(zhǔn)液:生物胺標(biāo)準(zhǔn)品購自Sigma-Aldrich公司，純度均在99%以上，然后將色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、組胺、酪胺、亞精胺、精胺等8種標(biāo)準(zhǔn)品分別用0.6mol·L－1的高氯酸配制成100μg·mL－1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，之后混合稀釋至125μg·mL－1，62.5μg·mL－1，31.25μg·mL－1，15.625μg·mL－1)依次加入80μL2mol·L－1的氫氨化鈉(NaOH)和120μL的飽和碳酸氫鈉(NaHCO3)，0.8mL的丹磺酰氯溶液(質(zhì)量濃度為10mg·mL－1，丙酮溶解)，混合均勻后40℃避光反應(yīng)45min，加入20μL的濃氨水終止反應(yīng)，室溫下靜置30min后用乙腈定容到2mL。之后1800g離心5min，用0.22μm的有機(jī)膜過濾，濾液用液相色譜檢測峰面積。液相條件是流動相A為0.1mol·L－1乙酸銨，流動相B為100%乙腈。流速為0.8mL·min－1，柱溫30℃，進(jìn)樣量50μL。

1.2.6統(tǒng)計(jì)分析及方程檢驗(yàn)方法采用Excel2007進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，用SAS9.0軟件進(jìn)行方差分析，差異顯著性水平為P＜0.05。對數(shù)據(jù)點(diǎn)進(jìn)行分析，求得相關(guān)性系數(shù)R，對相關(guān)性系數(shù)取平方得到?jīng)Q定系數(shù)R2，以R2分析相關(guān)性方程參考價值的高低。

2.結(jié)果與分析

2.1品質(zhì)相關(guān)指標(biāo)的變化草魚在冷藏過程中汁液流失率隨時間的延長而增加(P＜0.05)，前期汁液流失率增長緩慢，貯藏第12天汁液流失率為2.94%，之后快速增長，第15天時汁液流失率達(dá)到5.27%(圖1－a)。草魚的初始菌落總數(shù)為3.92logcfu·g－1，在貯藏過程中呈上升趨勢(P＜0.05)，前9d增長相對較快，此后增長趨于平緩，第12天菌落總數(shù)達(dá)到7.42logcfu·kg－1(圖1－b)。草魚的感官分值一直隨貯藏時間的延長而顯著下降(P＜0.05)，第9天魚肉有輕微異味，水煮后肉質(zhì)彈性一般，湯內(nèi)出現(xiàn)少量碎肉，至第12天感官評分已降至12分(圖1－c)，此時魚肉已經(jīng)腐敗。草魚的TVB-N隨貯藏時間的延長而明顯增加(P＜0.05)，到第9天時TVB-N達(dá)到225.8mg·kg－1，此時魚肉已經(jīng)開始腐敗，之后快速增長，至第12天時TVB-N達(dá)到328.2mg·kg－1(圖1－d)，魚肉已經(jīng)不可食用。淡水魚的TVB-N與海水魚有明顯差異，海水魚的TVB-N通常較高，而淡水魚的TVB-N較低［3，15］。

2.2生物胺的變化及與其他品質(zhì)指標(biāo)的相關(guān)性分析草魚在4℃冷藏過程中，經(jīng)2種途徑(加熱和未加熱)處理后生物胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)的變化見表1，生物胺和其他品質(zhì)指標(biāo)的總體相關(guān)性，色胺、苯乙胺、亞精胺、酪胺僅在個別天數(shù)檢出，因此未新鮮草魚中的組胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)為(16.40±0.04)mg·kg－1，精胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)為(28.56±0.09)mg·kg－1(表1)，比其他胺類高，在貯藏前12d組胺和精胺雖有一定波動，但其相對穩(wěn)定，貯藏第15天時下降顯著，很可能是因?yàn)楦泛褪返拇罅吭黾佑绊懥税被崦擊让傅幕钚裕瑥亩鴮?dǎo)致組胺和精胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著降低。組胺和精胺與其他品質(zhì)指標(biāo)沒有表現(xiàn)出相關(guān)性，故組胺和精胺不宜用作草魚的質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)。新鮮草魚中腐胺的初始質(zhì)量分?jǐn)?shù)為(3.48±0.03)mg·kg－1，隨貯藏時間的延長而增加，第15天達(dá)到(17.12±4.40)mg·kg－1，與草魚的汁液流失率和TVB-N都有著較好的相關(guān)性，相關(guān)性方程為y(腐胺)=2.5401x(汁液流失率)+1.9625，R2=0.8669，P＜0.05;y(腐胺)=0.0252x(TVB-N)+1.2937，R2=0.9222，P＜0.05。新鮮草魚中尸胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)很低［(2.48±0.25)mg·kg－1］，之后隨著貯藏時間的延長而增加，但是貯藏前期變化不顯著(P＞0.05)，至第9天時達(dá)到(10.25±1.93)mg·kg－1，第12天時迅速上升至(25.15±1.32)mg·kg－1。根據(jù)感官分值，此時魚肉已經(jīng)不能食用，且尸胺與TVB-N的決定系數(shù)R2＞0.8，可見尸胺與TVB-N有著較好的相關(guān)性，方程為y(尸胺)=0.4546x(TVB-N)－66.387，R2=0.8347，P＜0.05。熱處理后4種生物胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)有所降低，但大多數(shù)魚片都沒有顯著性差異(P＞0.05)，可見85℃、15min的熱處理對于草魚的生物胺沒有顯著的破壞作用。但TVB-N(x)和腐胺(y1)、尸胺(y2)之間仍存在較好的相關(guān)性，y1=0.0209x+1.1429，R2=0.931，P＜0.05;y2=0.4341x－66.169，R2=0.8512，P＜0.05。

3.討論

草魚的汁液流失率隨著貯藏時間的延長而上升，同時感官分值幾乎呈均勻下降趨勢，這與洪惠等［16］報道鳙在冷藏條件下的品質(zhì)變化相一致。在貯藏期間草魚初始TVB-N為62.2mg·kg－1，低于郭全友等［17］研究的大黃魚(Pseudosciaenacrocea)的初始TVB-N(70.0mg·kg－1)，且貯藏前期TVB-N增長較慢，后期迅速增長，整個貯藏期一直呈上升趨勢，與肖楓等［15］發(fā)現(xiàn)冷藏條件下鯽(Carassiuscuvieri)的TVB-N變化趨勢相似。這樣的變化趨勢很可能是因?yàn)槲⑸锏臄?shù)量增多，蛋白質(zhì)在細(xì)菌和酶的作用下進(jìn)一步分解產(chǎn)生氮、氨及胺類等堿性含氮物質(zhì)，從而導(dǎo)致TVB-N的迅速增加。草魚在整個貯藏過程中菌落總數(shù)一直呈增長趨勢，開始增長相對較快，之后趨于緩慢，這與胡素梅等［18］研究的鯉(Cyprinuscarpio)在冷藏條件下的菌落總數(shù)的變化規(guī)律大體相似，但是鯉在第14天菌落總數(shù)為6.54logcfu·g－1，仍可食用，而草魚魚片在第12天已達(dá)到7.42logcfu·g－1，超過了7.00logcfu·g－1的可食用限度，可見草魚和鯉雖同屬鯉科魚類，但由于種類的不同，在貯藏的不同時期菌落總數(shù)變化也有一定的差異。

草魚在4℃貯藏過程中組胺和精胺一直呈波動趨勢，這與李凱風(fēng)［14］報道的鯽冷藏條件下組胺和精胺的變化趨勢相同。腐胺和尸胺是水產(chǎn)品中的主要生物胺，也是腐敗魚肉的優(yōu)勢生物胺［19］，草魚在4℃貯藏過程中變化最顯著的生物胺也是腐胺和尸胺。草魚中的腐胺隨著貯藏時間的延長而增加，與SHI等［20］報道的鰱在冷藏過程中腐胺的變化趨勢相似，新鮮鰱中未檢出腐胺，而新鮮草魚中腐胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為(3.48±0.03)mg·kg－1，可見魚的品種和貯藏條件對生物胺的變化有一定的影響［21］。新鮮草魚中尸胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)隨著貯藏時間的延長而增加，但是貯藏前期變化不顯著(P＞0.05)，后期劇增，這與徐杰等［22］報道的凡納濱對蝦(Litopenae-usvannamei)中尸胺的變化趨勢大致相同。魚體貯藏過程中尸胺總質(zhì)量分?jǐn)?shù)呈一定上升趨勢，貯藏初期尸胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)很低，熱處理后未能檢測出，兩者無實(shí)質(zhì)性區(qū)別，可能是魚體自身的差異造成的。熱處理是常見的食品加工方式，趙中輝等［23］報道水產(chǎn)品貯藏過程中生物胺的變化時曾加熱生物胺的標(biāo)準(zhǔn)液，得出加熱對生物胺沒有破壞作用的結(jié)論，而筆者研究表明草魚魚片經(jīng)過85℃、15min的熱處理后生物胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)總體上呈下降趨勢，但與未經(jīng)熱處理的魚片沒有顯著性差異(P＞0.05)，關(guān)于草魚魚片更高溫度和更長時間處理后生物胺的變化還有待下一步研究。

4.結(jié)論

4.1草魚在冷藏加工過程中變化最顯著的生物胺是腐胺和尸胺，腐胺和尸胺與草魚的感官分值、TVB-N、菌落總數(shù)、汁液流失率等評價指標(biāo)有著較好的相關(guān)性。TVB-N和腐胺、尸胺、組胺、精胺的總質(zhì)量分?jǐn)?shù)之間也存在一定的相關(guān)性。

4.2草魚在冷藏過程中隨著時間的延長，感官品質(zhì)下降，菌落總數(shù)、汁液流失率和TVB-N等均顯著增加(P＜0.05)，因此，草魚貯藏加工時判斷魚肉的新鮮程度應(yīng)采用多個新鮮指標(biāo)進(jìn)行綜合分析。

4.385℃、15min的加熱處理對于草魚中生物胺的破壞作用不明顯，難以有效地去除生物胺。

單位：張?jiān)旅腊颀埩_永康王航作者：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)