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基因治療范文第1篇

[關(guān)鍵詞] 胰腺癌；基因治療；研究

[中圖分類號(hào)]R735.9 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B[文章編號(hào)] 1673-7210（2009）03（a）-156-02

胰腺癌是消化系統(tǒng)惡性腫瘤，占癌癥死亡的第4位。由于胰腺位置隱蔽，臨床癥狀多不典型， 不易被早期發(fā)現(xiàn)，同時(shí)其浸潤性強(qiáng)并易發(fā)生轉(zhuǎn)移，所以切除率低、預(yù)后差。近年來，胰腺癌的遠(yuǎn)期療效和預(yù)后并未帶來突破性進(jìn)展，研究表明胰腺癌的發(fā)生發(fā)展為多基因參與、多步驟發(fā)生的復(fù)雜的生物學(xué)過程，因此基因治療被認(rèn)為是繼手術(shù)、放療和化療等傳統(tǒng)療法之后腫瘤治療的最有前景治療方案之一，基因治療中又以自殺基因體系和免疫基因體系方式最為引人關(guān)注，本文主要從這兩種治療方法方面論述近年來胰腺癌基因治療狀況。

1自殺基因治療

自殺基因療法又稱基因定向酶藥物前體療法，是利用轉(zhuǎn)基因的方法將藥敏基因?qū)肽[瘤細(xì)胞，從而增加腫瘤細(xì)胞對(duì)化療的敏感性，使無毒的藥物前體通過該基因表達(dá)的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為對(duì)細(xì)胞有毒性作用的藥物，干擾腫瘤細(xì)胞DNA的合成，抑制腫瘤細(xì)胞的生長，從而殺死腫瘤細(xì)胞，這種使腫瘤細(xì)胞自殺的基因稱“自殺基因”。目前腫瘤基因治療研究中常用的自殺基因主要為單純皰疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）基因，其治療系統(tǒng)為HSV-TK/GCV，在體外及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中均可抑制胰腺癌細(xì)胞的生長，因此在治療研究中備受關(guān)注。

由于單純皰疹病毒（HSV）1型或2型胸苷激酶（TK）基因編碼的胸苷激酶能特異性地將核苷類似物等如羥甲基無環(huán)鳥苷（GCV）磷酸化，在胞內(nèi)進(jìn)一步代謝生成三磷酸GCV，可抑制細(xì)胞DNA聚合酶和作為DNA合成的終結(jié)者，使腫瘤細(xì)胞對(duì)GCV敏感性大大增高，從而明顯提高對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷率[1]。

Ritz等[2]在HSV-TK基因治療腫瘤的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，觀察到人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)子調(diào)控的復(fù)制缺陷型腺病毒Ad-hTERT-TK具有良好的腫瘤細(xì)胞內(nèi)特異性表達(dá)能力，它可以選擇性在端粒酶陽性的腫瘤細(xì)胞中復(fù)制。Rosenfeld等[3]以腺病毒為載體介導(dǎo)HSV-TK在體外成功轉(zhuǎn)染四株胰腺癌細(xì)胞系，觀察到顯著的原藥轉(zhuǎn)換作用和旁觀者效應(yīng)；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明轉(zhuǎn)導(dǎo)TK基因的胰腺癌細(xì)胞成瘤時(shí)間延遲，給予原藥GCV后腫瘤消退；給裸鼠腹腔內(nèi)注入胰癌細(xì)胞誘發(fā)腫瘤形成，再注入表達(dá)HSV-TK基因的腺病毒載體，在注射GCV后，腫瘤明顯退縮，伴有強(qiáng)大BSE出現(xiàn)。Block等[4]同樣以腺病毒作為載體轉(zhuǎn)導(dǎo)TK基因，在胰腺癌肝轉(zhuǎn)移模型觀察到HSV-TK/GCV有效抑制胰腺癌的肝轉(zhuǎn)移，并利用重組腺病毒載體轉(zhuǎn)染CD基因進(jìn)入BALB-C小鼠和MC38肝轉(zhuǎn)移模型小鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在腫瘤細(xì)胞中目的基因的表達(dá)水平比其他器官中的表達(dá)水平高上千倍。Yang等[5]將BxPC-3胰腺癌細(xì)胞注射到裸鼠胰尾，然后濃縮HSV-TK載體和GCV，結(jié)果HSV-TK治療組轉(zhuǎn)移性腹腔腫瘤明顯低于對(duì)照組；在培養(yǎng)劑或是腹腔積液中轉(zhuǎn)染HSV-TK載體，并用GCV處理所得結(jié)果無明顯差別，提示浸浴腹水環(huán)境中載體能有效轉(zhuǎn)導(dǎo)腫瘤細(xì)胞，腹腔內(nèi)注射濃縮逆轉(zhuǎn)錄病毒HSV-TK載體是胰腺癌腹腔轉(zhuǎn)移的有效治療方法。在體內(nèi)研究表明HSV-TK基因轉(zhuǎn)化后繼以GCV治療的腫瘤逆轉(zhuǎn)效應(yīng)與腫瘤體積大小有關(guān)，在大腫瘤中，依賴于注射的病毒類型，因而聯(lián)合應(yīng)用ADV-TK+VPC-Rv-TK（VPC）繼以4dGCV治療可取得最佳效果。

2 免疫基因治療

免疫基因治療是將各類細(xì)胞因子基因轉(zhuǎn)導(dǎo)入腫瘤或其他免疫效應(yīng)細(xì)胞，使其在機(jī)體表達(dá)并分泌細(xì)胞因子，或利用其他基因增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的免疫原性和（或）免疫系統(tǒng)功能，加速腫瘤消退。如將細(xì)胞因子基因?qū)肽切┛啥ㄎ挥谀[瘤的細(xì)胞，可在局部持續(xù)產(chǎn)生大量細(xì)胞因子，高效低毒地抗癌功能?；蚶肈NA重組技術(shù)，增強(qiáng)瘤細(xì)胞的免疫原性，使機(jī)體的免疫系統(tǒng)更好地發(fā)揮抗腫瘤作用。

GM-CSF基因是目前激活免疫系統(tǒng)的最有效基因之一，它能吸引免疫細(xì)胞聚集到表面存在抗原體的腫瘤細(xì)胞處。這些抗原體可以引導(dǎo)免疫系統(tǒng)找出并破壞殘留在病人體內(nèi)其他位置的癌細(xì)胞。

Jaffee等[6]使用分泌GM-CSF（粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子）的同種異體腫瘤細(xì)胞疫苗用于術(shù)后胰腺癌患者，患者平均生存期為13個(gè)月，較化療放療組（6～9個(gè)月）明顯延長，證實(shí)這種疫苗對(duì)于胰腺腺癌患者是安全有效的。Yamaguchi[7]研究顯示將鼠GM-CSF基因轉(zhuǎn)導(dǎo)人胰腺癌細(xì)胞，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明GM-CSF基因表達(dá)產(chǎn)生顯著的抑癌效應(yīng)。

3 小結(jié)

胰腺癌的基因治療目前仍處于試驗(yàn)研究階段，尚無一項(xiàng)臨床治療方案獲得批準(zhǔn)。但基因治療被認(rèn)為是腫瘤治療的最終方法，由于單一的自殺基因體系只能限制腫瘤的進(jìn)一步生長和一定程度的腫瘤體積的減少，很難從根本上清除瘤塊。要根除腫瘤，必須在限制腫瘤生長的基礎(chǔ)上，依靠其他機(jī)制，如增強(qiáng)機(jī)體免疫能力來殺傷腫瘤細(xì)胞。因此可考慮從聯(lián)合自殺基因和免疫基因治療胰腺癌的思路入手，通過聯(lián)合兩者作用胰腺癌細(xì)胞，建立起單獨(dú)和聯(lián)合作用的動(dòng)物模型，并通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來獲得聯(lián)合HSV-TK/GCV和GM-CSF進(jìn)行胰腺癌治療的一手資料，并對(duì)其療效進(jìn)行評(píng)估，為臨床上應(yīng)用聯(lián)合基因療法治療胰腺癌提供實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Springer CJ,Niculescu-Duvaz I. Prodrug-activating systems in suicide gene therapy[J].J Clin Investi,2000,105(9):1161-1167.

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[3]Rosenfeld ME,Vicker SM, Raben D, et al. Pancreatic carcinoma cell killing via adenoviral mediated delivery of the herpes simplex virus thymidine kinase gene[J].Ann Surg,1997,22(5):609-618.

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[5]Yang L,Chiang Y,Lenz HJ,et al.Intercellular communication mediates the bystander effect during herpes simplex thymidine kinase/ganciclovir-based gene therapy of human gastrointestinal tumor cells[J]. Hum Gene Ther,1998,9:719-728.

[6]Jaffee EM，Dranoff G，Cohen LK，Hauda KM，Clift S，Marshall FF，Mullig an RC，Pardoll DM. High efficiency gene transfer into primary human tumor explan ts without cell selection.Cancer Res 1993；53（10 Suppl）：2221-2226

基因治療范文第2篇

早在20世紀(jì)50年代人們已知道是各類基因控制細(xì)胞增生，80～90年代癌癥基因研究更進(jìn)入。

俗話說有矛必有盾?？茖W(xué)家自1970年找到第一個(gè)癌基因，至今已發(fā)現(xiàn)20種不同的癌基因，10余種癌抑制基因。癌基因誘發(fā)細(xì)胞增生，而癌抑制基因恰恰相反，但是當(dāng)癌抑制基因受到某些因素影響發(fā)生突變，它就失去了這一抑制作用，其結(jié)果必然是癌基因無法無天，細(xì)胞增殖加快。1994年又發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞凋亡基因，它不僅能使細(xì)胞停止分裂，更能使細(xì)胞死亡。同樣，當(dāng)?shù)蛲龌蚴艿侥承┮蛩赜绊懓l(fā)生突變時(shí)，也會(huì)失去其凋亡作用。因此，當(dāng)癌基因在遺傳、免疫、內(nèi)分泌、精神等內(nèi)在因素，及生物、物理、化學(xué)、營養(yǎng)等外在因素（統(tǒng)稱致癌因素）觸發(fā)后開始啟動(dòng)，而癌抑制基因及凋亡基因又發(fā)生突變，失去抑制癌基因的作用的時(shí)候，癌癥就發(fā)生了。

癌癥基因調(diào)控旨在了解哪些基因發(fā)生變異后，采取各種手段，包括藥物來“糾正”變異基因，達(dá)到治療目的。癌癥基因治療世界各國均在努力探索中，在我國，中醫(yī)藥調(diào)控基因已見端倪、方興未艾。如砒霜中有效成分三氧化二砷治療白血病有效，其既能下調(diào)凋亡抑制基因，又能上調(diào)凋亡誘導(dǎo)基因的表達(dá)，誘導(dǎo)癌細(xì)胞加速死亡。另外，雄黃（含砷）、輕粉（含汞）同樣具有調(diào)控細(xì)胞凋亡作用。蟾蜍所含華蟾素低濃度時(shí)促進(jìn)細(xì)胞分裂、增生和誘導(dǎo)細(xì)胞分化，高濃度時(shí)抑制細(xì)胞生長、促進(jìn)細(xì)胞凋亡，并對(duì)人白血病細(xì)胞系、大腸癌細(xì)胞系有誘導(dǎo)凋亡作用。莪術(shù)中提取的欖香烯，可誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞、人肝癌腹水癌細(xì)胞凋亡，并明顯影響腫瘤細(xì)胞的分裂周期。槲皮素可誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，抑制癌基因表達(dá)。羊藿苷能誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡。除凋亡基因外，首烏能調(diào)控癌抑制基因；大蒜油可上調(diào)癌抑制基因表達(dá)水平；丹參及姜黃素可抑制癌基因突變率；穿心蓮顯著抑制癌基因表達(dá)；土貝母對(duì)體外培養(yǎng)的人腎顆粒細(xì)胞癌和褐鼠種植性人腎顆粒細(xì)胞癌的生長均具有明顯的抑制作用。此外，蛇六谷、葉楸堿、地榆鞣質(zhì)、芹菜素、天花粉蛋白、漢防己堿、熊果酸等都對(duì)癌細(xì)胞有誘導(dǎo)凋亡作用，十全大補(bǔ)湯、六君子湯、人參養(yǎng)榮湯、小柴胡湯、當(dāng)歸補(bǔ)血湯等均具有誘導(dǎo)不同癌細(xì)胞凋亡的作用。

中藥誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡原理眾多，參與基因調(diào)控所涉及的面極廣，調(diào)動(dòng)了體內(nèi)各種抗癌系統(tǒng)發(fā)揮更大的作用，與已有的手術(shù)、化療、放療、生物免疫治療等相比，將會(huì)有一個(gè)極大的飛躍。我國中藥品種繁多，其組成的中藥復(fù)方更不計(jì)其數(shù)?？梢韵嘈牛诎┌Y基因治療中中藥必將大有作為。

（作者每周二、四、六上午均有專家門診）

基因治療范文第3篇

基因治療(GeneTherapy)是指將外源正?；?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，而達(dá)到治療目的。1991年美國實(shí)施了人類第一個(gè)對(duì)遺傳病進(jìn)行體細(xì)胞基因治療的方案，科學(xué)家W.FrenchAnderson等將含有正常ADA（AdenosineDeaminase，腺苷脫氨酶）基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)入一個(gè)4歲患有ADA-SCID（SevereCombinedImmunodeficiency，嚴(yán)重復(fù)合免疫缺陷綜合征）的女孩的白細(xì)胞內(nèi)，并用白細(xì)胞介素Ⅱ(IL-2)刺激其增殖，經(jīng)10天左右再經(jīng)靜泳輸入到此患兒體內(nèi)。大約1－2月治療一次。8個(gè)月后，患兒體內(nèi)ADA水平達(dá)到正常值的25％，兩年后基本恢復(fù)正常，未見明顯副作用。此后又進(jìn)行第2例治療并獲得類似的效果。這是基因治療史上的里程碑，迅速引起了全球基因治療的研究熱潮。然而，基因治療的發(fā)展并不是一帆風(fēng)順的。1999年，美國一名年僅18歲的青年JesseGelsinger因患鳥氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶不足癥（一種遺傳性疾?。┰诿绹e夕法尼亞大學(xué)人類基因治療中心接受基因治療時(shí)不幸死亡，這一事件震驚了當(dāng)時(shí)的科技界。基因治療一度跌入低谷，各國對(duì)基因治療臨床試驗(yàn)的資助大幅減少。

基因治療在爭議中不斷地前進(jìn)，最近幾年已取得不俗進(jìn)展，重新成為各國研究的熱點(diǎn)。RNAi（RNAinterference,RNA干擾）是基因治療的又一亮點(diǎn)，其在神經(jīng)性、遺傳性、病毒性等疾病中的治療研究已經(jīng)展開。2009年，針對(duì)X-連鎖型腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良癥(X-linkedAdrenoleukodystrophy，X-ALD)的基因治療初見成效，并被《Science》評(píng)為年度十大科學(xué)發(fā)現(xiàn)之一。正如《Science》評(píng)論指出：在飽受科學(xué)界質(zhì)疑以及制藥業(yè)遺忘多年后，近幾年基因治療在應(yīng)對(duì)嚴(yán)重遺傳性疾病方面取得了重大突破，再次優(yōu)雅的回歸在我國，基因治療也有一定發(fā)展。1991年，復(fù)旦大學(xué)薛京倫教授研究小組進(jìn)行了國內(nèi)首例基因治療臨床試驗(yàn)。2003年，人類首例商業(yè)化基因治療產(chǎn)品“重組Ad-p53腺病毒注射液”在深圳誕生。目前，我國已在在遺傳病、腫瘤、神經(jīng)系統(tǒng)疾病及細(xì)胞因子基因治療的臨床前研究取得了一定成績。

基因治療按靶細(xì)胞類型分為生殖細(xì)胞(Germ-lineCell)基因治療和體細(xì)胞(SomaticCell)基因治療。廣義的生殖細(xì)胞基因治療以、卵子和早期胚胎細(xì)胞作為治療對(duì)象。由于生殖細(xì)胞基因治療涉及一系列倫理學(xué)問題，如人權(quán)問題、阻礙人類多樣性的問題以及基因歧視等，生殖細(xì)胞基因治療仍屬。體細(xì)胞基因治療是當(dāng)前基因治療研究的主流，但是仍處于臨床試驗(yàn)階段，存在較高的風(fēng)險(xiǎn)性和不穩(wěn)定性。基因治療由于自身技術(shù)的高度復(fù)雜和難以控制，同時(shí)涉及一定的社會(huì)倫理學(xué)問題，應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)必然會(huì)引起相關(guān)的法律問題。

二、基因治療在臨床醫(yī)學(xué)應(yīng)用中的法律問題

（一）隱私權(quán)

基因(Gene)是指攜帶有遺傳信息的DNA序列，是控制性狀的基本遺傳單位?；蛴袃蓚€(gè)特點(diǎn)，一是能忠實(shí)地復(fù)制自己，以保持生物的基本特征；二是基因能夠“突變”，突變絕大多數(shù)會(huì)導(dǎo)致疾病，另外一小部分是非致病突變。非致病突變給自然選擇帶來了原始材料，使生物可以在自然選擇中被選擇出最適合自然的個(gè)體。基因與人類的健康密切相關(guān)?；虻奶攸c(diǎn)決定了基因具有特殊的地位，基因治療過程中必然涉及到患者基因的隱私權(quán)保護(hù)。

一是基因隱私保密權(quán)。保護(hù)個(gè)人隱私的隱蔽性、不公開性是使個(gè)人隱私保持其受法律保護(hù)狀態(tài)的前提。基因信息不僅與個(gè)人密切相關(guān)，而且與個(gè)人的后代相關(guān)。因而,個(gè)人享有對(duì)其基因信息進(jìn)行保密,不為他人所知的權(quán)利。

二是基因隱私的知曉權(quán)。獲取基因進(jìn)行基因研究必須向基因的所有者進(jìn)行告知，讓基因所有者知情，使其知道自己的基因作何用途。

三是基因隱私利用權(quán)。是指自然人依法對(duì)自己的基因信息進(jìn)行積極利用,以滿足自己精神、物質(zhì)等方面需要的權(quán)利。

四是基因隱私支配權(quán)。這是基因隱私權(quán)的核心內(nèi)容。任何單位或個(gè)人未經(jīng)基因提供者本人的同意或授權(quán)，不得隨意公開、使用或處置基因提供者的基因信息。如利用基因信息進(jìn)行相關(guān)科研等活動(dòng)時(shí)，必須征得提供者的同意。

五是基因隱私維護(hù)權(quán)。是指自然人對(duì)于自己的基因隱私所享有的維護(hù)其不可侵犯性,在受到非法侵害時(shí)可以尋求司法救濟(jì)的權(quán)利。

例如，非經(jīng)基因提供者的同意，將其基因信息進(jìn)行商業(yè)活動(dòng)時(shí)，基因提供者有權(quán)依靠法律得到相關(guān)賠償。

（二）知情同意書的簽訂

任何醫(yī)療活動(dòng)都會(huì)存在風(fēng)險(xiǎn)，為保護(hù)醫(yī)患雙方的權(quán)益，大部分臨床醫(yī)療活動(dòng)均要簽訂相關(guān)知情同意書，并受法律保護(hù)?；蛑委煈?yīng)用到臨床醫(yī)學(xué)，簽訂知情同意書同樣至關(guān)重要。我國1994年頒布的《醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理?xiàng)l例實(shí)施細(xì)則》第六十二條和八十八條以及2002年頒布的《醫(yī)療事故處理?xiàng)l例》第十一條規(guī)定，患者在醫(yī)療過程中對(duì)自己的病情、診斷、治療享有知情權(quán)。醫(yī)方施行手術(shù)、特殊檢查或特殊治療時(shí)，必須征得患者同意。概言之，患者知情同意權(quán)包括了解權(quán)、被告知權(quán)、選擇權(quán)、拒絕權(quán)和同意權(quán)，但不宜告知患者的（仍應(yīng)告知其家屬）除外。特殊檢查、治療系指該檢查、治療具有一定危險(xiǎn)性，或因患者本質(zhì)特殊、病情危急可能產(chǎn)生不良后果，或系臨床試驗(yàn)性，或收費(fèi)較多?；蛑委熤委燂@然屬于上述法律規(guī)定中的特殊檢查和治療范疇。

基因治療不同于傳統(tǒng)的醫(yī)療活動(dòng)，其高科技、高要求及高風(fēng)險(xiǎn)等特點(diǎn)必然決定此類知情同意書的特殊性。受試者有權(quán)利要求被告知基因治療實(shí)施單位及人員的資格以及經(jīng)驗(yàn)、風(fēng)險(xiǎn)效益比、其他可替代的保守治療途徑、保密問題、受傷害時(shí)的賠償?shù)鹊取?shí)施單位還必須有一份針對(duì)使用的基因產(chǎn)品的專業(yè)醫(yī)師的指示說明，包括依實(shí)驗(yàn)所知的產(chǎn)品藥性、毒性和治療效果等。考慮到基因治療的復(fù)雜和難以理解性，一般人不是很容易透徹理解，應(yīng)當(dāng)成立相關(guān)部門，如基因治療專家咨詢委員會(huì)等，幫助患者及家屬真正了解基因治療及知情同意書的內(nèi)容，真正維護(hù)患者及其家屬的利益。

（三）治療方案的規(guī)范

基因治療現(xiàn)在還大多仍處于臨床試驗(yàn)階段，還不是一種成熟和穩(wěn)定的治療技術(shù)，存在較多不宜克服的難題，其中最為突出的是：

1.效率問題

基因治療的時(shí)效比較短暫?；蛑委煶晒Φ那疤崾菍?dǎo)入治療性DNA的靶細(xì)胞能發(fā)揮功能，并且能夠在體內(nèi)長時(shí)間存活并且性能穩(wěn)定。然而，導(dǎo)入的外源性的DN段會(huì)導(dǎo)致許多細(xì)胞快速分化從而很大程度上可能基因治療的持續(xù)性?；颊弑仨毥?jīng)過多輪治療，如前所述的第一例成功的基因治療病例中，1-2月就要進(jìn)行一次，每次費(fèi)用大概兩萬多美元，代價(jià)相當(dāng)昂貴。此外，任何外物進(jìn)入人體組織后，人體的免疫系統(tǒng)就會(huì)被激發(fā)產(chǎn)生免疫應(yīng)答以防御入侵者，而這種免疫應(yīng)答在某種程度上也會(huì)降低基因治療的效果。

2.安全性問題

病毒是大多數(shù)基因治療研究中選擇的載體，會(huì)對(duì)病人帶來許多潛在危險(xiǎn)，比如其毒性、免疫和炎癥反應(yīng)以及基因控制和定位的問題?；蛑委煹陌踩允悄壳盎蛑委煚幷撟顬榧ち业膯栴}，比較著名的是前文提到的那位18歲美國病人死于基因治療。患者死亡的主要原因是基因治療對(duì)象選擇有誤及用藥劑量過大，盡管病毒載體進(jìn)入細(xì)胞后是隨機(jī)整合至宿主細(xì)胞染色體的，但其仍具有潛在的插入突變可能性。

基因治療屬于高端的新醫(yī)療技術(shù)，存在相當(dāng)高的風(fēng)險(xiǎn)。由于技術(shù)的限制性以及可能涉及相關(guān)的社會(huì)倫理問題，基因治療在實(shí)施時(shí)必須遵循一定規(guī)范，必須由相關(guān)部門進(jìn)行管制和監(jiān)督。1993年，我國衛(wèi)生部頒布了《人的體細(xì)胞治療及基因治療臨床研究質(zhì)控要點(diǎn)》，將人的體細(xì)胞治療及基因治療的臨床研究納入《藥品管理法》的法制化管理。2003年，我國藥監(jiān)局又頒布了《人基因治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》，較為詳細(xì)地規(guī)定了基因治療研究的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)和操作規(guī)范。

三、我國臨床基因治療的立法思考

（一）國外基因治療的立法經(jīng)驗(yàn)

1.美國

1976年，美國國立衛(wèi)生研究院(NationalInstitutesofHealth,NIH)成立了重組DNA咨詢委員會(huì)(RAC)并制定世界上第一個(gè)實(shí)驗(yàn)室基因工程應(yīng)用法規(guī)《重組DNA分子實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)則》，首開了政府對(duì)生物技術(shù)發(fā)展進(jìn)行控制的先例。隨后，在基因治療進(jìn)入臨床研究前的1985年，美國NIH制訂了針對(duì)體細(xì)胞基因治療的指導(dǎo)準(zhǔn)則《人類體細(xì)胞基因治療的設(shè)計(jì)和呈批考慮要點(diǎn)》，是這一領(lǐng)域里第一個(gè)系統(tǒng)的成文規(guī)章。美國對(duì)基因治療臨床試驗(yàn)的監(jiān)督由健康和人類服務(wù)部的食品與藥品管理局和人體研究保護(hù)辦公室兩個(gè)法定機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)。所有從事人體研究的研究者，無論是來自學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)還是工業(yè)界，都必須遵循上述機(jī)構(gòu)的監(jiān)督管理。

2.英國

1989年，英國政府成立基因療法倫理委員會(huì)，作為臨床治療的審批和監(jiān)督機(jī)構(gòu)。1993年成立基因治療咨詢委員會(huì)，對(duì)基因治療臨床方案的可接受性進(jìn)行審查和管理，協(xié)調(diào)與其他相關(guān)機(jī)構(gòu)的關(guān)系。

3.奧地利

奧地利基因治療的管理要遵循基因技術(shù)法的有關(guān)規(guī)定。體細(xì)胞基因治療只能在被批準(zhǔn)的醫(yī)院里由特定的醫(yī)療小組進(jìn)行，并要得到相關(guān)政府機(jī)構(gòu)和倫理委員會(huì)的同意。

4.德國

德國1984年由司法部和科研部召集醫(yī)生、生物學(xué)家、哲學(xué)家、法學(xué)家、宗教代表組成了一個(gè)基因分析和基因治療的研究小組，為政府的立法提供咨詢報(bào)告，并基于報(bào)告提出了一系列相關(guān)的法律法規(guī)。德國1990年制定世界上第一部“基因技術(shù)法”，分七部分四十二節(jié)。

（二）我國臨床基因治療的立法建議

基因治療對(duì)個(gè)體及人類生命的影響程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了傳統(tǒng)醫(yī)療技術(shù)，其風(fēng)險(xiǎn)也是目前的醫(yī)療經(jīng)驗(yàn)知識(shí)無法掌控的。同時(shí)，基因治療還可能引發(fā)不少社會(huì)倫理問題。這些問題的解決離不開法律的支持。就本人觀點(diǎn)而言，我國臨床基因治療的立法至少應(yīng)包括以下內(nèi)容：

1.治療范疇的立法

首先要確定臨床基因治療的范疇，何種基因治療可以在人體內(nèi)進(jìn)行等基本問題。最為典型的是生殖細(xì)胞基因治療，它涉及平等問題和其他個(gè)人侵害問題，如優(yōu)生主義、基因歧視等，各國對(duì)其一般都持反對(duì)態(tài)度。就我國目前而言，可以通過法律規(guī)定臨床醫(yī)學(xué)基因治療的基本范疇，同時(shí)規(guī)定設(shè)立相關(guān)倫理委員會(huì)進(jìn)行協(xié)助管制。

2.治療方案審核的立法

除了涉及相應(yīng)的社會(huì)倫理問題，基因治療還存在高風(fēng)險(xiǎn)且費(fèi)用昂貴，如何權(quán)衡“受益/風(fēng)險(xiǎn)”的比例也相當(dāng)重要。我國可以指定或成立相關(guān)機(jī)構(gòu)或部門，進(jìn)行臨床基因治療方案的嚴(yán)格審核。

3.規(guī)范化治療方面的立法

臨床基因治療，從方案的選擇、實(shí)施到最后的療效評(píng)估等，都應(yīng)嚴(yán)格按照一套規(guī)范化的程序進(jìn)行。美國的基因治療臨床研究倫理審查已制度化。美國食品和藥物管理局(FoodandDrugAdministration,FDA)生物制品評(píng)估和研究中心(CBER)負(fù)責(zé)對(duì)基因治療、細(xì)胞治療的安全性和有效性的評(píng)價(jià)。美國國立衛(wèi)生研究院下設(shè)的生物技術(shù)活動(dòng)辦公室(OBA)執(zhí)行對(duì)基因治療研究的監(jiān)管。人體研究保護(hù)辦公室側(cè)重于對(duì)受試者的保護(hù)，而所有涉及人類受試者的臨床試驗(yàn)都要接受地方倫理委員會(huì)審查。英國參與基因治療監(jiān)管和審查相關(guān)的政府部門包括醫(yī)學(xué)和醫(yī)療產(chǎn)品管理局(MHPRA)、轉(zhuǎn)基因作物(GMOs)科學(xué)咨詢委員會(huì)、基因治療咨詢委員會(huì)(GTAC)、地方倫理委員會(huì)。

就我國而言，關(guān)于臨床基因治療規(guī)范化方面的立法，至少考慮以下幾方面內(nèi)容：首先，臨床基因治療資格的審查機(jī)制?；蛑委熧Y格的獲得必須通過嚴(yán)格審查，包括相關(guān)的治療設(shè)施及人員配備是否達(dá)到必需的標(biāo)準(zhǔn)。其次，獲得資格后的施行人必須嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)的基因治療方案進(jìn)行治療?，F(xiàn)在可參照的是《人的體細(xì)胞治療及基因治療臨床研究質(zhì)控要點(diǎn)》以及《人基因治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》這兩份文件，之后可隨著基因治療的日趨成熟作相應(yīng)修改補(bǔ)充或?qū)ｉT立法規(guī)定。

再者，應(yīng)當(dāng)成立或指定相關(guān)部門對(duì)臨床基因治療規(guī)范化的實(shí)施進(jìn)行不間斷的監(jiān)督和管制，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理基因治療過程中的問題。同時(shí)，還應(yīng)追蹤患者的治療效果，作相應(yīng)的評(píng)估分析。最后，應(yīng)當(dāng)建立基因治療數(shù)據(jù)庫。數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)應(yīng)準(zhǔn)確詳實(shí)，并配有相應(yīng)的對(duì)照、評(píng)估以及傳播信息的保護(hù)機(jī)制。

4.侵權(quán)方面的立法

基因治療的技術(shù)高難度性以及涉及相關(guān)社會(huì)倫理學(xué)問題等特點(diǎn)使得它在臨床醫(yī)學(xué)操作過程中更易發(fā)生醫(yī)患矛盾。我國2010年7月開始施行的《侵權(quán)責(zé)任法》專設(shè)第七章規(guī)定醫(yī)療損害責(zé)任相關(guān)問題。基因治療應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)，同樣將涉及相關(guān)的侵權(quán)問題。

一是隱私權(quán)。由于基因治療的特殊性，基因治療過程中患者的隱私權(quán)保護(hù)尤為重要?！肚謾?quán)責(zé)任法》第六十二條是患者的隱私權(quán)保護(hù)相關(guān)規(guī)定，臨床基因治療在這方面的立法可參照此法并結(jié)合自身特點(diǎn)作相應(yīng)補(bǔ)充。二是知情同意書的簽訂。除了《侵權(quán)責(zé)任法》第五十五條關(guān)于患者知情權(quán)的相關(guān)規(guī)定外，基因治療作為一種特殊治療，其知情同意書中還應(yīng)詳細(xì)闡述基因治療實(shí)施單位和個(gè)人的資格及經(jīng)歷、基因治療的詳細(xì)過程及療效、可能產(chǎn)生的各種風(fēng)險(xiǎn)、治療費(fèi)用等內(nèi)容。由于基因治療的復(fù)雜和難以理解性，還應(yīng)指定或成立相關(guān)部門，如基因治療專家咨詢委員會(huì)等，幫助患者及家屬真正了解基因治療和知情同意書的內(nèi)容再做出是否簽訂的決定，真正維護(hù)患者及其家屬的利益。臨床基因治療在這方面的法律規(guī)定應(yīng)該進(jìn)行全面的考量。三是規(guī)范化治療?！肚謾?quán)責(zé)任法》第五十八條第一款規(guī)定，違反法律、行政法規(guī)、規(guī)章以及其他有關(guān)診療規(guī)范的規(guī)定導(dǎo)致患者有損害，推定醫(yī)療機(jī)構(gòu)有過錯(cuò)。基因治療作為一種高難度、高風(fēng)險(xiǎn)的治療方案，施行規(guī)范化的保守治療將更加安全，因此應(yīng)該制定相應(yīng)的法規(guī)進(jìn)行管制。

5.對(duì)治療方法本身保護(hù)的立法

基因治療自身能否依法得到保護(hù)，尤其是能否通過被授予專利權(quán)得到保護(hù)，一直是全球爭論的焦點(diǎn)?；谌说乐髁x的考慮以及疾病治療方法因人而異缺乏重復(fù)性的考慮，大多數(shù)國家對(duì)疾病治療方法不予以專利保護(hù)?；蛑委煂儆诩膊≈委煹姆椒?，所以目前大多數(shù)國家都同樣不予以專利保護(hù)?！稓W洲專利公約》(EuropeanPatentConvention,EPC)對(duì)授予專利的要求是新穎性、實(shí)用性以及創(chuàng)造性，其中第52(4)條指出，通過外科手術(shù)等治療和診斷人類或動(dòng)物疾病的方法不符合其工業(yè)化實(shí)用性的要求，不應(yīng)被授予專利?；蛑委熥鳛橐环N疾病治療方法，在歐洲同樣不被授予專利保護(hù)。此外，其真正目的還在于保護(hù)公共利益，使公眾避免花費(fèi)昂貴的醫(yī)療服務(wù)費(fèi)用。然而，并不是所有基因治療相關(guān)的發(fā)明都被EPC排斥在專利保護(hù)范圍之外。EPC為用于基因治療方法的產(chǎn)品，特別是物質(zhì)或其化學(xué)成分提供專利權(quán)保護(hù)，這些產(chǎn)品的新穎性可參照EPC第54(5)條規(guī)定確定。即使這些物質(zhì)或化學(xué)成分以前就被人知曉，但只要作為一種治療、手術(shù)或者診斷的方法第一次被發(fā)現(xiàn)，仍然可以被授予專利。

例如，在ADA-SCID基因治療中，導(dǎo)入含有缺陷基因正確拷貝數(shù)的病毒顆粒到體內(nèi)的治療方法并不能被授予專利，但治療過程中用的這種遺傳學(xué)已發(fā)生改變的病毒可以被授予專利，這個(gè)病毒將被授予治療ADA-SCID醫(yī)學(xué)使用的專利保護(hù)，即使它之前已被授予別的非醫(yī)學(xué)使用專利保護(hù)。專利法對(duì)于技術(shù)發(fā)展的推動(dòng)作用不容小覷，生物技術(shù)也不例外。作為這個(gè)領(lǐng)域的領(lǐng)先者，美國和歐盟都不否認(rèn)這個(gè)觀點(diǎn)。根據(jù)美國專利法的規(guī)定，疾病治療的方法包括基因治療，是可以被授予專利保護(hù)的。這樣勢必促進(jìn)本土對(duì)基因治療的深入研究，最終在這一領(lǐng)域處于壟斷地位。關(guān)于這一點(diǎn)，對(duì)基因治療專利化保護(hù)限制的歐盟也已日益意識(shí)到來自美國的競爭壓力，并且意識(shí)到自身的法律規(guī)定已經(jīng)限制了本土在這一領(lǐng)域的發(fā)展，現(xiàn)已采取相關(guān)措施逐漸擴(kuò)大對(duì)基因治療的保護(hù)范圍。

我國專利法第二十五條明確規(guī)定，對(duì)“疾病的診斷和治療方法”不授予專利權(quán)。因此，我國對(duì)基因治療本身不應(yīng)給予專利保護(hù)。然而，用于基因治療的藥物或器械等產(chǎn)品，則應(yīng)該按照現(xiàn)行《專利法實(shí)施細(xì)則》等法律授予專利保護(hù)，以維護(hù)發(fā)明者的利益和刺激我國基因治療的研究，從而促進(jìn)我國基因治療技術(shù)水平的發(fā)展。

四、結(jié)語

基因治療范文第4篇

[關(guān)鍵詞]基因治療；載體；病毒；感染；基因表達(dá)

[Abstract]Gene therapy is to cure the inherited or acquired diseases through delivering normal genes to targeted cells and replacing the unorderly genes. Viral vectors have different capabilities as gene delivery vehicles for vaccines and immunotherapeutics.The principle is that virus can deliver the gene to other cells by infection. The methods used so far were reviewed in viral systems including retrovirus, adenovirus, adeno-associated virus, herpessimplex virus, α-virus and vaccinia virus.Also, the development of virus vectors for gene therapy was reviewed in this paper.

[Key words]gene therapy; vector; virus; infection; gene expression

基因治療是當(dāng)代醫(yī)學(xué)和生物學(xué)的一個(gè)新的研究領(lǐng)域，始于20世紀(jì)80年代。它主要是向靶細(xì)胞或組織中引入外源基因DNA或RN段，以糾正或補(bǔ)償患者基因的缺陷，關(guān)閉或抑制異常表達(dá)的基因，從而達(dá)到治療疾病的目的。1990年第一次把腺嘌呤脫氨酶（ADA）基因成功導(dǎo)入到人體內(nèi)的T淋巴細(xì)胞中用來治療ADA基因缺失病，由此標(biāo)志著人類歷史上基因治療時(shí)代的開始。本文主要介紹基因治療中常用的6種病毒載體的生物學(xué)特性。目前，基因治療已從遺傳病擴(kuò)展到非遺傳病領(lǐng)域，例如：傳染病，腫瘤，神經(jīng)系統(tǒng)疾病，免疫缺陷病等。

1逆轉(zhuǎn)錄病毒載體

逆轉(zhuǎn)錄病毒（retrovirus.RV）為單鏈RNA病毒，是病毒載體中應(yīng)用最早，研究成熟，目前被廣泛應(yīng)用的載體。逆轉(zhuǎn)錄病毒是基因組為8.5kb的小RNA，進(jìn)入細(xì)胞后，病毒RNA即逆轉(zhuǎn)錄為雙鏈DNA，并整合到細(xì)胞基因組中。將水泡性口炎病毒糖蛋白（VSV-G）整合于逆轉(zhuǎn)錄病毒包膜中能加速各種宿主細(xì)胞對(duì)其進(jìn)行膜融合和內(nèi)吞，具有廣泛的宿主范圍和更高的轉(zhuǎn)染效率，可高效的轉(zhuǎn)染靜止細(xì)胞，且能抵抗血清補(bǔ)體滅活的作用[1]。為了提高逆轉(zhuǎn)錄病毒感染靶細(xì)胞的特異性，降低其潛在的危險(xiǎn)性，可以在原來的病毒Env蛋白上接上一段具有特異靶向的多肽，目前應(yīng)用較多的是單鏈可變區(qū)抗體（acFV）；還可通過插入組織特異啟動(dòng)子實(shí)現(xiàn)靶向表達(dá)。第三代包裝細(xì)胞系Ψ-crip和Ψ-cre使載體與包裝細(xì)胞間至少需要發(fā)生四次同源重組才可能產(chǎn)生有復(fù)制能力的逆轉(zhuǎn)錄病毒，提高了逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的安全性。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體有感染效率高、外源基因整合到細(xì)胞基因組中、可長期表達(dá)而不產(chǎn)生任何有免疫原性的病毒蛋白等優(yōu)點(diǎn)。但目前，基因轉(zhuǎn)導(dǎo)所用的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體為野生型逆轉(zhuǎn)錄病毒的改構(gòu)形式，保留感染靶細(xì)胞能力而去除復(fù)制能力，仍具有一定危險(xiǎn)性。

慢病毒（Lentivirus）也屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒家族，是一類很有前途的基因轉(zhuǎn)移載體。它既可以感染分裂細(xì)胞又可感染非分裂細(xì)胞。該病毒載體能整合入靶細(xì)胞基因組、不需要反復(fù)轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞。最為人們熟知的慢病毒是人免疫缺陷病毒（HIV），復(fù)制缺陷型HIV可被用于基因轉(zhuǎn)移。HIV具有簡單逆轉(zhuǎn)錄病毒的3個(gè)基因（gap、pol和env）。此外還有5種輔助蛋白基因（tet、rev、vpr、nef和vif）。以HIV-1為例，其進(jìn)入細(xì)胞需要結(jié)合兩種細(xì)胞表面受體。這種趨化因子受體可能是CCKR4（主要是T細(xì)胞表達(dá)）或CCKR5（主要是巨噬細(xì)胞表達(dá)）。利用HIV-1的這一特性可使基因轉(zhuǎn)移具有特殊的靶向[2]。雖然使用缺陷性病毒時(shí)靶細(xì)胞不表達(dá)病毒蛋白，人們對(duì)其安全性還存有一定疑慮。所以，科學(xué)家們正嘗試在不影響病毒功能的前提下盡量刪除病毒序列以建立更加安全的慢病毒載體。

2腺病毒載體

腺病毒（Adenovirus.AV）為線性雙鏈DNA無包膜的DNA病毒，最大可攜帶7.5kb左右的外源基因。它的宿主范圍廣，均可感染分裂和非分裂細(xì)胞。與逆轉(zhuǎn)錄病毒家族載體不同，腺病毒基因組不能整合到宿主細(xì)胞基因組中，而是以附加體的形式存在，不隨宿主細(xì)胞分裂而復(fù)制，治療中有時(shí)需要反復(fù)轉(zhuǎn)導(dǎo)。這一特性對(duì)于免疫基因治療來說是非常有利的，用腺病毒裁體將不會(huì)導(dǎo)致象能整合的載體那樣使用后出現(xiàn)對(duì)免疫系統(tǒng)纏綿持久的刺激。

腺病毒轉(zhuǎn)錄單位密集而復(fù)雜，重組困難，僅限于特定的區(qū)域，一般是在E1、E2A、E3和E4。第一代腺病毒載體通常以轉(zhuǎn)移基因取代E1A和E1B，但是這種載體有明顯的缺陷如包裝能力較低、細(xì)胞毒性較強(qiáng)、易引發(fā)免疫反應(yīng)。近年來，在增大載體容量、降低細(xì)胞毒性、減弱宿主兔疫反應(yīng)等方面的研究有了很大進(jìn)展，切除了E1和E3的第二代載體，延長了轉(zhuǎn)移基因在體內(nèi)的表達(dá)時(shí)間并降低了細(xì)胞毒效應(yīng)[3]。

研究表明，E1區(qū)替代型復(fù)制缺陷型腺病毒載體Ad5具有感染及表達(dá)效率高、遺傳毒性低、制備方法相對(duì)簡單、可獲得高滴度（1012pfu/ml）純化載體等優(yōu)點(diǎn)。由于重組腺病毒載體不整合入宿主細(xì)胞染色體、其DNA以附加體形式存在于染色體以外，表達(dá)時(shí)間相對(duì)短暫，因此是IL-2在腫瘤基因治療中的適宜載體系統(tǒng)。重組Ad5腺病毒直接注射進(jìn)入小鼠H22肝癌組織，能有效地進(jìn)行轉(zhuǎn)染與原位表達(dá)，具有明顯的抗腫瘤作用。有人觀察了攜帶人野生型P53、GM-CSF和B7-1基因的重組腺病毒載體（BB-102）轉(zhuǎn)染BEL-7402、HLE及HuH-7肝癌細(xì)胞后P53基因的表達(dá)等情況，發(fā)現(xiàn)P53基因能在轉(zhuǎn)染了BB-102的肝癌細(xì)胞中高效表達(dá)；肝癌細(xì)胞生長明顯受到抑制；轉(zhuǎn)染BB-102還能誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞的凋亡。BB-102可能通過其介導(dǎo)P53基因的表達(dá)抑制肝癌細(xì)胞的增殖，在腫瘤的基因治療中，選擇性復(fù)制型腺病毒載體的治療作用明顯高于復(fù)制缺陷型腺病毒載體。

雖然重組腺病毒載體應(yīng)用日益廣泛，但有幾個(gè)主要缺陷仍需改進(jìn)，腺病毒載體介導(dǎo)的基因表達(dá)通常都是短期的；在體內(nèi)引發(fā)強(qiáng)的免疫和炎癥反應(yīng)；單次大劑量應(yīng)用，會(huì)激發(fā)抗病毒的中和抗體產(chǎn)生，降低系統(tǒng)應(yīng)用的效率；特異性較低。若切除了腺病毒的E1、E2和E4基因，能避免其在宿主細(xì)胞中表達(dá)免疫原性病毒蛋白。Belousova等[4]報(bào)道，通過在衣殼上嵌合CD40配體，可以使腺病毒載體高效感染CD40陽性的樹突狀細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，這一特點(diǎn)可用于遺傳性免疫疾病和腫瘤的基因治療。Kreppel等[5]構(gòu)建的高容量腺病毒載體（HC-Ad）可以在大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)6個(gè)月，而有人利用神經(jīng)元特異的強(qiáng)啟動(dòng)子，使重組腺病毒載體在腦海馬會(huì)中的表達(dá)時(shí)間可長達(dá)9個(gè)月?？傊俨《居捎谄浔旧淼纳飳W(xué)特點(diǎn)，有其獨(dú)特的優(yōu)勢，加強(qiáng)對(duì)腺病毒載體的基礎(chǔ)研究，一定會(huì)促進(jìn)這一基因轉(zhuǎn)移載體的發(fā)展和完善。

3腺相關(guān)病毒載體

腺相關(guān)病毒（Adeno-associatedVirus.AAV）又稱副腺病毒，是一類屬微小病毒科。AAV是一種缺陷病毒，不能進(jìn)行獨(dú)立復(fù)制，只有在輔助病毒，如腺病毒、單純瘡疹病毒、痘苗病毒存在的情況下，才能進(jìn)行最佳復(fù)制，產(chǎn)生新的病毒顆粒，否則只能進(jìn)行潛伏感染。AAV載體具有安全，宿主范圍廣，可以長期表達(dá)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物的特點(diǎn)，使它在基因治療領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。目前已發(fā)現(xiàn)的AAV有8種血清型，各種血清型AAV載體主要區(qū)別是衣殼蛋白不同，因此對(duì)不同的組織和細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率存在差異。目前應(yīng)用最多的AAV載體是血清型2，即AAV2，其基因組是長4680bp的單鏈線狀DNA，兩側(cè)為兩個(gè)長145bp的回文序列，稱反向末端重復(fù)序列（invertedterminalrepeat，ITR），呈T形發(fā)夾樣結(jié)構(gòu)。ITR為病毒DNA復(fù)制，包裝，“拯救”所必需的唯一順式作用元件。AAV2進(jìn)入細(xì)胞的過程是由基礎(chǔ)受體（硫酸肝素蛋白多糖受體）和輔助受體包括1型成纖維細(xì)胞生長因子受體（FGFR21）和整合素αⅤβ5介導(dǎo)產(chǎn)生，其對(duì)多種組織細(xì)胞（如表面具有硫酸肝素蛋白多糖受體的肌肉、視網(wǎng)膜、肝臟、神經(jīng)元細(xì)胞等）具有較好的轉(zhuǎn)染效率。AAV作為基因治療載體的優(yōu)勢主要有：（1）AAV是一種人源性的病毒，對(duì)人體無致病性，免疫反應(yīng)輕微；（2）可定點(diǎn)整合至人的19號(hào)染色體，并能較穩(wěn)定的存在，從而避免了其它病毒隨機(jī)整合可能引起的抑癌基因失活和原癌基因激活的危險(xiǎn)；（3）AAV介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)可使外源基因持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)，并可受到周圍基因的調(diào)控；（4）AAV的宿主范圍很廣，包括分裂期和非分裂期的多種細(xì)胞；（5）AAV轉(zhuǎn)移系統(tǒng)具有較好的熱穩(wěn)定性和抗酸堿（Ph3.0~9.0）性以及抗有機(jī)溶劑處理的特點(diǎn)，便于儲(chǔ)存[6]。如Gao[7]等用含有AAV的rep/cap基因盒的質(zhì)粒感染A549細(xì)胞獲得K209細(xì)胞，代替293細(xì)胞，使細(xì)胞內(nèi)rep/cap基因的表達(dá)擴(kuò)增1000倍，增加了rAAV的產(chǎn)量。對(duì)不同的細(xì)胞，AAV載體的轉(zhuǎn)染效率存在差異。Halbert等[8]報(bào)道，AAV-6載體對(duì)肺氣道上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率顯著大于AAV-2載體，最高可達(dá)80%。用rAAV進(jìn)行基因治療若有輕度免疫反應(yīng)，將影響轉(zhuǎn)染效率。人群中約有50%～96%的人血清中帶有抗AAV-2的抗體，其中有18%～75%為中性抗體，這些抗體的存在給rAAV的成功轉(zhuǎn)導(dǎo)增加一定的難度。Bartlett等[9]對(duì)AAV表面進(jìn)行化學(xué)修飾后，成功地轉(zhuǎn)染了人巨核細(xì)胞系。由于存在利用效率低的問題，目前科研工作者進(jìn)行了大量關(guān)于增強(qiáng)AAV基因載體效應(yīng)的研究，AAV載體在多種組織都進(jìn)行了成功的轉(zhuǎn)染，如肝、腦、心肌、骨路肌、視網(wǎng)膜和氣道上皮等組織，未發(fā)現(xiàn)對(duì)機(jī)體有致病性。

4單純皰疹病毒載體

單純皰疹病毒（herpessimplexvirus），（HSV）為雙鏈有包膜的病毒，可感染分裂和非分裂細(xì)胞，作為基因治療載體具有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）容納外源基因的長度達(dá)40～50kb，是目前容量最大的病毒載體；（2）具嗜神經(jīng)性，可在神經(jīng)元中建立終生潛伏性感染，非常適用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病如帕金森氏病等；（3）滴度高；（4）可感染分裂期和非分裂期細(xì)胞。由于呈潛伏性感染，HSV載體非常適用于需要基因長時(shí)間表達(dá)的基因治療，但在介導(dǎo)腫瘤基因治療等要求基因短暫高水平表達(dá)的基因轉(zhuǎn)移是不合適的。此外，HSV的細(xì)胞毒性有待進(jìn)一步研究改善。早期基因（ICP4，ICP22，ICP27）的去除可明顯降低HSV載體的毒性，避免引發(fā)腦炎的危險(xiǎn)[10]。

目前研究較多的是HSV-1載體，主要用于慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病、惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤、骨骼肌細(xì)胞及干細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)移。HSV1716是一個(gè)被改造過的異型HSV載體，能長期存在于神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞，而具有潛在的殺瘤效應(yīng)[11]。Goss等[12]用復(fù)制缺陷的HSV載體表達(dá)神經(jīng)生長因子以治療糖尿病所致的神經(jīng)病變，結(jié)果顯示能阻止病變的進(jìn)程。研究還表明干細(xì)胞對(duì)HSV易感，利用去除早期基因的HSV載體轉(zhuǎn)導(dǎo)猴CD34+細(xì)胞，結(jié)果顯示報(bào)告基因表達(dá)時(shí)間超過3周，說明HSV載體適用于干細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)移[13]。

5α-病毒載體

α-病毒（α-virus）屬于披膜病毒科，宿主范圍廣泛，可以在哺乳動(dòng)物和昆蟲體內(nèi)的不同細(xì)胞中復(fù)制，其病毒感染吸附依賴于敏感細(xì)胞表面的受體。其基因組RNA（49SRNA）一方面可以作為mRNA翻譯合成非結(jié)構(gòu)蛋白，另一方面又可以作為復(fù)制的模板合成負(fù)鏈RNA；反過來負(fù)鏈RNA又是新的病毒基因組RNA和26S亞基因組RNA合成的模板。α-病毒的多個(gè)成員已經(jīng)被作為表達(dá)載體，并被引入基因治療領(lǐng)域，其中最常用的是森林病毒（SemlikiforestVirus，SFV），Sindbin病毒（SindbinVirus，SIV）和委內(nèi)瑞拉腦炎病毒（Venezuelanequineencephalitisvirus，VEEV）。除了原型病毒之外，其重組形式的病毒也相繼出現(xiàn)。α-病毒已經(jīng)發(fā)展成3種不同類型的載體：（1）復(fù)制缺陷型載體：通過將26S亞基因組MA和mPsRNA分割開來，將它們以cDNA的形式分別構(gòu)成兩個(gè)質(zhì)粒（輔助質(zhì)粒和表達(dá)質(zhì)粒）。在mPscDNA下游插入外源基因，從而實(shí)現(xiàn)外源基因同mPs基因同轉(zhuǎn)錄和同復(fù)制。（2）復(fù)制型載體：在全長基因組之外還含有第2個(gè)亞基因組啟動(dòng)子，感染細(xì)胞后會(huì)引起病毒的復(fù)制。（3）分層DNA載體（IayeredDNA-vector）：不含結(jié)構(gòu)蛋白基因，但在復(fù)制子cDNA上游引入Ⅱ型RNA聚合酶盒以啟動(dòng)復(fù)制子cDNA的轉(zhuǎn)錄，然后復(fù)制子才能發(fā)揮自己的作用，帶動(dòng)外源基因的表達(dá)。目前α-病毒在腫瘤治療得到廣泛應(yīng)用，α-病毒能感染很多不同的腫瘤細(xì)胞系，重組病毒在感染的細(xì)胞中可以誘導(dǎo)明顯的細(xì)胞凋亡[14]。同其他病毒載體相比，α-病毒是這個(gè)領(lǐng)域的一個(gè)新成員。具有比其它病毒制備方便、安全性高的優(yōu)點(diǎn)[15]。當(dāng)然在應(yīng)用上它也不可避免的存在許多不足，如何提高它的利用率也是目前研究的一大熱點(diǎn)。

6痘病毒載體

痘病毒（VacciniaVirus.VV）是雙鏈DNA病毒，可感染分裂和未分裂細(xì)胞。它的基因組可承載25kb的轉(zhuǎn)基因序列。痘病毒作為重組疫苗已獲得巨大成功，臨床前研究中，它又成功地實(shí)現(xiàn)了體內(nèi)抗癌的細(xì)胞因子基因傳遞。單一痘病毒載體同時(shí)傳遞IL-2和IL-12并與腫瘤抗原合用，抗腫瘤效果和存活率都顯著提高。疫苗病毒載體使用歷史長、毒性小、外源DNA裝載量大，是極好的基因傳遞載體。

7結(jié)語

目前而言，病毒載體系統(tǒng)雖然在基因治療中占有絕對(duì)優(yōu)勢，作用不可替代，但仍然存在著一系列潛在問題：可能因隨機(jī)插入而引起基因失活、重組；癌基因激活；野生型病毒生成；外源基因的裝載能力不大，特異性和靶向性不強(qiáng)；有的甚至對(duì)機(jī)體有免疫原性等。隨著研究的深入，病毒載體不斷得以完善改進(jìn)，更多安全、高效的新型病毒載體將源源不絕出現(xiàn)，使基因治療這一全新的疾病治療手段在很大程度上改變?nèi)祟惣膊≈委煹臍v史進(jìn)程，治愈人類目前難以治愈的疾病。

8展望

基因治療病毒載體的研究已取得了較大進(jìn)展，數(shù)個(gè)病毒載體可實(shí)現(xiàn)體內(nèi)轉(zhuǎn)基因的長時(shí)間表達(dá)，但病毒載體的安全性問題還有待進(jìn)一步的研究解決，安全性和靶向性一直是人們研究的熱點(diǎn)。研究表明通過使用組織特異性啟動(dòng)子或多聚物和脂質(zhì)體的修飾，可提高基因轉(zhuǎn)移的靶向性，且多聚物和脂質(zhì)體的修飾還可減輕免疫反應(yīng)，有利于載體的重復(fù)應(yīng)用。載體中去除不必要的病毒基因，可明顯減輕細(xì)胞毒性和免疫原性，還可避免產(chǎn)生可復(fù)制的病毒顆粒和人體感染病毒的危險(xiǎn)。自我滅活或自我破壞病毒載體的構(gòu)建也能提高病毒載體的安全性?？傊S著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和分子病毒學(xué)的發(fā)展，人們對(duì)病毒載體的進(jìn)一步改造完善，將使其在基因治療中繼續(xù)發(fā)揮著重要的作用。

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基因治療范文第5篇

皮膚的衰老是由遺傳基因DNA決定的

脫氧核酸的功能片段就是基因，由基因所傳遞的各類程序是人類衰老和壽命長短的物質(zhì)基礎(chǔ)。這種物質(zhì)基礎(chǔ)是在生物進(jìn)化中形成的，對(duì)每個(gè)個(gè)體來說，是生來注定的。但是，外部環(huán)境又會(huì)使遺傳基因產(chǎn)生一定的變化，這就是變異的一面。

隨著人體內(nèi)在的老化，細(xì)胞再生和分裂所必須的核酸和酶變得越來越貧乏，表現(xiàn)為纖維的損傷和斷裂，致使皮膚松弛、變薄、生出皺紋，而外在的日光照曬導(dǎo)致皮膚變厚、失去彈性、黑色素沉著且毫無光澤。

皺紋形成的根本原因是細(xì)胞衰老

隨著現(xiàn)代生命科學(xué)的突飛猛進(jìn)，科學(xué)家們已能在基因水平上對(duì)衰老的細(xì)胞進(jìn)行調(diào)控，向衰老的細(xì)胞提供一種染色體端粒酶，這種酶能夠延長細(xì)胞的壽命，從而達(dá)到延緩機(jī)體衰老的目的。

普通的人體細(xì)胞每分裂一次，染色體兩頭的端粒就會(huì)變短一點(diǎn)，細(xì)胞因此慢慢變老。大約分裂70次之后，端粒就會(huì)變得太短而不能保護(hù)染色體，一旦細(xì)胞不能再進(jìn)行分裂，死期也就到了，而端粒酶能使變短的端粒重新生長到原來的長度，延長細(xì)胞的壽命。

美國科學(xué)家最近宣布，賓夕法尼亞州大學(xué)VNIVERSITY OF PENNESYLVANIA醫(yī)學(xué)院發(fā)明了新的基因治療GENETHERAPY法，他們?nèi)〕鋈梭w細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行基因改造，成功地給老化的細(xì)胞注入了新的活力，大大延長了細(xì)胞的壽命。

核酸，神奇的青春元素

美國生物醫(yī)學(xué)科學(xué)家經(jīng)過多年的研究和臨床實(shí)踐，發(fā)現(xiàn)隨著年齡的增長，DNA RNA的合成越來越不足，會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)、酶合成量與質(zhì)的不足，從而表現(xiàn)為細(xì)胞與組織器官結(jié)構(gòu)、功能缺陷，百病叢生。