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關(guān)鍵詞：

急性白血病是我國(guó)常見的造血系統(tǒng)惡性疾病。其病因及發(fā)病機(jī)理還不完全清楚，病毒、遺傳因素及染色體異常與它的發(fā)生都有關(guān)系?，F(xiàn)已證實(shí)，MTS1/P16基因在人類多種惡性腫瘤中存在著不同形式的改變［1,2］，但有關(guān)MTS1/P16基因在急性白血病中的國(guó)內(nèi)報(bào)道少［3］。我們采用差別PCR技術(shù)對(duì)MTS1/P16基因在急性白血病中純合缺失進(jìn)行檢測(cè)，以了解MTS1/P16基因缺失與急性白血病的關(guān)系。

1材料與

1.1標(biāo)本來(lái)源30例急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)，男19例，女11例，年齡2～70歲，中位年齡19歲。43例急性非淋巴細(xì)胞性白血病(ANLL)，男24例，女19例，年齡2.5～73歲，中位年齡34歲。對(duì)照組15例，為非惡性血液病病人(缺鐵性貧血7例，血小板減少性紫癜8例)，均為我院住院病人，診斷標(biāo)準(zhǔn)均符合FAB法，前抽骨髓1～2ml，以用于DNA提取。

1.2DNA提取參照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》［4］提取高分子量DNA，用TE(pH8.0)溶解，紫外分光光度測(cè)其OD值，調(diào)整濃度至50ng/ml，以備PCR擴(kuò)增。

1.3引物設(shè)計(jì)根據(jù)已知MTS1/P16基因序列，在第2外顯子的兩側(cè)設(shè)計(jì)1對(duì)擴(kuò)增引物，PCR擴(kuò)增物為480bp，引物序列如下：PS1:5′-GGAAATTGGAAACTGGAAGC-3′;PS2:5′-TCTGACCTTTGGAAGCTCT-3′。選用DMDExon51引物做內(nèi)對(duì)照，其PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為388bp，引物序列如下：PS1:5′-GAAATTGGCTCTTTAGCTTGTGTTTC-3′；PS2:5′-GGAGAGTAAAGTGATTGGTGGAAAATC-3′。上述引物均由院上海生化所合成。

1.4PCR擴(kuò)增PCR反應(yīng)混合液含10×PCRBuffer,200μmol/LdNTP，1μmol/Lprimer,200ng模板DNA，TaqDNA2.5U加H2O至終體積50μl，在DNA擴(kuò)增儀上進(jìn)行如下循環(huán)：95℃預(yù)變性5.0min，95℃，1.0min；58℃，1.0min；72℃，1.5min；30個(gè)循環(huán)。取5μlPCR產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠(加EB0.5μg/ml)上電泳(TaqDNA聚合酶為美國(guó)LifeTechnologies產(chǎn)品)。

2結(jié)果

30例ALL有10例MTS1/P16Exon2純合缺失，頻率為33.3%(10/30)；43例ANLL中有6例MTS1/P16Exon2純合缺失，頻率為14.0%(6/43)，15例對(duì)照無(wú)MTS1/P16Exon2純合缺失。

3討論

MTS1/P16是定位于人類染色體9P21的多腫瘤抑制基因［2,3］，編碼一分子量為16kD的核磷酸蛋白，P16蛋白可直接作用于細(xì)胞周期蛋白依賴激酶(CDK)4/6，周期素(cyclin)D和RB基因編碼蛋白PRb的反饋通路，通過調(diào)節(jié)PRb活性，抑制細(xì)胞從G1→S期轉(zhuǎn)變，防止細(xì)胞增殖［5,6］。MTS1/P16基因在人類多種原發(fā)性腫瘤和細(xì)胞系中主要表現(xiàn)為純合缺失或突變失活。等位基因純合缺失在白血病細(xì)胞系中達(dá)25%～65%［1,7］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，30例ALLMTS1/P16純合缺失率為33.3%(10/30)，43例ANLLMTS1/P16純合缺失率為14.0%(6/43)。報(bào)道造血系統(tǒng)惡性腫瘤中MTS1/P16基因缺失和突變的檢出率為5.56%～43.60%，平均13.81%，其中以急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)檢出率最高，平均為29.80%，而在急性非淋巴細(xì)胞白血病(ANLL)，慢性粒細(xì)胞白血病(CML)和淋巴瘤患者檢出率極低［8］。Hebert報(bào)道55例ALL中22例有MTS1/P16基因缺失，占44%［9］。Ogawa報(bào)道1組134例AML，僅有2例有MTS1/P16基因缺失［10］。

MTS1/P16基因在不同組織的腫瘤標(biāo)本或來(lái)源于不同地區(qū)同一種組織的腫瘤標(biāo)本中，其缺失和突變頻率也不同［11］，這一現(xiàn)象提示MTS1/P16基因改變?cè)诓煌M織的癌變過程中的作用有所不同。造成這種差異的原因尚不清楚，但可能與各臟器組織接受致癌物的種類，劑量以及對(duì)致癌物的代謝能力有關(guān)。本文結(jié)果，MTS1/P16基因在ALL中的高頻率缺失及在ANLL中的改變，提示MTS1/P16基因缺失與急性白血病的發(fā)生可能有關(guān)。

文獻(xiàn)：

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